Name: ויזואליזציה של כלי דם Ca 2 + איתות מופעלות על ידי ROS נגזר אוטוקריני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: חקור איתות סידן בכלי דם המופעל על ידי ROS נגזר אוטוקריני באמצעות צבעים רגישים לחמצון וחיישנים פלואורסצנטיים במודל תרבית משותפת של תאי אנדותל ומקרופאגים פעילים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים מענק (R01 HL086699, HL086699-01A2S1, 1S10RR027327-01) ל-MM. מאמר שלנו נתמך בחלקו על ידי Carl Zeiss MicroImaging LLC.

<ol><li>Madesh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+role+for+superoxide+in+InsP3+receptor-mediated+mitochondrial+dysfunction+and+endothelial+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Selective role for superoxide in InsP3 receptor-mediated mitochondrial dysfunction and endothelial apoptosis.</a> J. Cell. Biol. 170, 1079-1090 (2005).</li>
<li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiol. Rev. 82, 47-95 (2002).</li>
<li>Hamanaka, R. B., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+reactive+oxygen+species+regulate+cellular+signaling+and+dictate+biological+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem.+Sci%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial reactive oxygen species regulate cellular signaling and dictate biological outcomes.</a> Trends Biochem. Sci. 35, 505-513 Forthcoming.</li>
<li>Hawkins, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S-glutathionylation+activates+STIM1+and+alters+mitochondrial+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">S-glutathionylation activates STIM1 and alters mitochondrial homeostasis.</a> J. Cell. Biol. 190, 391-405 (2010).</li>
<li>Madesh, M., Hajnoczky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VDAC-dependent+permeabilization+of+the+outer+mitochondrial+membrane+by+superoxide+induces+rapid+and+massive+cytochrome+c+release%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">VDAC-dependent permeabilization of the outer mitochondrial membrane by superoxide induces rapid and massive cytochrome c release.</a> J. Cell Biol. 155, 1003-1015 (2001).</li>
<li>Finkel, T., Holbrook, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidants+oxidative+stress+and+the+biology+of+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oxidants oxidative stress and the biology of ageing.</a> Nature. 408, 239-247 (2000).</li>
<li>Rittirsch, D., Flierl, M. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harmful+molecular+mechanisms+in+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Harmful molecular mechanisms in sepsis.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 776-787 (2008).</li>
<li>Sanlioglu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+Rac1-dependent+reactive+oxygen+species+formation+and+coordinates+tumor+necrosis+factor-alpha+secretion+through+IKK+regulation+of+NF-kappa%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces Rac1-dependent reactive oxygen species formation and coordinates tumor necrosis factor-alpha secretion through IKK regulation of NF-kappa.</a> 276, 30188-30198 (2001).</li>
<li>Hawkins, B. J., Madesh, M., Kirkpatrick, C. J., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superoxide+flux+in+endothelial+cells+via+the+chloride+channel-3+mediates+intracellular+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Superoxide flux in endothelial cells via the chloride channel-3 mediates intracellular signaling.</a> Mol. Biol. Cell. 18, 2002-2012 (2007).</li>
<li>Vliet, A. vander <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidases+in+lung+biology+and+pathology%3A+host+defense+enzymes+and+more%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic.+Biol.+Med%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidases in lung biology and pathology: host defense enzymes and more.</a> Free Radic. Biol. Med. 44, 938-955 (2008).</li>
<li>Babior, B. M., Kipnes, R. S., Curnutte, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+defense+mechanisms.+The+production+by+leukocytes+of+superoxide%2C+a+potential+bactericidal+agent%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Biological defense mechanisms. The production by leukocytes of superoxide, a potential bactericidal agent.</a> J. Clin. Invest. 52, 741-744 (1973).</li>
<li>Lambeth, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOX+enzymes+and+the+biology+of+reactive+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">NOX enzymes and the biology of reactive oxygen.</a> Nat. Rev. Immunol. 4, 181-189 (2004).</li>
<li>Mukhopadhyay, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+detection+of+apoptosis+and+mitochondrial+superoxide+production+in+live+cells+by+flow+cytometry+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Simultaneous detection of apoptosis and mitochondrial superoxide production in live cells by flow cytometry and confocal microscopy.</a> Nat. Protoc. 2, 2295-2301 (2007).</li>
<li>Niethammer, P., Grabher, C., Look, A. T., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tissue-scale+gradient+of+hydrogen+peroxide+mediates+rapid+wound+detection+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A tissue-scale gradient of hydrogen peroxide mediates rapid wound detection in zebrafish.</a> Nature. 459, 996-999 (2009).</li>
<li>Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptors+and+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptors and innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 1, 135-145 (2001).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

השיטה המתוארת כאן מאפשר מדידה כמותית מהירה של מינים חמצן תגובתי בתאים חיים או באמצעות צבעים חמצון רגיש או חיישנים פלסמיד. אגוניסטים של TLRs (קולטני Toll-כמו) הם תרכובות לגרות את התאים דרך TLRs הנוכחי על פני התא ההדק מסלולי איתות במורד 15. בפרוטוקול שלנו, אנו השתמשו בשלושה דהינו אגוניסטים שונים TLR, שאיבה, teichoic חומצה TLR2 אגוניסט, פולי (אני: C). TLR3-אגוניסט, LPS-TLR4 אגוניסט אשר דיווחו לגרום ROS כמודל למערכת כדי להדגים את המדידה ROS . מדידה של ROS באמצעות חמצון צבען...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Attofluor תא תא </td><td> Invitrogen </td><td> A7816 </td></tr><tr><td> Antimycin </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> A8674 </td></tr><tr><td> DMEM בינוני גלוקוז נמוכה </td><td> Invitrogen </td><td> 10567-014 </td></tr><tr><td> צמיחה האנדותל גורם תוספת (ECGS) </td><td> בצפון מדינת ניו יורק </td><td> 02-102 </td></tr><tr><td> סרום שור עוברית </td><td> Invitrogen </td><td> 12662011 </td></tr><tr><td> G418 </td><td> Invitrogen </td><td> 10131-027 </td></tr><tr><td> לטין </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> G1393 </td></tr><tr><td> H 2 DCFDA </td><td> Invitrogen </td><td> D-399 </td></tr><tr><td> LPS </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> L4516 </td></tr><tr><td> LTA </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> L2515 </td></tr><tr><td> MitoSOX האדום </td><td> Invitrogen </td><td> M36008 </td></tr><tr><td> Opti-ממ אני מופחת בינוני סרום </td><td> Invitrogen </td><td> 51985091 </td></tr><tr><td> פן / סטרפטוקוקוס (10x) </td><td> Invitrogen </td><td> 15140163 </td></tr><tr><td> pHyPer-Cyto </td><td> Evrogen </td><td> FP941 </td></tr><tr><td> pHyPer-dMito </td><td> Evrogen </td><td> FP942 </td></tr><tr><td> פולי (אני: C) </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> P0913 </td></tr><tr><td> פריזמה תוכנה 5.0 </td><td> GraphPad תוכנה, Inc </td><td></td></tr><tr><td> SigmaPlot 11.0 </td><td> Systat תוכנה, Inc </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין-EDTA (10x) </td><td> Invitrogen </td><td> 15400054 </td></tr><tr><td> T-25 צלוחיות </td><td> קורנינג </td><td> 430639 </td></tr><tr><td> T-75 צלוחיות </td><td> BD פלקון </td><td> 353136 </td></tr><tr><td> גם 96-TC ומיקרו צלחת יפה </td><td> BD פלקון </td><td> 353072 </td></tr><tr><td> זן 2009 תוכנה </td><td> Carl Zeiss 510 Meta confocal מיקרוסקופיה </td><td></td></tr></tbody></table>

ויזואליזציה של כלי דם ca 2 + איתות מופעלות על ידי ros נגזר אוטוקריני

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

סטרס חמצוני היה מעורב במספר מצבים פתולוגיים כולל נזק איסכמיה / reperfusion ועל אלח דם. הרעיון של סטרס חמצוני מתייחס היווצרות חריגה של ROS (מינים חמצן תגובתי), אשר כוללים • O 2 -, H 2 O 2, רדיקלים הידרוקסיל. מינים החמצן מגיב משפיע שפע של תהליכים תאיים כולל התמרה האות, התפשטות תאים ומוות התא 1-6. ROS יש פוטנציאל נזק בכלי הדם ותאי איבר ישירות, והוא יכול ליזום תגובות כימיות משני שינויים גנטיים כי בסופו של דבר לגרום הגברה של הנזק ROS בתיווך הראשוני רקמות. רכיב מרכזי של מפל הגברה המחזקת נזק בלתי הפיך לרקמות הוא גיוס והפעלה של מחזורי תאים דלקתיים. במהלך דלקת, תאים דלקתיים לייצר ציטוקינים כגון נמק הגידול גורם-α (TNFα) ו-IL-1 כילהפעיל בתאי האנדותל (EC) ותאי אפיתל נוספת להגדיל את 7 התגובה הדלקתית. תפקוד אנדותל כלי דם הוא תכונה הוקמה דלקת חריפה. המקרופאגים לתרום תפקוד אנדותל במהלך דלקת על ידי המנגנונים אינם ברורים. הפעלה של תוצאות מקרופאגים לשחרור תאיים של O 2 • - שונות הפרו ציטוקינים דלקתיים, אשר מפעילה איתות פתולוגיים בתאים סמוכים 8. Oxidases NADPH הם המקור העיקרי והראשון במעלה של ROS ברוב סוגי התאים. לאחרונה, היא מופיעה על ידינו ואחרים 9,10 כי ROS המיוצר על ידי oxidases NADPH לעורר את הייצור המיטוכונדריאלי ROS במהלך תנאי pathophysiological רבים. מכאן מדידת הייצור המיטוכונדריאלי ROS חשוב לא פחות בנוסף למדידת cytosolic ROS. המקרופאגים מייצרים ROS על ידי האנזים מונואמין NADPH flavoprotein אשר ממלא תפקיד העיקרי לדלקת. הופעל פעם אחת,NADPH אוקסידאז phagocytic מייצרת כמויות עצומות של O 2 • - חשובים במנגנון ההגנה המארחת 11,12. למרות אוטוקריני הנגזרות O 2 • - ממלא תפקיד חשוב בפתוגנזה של מחלות כלי הדם, ויזואליזציה של ROS-Induced אוטוקריני איתות תאיים, כולל גיוס Ca 2 + עדיין השערה. פיתחנו מודל שבו מקרופאגים מופעל משמשים כמקור של O 2 • - כדי transduce איתות לתאי אנדותל סמוכים. באמצעות מודל זה אנו מראים כי macrophage הנגזרות O 2 • - להוביל סידן איתות לתאי אנדותל סמוכים.

שיטה יעילה כדי להשיג תובנות לדמיין את האינדוקציה אוטוקריני הנגזרות ROS של האנדותל Ca2 + איתות מתואר. שיטה זו מנצלת את מדידת ROS נגזר אוטוקריני מופעלות Ca2 + לגיוס בתאי האנדותל בכלי הדם במודל שיתוף תרבות.

ויזואליזציה של כלי דם Ca 2 + איתות מופעלות על ידי ROS נגזר אוטוקריני

עקה חמצונית מעורבת במספר מצבים פתולוגיים, כולל נזקי איסכמיה/reperfusion (חזרת זרימה) ואלח דם (ספסיס). המושג של עקה חמצונית...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להדגים ויזואלית את השיגנלינג של סידן בכלי הדם המופעל על ידי רדיקלי חמצן (ROS) ממקור פריקריני. דבר זה מושג תחילה על ידי הדמיה של ROS באמצעות צבעים הרגישים לחמצון במקרופאגים פעילים. ניתן להדגים ROS גם בתאים אנדותליאליים באמצעות חיישנים פלואורסצנטיים מבוססי פלסמיד.לאחר מכן, עברו לוויזואליזציה בו-זמנית של מקפגים מופעלים המסומנים ב-cell tracker red ותאי אנדותל המסומנים ב-flu of four במודל של תרבית משותפת. לבסוף, מדדו את איתות הסידן בתאי האנדותל שמופעל על ידי ROS שמקורם במקפגים, באמצעות מערכת דימוי קונפוקאלית.תוצאות אלו יכולות להדגים את רמות ה-ROS באופן עצמאי, וכן להעריך בו-זמנית את גיוס הסידן התוך-תאי המופעל על ידי ROS הנגזר מ-Peregrine. שיטה זו מאפשרת הערכה סימולטנית של שני מולקולות איתות שונות המעוררות באופן הדוק איתות כלי דם ומצב פתופיזיולוגי של סימולטור. שני פוסט-דוקטורנטים מהמעבדה שלי, Karthik ו-Raj, ידגימו את הפרוצדורה על מדידות גולמיות ומדידות סידן, וכן על אינטראקציות בין מקרופאגים לתאי אנדותל.תרבתו מקפגים גזורים ממונוציטים של עכברים בצלחות בעלות תחתית זכוכית בקוטר 35 מילימטר. לאחר מכן, חפו את התאים עם אגוניסטים של קולטן דמוי-טול (toll-like receptor) דגרו אותם למשך שש שעות בטמפרטורה של 37 °C. לצורך ויזואליזציה של הציטוזול.להערכת ROS, הוסיפו צבע הרגיש לחמצון והדגירו את התאים למשך 20 דקות. כעת, הדמיאו את התאים על במה בבקרה טמפרטורלית של מערכת דימיון קונפוקלית. לחלופין, כדי להדגים ROS מיטוכונדריאלי בתאים שהופעלו באמצעות TLR, הוסיפו אינדיקטור לסופראוקסיד מיטוכונדריאלי והדגירו את התאים למשך 30 דקות ב-37 °C.עבור ביקורת שלילית, טפל את התאים ב-PBS או ב-DMSO עבור ביקורת חיובית. טפל את התאים ב-2 mM antimycin. לאחר מכן, עבור להדמיה של כל התאים על במה עם בקרת טמפרטורה של מערכת דימיג קונפוקאלית.באמצעות תוכנת Image J, נתחו את כל נתוני התמונה. החיישן הפלואורסצנטי hyper מזהה באופן ספציפי ריכוזים סוב-מיקרומולריים של פרוקסיד, ובהתבסס על ביטוי ביונקים, ניתן לכוון את תכנון הווקטור לציטופלזמה או למיטוכונדריה. באמצעות אלקטרופורציה, צרו קווים יציבים של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים ריאתיים של עכבר הנושאים פלסמיד עם ביטוי-יתר של hyper.כדי להקל על צמיחת מושבות, זרע תאים בצפיפות נמוכה ב-TMEM מלא והדגר למשך 48 שעות, לאחר מכן החלף את המצע במצע תרבית מלא בתוספת אנטיביוטיקה לברירה. סרוק את השיבוטים כדי למצוא את האחוז הגבוה ביותר של תאים היפר-חיוביים, והגבל את התרבית כדי ליצור קווים יציבים של תאים היפר-חיוביים עבור ניסויים בודדים. זרע תאים על כיסויות זכוכית מצופות ג'לטין בריכוז 0.2% והגדר למשך לילה עד להגעה ל-80% התלכדות.כעת הפעילו את התאים באמצעות ליגנדים של TLR והדגירו למשך שש שעות ב-37 °C. לצורך זיהוי ROS ציטופלזמי, רכבו את כיסויי הזכוכית (cover slips) של התאים על תא תאים מסוג adelo. הוסיפו 1 mL של תמיסת מלח מאוזנת (balance salt solution) שחוממה מראש, והניחו את התא על במה עם בקרת טמפרטורה של מערכת ההדמיה הקונפוקלית.יש להקליט שינויים בפלואורסצנציה בתאים לצורך זיהוי של ROS מיטוכונדריאלי. יש לכלול בקר חיובי של 2 µM antimycin A. לאחר מכן, יש להכין את לביות הזכוכית של התאים שעברו טיפול עבור מיקרוסקופיה קונפוקלית. בצע ניתוח תמונות באמצעות תוכנת Image J.התחל עם תאי אנדותל שגודלו עד ל-80% confluence על כיסורי זכוכית מצופים בג'לטין, לצורך ויזואליזציה ומדידה של שינויים בריכוז הסידן התאי. דגור את התאים בצבע הפלואורסצנטי fluo-4 AM בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות; כדי למזער את איבוד הצבע, שטוף את התאים בתמיסת דימיג'ינג ניסויית המכילה suen pyro zone. כעת, הרכב את כיסורי הזכוכית על תא אדלו (adelo cell chamber) עם 800 µL של תמיסת דימיג'ינג ניסויית שחוממה מראש, ומקם את התאים על במה מבוקרת טמפרטורה של מערכת הדימיג'ינג הקונפוקלית בתוך מבחנה נפרדת.השתמש ב-500 nanograms per milliliter של cell tracker red C-M-T-P-X למשך 15 דקות כדי לסמן את אוכלוסיית המקרופאגים הנחקרת; שטוף את התאים והשהה מחדש את המשקעים ב-200 microliters של תמיסת דימות ניסויית. כעת הוסף את המקרופאגים המסומנים על גבי תאי אנדותל הטעונים ב-flu oh 4:00 AM במכלול תא confocal. רשום את הפלואורסצנציה הירוקה והאדומה בכל שלוש שניות למשך 10 דקות.בניסוי זה, תאי J 7 74 0.1 נחשפו לליגנדים של TLR שתיים, שלוש וארבע למשך שש שעות. תמונות קונפוקאליות מייצגות מראות עלייה ב-R os ציטוזולי כפי שנמדד באמצעות DCF. באופן מעניין, פלואורסצנציה אדומה של mitoses socks מעידה על עלייה דומה ב-ROS מיטוכונדריאלי.שינויים פלואורסצנטיים אלו הם כמותיים. לפיכך, יש לנרמל את התוצאות ולהביעם כשינוי מכפלה יחסי לכל טיפול, כאשר אות ה-antimycin a מהווה בקרת חיובית לייצור ROS מיטוכונדריאלי. איור זה מציג תמונות של רמות פחמימן באנדותל, בציטוזול ובמיטוכונדריה בתאים המבטאים באופן יציב hyper cyto או hyper D mito.MP ECS שעוררו באמצעות אגוניסטים של TLR. כימות של שינוי בממוצע הפלואורסצנציה מדגים עלייה בפלואורסצנציה של hyper cyto ו-hyper D mito לאחר שש שעות של עיבור במערכת של שיתוף-תרבית. כדי להעריך את סיגנל ה-ROS של Peregrine, מקרופאגים ממירין שבודדו באופן טרי הן מעכברים מסוג wild type והן מעכברים מסוג GP 91 Fox null הופעלו באמצעות 1 µg/mL של LPS למשך שש שעות.מקרופגים סומנו בצבע אדום באמצעות C-M-T-P-X והוסיפו ל-MPM ecs טעונים בفلורסצנציה ירוקה. באופן מעניין, מקרופגים מופעילים על ידי LPS שבודדו מעכברי פרא (wild type) עוררו גיוס סידן נרחב ומהיר ב-MPM ECS בהשוואה למקרופגים מעכברי GP 91 Fox null.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור כי הן הורדה ממושכת והן חשיפה לייזר עלולות להוביל לחמצון עצמי של DCF. חיוני למנוע פוטו-בליצ'ינג (photo bleaching) של hyper cyto ו-hyper D mitral. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע מדידת RA במקרופאגים ובתאי אנדותל בתוך שבע שעות, בתנאי שהתהליך מבוצע כהלכה.

visualization-vascular-ca2-signaling-triggered-paracrine-derived

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מאמר זה מתאר מודל פשוט של גירוי אנגיוגנזה ב לפדר את העכברוש. המודל מייצר עליות דרמטיות באזור נימי, מצמיח כלי דם וצפיפות כלי הדם במשך זמן קצר יחסית ברקמות המאפשר en להדמיה פני רשתות שלמות כלי הדם עד לרמה תא בודד.

לפדר החצנה חולדה: דגם לחקירת דינמיקה סלולר המעורבים אנגיוגנזה

אנו מתארים בדיקת פקק מטריג'ל כדי להמחיש את הפוטנציאל האנגיוגני של מאגר של גורמים המופרשים על ידי תאים סרטניים באמצעות שתי שיטות הדמיה משלימות, אולטרסאונד ואנדומיקרוסקופיה. המטריגל, ג'ל מחקה מטריצה חוץ-תאית (ECM), משמש להחדרת גורמים אנגיוגניים למארח (עכבר) המופרשים למדיה המותנית (C.M).

פונקציונליות ניטור ומורפולוגיה של כלי דם גויס על ידי גורמים מופרשים על ידי תאים מניבי גידול בצמיחה מהיר

כאן, אנו מתארים גישת מיקרוסקופיה אופטית חצי פולשנית לאינדוקציה של קריש פוטו-טרומבוטי של רוז בנגל בקליפת המוח הסומטוסנסורית של עכבר in vivo.  ההיבטים הטכניים של הליך ההדמיה מתוארים מאינדוקציה של אירוע פוטוטרומבוטי ועד ליישום ואיסוף נתונים.

רוז בנגל Photothrombosis ידי דימות אופטי Confocal<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של שבץ כלי אחד

הושלתי האנדותל שנגזר מתאי גזע המושרה ביותר (iPSC-EPs) יש את הפוטנציאל לחולל מהפכה לטיפולי מחלות לב וכלי דם ולאפשר יצירת מודלים נאמנים יותר של מחלות לב וכלי דם. בזאת, כימוס של iPSC-EPs בתלת מימדי (3D) קולגן מיקרוסביבה וניתוח כמותי של הפוטנציאל הגלום בתאים אלה מתוארים.

מודל תלת מימד וצינור חישוב מתורבת לכמת את הפוטנציאל הוושלתי של iPSC-נגזר של התגובה האנטי-מגנטית

miRNA הרפוי יש פוטנציאל משמעותי בוויסות התקדמות סרטן. המודגמות כאן גישות אנליטיות משמשים לצורך זיהוי הפעילות של טיפול miRNA קומבינטורית להפסקת מחזור התא, אנגיוגנזה.

ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

במודלים של בעלי מבחנה של אנגיוגנזה כלילית ניתן לעשות שימוש לגילוי המנגנון הסלולר והמולקולרי של אנגיוגנזה כלילית. באופן מתורבת תרבויות של הסינוס venosus ורקמות אנדוקרדיום להראות צמיחה חזקה בתגובה ל-ולהציג דפוס דומה של הביטוי הפיכה-TFII כמו ב vivo.

מודל מבחנה של אנגיוגנזה כלילית

רקמות מהונדסות מסתמכות במידה רבה על רשתות כלי דם נאותות כדי לספק חומרים מזינים וגזים חיוניים ולהסיר פסולת מטבולית. בעבודה זו, פרוטוקול זריעה צעד אחר צעד של תאי אנדותל ותאי תמיכה יוצר רשתות כלי דם מאורגנות מאוד בפלטפורמת תפוקה גבוהה לחקר התנהגות כלי שיט מתפתחת בסביבה תלת-ממדית מבוקרת.

זריעת תאים Stepwise על פיגומים Tessellated ללמוד כלי דם מונבטים

איתות סידן מערכתי המופעל על ידי גלוטמט חוץ-תאי הוא קריטי לגיוס תגובות הגנת הצמח לפצעים מכניים ולתקפת אוכלי עשב בצמחים. מאמר זה מתאר שיטה לדמיין את הדינמיקה המרחבית והטמפורלית של שני גורמים אלה באמצעות צמחי תאליאנה ערבידופסיס המבטאים ביוסנסורים פלואורסצנטיים רגישים לסידן וגלוטמט.

שדה רחב, הדמיה בזמן אמת של אותות פצע מקומיים ומערכתיים ב Arabidopsis

בדיקה זו משתמשת בתאי גזע עובריים של עכברים המתמיינים לגופי עובר בתרבית בג'ל קולגן תלת-ממדי כדי לנתח את התהליכים הביולוגיים השולטים באנגיוגנזה נובטת במבחנה. הטכניקה יכולה להיות מיושמת לבדיקת תרופות, מידול מחלות, ולחקר גנים ספציפיים בהקשר של מחיקות קטלניות עוברית.

במבחנה בדיקת הנבטה תלת מימדית של אנגיוגנזה באמצעות תאי גזע עובריים של עכבר לצורך מידול מחלות כלי דם ובדיקות סמים

המחקר הנוכחי מתווה שיטה הניתנת לשחזור ומתיחה גבוהה לחקר אירועי איתות Wnt פרקריניים לא-קנוניים במבחנה.  פרוטוקול זה יושם כדי להעריך את ההשפעה של איתות Wnt5a של פרקרין בתאי הצמרת העצבית של מורין ובמיובלסטים.

מידול אותות Wnt פאראקרינים לא-קנוניים במבחנה

מחקר זה מציג את בדיקת נדידת פצעי השריטה הדו-ממדית (2D) ואת בדיקת הנבטת הספרואידים התלת-ממדית (3D), יחד עם שיטות הניתוח שלהם במורד הזרם, כולל מיצוי RNA ואימונוציטוכימיה, כבדיקות מתאימות לחקר אנגיוגנזה במבחנה.

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד

חקור איתות סידן בכלי דם המופעל על ידי ROS נגזר אוטוקריני באמצעות צבעים רגישים לחמצון וחיישנים פלואורסצנטיים במודל תרבית משותפת של תאי אנדותל ומקרופאגים פעילים.

ויזואליזציה של כלי דם Ca^{2 +} איתות מופעלות על ידי ROS נגזר אוטוקריני

גלה סרטונים נוספים