הזרקת וקטורים רקומביננטיים הקשורים לאדנו במודל עכבר ניוון שרירים בעמוד השדרה והבולברי

התחל עם ניוון שרירים בעמוד השדרה והבולברי או עכבר מושפע מ-SBMA.

נקו את זנבו וחממו אותו כדי להרחיב את הווריד.

SBMA נגרם על ידי קולטן אנדרוגן מוטנטי או גן AR המייצר mRNA AR מוטנטי.

mRNA זה מסנתז חלבונים רעילים בנוירונים מוטוריים הפוגעים בהעברת האותות וגורמים לחולשת שרירים.

לאחר מכן, קח מזרק המכיל וירוס רקומביננטי הקשור לאדנו, או וקטורי AAV עם פלסמיד המקודד מיקרו-RNA טיפולי.

הכנס את המחט לווריד הזנב והזריק את התמיסה.

כעת, הפעל לחץ כדי לעצור את הדימום, ולאחר מכן החזר את העכבר לכלוב שלו.

ברגע שהוא במחזור, הווקטור הנגיפי מגיע לנוירונים מוטוריים השולטים בתפקוד השרירים.

הנגיף נכנס לתא באמצעות אנדוציטוזיס, ומשחרר את הפלסמיד.

הפלסמיד מייצר מיקרו-RNA בוגר עם רצפים משלימים ל-AR mRNA המוטנטי.

מיקרו-רנ"א אלה נקשרים ל-AR mRNAs, מה שמפעיל את פירוקם.

זה מעכב הצטברות חלבון רעיל ומסייע בשיפור התפקוד העצבי-שרירי.

חלקו את מלאי הפלסמיד של AAV microRNA ל-100 עד 200 מיקרוליטר, המכילים עומס ויראלי של 10 עד 100 טריליון גנומים למיליליטר. לאחר מכן, טען אליקוט אחד למזרק וחבר מחט בגודל 27 עד 30.

כעת, באמצעות מסנן עכבר רגיל, אבטח עכבר כשזנבו חשוף. לאחר מכן נקו את הזנב עם 70% אלכוהול והניחו כרית חמה, מתחת לזנב למשך כ-30 שניות כדי להגביר את הרחבת כלי הדם. כעת, בחלק הדיסטלי של הזנב, הכנס את המחט לווריד הזנב כשהשיפוע כלפי מעלה ובזווית רדודה, כ-15 מעלות.

לאחר מכן הזריק את הנגיף והמתן מספר שניות לפני הסרת המחט. לאחר הסרת המחט, הפעל לחץ מתון באמצעות שתי אצבעות כדי לעצור כל דימום. ואז החזירו את החיה לכלוב הביתי שלה.