מתן תוך ורידי של וקטורים רקומביננטיים של וירוסים הקשורים לאדנו במודל חולדה

התחל עם חולדה מורדמת הממוקמת על צדה עם זנבה חשוף.

אתר את וריד הזנב לרוחב, זהה אתר הזרקה לאורכו וחטא את האזור.

הפעל לחץ קל מעל מקום ההזרקה כדי להרחיב את הווריד.

קח מזרק המכיל את הנגיף הקשור לאדנו-רקומביננטי או וקטור AAV הנושא את גן המטרה.

יישר את המחט עם הווריד ונקב את עור הזנב.

שחרר את הלחץ על הווריד כדי להחזיר את זרימת הדם התקינה.

הכנס את המחט לווריד הזנב והזריק לאט את הנגיף.

לאחר ההזרקה, משוך את המחט, הפעל לחץ כדי לעצור כל דימום ועקוב אחר התאוששות החולדה.

וריד הזנב הצדדי מעביר את הנגיף לזרם הדם, שם הוא מסתובב דרך הלב ונכנס למוח ומגיע לתאי העצב.

בתוך הנוירון, הנגיף נכנס לגרעין, משחרר את החומר הגנטי שלו ומקל על ייצור חלבוני מטרה ליישומים נוירותרפיים.

להרדים כראוי את החולדה באמצעות מערכת ההרדמה. הקפידו על מישור הרדמה הולם על ידי היעדר תגובה לצביטה בבוהן. לאחר מכן, הניחו את החולדה באזור העבודה על צדה ושמרו על הרדמה באמצעות חרוט האף. כשהחולדה שוכבת על צדה, וריד זנב צדדי אחד צריך להיות פונה כלפי מעלה.

אתר ההזרקה הוא שני שליש לאורך הזנב. נגב את מקום ההזרקה עם כרית הכנת האלכוהול. החזק בחוזקה את הזנב מעט מעל אזור ההזרקה באצבע אחת ישירות מעל וריד הזנב הרוחבי. זה ירחיב את הווריד. כשהשיפוע פונה כלפי מעלה, יישר את המחט עם וריד הזנב הגלוי באותו כיוון.

יש לנקב את העור מעל וריד הזנב תוך הקפדה יתרה על הימנעות מהיד השנייה להחזיק את הזנב וללחוץ על וריד הזנב. שחרר לחץ מווריד הזנב כדי לאפשר זרימת דם תקינה. ואז העבירו את המחט לווריד. כדי להבטיח שהמחט ניקבה את וריד הזנב, משוך מעט לאחור את הבוכנה. אם המחט נמצאת בווריד, הדם יזרום לתוך המחט.

לאחר מיקום מחדש של המחט, במידת הצורך, ייצב את המחט על ידי החזקת קצה המזרק כנגד הזנב. הזרקו לאט את הווקטור לזנב במהירות של כ-20 מיקרוליטר לשנייה.

במקרה של הזרקה לקויה, החיה תועבר רק באופן חלקי והתוצאות כנראה לא יהיו מועילות. עם זאת, עם תרגול, זריקות טובות ניתנות לשחזור ואמינות מאוד.

אם הווקטור ניתן, הסר את המחט מהזנב ולחץ פד גזה על מקום ההזרקה כדי לעזור לעצור את הדימום למשך 30 עד 60 שניות. כבה את הרדמת האיזופלורן והחמצן. עקוב אחר החולדה עד שהיא חוזרת להכרה ולאחר מכן החזיר אותה לכלוב שלה. השלך חומרים שעלולים להיות מזוהמים ב-AAV למיכל ביולוגי מתאים, ונקה את תחנת העבודה עם 70% אתנול.