צינורות זרעי תאי שוואן להתחדשות אקסונלית לאחר פגיעה בחוט השדרה

קחו חולדה מורדמת עם חוליות חשופות, עם התהליכים הקוצניים והלמינה שנכרתו מרמות בית החזה T7 עד T9.

חותכים את שורשי הגב והגחון מעל ומתחת ל- T8.

מרחו מי מלח כדי לעזור לעצור את הדימום ולהסיר את הנוזל בעזרת ספוג.

חצו את חוט השדרה בין T8 ל-T9 כדי לנתק סיבי עצב.

מניחים קצף דחוס בפער ומורחים מי מלח.

לאחר שהדימום נפסק, הסר את הקצף ונקה את שאריות הנוזל.

החלק צינור פולימר פיזואלקטרי שהוכן מראש, עם חלונות פתוחים, מעל גדם חוט השדרה הרוסטרלי.

הכנס את גדם הזנב לקצה הנגדי של הצינור.

הזרקת תאי שוואן, תלויים במטריצה הניתנת להזרקה, דרך חלונות הצינור.

סגור את החלונות בצורה מאובטחת.

תאי שוואן מאכלסים את הצינור ומפרישים גורמים נוירוטרופיים התומכים בצמיחת אקסונים.

הצינור מספק הנחיה מבנית, בעוד שתכונותיו הפיזואלקטריות מייצרות רמזים ביו-חשמליים לצמיחת נויריטים.

בהדרגה, האקסונים מתחדשים על פני הגשר, ומחזירים את ההמשכיות בין הגדמים.

לאחר הסרת כל הלמינות, ודא שהפערים בין התהליכים הרוחביים נראים לעין, במיוחד ב-T8, ובדוק את העצמות משני הצדדים בין T7 ל-T9 כדי לוודא שאין שברי עצם בולטים כלפי חוץ, ושורשי הגב אמורים להיות גלויים. בעזרת מספריים קפיציים זוויתיים, חותכים את שורשי הגב והגחון מעל ומתחת ל- T8. והוסיפו מי מלח לחוט השדרה כדי לעזור לעצור את הדימום.

לאחר מכן, הניחו את המספריים הקפיציים הזוויתיים מעל חוט השדרה במרווחים בין התהליכים הרוחביים ב-T8, ובצעו חתך אחד כדי לנתק לחלוטין את רקמת העצב. הניחו חתיכה קטנה של קצף דחוס לתוך הפער שנוצר בין 2 ל -2.5 מילימטרים, והוסיפו מיד מי מלח לאזור.

בזמן ההמתנה שגדמי החוט הקטוע יגיעו להמוסטזיס, חתכו את משולשי הספיגה לחתיכות דקות וארוכות והוציאו צינור מאחסון PBS. הנח כמה משולשים לתוך הצינור כדי להסיר עודפי PBS ואשר שהחלונות שנחתכו מראש פתוחים.

לאחר מכן, הסר את המדיום מכדור תא GFP Schwann והשהה מחדש את תאי שוואן ב-10 מיקרוליטר של DMEM/F-12 קר. הוסף 10 מיקרוליטר ג'ל להזרקה קרה לתרחיף התא וערבב היטב עם פיפטינג חוזר ונשנה. לאחר מכן, הנח את תרחיף התא על קרח. כאשר גדמי חבל הטבור מוכנים, הסר את הקצף הדחוס ולאחר מכן השתמש בחתיכות ארוכות של משולשי הספיגה כדי להסיר את מי המלח והדם מאזור כריתת הלמינקטומיה.

לאחר מכן, השתמש במיקרו מרית כדי להרים בעדינות את הגדם הרוסטרלי ולהחליק את הצינור מעל הגדם כשהחלונות פונים כלפי מעלה. לדאוג שכל הגדם יוכנס ושלא יהיה דימום עודף לתוך הצינור. הרם בעדינות את גדם הזנב והחלק מעליו את הקצה השני של הצינור. לדאוג שכל הגדם יוכנס ושהחלונות יהיו על המשטח הגבי.

לאחר מכן, השתמש במיקרופיפטה המצוידת בקצה טעינת כתמים מערביים כדי להזריק 20 מיקרוליטר מתערובת המטריצה הניתנת להזרקה של תא GFP Schwann לתוך הצינור דרך אחד החלונות שנחתכו מראש. ולסגור את החלונות.