פיתוח רשת עצבית מהונדסת מיקרו-רקמות באמצעות מיקרו-עמודה מבוססת הידרוג'ל

התחל בצלחת המכילה מיקרו-עמודה. למיקרו-עמוד יש מעטפת חיצונית של הידרוג'ל ומטריצה חוץ-תאית, או ליבת ECM.

הוסף טיפות תרבות בינונית לאותה מנה.

העבירו את אגרגטים של תאי העצב לתוך הצלחת, ואז הניחו אותם לאחת הטיפות הבינוניות.

התבונן תחת סטריאומיקרוסקופ והכנס אגרגטים של תאים בשני קצוות המיקרו-עמודה.

לאחר מכן, העבירו את המיקרו-עמודה הזרוע למדיום לצורך כדאיות תאית.

דגירה כדי לאפשר את חיבור התא ל-ECM.

באמצעות הסטריאומיקרוסקופ, אשר את חיבור התא. לאחר מכן, הוסיפו מדיום תרבות לכיסוי המנה והדגירה.

הנוירונים המחוברים מתחילים להאריך את האקסונים שלהם דרך ה-ECM.

החלף באופן קבוע את חצי המדיום במדיום טרי כדי לשמור על רמות החומרים המזינים.

עם הזמן, האקסונים גדלים ומתפרשים לכל אורך המיקרו-עמודה, ויוצרים רשתות עצביות.

הרשת העצבית המהונדסת במיקרו-רקמות שפותחה מוכנה לשחזר את המעגלים העצביים הפגועים.

המשך לזריעת תאים מיד לאחר הדגירה. העבירו כ -10 עד 20 מיקרוליטר של תרבית בינונית לשני אזורים פנויים בצלחות הפטרי המחזיקות את עמודי המיקרו. השתמשו במיקרופיפטה כדי לאסוף את הצברים העצביים בנפרד, והעבירו אותם לצלחת פטרי המכילה את המבנים. העבירו את האגרגטים בעזרת מלקחיים לאחת המאגרים הקטנים של מדיום התרבית כדי לשמור על בריאות התאים.

תוך כדי התבוננות תחת סטריאומיקרוסקופ, השתמש במלקחיים כדי להכניס אגרגט בקצה אחד של עמודות המיקרו עבור מיקרו-TENN חד כיווני או בכל קצה לארכיטקטורה דו-כיוונית. לאחר מכן, העבר את עמוד המיקרו הזרוע למאגר הקטן השני של מדיום התרבית כדי למנוע התייבשות ולשמור על בריאות המצטברים. לאחר טעינת כל עמודות המיקרו, יש לדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 45 דקות כדי לאפשר לאגרגטים להיצמד ל-ECM.

לאחר הדגירה, ודא שהאגרגטים נשארים בקצות עמודי המיקרו, באמצעות הסטריאומיקרוסקופ. לבסוף, הציפו בזהירות את צלחות הפטרי המכילות את המיקרו-TENN במדיום תרבית באמצעות פיפטה. מניחים את הכלים בחממה בחום של 37 מעלות צלזיוס ו -5% פחמן דו חמצני לתרבית ארוכת טווח.