Name: לשעבר vivo הכנה מבודדת Microvessel השלד לחקירות תגובתיות כלי דם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: למדו בידוד כירורגי וקנולציה כפולה של עורקי התנגדות מבודדים לחקירת תגובתיות כלי דם ומנגנוני תפקוד כלי דם ex vivo. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של תכונות מבניות ופונקציונליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי איגוד הלב האמריקני (EIA 0740129N) ו NIH T32 HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

פרוטוקול הציג מתאר cannulation, בידוד הסרת כפולה של microvessel שרירי השלד, אם כי טכניקה זו בכלל ניתן ליישם בקלות ברוב הרקמות. על כתב היד הנוכחי, המונח &quot;עורקיק&quot; נוצל בעבר על ידי החוקרים לתאר כלי התנגדות נע בין 70-120 מיקרומטר בקוטר תחת הטון פעיל מנוחה, שהיא גם תורמת רבות תקנה ההתנגדות זלוף לאיבר או רקמות. עם כמה שינויים, מערכת זו ניתן להתקין על מספר יישומים עבור חוקר ספציפי בקלות מאפשר שילוב של טכניקות ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> חומרים כימיים וציוד </td><td> חברה </td><td> תגובות / קטלוג # </td></tr><tr><td> כלי הקאמרית </td><td> מנהג </td><td> דייב Eick (MCW) </td></tr><tr><td> מים מחוממת מחזורי אמבטיה </td><td> PolyScience ו Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipets </td><td> פרדריק Haer ושות&#39; </td><td> נימי Tubing 2.0 מ&quot;מ OD x 1.0 מ&quot;מ מזהה (27-33-1) </td></tr><tr><td> לחץ צג </td><td> Precision של מכשירים בעולם </td><td></td></tr><tr><td> מאגר מים במקטורן </td><td> מנהג </td><td></td></tr><tr><td> מקור אור חיצוני </td><td> Precision של מכשירים בעולם </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipet פולר </td><td> MicroData מכשירים </td><td> PMP102 Micropipet פולר </td></tr><tr><td> מלא משליםment של כלים כירורגיים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> דומון </td></tr><tr><td> מלקחיים עדינים במיוחד </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> קשירת משי נושא </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 או 9-0 </td></tr><tr><td> סטריאו מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> אולימפוס SZ-11 </td></tr><tr><td> מחוגה וידאו אנלוגי </td><td> Boeckeler </td><td> באמצעות בקר (Via-100) </td></tr><tr><td> מצלמה ברזולוציה גבוהה אנלוגי </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> חמצן טנק </td><td> אזורי </td><td> חנקן האיזון 21% ו 5% CO 2 וחנקן איזון </td></tr><tr><td> צנור </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> מסננים משאבה </td><td> קול בן הזוג Instrument ושות </td><td></td></tr><tr><td> עכברוש PSS שונה </td><td> ראו מתכון בהמשך </td><td></TD&gt; </tr><tr><td> PSS להרפיית ואן Breemen של </td><td> ראו מתכון בהמשך </td><td></td></tr></tbody></table> טבלה 1. רשימת הרכיבים העיקריים של ההתקנה תחנת מבודד microvessel מוצגים הנתונים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שונה PSS עכברוש מתכון </td><td> כדי להפוך את שני ליטרים של PSS </td><td> 20X צילומים של מלח (2L) </td><td> 20X למלאי (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278.0 גרם </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14.0 גרם </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11.5 גרם </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9.4 גרם </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80.8 גרם </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.4 גרם </td></tr><tr><td> לאא 2 PO 4 </td><td> 0.28 גר &#39; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> 1.98 גר &#39; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x מלח במלאי </td><td> 100 מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x מאגר צילומים </td><td> 100 מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מים מזוקקים </td><td> 1800 מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> טבלה 2. מתכון הפתרון הסטנדרטי מלח פיזיולוגית (PSS) בשימוש בפרוטוקולים microvessel מבודדים. תגובות על המתכון: להפוך 2 ליטר של צילומים של מלח 2 ליטר של למלאי. אלה גלהיות בקירור, כאשר לא בשימוש, אבל לנער אותם היטב ולעתים קרובות לפני הכנת PSS. המרכיבים הנוספים מתווספים בעת הכנת PSS האחרונים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> PSS להרפיית ואן Breemen של </td><td> כדי להפוך את 2 ליטרים של PSS </td><td> 20X מלח במלאי (1 ליטר) </td><td> 20X מאגר צילומים (1 ליטר) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107.4 גרם </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7.0 גרם </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5.76 גר &#39; </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6 שעות 2 O </td><td></td><td> 81.32 גרם </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40.4 גרם </td></tr><tr><td> EDT</td><td></td><td></td><td> 0.2 גרם </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15.22 </td></tr><tr><td> לאא 2 PO 4 </td><td> 0.28 גר &#39; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> 1.98 גר &#39; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x מלח במלאי </td><td> 100 מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x מאגר צילומים </td><td> 100 מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מים מזוקקים </td><td> 1800 מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> לוח 3. מתכון תמיסת מלח פיזיולוגית להרפיית ואן Breemen (PSS) שימוש בפרוטוקולים microvessel מבודדים בתנאים של בטון פעיל אפס. תגובות על המתכון: עשה 1 ליטר של צילומים של מלחND 1 ליטר של למלאי. אלה יכולים להיות בקירור, כאשר לא בשימוש, אבל לנער אותם היטב ולעתים קרובות לפני הכנת PSS. המרכיבים הנוספים מתווספים בעת הכנת PSS להרפיית האחרונים.

לשעבר vivo הכנה מבודדת microvessel השלד לחקירות תגובתיות כלי דם

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

הכנה microvessel מבודד הוא הכנה vivo לשעבר המאפשר בחינה של תרומות שונות של גורמים בקוטר כלי שליטה, וכך, התנגדות זלוף 1-5. זהו תכשיר ניסיוני קלאסי זה היה, במידה רבה, תיאר בתחילה על ידי אושידה et al. 15 לפני כמה עשורים. זה תיאור ראשוני סיפק את הבסיס הטכניקות שונה בהרחבה משופרת, בעיקר במעבדה של ד&quot;ר בריאן Duling באוניברסיטת וירג&#39;יניה 6-8, ואנחנו מציגים גישה הנוכחי בעמודים הבאים. הכנה זו באופן ספציפי מתייחסים עורקיק gracilis בחולדה כמו microvessel של בחירה, אבל ההכנה הבסיסית יכול בקלות להיות מיושם על כלי מבודדים מרקמת כמעט כל איבר אחר או על פני מינים 9-13. מכני (כלומר, מימדי) שינויים microvessels בודד יכול בקלות לעבור הערכהבתגובה מגוון רחב של פיזיולוגיים (למשל, לחץ היפוקסיה, intravascular, או גזירה) או אתגרים תרופתי, והוא יכול לספק תובנות לגבי האלמנטים המרכיבים מכניסטית תגובות המשולבים ללא פגע, אם כי רקמת vivo לשעבר. המשמעות של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת מניפולציה קליל של ההשפעות על תקנה משולבת של קוטר microvessel, תוך המאפשר שליטה של ​​רבים תרומות ממקורות אחרים, כולל לחץ intravascular (myogenic), עצבוב האוטונומית, hemodynamic ( למשל, מאמץ גזירה), גירויים התלויים או עצמאית אנדותל, הורמונליים, והשפעות parenchymal, כדי לספק רשימה חלקית. תחת תנאי הניסוי מתאימים ועם המטרות המתאימות, זה יכול להוות יתרון על פני in vivo או ברקמות / איברים ההכנות באתרו, שאינם מאפשרים בקלות עבור קליל של משתנים מערכתיות רחבות יותר. תואר שניהגבלה יור הכנה זו היא למעשה תולדה של נקודות החוזק שלה. על פי ההגדרה, את ההתנהגות של הכלים האלה הוא נחקר בתנאים בהם רבים התורמים המשמעותיים ביותר בוויסות של התנגדות כלי הדם הוסרו, כולל עצבית, הלחות, חילוף החומרים וכו &#39;על כן, החוקר הוא הזהיר, כדי למנוע יתר פרשנות אקסטרפולציה של הנתונים אשר נאספו תוך שימוש בתכשיר זה. אזור משמעותי אחר של דאגה לגבי הכנה זו היא כי זה יכול להיות קל מאוד לגרום נזק לרכיבים תאיים כמו רירית האנדותל או השריר החלק בכלי הדם, כגון מקור משתנה הטעות יכול להיות מוצג. מומלץ מאוד כי החוקר הפרט לנצל מדידות מתאימים כדי להבטיח את איכות של התכשיר, הן התחלת הניסוי ומדי פעם במהלך כל פרוטוקול.

<em&gt; לשעבר vivo</emהכנה&gt; מתואר על הבידוד של השרירים הגדולים gracilis arterioles ההתנגדות לחקירה של שני כלי דם התגובות לגירויים vasoactive והערכת תכונות מבניות בסיסיות באמצעות מכניקת קיר פסיביים.

לשעבר vivo הכנה מבודדת Microvessel השלד לחקירות תגובתיות כלי דם

ההכנה של מיקרו-כלי דם מבודד היא הכנה ex vivo המאפשרת לבחון את התרומות השונות של גורמים השולטים בכלי דם...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבודד באופן כירורגי, להוציא ולבצע קניולציה כפולה של עורקי התנגדות בודדים. לצורך מחקר בסביבת ex vivo, הדבר מושג תחילה על ידי זיהוי ובידוד כירורגי של מיקרו-כלי דם בבעל חיים תחת הרדמה. לאחר העברת מיקרו-כלי הדם לתא כלי דם, הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של מיקרו-כלי הדם עוברים קניולציה.לבסוף, כלי הדם המיקרוסקופיים נחשפים לאתגרים פרמקולוגיים או פיזיולוגיים ולהתערבויות ניסוייות כדי להעריך מנגנונים העומדים בבסיס התפקוד או התפקוד הלקוי המהווים חלק בלתי נפרד מכלי הדם עצמו. בסופו של דבר, התוצאות מראות את הדפוסים ואת המנגנונים התורמים לתגובתיות וסקולרית בסביבה מבודדת באמצעות גירויים והתערבויות ממוקדים כראוי. באופן כללי, אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו יתקשו בביצועה, מכיוון שההכנה דורשת לא רק פיתוח של מיומנויות כירורגיות מצוינות לביצוע תחת מיקרוסקופ, אלא גם את הסבלנות והשליטה המוטורית העדינה הנדרשת לביצוע קנולציה כפולה של כלי דם מיקרוסקופיים מבודדים שקוטרם הוא לרוב הרבה פחות מ-100 מיקרון.יש לבצע זאת תוך מזעור מקסימלי של הטראומה לכלי הדם, אחרת כל הפרוצדורה תביא רק לכלי דם שאינו מגיב. את הפרוצדורה ידגים ג'ושוע בוצ'ר, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי. לפני ביצוע ניסויים בכלי דם מיקרוסקופיים מבודדים.הכנה. התחל בכיפוף של מיקרו-פיפטות זכוכית שהוכנו מראש לתצורה מתאימה על ידי חימומן מעל להבת בוטאן. לאחר מכן, השתמש בפינצטה עדינה כדי לשבור את הקצוות לקוטר המתאים.הנח שתי מיקרו-פיפטות באופן מנוגד בתוך מחזיקי הפיפטות של תא כלי הדם, כאשר הקצוות מכוונים כך שיהיו באותו מישור אנכי ואופקי בתוך תא הכלי. לאחר מכן, הכן תמיססת מלחים פיזיולוגית (PSS) ובדוק שה-pH מכוון לרמות המתאימות לתנאי הניסוי הספציפיים. באמצעות המוציטומטר או מיקרומטר של במה של מיקרוסקופ, בצע כיול לקליפרים הדיגיטליים של הווידאו שישמשו למדידת קוטר כלי הדם.השתמשו בתפרי ophthalmologic בגודל 8-0 או קטן יותר להכנת לולאות בעלות קצה בודד לחיבור של המיקרו-כלי דם לפיפטות. ביום הניסוי, אחסנו את הלולאות בצלחת פטרי על רצועת דבק קטנה הגלגלת סביב זכוכית כיסוי של מיקרוסקופ. הפעילו את גזי השיווי המשקל בתא הכלי ובישורי ה-PERFUSE eight וה-SUSE eight.מלאו את כל המאגרים, המבחנות והתאים בתמיסת PSS. במידת הצורך, השתמשו במזרק כדי לדחוף בעדינות את ה-PSS לכל אורך הפ pipette כדי לוודא שהיא אינה חסומה ומלאה לחלוטין. שמרו על לחץ הכניסה בגבולות סבירים כדי למנוע נזק לממירים הלחציים.לאחר הרדמת בעל החיים וחשיפת כלי הדם המיקרוסקופיים, הוצא את כלי הדם באמצעות פינצטה עדינה לאחיזה בצד החיצוני וחיתוך לאורך כלי הדם. הקפד מאוד לא למתוח או למשוך את כלי הדם. לאחר מכן, הנח את כלי הדם באמבט מים מלא, ובאמצעות זוג פינצטות עדינות וקצב פרפוזיה מתון, החזק כל צד של דופן הלומן של הקצה הפרוקסימלי של כלי הדם ובצע קנולציה של הקצה הפרוקסימלי בפיפטת הכניסה.לאחר מכן, החלק את כלי הדם על קצות הקנולות והנע אותו על הקצה עד לנקודה שבה ניתן לקבע את כלי הדם באמצעות לולאות ה-T. מקם את לולאת ה-T עבור הקצה הדיסטלי של כלי הדם ובצע קנולציה שלו בפיפט היציאה, תוך קיבועו באמצעות לולאות ה-T. כוונן את הקנולה עד שיהיה עיוות מינימלי בכלי הדם והוא יקارب את האורך ה-in vivo.הנח אבן בועות קטנה המעבירה את תערובת הגזים המתאימה אל תוך האמבט, וכסה את התא בניילון נצמד או במכסה זכוכית כדי למנוע התזות על עדשת המיקרוסקופ. סגור מדי פעם את צינור היציאה באמצעות תפס כדי לקבוע אם הכלי מפתח לחץ.בדקו את כלי הדם לדליפות על ידי העלאת הלחץ בתוך כלי הדם וסגירה של קווי הזרימה החוצה ולאחר מכן של קווי הזרימה פנימה. אם הלחץ התוך-לומנלי יציב, הרי שאין דליפות ניכרות. אם לכלי הדם יש ענף צדדי קטן הדולף, קשרו אותו בלולאה אחת של תפר אופתלמי 10-0. לאחר קנולציה של מיקרו-כלי הדם, השוואה ותיקוף, התחילו את הניסוי כדי לקבוע את תגובות הביקורת הראשוניות.לדוגמה, עבור גירוי פיזיולוגי כגון הפעלה מיוגנית או התכווצות מושרית-לחץ, שנו באופן אקראי את הלחץ תוך-הלומנלי בטווח הרצוי ואפשרו לכלי הדם זמן להגיב לאתגר עם phenylephrine בריכוזים משתנים ובסדר אקראי. לאחר זמן התערבות מתאים, התחילו סבב שני של איסוף נתונים על ידי ביצוע התערבויות נוספות, שטיפת התמיסה הראשונית או הסרת הגירוי הפיזיולוגי ואימות העובדה שכלי הדם חזר למצב שיווי משקל. ברגע שכלי הדם מאבד את הטונוס הפעיל, סיימו את הניסוי, או במידה ותרצו, אספו נתונים על המכניקה של דופן כלי הדם.עם סיום הניסוי, יש לשטוף את כל הקווים והתאים ב-PSS ובכמויות רבות של מים מזוקקים או דאיוניים, ולאחר מכן להניח להם להתייבש לחלוטין. מוצג כאן מיקרו-כלי דם עם קנולה הכוללת פיפטות כניסה ויציאה, וכן לולאות בהגדלה גבוהה. ניתן לראות כאן כי הקוטר הפנימי הוא 12 microns, כפי שנקבע באמצעות קליבר דיגיטלי.כלי דם מיקרוסקופי מקנולה מוצג לאחר הגעה לשיווי משקל. כאן מוצג אותו כלי דם לאחר התרחבות בתגובה לגירוי באצטילכולין. ולבסוף, זהו כלי הדם המכווץ לאחר גירוי בפנילפרין.גרפים אלו מסכמים את התגובות של כלי דם מיקרוסקופיים מבודדים למאתגרים של היפוקסיה, ריכוזים עולים של acetylcholine או שינויים בלחץ התוך-כלי תחת תנאי בקרה. לאחר מכן, התגובות נבדקו בנוכחות PSS נטול סידן. ברגע שהטכניקה נשלטת, ניתן לבצעה בערך בשעה אחת אם היא מבוצעת כראוי, וכלי הדם יכול להישאר חיוני בקלות במשך שעות רבות בתא, תוך שמירה על טמפרטורה, גז ותנאי perfuse או SUSE מתאימים.

the-ex-vivo-isolated-skeletal-microvessel-preparation-for

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שיטה צדדי חדש להסתכלות של microcirculation מוצג. זה נחשב מתאים תצפית ארוכת טווח, ועל בשילוב עם התערבויות ביולוגיות pharmacophysiological או המולקולרית.

במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

אנו מציגים הכנה להדמית מניפולציה סידן איתות בהאנדותל כלי הדם מקומי, ללא פגע. צינורות אנדותל מבודדים טריים מעורקי התנגדות עכבר אספקת שרירים שלד לשמור במורפולוגיה vivo ואיתות דינמית בתוך ובין תאי שכנים. ניתן להכין צינורות אנדותל מmicrovessels של רקמות ואיברים אחרים.

בידוד של כלי הדם האנדותל צינורות מעורקי עכבר התנגדות

המעי הדק הוא לעתים קרובות נחשף לרעלים שיכולים להשפיע על זרימת דם ולהשפיע לרעה על מזין קליטה. שימוש בעורק multimyograph וmesenteric ווריד מבודד, תרכובות או רעלים של עניין יכול להיות מוקרן לvasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

אנו מציגים פרוטוקול ללמוד אינטראקציות אנדותל-pericyte אדם העכבר באמצעות וריאציה של assay אנגיוגנזה תקע ג'ל מטריקס.

In vivo לחקר האדם האנדותל-pericyte אינטראקציה באמצעות assay Plug מטריקס ג&#39;ל עכבר

נוהל להכנת ההכנות הפנים של העורק הראשי עורקים אבי העורקים מתואר. הכנות כאלה, כאשר מוכתמים immunofluorescently עם נוגדנים ספציפיים, מאפשרים לנו ללמוד לוקליזציה של חלבונים זיהוי של סוגי תאים בתוך הקיר כולו כלי הדם על ידי מיקרוסקופיה confocal.

הכנת פנים של כלי דם עכבר

Videomicroscopy מערכות משמשות כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של רקמת שומן מבודדת רבים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים ולא תרופתי. טכניקה זו ניתן לבחון פנוטיפים microvascular בתחומים שונים רקמת שומן בבני מהשמנת יתר.

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

כתב יד זה מתאר במבחנה מיקרוסקופ וידאו פרוטוקולים להערכת הפונקציה כלי הדם בעכברוש מוחי התנגדות העורקים. כתב היד מתאר גם טכניקות להערכת צפיפות microvessel עם fluorescently שכותרתו זלוף לקטין ורקמות באמצעות לייזר Flowmetry דופלר.

הערכה של מנגנוני הבקרה וסקולרית ניצול מיקרוסקופ וידאו מבודד התנגדות העורקים של חולדות

כתב יד זה מתאר פרוטוקול פשוטה עבור בידודו של רבים מן הרשתית עכברוש יכול לשמש אלקטרופיזיולוגיות, סידן הדמיה ואת הלחץ myography מחקרים.

בידוד של רבים ברשתית ללימודי פיזיולוגיה של התא Vivo לשעבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לצביעת התאים. האנדותל של בית העורקים של העכבר ישירות טכניקה זו שימושית כשאתה לומד את הפנוטיפים הסלולאריים והמולקולריים של תאי האנדותל בדפוסי זרימה שונים ובפיתוח טרשת עורקים.

שימוש בפני הפנים הללו Immunofluorescence כתמים כדי להתבונן בתאי כלי דם אנדותל ישירות

המטרה של פרוטוקול זה היא לבודד את כלי המיקרו מאזורים מרובים של מערכת העצבים המרכזית של בעלי חוליות lissencephalic וגירנאריים.

בידוד אמין של מערכת העצבים המרכזית מיקרואוניות על פני חמש קבוצות בעלי חוליות

הכנה אינטנסיבית של "צינורות" אנדותל מוחיים של עכבר שלמים מעורקיים פרנצ'ימליים מוחיים מודגמת לחקר ויסות זרימת הדם במוח. יתר על כן, אנו מדגימים את החוזקות הניסיוניות של מודל מחקר אנדותל זה להדמיית פלואורסצנטיות ומדידה אלקטרופיזיולוגית של מסלולי איתות תאיים מרכזיים, כולל שינויים בתאיים [Ca2+] ופוטנציאל הממברנה.

בידוד וניתוח פונקציונלי של אנדותל עורקי של מפרקת מוח עכבר

למדו בידוד כירורגי וקנולציה כפולה של עורקי התנגדות מבודדים לחקירת תגובתיות כלי דם ומנגנוני תפקוד כלי דם ex vivo. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של תכונות מבניות ופונקציונליות.

לשעבר vivo הכנה מבודדת Microvessel השלד לחקירות תגובתיות כלי דם

גלה סרטונים נוספים