Name: פורסים תרבויות Organotypic של המוח התיכון הגחון עובריים: מערכת מחקר ופיתוח עצבי דופאמין במבחנה /em (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: למדו ליצור פרוסות אורגנוטיפיות ממוח תיכון גחוני עוברי של עכבר בגיל E12.5 לניתוח התפתחות נוירונים דופמינרגיים. השיטה משלבת חיתוך בוויברטום ודימות time-lapse לחקירת נוירוביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים מרטין אמונד ואיזבל Brachmann על עזרתם בהקמת פרוסה organotypic תרבות מערכת וולפגנג הובנר ו ליביו גבריאל Bodea לקריאה ביקורתית של כתב היד. ברצוננו להודות פרנק Costantini עבור R26 עכברים הכתב תבין קליף עבור העכברים קואל ששש. מחקר זה מומן על ידי פרס מחקר מטעם משרד המדע המחקר של צפון ריין וסטפליה (programm zur Förderung דר Rückkehr des wissenschaftlichen Spitzennachwuchses aus dem Ausland).

<ol><li>Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+neurons+arise+in+symmetric+and+asymmetric+division+zones+and+migrate+through+specific+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases.</a> Nat. Neurosci. 7 (2), 136-136 (2004).</li>
<li>Martini, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biased+selection+of+leading+process+branches+mediates+chemotaxis+during+tangential+neuronal+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration.</a> Development. 136 (1), 41-41 (2009).</li>
<li>Marin, O., Valiente, M., Ge, X., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guiding+neuronal+cell+migrations%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Biol%22%5BJournal%5D)">Guiding neuronal cell migrations.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2 (2), a001834-a001834 (2010).</li>
<li>Ayala, R., Shu, T., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trekking+across+the+brain%3A+the+journey+of+neuronal+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Trekking across the brain: the journey of neuronal migration.</a> Cell. 128 (1), 29-29 (2007).</li>
<li>Smidt, M. P., Burbach, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+make+a+mesodiencephalic+dopaminergic+neuron%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">How to make a mesodiencephalic dopaminergic neuron.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8 (1), 21-21 (2007).</li>
<li>Legue, E., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+fate+mapping+using+site-specific+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Genetic fate mapping using site-specific recombinases.</a> Methods. Enzymol. 477, 153-153 (2010).</li>
<li>Daza, R. A., Englund, C., Hevner, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+culture+of+embryonic+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice culture of embryonic brain tissue.</a> CSH Protoc. , (2007).</li>
<li>Harfe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+expansion-based+temporal+Shh+gradient+in+specifying+vertebrate+digit+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an expansion-based temporal Shh gradient in specifying vertebrate digit identities.</a> Cell. 118 (4), 517-517 (2004).</li>
<li>Srinivas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Dev. Biol. 1, 4-4 (2001).</li>
<li>Joksimovic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporally+separable+Shh+domains+in+the+midbrain+define+distinct+dopaminergic+progenitor+pools%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporally separable Shh domains in the midbrain define distinct dopaminergic progenitor pools.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (45), 19185-19185 (2009).</li>
<li>Blaess, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal-spatial+changes+in+Sonic+Hedgehog+expression+and+signaling+reveal+different+potentials+of+ventral+mesencephalic+progenitors+to+populate+distinct+ventral+midbrain+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Neural.+Dev%22%5BJournal%5D)">Temporal-spatial changes in Sonic Hedgehog expression and signaling reveal different potentials of ventral mesencephalic progenitors to populate distinct ventral midbrain nuclei.</a> Neural. Dev. 6 (1), 29-29 (2011).</li>
<li>Hippenmeyer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+developmental+switch+in+the+response+of+DRG+neurons+to+ETS+transcription+factor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling.</a> PLoS Biol. 3 (5), e159-e159 (2005).</li>
</ol>

אין לנו שום דבר לגלות.

פרוסה organotypic תרבות השיטה המוצגת כאן מספקת מערכת לטווח הקצר בניתוח חוץ גופית לפתח נוירונים דופאמינרגיים ומסלולי הנדידה והשלכה שלהם המוח התיכון הגחון עובריים. מצאנו כי ישנם מספר צעדים קריטיים בפרוטוקול כי יש בהשתתפות בקפידה על מנת לקבל פרוסות המאפשרים התפתחות תקינה של נוירונים המוח התיכון הגחון דופאמין. השלב הקריטי ביותר הוא דיסקציה של המוח העוברי, אשר צריך להיות גם מהיר ומדויק. בניגוד לדור של פרוסות המוח המבוגר, חשוב לחלק את המוח על vibratome מצויד במערכת קירור להשתמש...

טבלה של חומרים כימיים מסוימים וציוד <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D6429 </td><td></td></tr><tr><td> גלוקוז 30% </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7528-250 </td><td></td></tr><tr><td> סוס סרום </td><td> Invitrogen </td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM (ז 4,5 / L Glc., עם L-Gln, Na Pyr, NaHCO3) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D6429-500 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין 100x </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4333-20 </td><td></td></tr><tr><td> L-חומצה אסקורבית </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A4403 </td><td> להכין מלאי החנות 200mm ו - ב -20 ° C </td></tr><tr><td> Ultrapure LMP agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15517-022 </td><td></td></tr><tr><td> Millicel מוסיף </td><td> Millipore </td><td> PICMORG50 </td><td></td></tr><tr><td> μ-צלחת 35 מ&quot;מ, נמוך </td><td> Ibidi </td><td> 80136 </td><td></td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> Microm </td><td> HM 650V </td><td></td></tr><tr><td> Razor Blade </td><td> Plano GmbH </td><td> 121-6 </td><td></td></tr><tr><td> Histoacryl דבק </td><td> BRAU9381104 </td><td> בראון Aesculap </td><td></td></tr><tr><td> כף מחורר Dia קוטר 15 מ&quot;מ </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 10370 -18 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים 5 Dumoxel </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11252-30 </td><td></td></tr></table> נוגדנים המשמשים immunostainings: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><tד&gt; שם של הנוגדן </td><td> חברה </td><td > מספר קטלוגי </td><td> הערות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> Hydroxylase הארנב נגד טירוזין </td><td> Millipore </td><td> AB152 </td><td> דילול 1:500 </td></tr><tr><td> עכבר אנטי-tyrosine hydroxylase </td><td> Millipore </td><td> MAB318 </td><td> דילול 1:500 </td></tr><tr><td> עכבר אנטי BrdU </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555627 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> הארנב נגד ביקע caspase 3 </td><td> תא האיתות טכנולוגיה </td><td> 9661 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> חמור נגד ארנב IgG-Alexa 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A21206 </td><td> דילול 1:500 </td></tr><tr><td> חמור נגד עכבר IgG-Cy3 </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> 715-165-150 </td><td> דילול 1:200 </td></tr></table>

פורסים תרבויות organotypic של המוח התיכון הגחון עובריים: מערכת מחקר ופיתוח עצבי דופאמין במבחנה</em

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

העכבר הוא אורגניזם מודל מצוין ללמוד התפתחות המוח יונקים בשל שפע של נתונים מולקולריים וגנטיים. עם זאת, המוח המתפתח העכבר אינו מתאים מניפולציה הדמיה קל in vivo מאז העובר העכבר אינו נגיש ואטומים. תרבויות פרוסה Organotypic של המוח העוברי ולכן הם בשימוש נרחב ללמוד התפתחות המוח Murine במבחנה. Ex-vivo מניפולציה או שימוש העכברים הטרנסגניים מאפשר שינוי של ביטוי גנים, כך subpopulations של תאים עצביים או גליה יכול להיות מתויג עם חלבוני ניאון. התנהגותם של תאים שכותרתו לאחר מכן ניתן לצפות באמצעות זמן לשגות הדמיה. זמן לשגות הדמיה הצליחה במיוחד עבור הלומדים התנהגויות תא העומדים בבסיס התפתחות קליפת המוח בשלבים עובריים בסוף 1-2. עובריים organotypic תרבות פרוסה מערכות באזורי מוח מחוץ forebrain הם establis גם פחותהד. לכן, שפע של זמן לשגות נתונים הדמיה המתאר נדידת תאים עצביים מוגבל forebrain 3,4. זה עדיין לא ידוע, אם גילה את העקרונות למוח הגב להחזיק נכון עבור אזורים במוח הגחון. במוח הגחון, הנוירונים מאורגנים בקבוצות ולא שכבות עצביות ולעתים קרובות הם צריכים לעבור מסלולי הנדידה מסובך להגיע עמדתו הסופית שלהם. המוח התיכון הגחון הוא לא רק מערכת מודל טוב להתפתחות המוח הגחון, אך מכיל גם באוכלוסיות עצביות כגון נוירונים דופאמינרגיים הרלוונטיים בתהליכי מחלה. בעוד לתפקד ניוון של נוירונים דופאמינרגיים נחקר בפירוט רב המבוגר והמוח המזדקן, מעט מאוד ידוע על התנהגותם של הנוירונים האלה במהלך הבידול שלהם שלב ההגירה 5. אנו מתארים כאן דור של תרבויות פרוסה מיום עובריים (E) 12.5 המוח התיכון עכבר הגחון. אלה פולחן פרוסהures מתאימים פוטנציאלי לניטור דופאמין פיתוח הנוירון על פני כמה ימים במבחנה. אנו מדגישים את השלבים הקריטיים ביצירת פרוסות המוח על אלה בשלבים המוקדמים של ההתפתחות העוברית ולדון את התנאים ההכרחיים לשמירה על התפתחות תקינה של נוירונים דופאמינרגיים במבחנה. כמו כן, אנו מציגים תוצאות של ניסויים זמן לשגות הדמיה. בניסויים אלו, מבשרי המוח התיכון הגחון (כולל מבשרי דופאמין) וצאצאיהם תויגו באופן פסיפס באמצעות Cre / loxP ועין מתנהלת מערכת מיפוי מבוסס גורל 6.

שיטה לייצר פרוסות organotypic מן המוח התיכון E12.5 העוברי Murine מתואר. תרבויות פרוסה organotypic ניתן להשתמש כדי לבחון את התנהגות של נוירונים דופאמינרגיים או נוירונים המוח התיכון הגחון.

פורסים תרבויות Organotypic של המוח התיכון הגחון עובריים: מערכת מחקר ופיתוח עצבי דופאמין במבחנה</em

העכבר הוא אורגניזם מודל מצוין לחקר התפתחות המוח של יונקים, וזאת בשל השפע של נתונים מולקולריים וגנטיים. עם זאת, ה...

המטרה הכללית של הליך זה היא להפיק פרוסות אורגנוטיפיות מהמוח האמצעי העוברי ביום E 12.5 לצורך ניתוח של נוירונים דופמינרגיים בשלבי התפתחותם. זאת מושג תחילה על ידי דיסקציה של המוח העוברי, ולאחר מכן השבחה של המוח בתוך agarose בעל נקודת התכה נמוכה.השלב השלישי הוא חיתוך פרוסות המוח באמצעות ויברטום. השלב הסופי הוא בחירת פרוסת המוח המתאימה לתרבית ולדימוי בזמן אמת (time-lapse). לבסוף, דימוי בזמן אמת ומיקרוסקופיית אימונופלואורסצנציה משמשים להדגמת השלבים המוקדמים של נוירונים דופמינרגיים, התנהגות נדידה ודיפרנציאציה.שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום ההתפתחות העצבית, כגון מעקב אחר נוירונים והתנהגות נדידה במהלך התפתחות החלק הוונטרלי של המוח. יום אחד לפני הדיסקציה, הכינו תמיסת Krebs buffer וגם את מצע התרבית בהתאם לכתב העת המצורף, כשעתיים לפני הדיסקציה. הכינו 100 milliliters של 4% low melting agarose ב-Krebs buffer על ידי חימום התמיסה במיקרוגל עד להמסה מלאה של ה-agarose.לאחר מכן, מקמי את ה-aros במקלח מים בטמפרטורה של 45 °C. בשלב הבא, מלאי את מגש הבאפר של ה-Vibram בבפר Krebs קר מאוד. הפעילי את אלמנט הקירור ושמרי עליו בטמפרטורה של 4 °C.לאחר מכן, קבעו להב תער בתוך נשא הלהבים. הכינו סקאלפל, מכחול עדין וכף מחוררת קטנה לאיסוף הפרוסות מאזור הוויברטור לצורך חיתוך מאוחר יותר. לאחר מכן, הוסיפו תמיסת Krebs לבצלחונות פטרי סטריליים ושמרו אותם על קרח.באזור הניתוח, הכין שלוש צלחות פטרי סטריליות גדולות לניתוח ושתי צלחות פטרי סטריליות קטנות להטמעה, זוג מספריים קטנים, שתי פינצטות עדינות, כף מחוררת קטנה, פיפטת פסטור מזכוכית שעברה ליטוש באש עם קצה עגול סגור والليטר אחד של Krebs buffer על קרח. נגב את כל כלי הניתוח ב-70% ethanol. לאחר מכן, הוסף מצע גידול לבארות של פלטת שש בארות והדגר אותה ב-37 °C למשך שעתיים.בשלב הבא, הוסיפו 1.5 milliliters של Krebs buffer עם penicillin streptomycin לכל באער של פלטה נוספת בעלת שישה באערים תחת תנאים סטריליים. הכניסו milli cell membrane inserts לבאערים. הניחו את הפלטה בעלת ששת הבאערים לצד ה-vibrato כך שניתן יהיה להעביר את פרוסות המוח אל ממברנות המסנן.מיד לאחר החיתוך, יש להקריב עכברה נקבה הרייה עם עוברים בשלב E 12.5 ולהוציא את הרחם על ידי הרמתו בעזרת פינצטה. לאחר מכן, השתמש בפינצטה נוספת כדי לקרוע את השריר הרחמי (myometrium) מהרחם. לאחר מכן, הנח את הרחם בבפר Krebs קר במקרר קרח תחת המיקרוסקופ.השתמשו בזוג פינצטות עדינות כדי להפריד את הדופן השרירית של הרחם, את קרומי ריקר (riker's membrane) ואת שק החלמון הוויסרלי מהעובר. לאחר מכן, הוציאו את העוברים מהרחם והעבירו כל עובר לצלוחית פטרי נפרדת המכילה תמיסת Krebs sterile buffer. לאחר מכן, חתכו את ראשו של כל אחד מהעוברים.קבע את הראש על ידי דקירה בגובה העין באמצעות פינצטה עדינה. השתמש בזוג פינצטות נוסף כדי להסיר בזהירות את העור ואת הגולגולת. לאחר מכן, הרם בזהירות את המוח והעבר אותו לצלחת פטרי עם Krebs buffer סטרילי.לאחר מכן, שטפו את המוחות ב-4% Low melting point aros. טמנו שתיים עד שלוש מוחות בכל פעם ב-4% fresh, low melting point aros, באמצעות פיפט פסטור בעל קצה עגול המלוטש באש.לאחר מכן, הניחו את כלי ההטמעה על קרח בצורה מאוזנת ככל האפשר. לאחר מכן, הרימו את המוחות עד שהחלק התחתון של ה-aros יתמצק, כך שהמוחות יוכלו לשקוע באופן אחיד ולהיות מקבילים לתחתית בלוק ה-aros. כאשר ה-aros התמצק לחלוטין, גזרו את ה-aros המקיף את המוחות.לאחר מכן, הדביקו את הבלוק על במה הדגימה של הוויברטום. בעת הדבקת הבלוק, ודאו שהצד הוונטרלי (הבטני) של המוח מקביל לבמה. בצעו חיתוכים אופקיים בעובי 300 micron בתדר של 50 hertz, אמפליטודדת להב של 1.1 millimeters ומהירות של 25 millimeters per second.אספו את פרוסות המוח באמצעות מברשת צבע דקה כדי לדחוף את הפרוסה לכף מחוררת קטנה. לאחר מכן, העבירו אותן תחת המיקרוסקופ לצלחית המכילה בופר Krebs סטרילי וקר מאוד. בחרו את הפרוסה המכילה רקמה מהאזור הוונטרלי של האות המוחית (ventral midbrain).בשלב זה, השתמש בכף מחוררת קטנה ובמכחול עדין כדי להעביר את פרוסות המוח אל תוך מעמדי קרומי תאי milli בתוך פלטת שש בארות המכילה תמיסת Krebs שהוכנה מוקדם יותר. לאחר מכן, העבר את הקרומים עם הפרוסות לפלטת שש בארות אחרת עם מצע גידול; שמור על החלק העליון של הקרומים יבש, כך שפרוסות המוח יקבלו מצע מלמטה ואוויר מלמעלה.הניחו את הפרוסות באינקובטור עם 5% carbon dioxide בטמפרטורה של 37 degrees Celsius. חשוב מאוד להניח את הפרוסות באינקובטור בתוך שעתיים לאחר השלב הראשוני של הדיסקציה. ניתן לתחזק פרוסות אלו in vitro למשך שלושה עד ארבעה ימים.לאחר ארבע עד חמש שעות של התאוששות, ניתן להשתמש בחתכים לדימות בשיטת time-lapse רגע לפני הדימות. יש להוסיף לצלחית 1.5 µL של ascorbic acid בריכוז 200 mM כדי להגן על החתכים מפני פוטוטוקסיות.דגרו את הפרוסות בתא סביבתי בטמפרטורה של 37 °C עם 5% carbon dioxide במהלך דימוי בשיטת time-lapse. להלן פרוסה אקוטית המראה את המיקום הרגיל של נוירונים דופמינרגיים במידבראין הוונטרלי (ventral midbrain), שבה ההשלכות למוח הקדמי טרם התפתחו. לאחר יום אחד בתרבית, השלוחות למוח הקדמי מתחילות להיווצר, כפי שמוצג על ידי החץ הצהוב.חצי חץ לבן מציין את מיקום גופי התא המוצגים בהגדלה גבוהה יותר בתוספות (insets). כאן מוצג נתיב הנדידה של נוירונים המסומנים ב-YFP. בחתך אופקי אקוטי, המיקום הראשוני של התאים מסומן בחצי חץ אדום.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו מכינים פרוסות גנוטיפיות מהמוח האמצעי העוברי של דג ימי ביום E 12.5, כדי להשיג פרוסות חיות ושלמות. חשוב לבצע את הדיסקציה של המוח העוברי בזהירות, ולאחר החיתוך ב-vibrato לבחור את פרוסת המוח הנכונה לתרבית ולדימות TimeLapse.

organotypic-slice-cultures-embryonic-ventral-midbrain-system-to-study

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פורסים תרבות Organotypic של E18 מוח החולדה

ראשי ניתק הדופמין במוח התיכון בתרביות תאים מאפשרים ללמוד את המאפיינים presynaptic של נוירונים דופמין. הם יכולים לשמש כדי לפקח בזמן אמת שחרור הדופמין קינטיקה של חלבונים / רמות ה-mRNA של הרגולטורים של exocytosis דופמין. כאן, אנו מראים לך איך לייצר מן התרבויות הללו בילודים מכרסמים.

ראשי ניתק דופמין במוח התיכון Cell תרבויות מן ילודים מכרסמים

אנו מציגים שיטה להכין פרוסות organotypic של אמצע ההיריון עוברי עכברים הדמיה טיפוח זמן לשגות תולדה של עצבים היקפיים.

פורסים תרבות Organotypic של ה-GFP-לבטא עוברי עכברים עבור הדמיה בזמן אמת תולדה של עצבים היקפיים

לבצע הערכה מהירה של הפונקציה של הגנים בהתפתחות קליפת המוח, אנו מתארים שיטות...

שיטות לימוד המורפוגנזה העצבית:<em&gt; Ex vivo</em&gt; RNAi electroporation בקליפת עובריים מוחין Murine

כדי להעריך את תפקוד רגולציה של גנים במהלך ההתפתחות של נוירונים המוח התיכון דופאמין, אנו מתארים שיטה...

ב electroporation לג&#39;ימי של המוח התיכון צ&#39;יק לחקר תפקוד הגן בהתפתחות Neuron דופאמין

סרטון זה מתאר שיטה לטיפוח נוירונים דופמינרגיים מרקמת מוח עוברית של עכבר. התהליך כולל טיפול במוח התיכון באמצעות אנזים מפרקי חלבון, ניתוק התאים וגידולם על גבי כיסויים מצופים פולימר בתווך עשיר בחומרים מזינים עם אנטיביוטיקה לצורך גדילתם ויכולת הקיום שלהם לטווח ארוך.

גידול ותחזוקה של תאי עצב דופמינרגיים מרקמת מוח עוברית של עכבר

הסרטון מדגים את תהליך הבידוד והטיפוח של נוירוני דופמין מהמוח התיכון של עוברי עכברים. רצפות המוח התיכון הגחוני המבודד מנותקות באמצעות אנזימים. נוירוני הדופמין המתקבלים נקצרים ומועברים למיקרו-איים בתוך צלחות מרובות בארות. התאים מודגרים בתווך נוירון דופמין כדי לשמור על התאים בצפיפות גבוהה בתוך המיקרו-איים.

בידוד ותרבית של נוירוני דופמין עובריים ראשוניים במוח התיכון

מתוארת טכניקה לחקר תאי NG2 ואוליגודנדרוציטים באמצעות מערכת תרבית פרוסות של המוח הקדמי והמוח הקטן.  שיטה זו מאפשרת לבחון את הדינמיקה של התפשטות והתמיינות של תאים בתוך שושלת האוליגודנדרוציטים שבה ניתן לתפעל בקלות את הסביבה החוץ-תאית תוך שמירה על ציטו-ארכיטקטורת רקמות.

תרבויות Organotypic Slice ללמוד oligodendrocyte Dynamics וmyelination

כאן אנו מתארים טכניקה ללימוד neurogenesis לאחר הלידה בהיפוקמפוס באמצעות טכניקת התרבות הפרוסה organotypic. שיטה זו מאפשרת למניפולציה במבחנה של neurogenesis למבוגרים ומאפשרת היישום הישיר של סוכנים תרופתיים להיפוקמפוס התרבותי.

תרבויות Organotypic Slice ללימודים של אחרי לידה נוירוגנזה

הגורמים לניוון של נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון במהלך מחלת פרקינסון אינם מובנים במלואם. מערכות תרבית תאיות מספקות כלי חיוני לחקר התכונות הנוירופיזיולוגיות של נוירונים אלה. כאן אנו מציגים פרוטוקול אופטימלי, שניתן להשתמש בו למודלים במבחנה של ניוון עצבי.

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

הvivo לשעבר פרוסה מאפשרת העצב outculמניע העצבים כדי להיות בתמונה בזמן אמת. פרוסות מופקים על ידי הטבעת e 10.5 איי. איי. או. עוברי העוברים ב-agarose, הפרוסות על הרטט, וגדלים בחממה בשלב העליון. התפקיד של מסלולים הדרכה אקסון מוערך על ידי הוספת מעכבי התקשורת התרבות.

לשעבר Vivo Oculomotor ניע את התרבות של מעובריים GFP-הביע עכברים עבור זמן הדמיה של מניע העצבי החיצוני

למדו ליצור פרוסות אורגנוטיפיות ממוח תיכון גחוני עוברי של עכבר בגיל E12.5 לניתוח התפתחות נוירונים דופמינרגיים. השיטה משלבת חיתוך בוויברטום ודימות time-lapse לחקירת נוירוביולוגיה התפתחותית.

פורסים תרבויות Organotypic של המוח התיכון הגחון עובריים: מערכת מחקר ופיתוח עצבי דופאמין במבחנה

גלה סרטונים נוספים