Name: עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: למד שיטה פשוטה ושחזורית לריסוק עצב הישי בעכברים וניתוח הר שלם של שרירים לאחר התחדשות עצבית. הטכניקה משתמשת במלקחיים המוסטטיים לסימון מדויק ומאפשרת הערכה יעילה של חידוש עצבי בשרירים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים NIH K08NS065157 (כדי TAF) בנוסף, מרכז פן על צ&#39;כית, מספר פרס P30AR050950 מן המכון הלאומי של דלקת פרקים, מחלות השלד והשרירים והעור נתמך בעבודה זו (TAF וסטיבן ס &#39;שרר). לבסוף, שריינרים ילדים מרכז המחקר זרע מימון (TAF) נתמך על העבודה הזאת. ברצוננו להודות לד&quot;ר יאנג, ג&#39;ין בן עבור בתחילה הוכחת הר ההליך כולו ואיימי א &#39;קים על עזרתה בהפקת סקיצות של איור 1.

<ol><li>Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neurotoxic+and+neuroprotective+agents+on+peripheral+nerve+regeneration+assayed+by+time-lapse+imaging+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo.</a> J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).</li>
<li>Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinnervation+of+the+tibialis+anterior+following+sciatic+nerve+crush+injury%3A+A+confocal+microscopic+study+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: A confocal microscopic study in transgenic mice.</a> Exp. Neurol. 207, 64-74 (2007).</li>
<li>Amado, S., Simñes, M. J., Armada-da-Silva, P. A. S., Luís, A. L., Shirosaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+hybrid+chitosan+membranes+and+N1E-115+cells+for+promoting+nerve+regeneration+in+an+axonotmesis+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Use of hybrid chitosan membranes and N1E-115 cells for promoting nerve regeneration in an axonotmesis rat model.</a> Biomaterials. 29, 4409-4419 (2008).</li>
<li>Luís, A. L., Rodrigues, J. M., Geuna, S., Amado, S., Simðes, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+cell+transplantation+effects+on+sciatic+nerve+regeneration+after+a+standardized+crush+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Neural cell transplantation effects on sciatic nerve regeneration after a standardized crush injury in the rat.</a> Microsurgery. 28, 458-470 (2008).</li>
<li>Luís, A. L., Amado, S., Geuna, S., Rodrigues, J. M., Simðes, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J. Neurosci. Methods. 163, 92-104 (2007).</li>
<li>Baptista, A. F., de Souza Gomes, J. R., Oliveira, J. T., Santos, S. M. G., Vannier-Santos, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+assess+function+after+sciatic+nerve+lesion+in+the+mouse+-+adaptation+of+the+sciatic+static+index%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new approach to assess function after sciatic nerve lesion in the mouse - adaptation of the sciatic static index.</a> J. Neurosci. Methods. 161, 259-264 (2007).</li>
<li>Ronchi, G., Raimondo, S., Varejão, A. S. P., Tos, P., Perroteau, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+crush+injury+of+the+mouse+median+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Standardized crush injury of the mouse median nerve.</a> J. Neurosci. Methods. 188, 71-75 (2010).</li>
<li>Berg, A., Zelano, J., Cullheim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin+G-2+ligand+mRNA+is+downregulated+in+spinal+motoneurons+after+sciatic+nerve+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Netrin G-2 ligand mRNA is downregulated in spinal motoneurons after sciatic nerve lesion.</a> Neuroreport. 21, 782-785 (2010).</li>
<li>Girolami, E. I., Bouhy, D., Haber, M., Johnson, H., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+and+potential+role+of+SOCS1+and+SOCS3+in+Wallerian+degeneration+in+injured+peripheral+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Differential expression and potential role of SOCS1 and SOCS3 in Wallerian degeneration in injured peripheral nerve.</a> Exp. Neurol. 223, 173-182 (2010).</li>
<li>Hossain-Ibrahim, M. K., Rezajooi, K., Stallcup, W. B., Lieberman, A. R., Anderson, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+axonal+regeneration+in+the+central+and+peripheral+nervous+systems+of+the+NG2-deficient+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Analysis of axonal regeneration in the central and peripheral nervous systems of the NG2-deficient mouse.</a> BMC Neurosci. 8, 80-80 (2007).</li>
<li>Thornton, M. R., Mantovani, C., Birchall, M. A., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+N-CAM+and+N-cadherin+expression+in+axotomized+and+crushed+rat+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Quantification of N-CAM and N-cadherin expression in axotomized and crushed rat sciatic nerve.</a> J. Anat. 206, 69-78 (2005).</li>
<li>Beer, G. M., Steurer, J., Meyer, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardizing+nerve+crushes+with+a+non-serrated+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Standardizing nerve crushes with a non-serrated clamp.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 531-534 (2001).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

הצגנו שיטה להשיג דלוקה מלאה ומהימנה גיד הנשה עם סימון מדויק של אתר דלוק. כאמור, למעוך גיד הנשה הוא מודל נפוץ של פגיעה עצבית היקפית בעכברים וחולדות. למרות כל שיטה של ​​התאהבות יש יתרונות וחסרונות, מצאנו שיטה זו הופק דלוקה שלמה סומן בקלות עם מינימום של ציוד מיוחד (מלחציים מיוחדים למשל, וכו &#39;). למחוץ שיטות הכלי הנפוץ ביותר המשמש למחוץ העצב העכבר ה...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם (תיאור / כמות) </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> קליפר מיני עם מס &#39;0000 Blade </td><td> Roboz </td><td> RC-5903 </td></tr><tr><td> נאיר מסיר שיער (9 גר &#39;.) </td><td> הכנסייה דווייט ושות&#39; בע&quot;מ </td><td> N / A </td></tr><tr><td> בבטאדין ליטוש כירורגי (1 ליטר) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 19066452 </td></tr><tr><td> משחת עיניים (1 גר &#39;.) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 19082795 </td></tr></tbody></table> כירורגי כלים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם (תיאור / כמות) </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> FST 250 חם חרוז מעקר </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 18000-45 </td> &lt;/ Tr&gt; <tr><td> איריס מספריים (11 ס&quot;מ) </td><td> Precision של מכשירים בעולם </td><td> 500216 </td></tr><tr><td> פוטס, סמית מלקחיים (סטרייט, 18cm; 1x2 שיניים) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11024-18 </td></tr><tr><td> מקפרסון, Vannas מספריים (5 להבים מ&quot;מ) </td><td> Precision של מכשירים בעולם </td><td> 14124-G </td></tr><tr><td> דומונט # 5 מלקחיים - Dumoxel תקן עצה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11252-30 </td></tr><tr><td> דומונט # 5/45 מלקחיים - Dumoxel תקן עצה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11251-35 </td></tr><tr><td> Hemostats יפות במיוחד (סטרייט, בתוך משטחים חלקים) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 13020-12 </td></tr><tr><td> אבקת פחם פעיל (500 גרם) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> C272-500 </td></tr><tr><td> 6-0 גודל התפרים עם מחט C-1 (משי סטרילי, שחור, קלועה,שאינם נספגים, 18 &quot;אורך; Box של 36) </td><td> Roboz </td><td> SUT-1073-1011 </td></tr><tr><td> רפלקס Applier קליפ (במשך 9 קליפים מ&quot;מ) </td><td> Precision של מכשירים בעולם </td><td> 500345 </td></tr><tr><td> 9 מ&quot;מ נירוסטה רפלקס קליפים (100/box) </td><td> Precision של מכשירים בעולם </td><td> 500346 </td></tr></tbody></table> Animal Care: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם (תיאור / כמות) </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> % 0.9 סודיום כלוריד להזרקה (חינם חומר משמר; 20 מ&quot;ל) </td><td> Hospira </td><td> 0409-4888-20 </td></tr><tr><td> מערכת שלמה שמיכה Homeothermic עם בדיקה גמיש (בינוני, 115 VAC, 60 הרץ) </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 507222F </td></tr></tbody></table> כירורגי Platforמ &#39;ו Retractors: (לרכוש בחנות המקומית לחומרי) <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם (תיאור /) </td><td> כמות </td></tr><tr><td> פלטפורמת פלדה אל חלד (מחורץ, ~ 12 &quot;x12&quot; x1 / 8 &quot;) </td><td> 1 </td></tr><tr><td> לחצן מגנטים (לדוגמה: ליקוי חמה E825) </td><td> 3 </td></tr><tr><td> פלדה אל חלד (3 ברגים &quot;ארוך, קוטר נקבע על ידי מגנטים לחצן) </td><td> 3 </td></tr><tr><td> נירוסטה אגוזים (בהתאמת גודל ברגים) </td><td> 9 </td></tr><tr><td> גומיות (המתח אור) </td><td> 3 </td></tr><tr><td> סיכות חרקים (שני הקצוות בנט טופס הוקס) </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> חצי מאריה: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם (תיאור / כמות) </td><td> הספק &lt;/ Strong&gt; </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde (1 ק&quot;ג) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1 ק&quot;ג </td></tr><tr><td> פוספט נתרן Dibasic נטול מים (500 גר &#39;, המשמשים להכנת מאגר פוספט) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> S375-500 </td></tr><tr><td> פוספט נתרן Monobasic נטול מים (1 ק&quot;ג, המשמשים להכנת מאגר פוספט) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> Glutaraldehyde (50%, 10 x 10 מ&quot;ל) </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 18431 </td></tr><tr><td> אוסמיום Tetroxide (מימית 4%, 10 x 10 מ&quot;ל) </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 18465 </td></tr><tr><td> פרופילן אוקסיד (450 מ&quot;ל) </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 18601 </td></tr><tr><td> הטמע 812 (קיט, על בלוקים קשיחים / ניגודיות תמונה גבוהה) </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים למדעים </td><td> 14120 </td></tr><tr><td> Toluidiנה כחול (25 גרם) </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 19451 </td></tr></tbody></table> הכנת כל הר שריר ו אימונוהיסטוכימיה: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם (תיאור / כמות) </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde (1 ק&quot;ג) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1 ק&quot;ג </td></tr><tr><td> פוספט נתרן Dibasic נטול מים (500 גר &#39;, המשמשים להכנת מאגר פוספט) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> S375-500 </td></tr><tr><td> פוספט נתרן Monobasic נטול מים (1 ק&quot;ג, המשמשים להכנת מאגר פוספט) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> 10% diluent BSA / פתרון חסימת (200 מ&quot;ל) </td><td> Kirkegaard &amp; פרי Laboratories, Inc </td><td> 50-61-00 </td></tr><tr><td> טריטון X-100 (100 מ&quot;ל) </td&gt; <td> דוט מדעי Incorporated </td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td> גליצין, 98% (1 ק&quot;ג) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> AC12007-0010 </td></tr><tr><td> רקמת-Tek cryo-אוקטובר מתחם (המקרה של 12, 4 בקבוקי עוז) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 14-373-65 </td></tr><tr><td> Sylgard דאו 170 (2 ערכת פאונד) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> NC9492579 </td></tr><tr><td> נירוסטה סיכות חרקים, גודל 1 (100/pkg) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 26001-40 </td></tr><tr><td> Tetramethylrhodamine-A-Bungarotoxin (0.5 מ&quot;ג) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T0195-.5MG </td></tr><tr><td> עכבר נוגדן חד שבטי נגד SMI-312 (0.1 מ&quot;ל) </td><td> Covance </td><td> SMI-312R </td></tr><tr><td> עכבר נוגדן חד שבטי נגד SV2 (0.1 מ&quot;ל) </td><td> התפתחותית מחקרים Hybridoma בנק (DSHB) </td><td> SV2 </td></tr><tr><td> הארנב פולינוגדן נגד משובטים GAP-43 </td><td> נובוס ביולוגיות </td><td> NB300-143 </td></tr><tr><td> Flourescein מצומדות נגד עכבר עיזים IgG, Fcγ סדרה 1 ספציפי </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=115-095-205&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">11 5-095-205</a> </td></tr><tr><td> DyLight 649 מצומדות נגד ארנב חמור IgG </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> <a href="http://www.jacksonimmuno.com/MERCHANT2/merchant.mv?Screen=BASK&amp;Store_Code=JI&amp;Action=ADPR&amp;Product_Code=711-495-152&amp;Attributes=Yes&amp;Quantity=1">711-495-152</a> </td></tr><tr><td> 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, dilactate, 10 מ&quot;ג) </td><td> Invitrogen </td><td> D3571 </TD&gt; </tr><tr><td> Vectashield הרכבה בינונית (10 מ&quot;ל) </td><td> וקטור מעבדות </td><td> H-1000 </td></tr><tr><td> Superfrost פלוס שקופיות מיקרוסקופ (לבן, גודל: 75 x 25 מ&quot;מ, חבילה של 144) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Fisherfinest כיסוי פרימיום משקפיים (גודל: 40 x 22 מ&quot;מ; חפיסת עוז 1.) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 12-548-5C </td></tr></tbody></table>

עכבר לשחזור sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

הדור הבא של מערכת העצבים ההיקפית (PNS) נלמדת באופן נרחב גם על הרלוונטיות שלה למחלות האדם להבין את התגובה משובי חזקים רכוב על ידי נוירונים PNS ובכך אולי שהאירו את הכישלונות של התחדשות מערכת העצבים המרכזית 1. למעוך גיד הנשה (axonotmesis) הוא אחד המודלים הנפוצים ביותר של פגיעה עצבית היקפית במכרסמים 2. ריסוק קוטע את כל האקסונים אלא רבדים שוואן התאים הבזליים נשמרים כך התחדשות כי הוא אופטימלי 3,4. זו מאפשרת לחוקר לבחון דווקא את היכולת של האקסון הגוברת לקיים אינטראקציה עם התא הן שוואן ואת רבדים הבסיס 4. החולדות היו בדרך כלל את הדגמים המועדפים על בעלי חיים למחוץ העצב ניסיוני. הם זמינים באופן נרחב ועל גיד הנשה lesioned שלהם מספק קירוב סביר של נגעים עצב אנושיים 5,4. אם כי קטנים יותר מאשר עצב חולדה, עצב העכבר יש תכונות דומות רבות. והכי חשוב אם כי, mousמודלים אלקטרוניים הם בעלי ערך יותר ויותר בגלל הזמינות רחב של קווי מהונדס כעת מאפשרת לנתיחה מפורט של מולקולות בודדות קריטיים עבור התחדשות עצבים 6, 7. חוקרים קודמים השתמשו בשיטות רבות כדי לייצר דלוקה עצב או פציעה כולל מלקחיים זווית פשוטים, מלקחיים, מלקחיים מצוננים עוצר דמום, Clamps כלי הדם, וכן החוקר מלחציים, שנועדו 8,9,10,11,12. החוקרים השתמשו גם שיטות שונות של סימון האתר כולל פגיעה תפר, חלקיקי פחמן חרוזי ניאון 13,14,1. אנו מתארים את השיטה שלנו להשיג דלוקה מלאה reproducibly גיד הנשה עם סימון מדויק ועקבי של האתר, למעוך בעזרת מלקחיים עוצר דמום דקים פחמן לאחר המדליקה האתר סימון. במסגרת תיאור שלנו הליך גיד הנשה למחוץ כללנו גם שיטה פשוטה יחסית של כל שריר לעלות לאחר מכן אנו משתמשים כדי לכמת התחדשות.

בדו&quot;ח זה אנו מתארים שיטה למחוץ העצב העכבר הנשה. שיטה זו משתמשת מלקחיים עוצר דמום זמינים ובקלות reproducibly מייצרת העצב המלא למחוץ הנשה. בנוסף, אנו מתארים שיטה להכין mounts שרירים שלמים מתאימים לניתוח של התחדשות עצבים אחרי למחוץ גיד הנשה.

עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

ההתחדשות במערכת העצבים ההיקפית (PNS) נחקרת רבות הן בשל הרלוונטיות שלה למחלות אנושיות והן כדי להבין את יכולת ההתחדשות החסונה...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להדגים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור של מעיכה של העצב הסיאטי (sciatic nerve) וניתוח whole mount של עיצבוב מחדש של השריר לאחר מעיכת העצב הסיאטי. זאת מושגים תחילה על ידי חשיפת העצב הסיאטי, כולל סידור נכון של רטרקטורים כירורגיים להבטחת גישה טובה לעצב. לאחר מכן, יש למעוך את העצב באמצעות פינצטת המוסטט (hemostat forceps) ולסמן את העצב באמצעות פחם.לאחר מכן, הסר שרירים בודדים המעצבבים על ידי עצב הסיאטיק (sciatic nerve) מהגפה האחורית. השלב האחרון הוא נתיחה של שרירים בודדים לצורך אנליזת whole mount לאחר צביעה אימונוהיסטוכימית. בסופו של דבר, התוצאות מדגימות שניתן לבצע מעיכה שמימה של עצב הסיאטיק באופן הדיר, וניתן להשתמש בדגימות שריר מסוג hole mounts כדי לנתח את ההתחדשות העוקבת.היתרון המרכזי של הליך זה הוא שהוא מספק טכניקה פשוטה וניתנת לשחזור למעיכת העצב הסיאטיקה ולאחר מכן לדירוג של התחדשות אקסונית. התחל את ההליך על ידי הרדמת העכבר לניתוח באמצעות תערובת של 100 milligrams per kilogram של ketamine ו-10 milligrams per kilogram של xylazine בהזרקה תוך-peritoneal כדי למזער כאבים לאחר הניתוח. העכבר מקבל בנוסף הזרקה תת-עורית של 10 milligrams per kilogram של meloxicam.בשלב הבא, גלחו את שתי הרגליים האחוריות בזהירות באמצעות מכסחת ניתוחית. לאחר מכן, מרחו קרם להסרת שיער מהנחיריים

reproducible-mouse-sciatic-nerve-crush-subsequent-assessment

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מקור: Li, Q., et al. חקירת התחדשות אקסונים של יונקים: אלקטרופורציה in vivo של גנגליון שורש גב של עכבר בוגר. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים את תהליך ההתחדשות האקסונלית בעצב הסיאטי של עכבר לאחר פציעת ריסוק. העצב המבודד מקובע ומוכן להדמיה, עם חלבונים פלואורסצנטיים המתבטאים בתאי עצב כדי לדמיין צמיחת אקסונים. באמצעות מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי, עוקבים אחר התחדשות האקסונים מאתר הפגיעה כדי להעריך את היקף הצמיחה מחדש.

התחדשות אקסונלית בעצב הסיאטי של עכבר לאחר פגיעת ריסוק

מקור: Li, Q. et al. חקירת התחדשות אקסונים של יונקים: אלקטרופורציה in vivo של גנגליון שורש גב של עכבר בוגר. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים טרנספקציה בתיווך אלקטרופורציה של נוירוני DRG של עכברים כדי לחקור התחדשות אקסונים. הוא מתאר את השלבים להעברת מבני חומצות גרעין לנוירונים DRG, גרימת פגיעה בעצב הסיאטי והערכת התחדשות אקסונלית.

טרנספקציה מתווכת אלקטרופורציה של גרעיני שורש הגב של העכבר כדי לקדם התחדשות אקסונים חושיים

מקור: Dalkin, W., et al. שיטת הפגיעה בעצב הסיבי: בדיקה אמינה לזיהוי ובדיקת גורמים המתקנים צמתים עצביים-שריריים. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הליך כירורגי לגרימת פגיעה עצבית סיבית בעכבר כדי לחקור התחדשות של צומת עצבי-שרירי (NMJ). ההליך כולל חשיפת העצב הסיבי, הפעלת לחץ מבוקר כדי לגרום לפציעה, והבטחת האפינוריום נשאר שלם כדי לתמוך בהתחדשות אקסונלית. עם הזמן, מקרופאגים מפנים פסולת אקסונלית, מה שמקל על תיקון עצבים והקמה מחדש של NMJs.

גרימת פגיעה עצבית סיבית בעכבר כדי לחקור התחדשות צומת עצבי-שרירי

פיתחנו שיטה לפגיעה עצבית כדי לבחון באופן מהימן את העצבוב מחדש של השרירים, ובכך התחדשות של צמתים עצביים-שריריים בעכברים. טכניקה זו כוללת פגיעה בעצב הסיבי המשותף באמצעות ניתוח פשוט וניתן לשחזור מאוד.  עצבוב מחדש של השרירים מוערך אז על ידי הרכבה שלמה של שריר extensor digitorum longus.

עצב שׁוֹקִיתִי השיטה פגיעה: A Assay אמין כדי לזהות מבחן הגורמים תיקון Neuromuscular הצומת

אלקטרופורציה היא גישה יעילה כדי לספק את הגנים של אינטרסים לתוך תאים. על-ידי החלת גישה זה ויוו על הנוירונים של העכבר למבוגרים העזוב שורש גנגליון (DRG), נתאר מודל ללמוד האקסון התחדשות בתוך vivo.

התחדשות האקסון בתרבית של החוקר: In Vivo אלקטרופורציה של העכבר למבוגרים העזוב שורש גנגליון

הציג הוא פרוטוקול לייצר סוגים שונים של עצב החציוני (MN) נגעים ותיקון בחולדה. בנוסף, הפרוטוקול מראה כיצד להעריך את ההחלמה הפונקציונלית של העצב באמצעות מספר בדיקות התנהגותיות לא פולשנית ומדידות פיזיולוגית.

פונקציונלי ופיסיולוגי שיטות להערכת התחדשות העצב החציוני בחולדה

ניתוח הליכה אוטומטי הוא כלי אפשרי להערכת התאוששות תפקודית במודלים של מכרסמים של פגיעה בעצב היקפי ופגיעה בחוט השדרה. אמנם זה דורש רק התקנה אחת כדי להעריך את תפקוד הקטר במודלים ניסיוניים שונים, התאמה קפדנית קשה ורכה והכשרה של בעלי החיים הוא חשוב מאוד.

ניתוח הליכה אוטומטי כדי להעריך התאוששות תפקודית מכרסמים עם פגיעה בעצב היקפי או חבלה בחוט השדרה

הערכת התאוששות מוטורית נותרה מדד התוצאה של בחינת ביצועים במחקרי עצבים היקפיים ניסיוניים. מדידת הכוח הטטוני איזומטרי של השריר הראשי tibialis בחולדה הוא כלי שלא יסולא בפז כדי להעריך את התוצאות התפקודיות לאחר שחזור של פגמים עצביים sciatic. השיטות והניואנסים מפורטים במאמר זה.

מדידת כוח טטוני איזומטרי מקסימלית של שריר השוקיות בעכברוש

אנו מספקים פרוטוקול להערכת התנהגות מוטורית באמצעות סוללת בדיקה התנהגותית בחולדות לאחר פציעת ריסוק עצבים סיאטית.

הערכה רב-גורמית של התנהגות מוטורית בחולדות לאחר פציעת ריסוק עצבית סיאטית חד-צדדית

אנו להדגים פרוטוקול לבידוד axoplasm מתוך עצב השת עכברוש מבוגר מבוסס על דיסקציה של fascicles עצב הדגירה במדיום hypotonic לשחרר המיאלין ואת lyse הלא axonal מבנים, ואחריו מיצוי של החומר האקסון מועשר הנותרים.

Axoplasm ניתוק מן החולדה עצב השת

למד שיטה פשוטה ושחזורית לריסוק עצב הישי בעכברים וניתוח הר שלם של שרירים לאחר התחדשות עצבית. הטכניקה משתמשת במלקחיים המוסטטיים לסימון מדויק ומאפשרת הערכה יעילה של חידוש עצבי בשרירים.

עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

גלה סרטונים נוספים