עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר
22 בפברואר 2012
בדו"ח זה אנו מתארים שיטה למחוץ העצב העכבר הנשה. שיטה זו משתמשת מלקחיים עוצר דמום זמינים ובקלות reproducibly מייצרת העצב המלא למחוץ הנשה. בנוסף, אנו מתארים שיטה להכין mounts שרירים שלמים מתאימים לניתוח של התחדשות עצבים אחרי למחוץ גיד הנשה.
המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים שיטה פשוטה הניתנת לשחזור של ריסוק עצב סיאטי וניתוח שלם של עצבוב שרירים לאחר ריסוק עצב סיאטי. זה מושג על ידי חשיפה ראשונה של העצב הסיאטי, כולל סידור נכון של מחזירים כירורגיים כדי להבטיח גישה טובה לעצב. לאחר מכן, מועכים את העצב בעזרת מלקחיים של המוסטט ומסמנים את העצב בפחם.
לאחר מכן הסר שרירים בודדים המופנים על ידי עצב סיאטי מהגפה האחורית. השלב האחרון הוא לנתח שרירים בודדים לניתוח הר שלם לאחר צביעה חיסונית. בסופו של דבר, התוצאות מדגימות כי ניתן לבצע פשוט ריסוק עצב סיאטי הניתן לשחזור וניתן להשתמש בתושבות חורי שריר כדי לנתח את ההתחדשות שלאחר מכן.
היתרון העיקרי של הליך זה הוא בכך שהוא מספק טכניקה פשוטה הניתנת לשחזור לריסוק העצב הסיאטי ובהמשך לציון התחדשות אקסונלית. התחל הליך זה על ידי הרדמת העכבר לניתוח באמצעות קוקטייל של 100 מיליגרם לק"ג קטמין ו-10 מיליגרם לק"ג קסילזין באמצעות הזרקה תוך צפקית כדי למזער את הכאב לאחר הניתוח. העכבר מקבל גם זריקה תת עורית של 10 מיליגרם לק"ג מלוקסיקם.
לאחר מכן, גלח את שני האחוריים בזהירות באמצעות קוצץ כירורגי. לאחר מכן יש למרוח קרם להסרת שיער nare לדלדול מוחלט. נקו את העור בעזרת אפליקטור סטרילי עם קצה כותנה וקרצוף כירורגי בטדין.
לאחר מכן, מרחו משחת עיניים על העיניים בעזרת אפליקטור סטרילי עם קצה כותנה. הנח את העכבר על צלחת נירוסטה נקייה מעל שמיכה בנושא הומאו שחוממה מראש, ושמור על טמפרטורת החיה על 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן הדביקו את כל הגפיים כלפי מטה.
מקם בזהירות את הגפה האחורית בצורה סימטרית כך שמפרק הברך יעשה זווית ישרה עם הגוף. לאחר מכן, כסו את השדה הניתוחי בווילון סטרילי מתחת למיקרוסקופ. בצע חתך חצי עגול על פני קו האמצע.
יש להפריד בעדינות את העור מהשרירים הבסיסיים ולקפל אותו מדי פעם. מרחו כ-0.1 מיליליטר מי מלח סטריליים כדי לשמור על לחות אתר הניתוח במהלך ההליך. לאחר מכן, פתח את המישור הפשיאלי בין הגלוטאוס מקסימוס לראש הקדמי של שריר הירך.
לחשוף את העצב הסיאטי לבקרה כירורגית. יש לחשוף ולגייס את העצב הסיאטי הנגדי אך להשאיר אותו שלם. ואז לנוח ולתפור את שרירי העכוז.
חשוף את העצב הסיאטי הניסיוני באותו אופן עם מחזירים. כדי להקל על ההדמיה. שחרר בעדינות את העצב הסיאטי מרקמת החיבור שמסביב באמצעות מספריים לכריתת אירית.
לאחר מכן השתמש במלקחיים העדינים 5 45 כדי למקם את העצב בלסת התחתונה של המלקחיים ההמוסטטיים הסופר עדינים ליישר את שלושת הפאשיות סמוכות לא זה על גבי זה. המלקחיים ההמוסטטיים נחרטו בסימן במרחק של 1.5 מילימטרים מקצהם. הנח את החלק החיצוני ביותר של הסיאטיק בקו אחד עם סימן זה לפני הריסוק.
זה מבטיח ריסוק ברוחב אחיד וכי העצב אינו משתרע מעבר ללסתות המלקחיים ההמוסטטיים כאשר הוא שטוח בגלל כוח הריסוק. אם העצב משתרע מעבר לקצות המלקחיים, העצב יימחץ רק חלקית. השתמש בזוג שני של מלקחיים המוסטטיים שנטבלו מראש ואבקת פחמן כדי לסמן את אתר הריסוק.
מועך את העצב באותו מקום ריסוק למשך 15 שניות בשלוש לחיצות. שום סימון פחמן לא צריך להתרחב מעבר לגבול הריסוק הראשוני. זה חשוב במיוחד אם נדרש סימון מדויק של אתר הריסוק כדי לטבול מראש את המלקחיים בפחמן ולמנוע פחמן נרחב באתר הניתוח.
פתח את המלקחיים באבקת פחמן. ואז סגור אותם בעדינות. השתמש בגזה סטרילית כדי לנגב את הפחמן בחלק החיצוני של ההמוסטטים.
בדוק את המלקחיים בהגדלה של פי שלושה לפחות כדי לוודא שמשטחי הריסוק מצופים באופן שווה באבקת פחמן. במידת הצורך, הם טובלים מחדש ומנגבים מנוחה ותופרים את שרירי העכוז באותו אופן כמו הצד הנגדי. לבסוף, סגור את חתך העור באמצעות קליפס הרפלקס של תשעה מילימטרים.
אם נמצא כי תשעה מהדקי רפלקס מילימטריים מגבילים את התנועה, ניתן להשתמש בקליפסים קטנים יותר של רפלקס או בשישה תפרים אוטומטיים. במקום זאת, לאחר הקרבת העכבר, הסר ארבעה שרירים. ה-tibias anterior extensor digitorum longus, peroneus longus והסוליה בגפה האחורית בזהירות על ידי הצמדה דרך רקמות החיבור שלהם לצלחת מצופה זרע שחור.
ואז שוטפים אותם ב- PBS. לאחר מכן, תקן אותם ב-4% אלדהיד פרפורם למשך 30 דקות. כדי לנתח כל שריר על צלחת פטרי מצופה זרוד שחור, הסר ממנו את הגידים בעזרת מספריים לכריתת הקשתית.
לאחר מכן, דק את השרירים על ידי קילוף סיבי שריר פנימיים שמור בזהירות על פני השטח החיצוניים של השריר, כולל רצועות לוחית הקצה. לאחר מכן הרכיבו את השרירים המתקבלים על מגלשות פלוס עם מגן וקטורי והחלקות כיסוי זכוכית בגודל 22 על 40 מילימטר אטמו את שני הצדדים עם לק שקוף. כאשר הם מותקנים כראוי על המגלשה, רצועות ה- nplate צריכות להיות במגע עם החלקות הכיסוי.
הנה דוגמה לאתר ריסוק באתרו בגפה האחורית השמאלית. אתר הריסוק מסומן על ידי פחמן שחור. הכוכבית מסמנת ענף של עצב השוקה המעצבן את שרירי הירך ומשמש כנקודת ציון שימושית.
במהלך ניתוח ריסוק, חלוקת השוקה של העצב הסיאטי מתוארת בכחול, הפרונאלי והירוק והשרל והצהוב. קטע דק למחצה זה מדגים ריסוק מוחלט המבוצע עם המלקחיים ההמוסטטיים. ראשי חץ מצביעים כאן על סיבים כתושים.
ריסוק לא שלם המבוצע עם המלקחיים הזוויתיים מסומן בקטע חצי סנפיר אחר. ראש חץ מציין שוב סיבים כתושים ואילו חיצים מצביעים על אקסונים משומרים. אלה התמונות המעובדות מכל שרירי ההר.
לאחר הסרת רקמת החיבור ודילול לאחר מכן, רצועות ה- nplate מתוארות על כל שריר. מוצג כאן שריר ההר השלם. 14 יום לאחר ריסוק העצב הסיאטי.
החצים מציינים אזורים בצומת העצבי-שרירי שעברו עצבוב מחדש על ידי אקסון. הנה ההדגמה של צומת עצבי-שרירי מנותק. הפער 43 תהליכי תאי שוואן חיוביים מסומנים על ידי ראשי החצים.
לא נראים אקסונים בצומת עצבי-שרירי זה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לרסק עצב סטטי באופן שחזורי ולהכין תושבות הורמוני שריר לניתוח התחדשות.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
דו"ח זה מתאר שיטה פשוטה וניתנת לשחזור לריסוק עצב הסיאטי של עכבר ולניתוח חידוש העצבוב השרירי. הטכניקה משתמשת במלקחיים המוסטטיים זמינים באופן רחב כדי להשיג ריסוק עצבי מלא וכוללת הכנת מונטים שלמים של השריר לניתוח התחדשות.
מרכיבי מחקר מרכזיים
תחום המדע
- מדעי המוח
- רפואה רגנרטיבית
- פיזיולוגיה של השריר
רקע
- פציעות עצב הסיאטי יכולות להוביל לחסרים מוטוריים משמעותיים.
- הבנת התחדשות העצבים חיונית לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.
- ניתוח מונט שלם מספק תובנות לחידוש עצבוב השריר.
- שיטות קיימות עשויות לחסר רפטוריות ונגישות.
מטרת המחקר
- להדגים שיטה ניתנת לשחזור לריסוק עצב הסיאטי.
- להכין מונטים שלמים של השריר לניתוח עוקב של התחדשות העצבים.
- לספק פרוטוקול פשוט שניתן לאמץ בקלות על ידי חוקרים.
שיטות בשימוש
- חשיפת עצב הסיאטי באמצעות רטרקטורים כירורגיים.
- ריסוק העצב באמצעות מלקחיים המוסטטיים וסימון אותו בעזרת פחם.
- הסרת שרירים בודדים המעוצבבים על ידי עצב הסיאטי מגפה האחורית.
- ניתוח השרירים לצורך ניתוח מונט שלם לאחר צביעה אימונולוגית.
תוצאות עיקריות
- השיטה מאפשרת ריסוק עצבי סיאטי קבוע ומלא.
- ניתן לנתח באופן יעיל מונטים שלמים של השריר לצורך התחדשות.
- התוצאות מדגימות את הכדאיות של גישה זו לחקר תיקון עצבים.
- הממצאים תורמים להבנת תהליכי חידוש עצבוב השריר.
מסקנות
- שיטה זו מספקת כלי אמין לחוקרים החוקרים פציעות עצבים.
- ניתוח מונט שלם הוא טכניקה בעלת ערך להערכת חידוש עצבוב השריר.
- ניתן ליישם את הפרוטוקול בקלות במגוון הגדרות מחקר.
שאלות נפוצות
Executive Industry Relevance
This method provides a reproducible model for studying peripheral nerve regeneration, enabling mechanistic de-risking of therapeutic targets in preclinical neuroscience programs. By standardizing sciatic nerve crush and quantifying reinnervation via whole mount muscle analysis, it supports target validation and assay development for neuroprotective or neuroregenerative candidates. The approach enhances predictive confidence in early discovery by linking axonal growth to functional reinnervation readouts.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses on axonal regeneration and Schwann cell interactions in a genetically tractable model.
- Operational Value: Uses widely available transgenic mouse lines to dissect molecular mechanisms of nerve repair with high reproducibility.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantitative, imaging-ready outputs (e.g., neuromuscular junction reinnervation) for high-content screening of compound libraries.
- Operational Value: Standardizes crush site marking and muscle preparation to ensure assay consistency across laboratories and timepoints.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Bridges discovery to preclinical validation by modeling axonotmesis, a clinically relevant peripheral nerve injury.
- Operational Value: Supports risk-adjusted advancement decisions through longitudinal, structure-function correlation of regeneration.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to lead identification, providing a disease-relevant system for evaluating biologics or small molecules aimed at enhancing nerve repair.
- Discovery Biology: Supports pathway clarification and functional target validation by enabling precise measurement of axonal regeneration kinetics.
- Screening: Delivers assay-ready tissue preparations with quantifiable dependent variables (e.g., reinnervated endplate bands) for compound effect assessment.
- Analytics: Generates statistical outputs from whole mount imaging that allow comparison of regeneration efficacy across experimental conditions.
- Translational Research: Aligns with preclinical continuity by using a rodent model predictive of human peripheral nerve lesion responses.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized, scalable platform for repeated use in target de-risking and lead optimization campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in target validation through direct visualization of axonal-Schwann cell-basal lamina interactions.
- Operational Value: Ensures reproducibility via standardized crush force, site marking, and muscle whole mount protocol.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions by providing objective, histology-based regeneration metrics early in the pipeline.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of neuroregenerative candidates based on functional reinnervation data.
Implementation Considerations
- Requires expertise in microsurgery, tissue dissection, and immunofluorescence staining.
- Depends on access to stereomicroscopes, hemostatic forceps, and imaging systems for whole mount analysis.
- Necessitates cross-team standardization of crush duration, marking technique, and muscle fixation timing.
- Involves adaptation considerations when applying the model to different mouse strains or genetic backgrounds.
- Limited by the need for terminal procedures and skilled handling to maintain crush consistency and marking fidelity.
