Name: שיטה פשוטה הדמיה ארבידופסיס מותיר שימוש Perfluorodecalin כנושאת הדמיה Infiltrative (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: למדו שיטת הדמיה מתקדמת לצמחי Arabidopsis thaliana באמצעות Perfluorodecalin כתמיסת הרכבה חודרנית. השיטה מכפילה את עומק ההדמיה ומאפשרת צפייה ברורה בתאים חיים בעלייה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות פרופ &#39;ניקולס סמירנוף מאוניברסיטת אקסטר את עצתו של אוניברסיטת אקסטר מתקן bioimaging. המימון ניתן על ידי בריטניה ביוטכנולוגיה ו מחקר מדעי הביולוגיה המועצה (מענק התייחסות BB/E002682/1).

פרוטוקול כדלקמן מתאר שיטה פשוטה לשימוש PFD כמדיום הרכבה infiltrative בעלים thaliana ארבידופסיס, אך אנו צופים כי בשיטה זו ניתן להשתמש במגוון רחב של יישומים בהם הדמיה אוויר עשיר ברקמות הוא הרצוי. 1. עלה דגימות הרכבה ב PFD <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו שקופית מיקרוסקופ עם אטם גז חדיר של polydimethylsiloxane (PDMS, ג'ל קרוליינה תצפית). PDMS הוא פולימר viscoelastic והוא יכול להיות מעוצב על מנת לספק קאמרית המותאמים לדרישות הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן PFD עם האוויר. זו יכולה להיות מושגת על ידי מבעבע עם אוויר או על ידי רעד נפח קטן של PFD בבקבוק אוויר מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PFD למזוג לתוך צלחת פטרי פתוחה לצוף שתיל כולו או עלה נכרת על PFD במשך 5 דקות. הרקמה צריך להיות שקוף, המזכירים רקמות מזוגגת (איור 2 (א)). עלים עשוי להופיע כהה או בהיר יותר מאשר לפני החשיפה PFD, depenדינג על תנאי תאורה לגיל רקמות בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו את תא PDMS עם PFD אוויר equilibrated ובזהירות להעביר את דגימות רקמה מן צלחת פטרי הדגירה לחדר PDMS. חותם את השקופית עם coverslip ותמונה על פי דרישות הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: PFD גם מתפקדת היטב בתא פתוח בנוי על coverslip או בתא זלוף והוא תואם עם גריז סיליקון. PFD אינו תואם טפלון רכיבים כמו מתמוסס להם. </li></ol> 2. נציג תוצאות: בדיקה מיקרוסקופית של PFD-מודגרות דגימות עלים מראה כי הרוב המכריע של airspaces מוצפים. איור 2 (ב) מראה airspaces מוצף GFP רקומביננטי תלויה PFD. ניכר כי עלה מוצף על הדגירה עם PFD, אך פה ושם כיסי אוויר עשויים להישאר. מים לא להציף את עלה בתנאים אלה. LSCM של דגימות מודגרות ועלה ב ir, מים או מראה כי PFD PFD נותן יתרון על פני מים ואוויר לעומק של הדמיה אפשרי (איור 3). הדוגמה שניתנה איור 3 מראה, אוויר ומים PFD ארבידופסיס רכוב עלי להביע את ונוס מקומי cytosolically, סוג של YFP 11 כי הוא הביע constitutively תחת האמרגן 35S. אנו יכולים לראות גידול של פי 2 בקירוב לעומק של הדמיה כאשר משווים PFD ומים. יצוין, עם זאת, כי השיפור מדויק לראות בעת שימוש PFD משתנה עם צמצם המספרי של העדשה ואת סוג של רקמה בשימוש. ראינו נהירה cytoplasmic ושיער התארכות שורש שתילים שטופלו PFD, שכל אחד מהם מעיד על צמחים בריאים. בנוסף הראינו כי 2 Fv / Fm, מידה מסוימת של תפקוד הפוטוסינתזה של צמחים 12 נשאר בגבולות נסבלים על לוחות הזמנים בשימוש בתחום ההדמיה. 3394fig1.jpg "/&gt; באיור 1. עלה הצמח המורכבות ואת ההשלכות אופטי ייצוג Diagrammatical מראה את תכונות אנטומיות של א ' thaliana עלה ביחס אופטי הגדרת. קיצורים בהם נעשה שימוש הם obj. = המטרה העדשה, IMM. = נוזל טבילה, Cov. = Coverslip, mnt. = Mountant, לחתוך. = לציפורן, המודעה. EP. = האפידרמיס adaxial, st. = נקבובית הפיוניות, SP. = Mesophyll ספוגי, כפי = חלל האוויר, חבר. = Mesophyll משוכה, vb = חבילה של כלי הדם, המודעה. EP. = Adaxial האפידרמיס. קירות התא מסומנים על ידי קווים שחורים. <img alt="איור 2." src="/files/ftp_upload/3394/3394fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 2."> באיור 2. PFD חודר בקלות עלים ארבידופסיס (א) עלים מודגרות באוויר, במים או PFD במשך 5 דקות, צילמו במצלמה דיגיטלית DCF3000FX לייקה עם מיקרוסקופ הלייקה MZ16F (Leica Microsystems (בריטניה) בע"מ, מילטון קיינס, אנגליה). הלוגו יופיטר היה מודפס על הסרט אצטט והאירו הלוך ושובמ 'מתחת עם תיבת אור. זמן חשיפה היה 89 ms וכל התמונות נאספו ועובדו זהה. ברים סולם מייצגים 2 מ"מ. (ב) PFD נושאת מטוהרים רקומביננטי חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) התוחם airspaces in vivo. ה-GFP הוא בצבע ירוק שווא, אדום משמש להראות כלורופיל אוטומטי הקרינה, אשר התוחם את התאים mesophyll. (איור 2 (ב) רשות לשכפל עם פרטים טכניים מלאים זמינים Littlejohn et al. 2010 2). ברים סולם מייצגים 25 מ ' <img alt="איור 3." src="/files/ftp_upload/3394/3394fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 3."> באיור 3. PFD משפר הדמיה confocal בעלים תמונות LSCM מראה מקומי cytoplasmically ונוס פלואורסצנטי (ירוק) ו autofluorescence כלורופיל (אדום) ב thaliana א עלים שלמים צילמו באוויר, במים או PFD. גל עירור היה 514 ננומטר פליטת הקרינה נרשמה ננומטר 518 604 ננומטר עבור ונוס ב 657 ננומטר679 ננומטר עבור כלורופלסטים. פאנל כל קטע confocal יחיד שנלקח מחסנית-Z של 11 תמונות confocal רכשה ב 5 מרווחי מיקרומטר. אלה היו מופק ערימה-Z מלא של 59 תמונות שנרכשו ב 1 במרווחים מיקרומטר, אשר שימשו להפקת סרטים משלים. מדידות עומק מקבלים יחסית אל פני השטח אפידרמיס. תמונות הנציג, אשר עובדו זהה, מוצגים. פרטים ניסויית כגון הגדרות מיקרוסקופ זהים לאלה שנמצאו Littlejohn et al. 2010 2. Scalebars מייצגים 20 מיקרומטר.

<ol><li>Inoue, S. Foundations of Confocal Scanned Imaging in Light Microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aInoue%2C+S+%22Handbook+of+Biological+Confocal+Microscopy%2C+3rd%22">Handbook of Biological Confocal Microscopy, 3rd</a>. Pawley, J. P. , Springer Science & Business Media, LLC. New York. 1-16 (2006).</li>
<li>Littlejohn, G. R., Gouveia, J. D., Edner, C. S. mirnoff, N,, Love, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfluorodecalin+substantially+improves+confocal+depth+resolution+in+air-filled+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22New.+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Perfluorodecalin substantially improves confocal depth resolution in air-filled tissues.</a> New. Phytologist. 186, 1018-1025 (2010).</li>
<li>Sargent, J. W., Seffl, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+perfluorinated+liquids.+Fed%5BTitle%5D)+AND+%22Fed.+Proc%22%5BJournal%5D)">Properties of perfluorinated liquids. Fed.</a> Fed. Proc. 29, 1699-1703 (1970).</li>
<li>Schönherr, J., Bukovac, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+stomata+by+liquids%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Penetration of stomata by liquids.</a> Plant Physiol. 49, 813-819 (1972).</li>
<li>Davies, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+ventilation%5BTitle%5D)+AND+%22Paediatr.+Child.+Health%22%5BJournal%5D)">Liquid ventilation.</a> Paediatr. Child. Health. 35, 434-437 (1999).</li>
<li>Shaffer, T. H., Wolfson, M. R., Greenspan, J. S., Hoffman, R. E., Davis, S. L., Clark, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+ventilation+in+premature+lambs%3A+uptake%2C+biodistribution+and+elimination+of+perfluorodecalin+liquid%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Fertil.+Dev%22%5BJournal%5D)">Liquid ventilation in premature lambs: uptake, biodistribution and elimination of perfluorodecalin liquid.</a> Reprod. Fertil. Dev. 8, 409-416 (1996).</li>
<li>Crafoord, S., Larsson, J., Hansson, L. J., Carlsson, J. O., Stenkula, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+perfluorocarbon+liquids+in+vitreoretinal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Ophthalmol.+Scand%22%5BJournal%5D)">The use of perfluorocarbon liquids in vitreoretinal surgery.</a> Acta. Ophthalmol. Scand. 73, 442-445 (1995).</li>
<li>Lowe, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+blood%3A+synthetic+substitutes+from+fluorinated+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Engineering blood: synthetic substitutes from fluorinated compounds.</a> Tissue Eng. 9, 389-399 (2003).</li>
<li>Wardrop, J., Edwards, C. M., Lowe, K. C., Davey, M. R., Power, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+responses+of+plant+protoplasts+to+culture+with+oxygenated+perfluorocarbon%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular responses of plant protoplasts to culture with oxygenated perfluorocarbon.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 428, 501-505 (1997).</li>
<li>Sukumaran, N. P., Quamme, H., Weiser, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+fluorocarbons+to+study+freezing+in+plant+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of fluorocarbons to study freezing in plant tissues.</a> Plant Physiol. 50, 632-634 (1972).</li>
<li>Nagai, T., Ibata, K., Park, E. S., Kubota, M., Mikoshiba, K., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+variant+of+yellow+fluorescent+protein+with+fast+and+efficient+maturation+for+cell-biological+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A variant of yellow fluorescent protein with fast and efficient maturation for cell-biological applications.</a> Nat. Biotechnol. 20, 87-90 (2002).</li>
<li>Baker, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorophyll+fluorescence%3A+a+probe+of+photosynthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Plant.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chlorophyll fluorescence: a probe of photosynthesis in vivo.</a> Annu. Rev. Plant. Biol. 59, 89-113 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

זוהי טכניקה פשוטה וקלה לשימוש כדי לשפר את מיקרוסקופית של אוויר מלא או אופטית רקמות מורכבות. הראינו כי הטכניקה יש כמה יתרונות חזקים ואנו מקווים כי הוא ישמש להבהיר שאלות ביולוגיות הנוגעות אוויר עשיר רקמות. לדוגמה זה יהיה בחירה טבעית עבור מחקרים של ההתקפה הפתוגן ב mesophyll צמח או הריאות. אנו גם מודעים למגבלות של הטכניקה. אנחנו עובדים על התאמה טובה יותר מקדם השבירה, לשימוש עם מצבים אחרים של מיקרוסקופיה, ומילוי perfluorocarbon mountant במהלך הניסויים זמנים ארוכים. אנו גם מכירים, עם זאת, כי אחד היתרונות העיקריים של PFCs, כלומר להיות אינרטי מבחינה ביולוגית יש flipside. PFCs אינם מתמוססים בקלות מולקולות ביולוגיות אשר גם מרמז כי הם אינם יכולים לשמש בקלות לספק תרכובות של עניין, כגון הורמונים, תרופות מולקולות קטנות או יונים אחרים.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Perfluorodecalin </td><td> F2 כימיקלים </td><td> N / A </td><td> טלפון להזמנה. </td></tr><tr><td> קרוליינה תצפית ג&#39;ל </td><td> ביולוגית להבים </td><td> 13-2700 </td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה פשוטה הדמיה ארבידופסיס מותיר שימוש perfluorodecalin כנושאת הדמיה infiltrative

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

הבעיה של רכישת תמונות ברזולוציה גבוהה עמוק לתוך דגימות ביולוגיות היא להכרה נרחבת 1. ברקמת אוויר מלא כגון mesophyll הספוגי של עלי הצמח או הריאות חוליות קשיים נוספים נובעים מעברים מרובים מקדם השבירה בין מרכיבים תאיים, בין התאים airspaces ובין הרקמה הביולוגית ואת שאר מערכת אופטית. יתר על כן, חוסר התאמה מקדם השבירה להוביל הנחתה של עירור ופליטה fluorophore האות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. אנו מתארים כאן את היישום של perfluorocarbon, perfluorodecalin (PFD), כאמצעי הדמיה אופטית infiltrative אשר משפר לייזר מיקרוסקופיית confocal (LSCM) הדמיה מדגם בעומק, מבלי להזדקק מגביר פגיעה בשלטון לייזר ויש לו השפעה פיזיולוגית מינימלית 2. אנו מתארים את הפרוטוקול לשימוש PFD עם רקמת עלה ארבידופסיס thaliana, אשר מורכב אופטית כתוצאה שלהמבנה (איור 1). PFD יש מספר תכונות שהופכות אותו מתאים לשימוש הזה 3. מקדם השבירה של PFD (1.313) דומה לזו של מים (1.333), והוא קרוב יותר לזה של cytosol (כ 1.4) מאשר אוויר (1.000). בנוסף, PFD זמינה, ללא ניאון אינו רעיל. מתח הפנים הנמוך של PFD (19 dynes -1 ס&quot;מ), נמוכה מזו של מים (72 dynes -1 ס&quot;מ) וגם מתחת לגבול (25-30 ס&quot;מ Dyne -1) עבור חדירה הפיוניות 4, המאפשר לה להציף mesophyll airspaces ספוגי ללא יישום של ואקום פוטנציאל הרסני או פעילי שטח. לבסוף ו מכריע, PFD בעל קיבולת גדולה המסת CO 2 ו-O 2, אשר מאפשר חילופי גזים להישמר ברקמה מוצף, ובכך ממזערת את ההשפעה הפיזיולוגית על המדגם. מאפיינים אלה היו בשימוש ביישומים שונים הכוללים נשימה נוזלי חלקי הריאות inflation 5,6, 7 ניתוחים, דם מלאכותי 8, חמצון של צמיחה מדיה 9, ומחקרים של היווצרות קרח קריסטל בצמחים 10. כיום, מקובל לעלות רקמות במים או חיץ מימית הדמיה confocal לחיות. אנו רואים כי השימוש PFD כמדיום הרכבה מהווה שיפור על הנוהג הקיים ומאפשרת הכנת פשוט לחיות דגימות עלים שלמים הדמיה.

אנו מתארים את השימוש perfluorodecalin כמדיום הרכבה infiltrative. זוהי שיטה פשוטה לשיפור עומק הדמיה<em&gt; ארבידופסיס thaliana</em&gt; עלה רקמה עם השפעה פיזיולוגית מינימלית.

שיטה פשוטה הדמיה ארבידופסיס מותיר שימוש Perfluorodecalin כנושאת הדמיה Infiltrative

הבעיה של השגת תמונות ברזולוציה גבוהה בעומק דגימות ביולוגיות מוכרת באופן נרחב1. ברקמות מלאות אוויר, כגון המזופיל הספוגי של...

המטרה הכוללת של הליך זה היא למזער את הדגרדציה של תמונות ביולוגיות הנגרמת על ידי חללי אוויר בעלי העלה, כדי להשיג תמונות ברורות יותר של תאים חיים בתוך העלה. אם העלה מורכב בתווך הרכבה מימי ופלואורופור מעורר על ידי לייזר, חללי אוויר רבים שאינם מלאים ושינויים במקדם השבירה בתוך הרקמה המוצגת בכתום מגבילים את עוצמת האות המגיע מעומק הרקמה בתמונה המתקבלת. אם העלה מורכב במקום זאת ב-per fluoro deline או PFD, עירור הלייזר של הפלואורופור פחות נחלש ומאפשר העברה טובה יותר של אותות שנפלטו.בסופו של דבר, שימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית עם סריקת לייזר בשילוב עם תוך המטבקה PFD מספק תמונות ברורות של תאים חיים בתוך עלה הצמח בעומק הגדול פי שניים מהעומק האפשרי בעת שימוש בתוך מטבקה מימי. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון קיבוע או מטבקה של עלים ותוך מימי, הוא שהיא מפחיתה את השבירה בתוך המזופיל ומאפשרת הדמיה מדויקת יותר של תאים חיים בעומק רב יותר בתוך העלה, דבר שהיה בעייתי בעבר. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח במדעי הצמחים, כגון בחינת ביולוגיה של תאי המזופיל ואיתות in vivo, התאושבות של פתוגנים בעלים ואינטראקציות של פתוגנים בתוך הרקמה, ובכך לספק תובנות לגבי ביולוגיה בסיסית של הצמח.ניתן ליישם זאת גם על רקמות אחרות בעלות מקדם שבירה גבוה העשירות בחללי אוויר, כגון שבלול האוזן או ריאות של חולייתנים. את הפרוצדורה זו ידגים ד"ר George Littlejohn מהמעבדה שלי ב-Mount Leaf. הדגימות ב-PFD מתחילות בהכנת סלייד למיקרוסקופ עם אטם חדיר לגז מפולידימטילסילוקסן, או PDMS; PDMS הוא פולימר ויסקו-אלסטי שניתן לעצב אותו כדי לספק תא המותאם לדרישות הניסוי.השג את שיווי המשקל של ה-PFD עם אוויר על ידי ניעור נפח קטן של PFD בבקבוק מלא באוויר. ניתן להשיג זאת גם על ידי הזרמת בועות אוויר דרך ה-PFD. לאחר מכן, העבר את ה-PFD לצלח פטרי פתוח והצף עליו נבט שלם או עלה חתוך למשך חמש דקות. הרקמה צריכה להפוך לשקופה, באופן המזכיר רקמה מזכוכית (vitrified tissue).העלים עשויים להיראות כהים או בהירים יותר מאשר לפני החשיפה ל-PFD, בהתאם לתנאי התאורה ולגיל הרקמה שנעשה בה שימוש. לבסוף, מלאו את תא ה-PDMS ב-PFD מאוורר והעבירו בזהירות את דגימות הרקמה מפטרית האינקובציה לתא ה-PDMS. אטמו את הזריקה באמצעות כיסוי זכוכית (coverslip) ובצעו הדמיה.בהתאם לדרישות הניסוי, עלי חודשים הובאו לדגירה למשך חמש דקות בתמיה של חלבון פלואורסצנטי ירוק רקומביננטי או GFP. בבדיקה מיקרוסקופית של דגימות עלים שדוגרו ב-PFD, נראה כי מרבית חללי האוויר מוצפים ב-GFP רקומביננטי התלוי ב-PFD. ה-GFP מופיע בירוק, והצבע האדום מייצג כלורופיל, פלואורסצנציית לוטו ותאי מזופיל.ניכר כי העלה מוצף לאחר דגירה עם PFD, אך ייתכן שכיסי אוויר מזדמנים יישארו. תחת תנאים אלו, מים אינם מציפים את העלה. כאן, עלי opsys המבטאים את Venus, וריאנט של YFP הממוקם בציטוסול, דוגרו והורכבו באוויר, במים או ב-PFD לסריקה בלייזר. מיקרוסקופיה קונפוקלית של הדגימות מראה יתרון של PFD על פני אוויר ומים, עם עלייה של פי שניים בקירוב בעומק הדימוג.בעת השוואה בין PFD למים, ברגע שהטכניקה נשלטת, ניתן לבצעה תוך חמש עד 10 דקות אם היא מבוצעת כראוי. במהלך ביצוע הליך זה, חשוב לזכור ש-perfluorodecalin ממיס לק ציפורים וטפלון, אך הוא תואם לגריז סיליקון. לאחר צפייה בסרטון זה, תגמירו להבין היטב כיצד להשתמש ב-perfluorodecalin כמצע הרכבה לשיפור הדימוי בתאי עלי צמחים.אל תשכחו כי למרות ש-per fluoro delin אינו רעיל, אנו ממליצים לאמץ נהלי בטיחות סטנדרטיים בעת ביצוע פרוצדורה זו.

a-simple-method-for-imaging-arabidopsis-leaves-using-perfluorodecalin

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פיתחנו פרוטוקול פשוט לגשת לשחזור בתגובה הפיוניות לחיידקים לחיות. שיטה זו מקטינה ופצע ומניפולציה של העלה, לעומת השימוש קליפות אפידרמיס שדווח קודם לכן.

הערכת התגובה הפיוניות לחיות תאים חיידקיים באמצעות הדמיה עלה שלמים

מאמר זה מספק פרוטוקול לגידול שתילים של ארבידופסיס ב RootChip, פלטפורמת הדמיה microfluidic המשלבת שליטה אוטומטית של תנאי הגידול עם מעקב שורש מיקרוסקופי ו להתרגז על בסיס מדידת רמות מטבוליט תאיים.

זמן לשגות דימות פלואורסצנטי של צמיחה רוט ארבידופסיס עם מניפולציה מהירה של הסביבה רוט שימוש RootChip

אנו מתארים פרוטוקול באמצעות שקופיות קאמריות ותקשורת כדי לשתק פסיגי צמחים עבור הדמית confocal של האפידרמיס על פני כמה ימים של פיתוח, המתעד את בידול הפיוניות. חלבוני fluorophore מתויג-ניתן לעקוב באופן דינמי על ידי ביטוי ולוקליזציה subcellular, להגביר את ההבנה של התפקידים האפשריים שלהם במהלך חלוקת תאים והתמיינות תאים מסוג.

לטווח ארוך הדמיה, ברזולוציה גבוהה Confocal זמן פקיעה של<em&gt; טבורית ארבידופסיס</em&gt; אפידרמיס במהלך הנביטה

איתות 2 + Ca מסדירה תהליכים ביולוגיים מגוונים בצמחים. כאן אנו מציגים גישות לניטור לחץ אביוטי המושרה Ca מרחב ובזמן 2 + אותות בתאי ארבידופסיס ורקמות באמצעות Ca 2 + אינדיקטורים מקודד גנטי Aequorin או Case12.

מדידת מרחב ובזמן Ca 2 + אותות בצמחים ארבידופסיס

הדמיה confocal לחיות מספק לביולוגים עם כלי רב עוצמה כדי ללמוד פיתוח. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט עבור הדמית confocal לחיות לפתח פרחים ארבידופסיס.

חי Confocal הדמיה של פיתוח פרחים ארבידופסיס

מוצג כאן היא טכניקה פשוטה עבור ברזולוציה גבוהה confocal זמן לשגות הדמיה של פיתוח שורש היפוקוטיל עד 3 ימים באמצעות מטרות צמצם גבוהה מספריים ו perfluorodecalin כמו מדיום טבילה.

חדר פשוט עבור לטווח ארוך הדמיה confocal של שורש ו היפוקוטיל פיתוח

מאמר זה מדגים כיצד תרבות תודרנית לבנה השתילים בשטח פלטפורמה דו שכבתי microfluidic מגבילה את הבסיס העיקרי ואת שערות השורש למישור אופטי יחיד. פלטפורמה זו יכולה לשמש עבור הדמיה אופטית בזמן אמת מורפולוגיה שורש בסדר גם באשר דימות ברזולוציה של באמצעים אחרים.

הדמיה המורפולוגיה שורש השיער של תודרנית השתילים בשטח פלטפורמה Microfluidic דו שכבתי

כאן, אנו מציגים עבור פרוטוקול סינתזה ואפיון של חלקיקי תחמוצת צריום (nanoceria) עבור ROS (מינים חמצן תגובתי) ניקוי ויוו, nanoceria הדמיה ברקמות הצמח על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית, אין ויוו ניטור של nanoceria ROS ניקוי על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית.

ניקוי קטליטי של הצמח חמצן תגובתי מינים In Vivo על ידי חלקיקי תחמוצת צריום Anionic

אנחנו מדווחים על שיטה פשוטה רב-תכליתי לביצוע פלורסנט לחיות-הדמיה של עלים תודרנית לבנה על פני תקופה ארוכה של זמן. אנו משתמשים צמח תודרנית הטרנסגניים לבטא גן כתב פלורסנט תחת השליטה של יזם הקשורות חסינות כדוגמה להשגת הבנה ייתכן של תגובות חיסוניות הצמח.

שיטה רב-תכליתי עבור הרכבה תודרנית יוצא Intravital הדמיה בצילום מואץ

המטרה של פרוטוקול זה היא להראות כיצד לטעון את ה-CFDA לאתרים שונים של החלקים התחתונים של Arabidopsis. לאחר מכן אנו מציגים את דפוס ההתפלגות שהתקבל של CF ב נצרי.

שירי תנועה של CFDA מעקב טעון ברקמות הכיור התחתון של Arabidopsis

מספר שיטות נפוצות מוצגות כאן כדי לחקור את אירועי הסחר בקרום של קולטן פלזמה קינאז. כתב יד זה מתאר פרוטוקולים מפורטים הכוללים את הכנת החומר הצמחי, טיפול תרופתי ומערך הדמיה קונפוקלית.

שיטות מבוססות תמונה לחקר אירועי סחר בממברנות בתאי שושלת סטומאטלית

למדו שיטת הדמיה מתקדמת לצמחי Arabidopsis thaliana באמצעות Perfluorodecalin כתמיסת הרכבה חודרנית. השיטה מכפילה את עומק ההדמיה ומאפשרת צפייה ברורה בתאים חיים בעלייה.

שיטה פשוטה הדמיה ארבידופסיס מותיר שימוש Perfluorodecalin כנושאת הדמיה Infiltrative

גלה סרטונים נוספים