גיבוש מערכת נשאת אקסוזומים עמוסה בדופמין

התחל עם צינור המכיל תרחיף של אקסוזומים, שהם ננו-שלפוחיות חוץ-תאיות מבוססות שומנים.

הוסף תמיסת מלח או PBS עם חוצץ פוספט לצינור כדי לקבל פיזור אקסוזום אחיד.

שאפו את תמיסת האקסוזום וסננו אותה באמצעות מסנן ממברנה להסרת מזהמים שנותרו.

העבירו את המתלה האקסוזומי המסונן הזה לצינור טרי.

הוסף לתרחיף האקסוזום תמיסה המכילה דופמין, חומר נוירותרפי, ואחריו ספונין, חומר פעילי שטח.

דגרו את התערובת בטמפרטורה פיזיולוגית כדי לשפר את חדירות הממברנה האקסוזומלית.

ספונין מסיר באופן סלקטיבי כולסטרול הקשור לממברנה מהממברנה האקסוזומלית, ויוצר נקבוביות בשכבות השומנים האקסוזומליות.

דופמין מתפזר דרך הנקבוביות הללו לאקסוזומים.

עם הזמן, שומנים בקרום האקסוזומי מתפשטים מחדש, והנקבוביות נסגרות, ועוטפות את הדופמין בתוך אקסוזומים.

לאחר מכן, אולטרה-צנטריפוגה את תמיסת התערובת כדי לגלול את האקסוזומים העמוסים בדופמין.

הסר את הסופרנטנט המכיל דופמין וספונין חופשיים.

הגלולה המכילה את האקסוזומים העמוסים בדופמין מוכנה למחקרים נוספים.

הוסף 3 מיליליטר PBS לתרחיף האקסוזום שנאסף קודם לכן על ידי אולטרה-צנטריפוגה, ועקר את המתלה המדולל על ידי סינון באמצעות מסנן 0.22 מיקרון.

לאחר מכן העבירו 500 מיקרוליטר מהמתלה האקסוזומי המעוקר לצינור אחר.

לאחר מכן, הוסף ברצף 500 מיקרוליטר של 0.5 מיליגרם לתמיסת דופמין מיליליטר וספונין לתרחיף המעוקר. לאחר הדגירה, אולטרה-צנטריפוגה את המתלה.