Name: חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: חקור את התגובה החיסונית במעי בעכברים עם דלקת קוליטיס מושרית DSS. השיטה כוללת הערכת פעילות מיאלופרוקסידז וציטוקינים דלקתיים, ניתוח היסטולוגי וניקוד מקרוסקופי לקביעת חומרת המחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מענקי הקנדי הלאומי לבריאות מחקר (CIHR) ועל ידי קרוהן ו קוליטיס קרן של קנדה (CCFC).

<ol><li>Sands, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+symptom+to+diagnosis%3A+clinical+distinctions+among+various+forms+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.</a> Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).</li>
<li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Etiopathogenesis+of+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases.</a> World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).</li>
<li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li>
<li>Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sulfate+sodium+%28DSS%29+induced+experimental+colitis+in+immunodeficient+mice%3A+effects+in+CD4%28%2B%29-cell+depleted%2C+athymic+and+NK-cell+depleted+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Res%22%5BJournal%5D)">Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice.</a> Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).</li>
<li>Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+acute+murine+dextran+sodium+sulphate+colitis%3A+cytokine+profile+and+dose+dependency%5BTitle%5D)+AND+%22Digestion%22%5BJournal%5D)">Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency.</a> Digestion. 62, 240-248 (2000).</li>
<li>Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assay+for+acute+intestinal+inflammation+based+on+myeloperoxidase+activity.+Assessment+of+inflammation+in+rat+and+hamster+models%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models.</a> Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).</li>
<li>Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).</li>
<li>Smith, J. W., Castro, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+peroxidase+activity+in+gut+mucosa+to+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation.</a> Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).</li>
<li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vagus+nerve%3A+a+tonic+inhibitory+influence+associated+with+inflammatory+bowel+disease+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model.</a> Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).</li>
<li>Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).</li>
<li>Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+model+of+colitis%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview.</a> Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).</li>
<li>Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).</li>
<li>Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+resident+intestinal+flora+in+acute+and+chronic+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice.</a> Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).</li>
<li>Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+subsets+of+enteric+bacteria+induce+and+perpetuate+experimental+colitis+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice.</a> Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).</li>
<li>Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+has+a+key+role+in+pathogenesis+of+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis.</a> Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).</li>
<li>Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hapten-induced+model+of+murine+inflammatory+bowel+disease%3A+mucosa+immune+responses+and+protection+by+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance.</a> J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).</li>
<li>Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+occurs+in+severe+combined+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice.</a> Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

DSS קוליטיס הוא מודל המושרה כימי הנמצא בשימוש נרחב של דלקת מעיים. במודל זה, עכברים מקבלים מי שתייה בתוספת DSS, אשר נחשב רעיל בתאי אפיתל במעי ולשבש את תקינות המכשול הרירית. 10 מינהל DSS גורם דלקת חריפה כי מאופיין שרפרף רופף, דימום בצואה, וגם עם חדירת גרנולוציטים. 10 במהלך DSS הממשל, קוליטיס מזוהה בדרך כלל עם ירידה משמעותית במשקל וכן נוכחות של דם בצואה, אשר ניתן להעריך על ידי בדיקת דם סמוי בצואה. 5.10,11 לאחר איסוף דגימות רקמות המעי הגס, חומרת קוליטי...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד: </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2ml) </td><td> Eppendorf </td><td> 0030 120.094 </td><td></td></tr><tr><td> Biotek EL808 צלחת ספיגת הקורא </td><td> Biotek </td><td> EL808 </td><td></td></tr><tr><td> Dextran מלח נתרן סולפט מגיב בכיתה (משקל מולקולרי 36,000-50,000 דה) </td><td> MP Biomedicals </td><td> 160110 </td><td></td></tr><tr><td> Gen5 (תוכנה) </td><td> Biotek </td><td> גרסה 1.10.8 </td><td></td></tr><tr><td> Hexadecyltrimethylammonium ברומיד (HTAB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H5882-100 גרם </td><td></td></tr><tr><td> מי חמצן, 30 wt.% פתרון במים </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 216763 </td><td> חנות ב 2-8 מעלות צלזיוס </td></tr><tr><td> Microtest plאכלו 96-היטב קרקעית שטוחה </td><td> Sarstedt </td><td> 82.1581 </td><td> לשימוש אחד בלבד </td></tr><tr><td> O-Dianisidine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D-3252 </td><td> אור רגיש. חנות ב 2-8 מעלות צלזיוס </td></tr><tr><td> פוספט אשלגן, dibasic </td><td> Caledon </td><td> 6620-1 </td><td></td></tr><tr><td> פוספט אשלגן, monobasic </td><td> EMD כימיקלים </td><td> PX1565-1 </td><td></td></tr><tr><td> מעכב פרוטאז קוקטייל </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8340 </td><td> חנות ב -20 ° C </td></tr><tr><td> טריטון X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> טונגסטן קרביד חרוזים על רקמות Lyser II </td><td> QUIAGEN </td><td> 69997 </td><td></td></tr></tbody></table>

חקירת דלקת מעיים במודל dss-induced של ibd

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

מחלות מעי דלקתיות (IBD) כוללת מגוון של מחלות מעיים, הנפוצה ביותר מהם קוליטיס כיבית (UC) ומחלת קרוהן (CD). שני UC ו-CD, כאשר קיימת במעי הגס, ליצור פרופיל סימפטום דומה אשר יכול לכלול, שלשולים דימום רקטלי, כאבי בטן, וירידה במשקל. 1 למרות בפתוגנזה של IBD נותר עלום, הוא תיאר כמחלה multifactorial המערבת שני מרכיבים גנטיים וסביבתיים. 2 ישנם מודלים של בעלי חיים רבים משתנה של דלקת המעי הגס הדומות מספר תכונות של IBD. מודלים של מגוון בעלי חיים קוליטיס מאלה הנובעות באופן ספונטני זנים רגישים של מינים מסוימים הממשל הנזקקים של ריכוזים ספציפיים של קוליטיס וישכנע כימיקלים, כגון נתרן סולפט dextran (DSS). כימית-Induced מודלים של דלקת במעיים הם הדגמים הנפוצים ביותר ואת הדרך הטובה ביותר לתאר של IBD. Adminiהקהילתיים, החברתיים של DSS במי שתייה מייצרת קוליטיס אקוטית או כרונית, תלוי בפרוטוקול הממשל. 3 חיות נתון התערוכה DSS במשקל וסימני שרפרף רופף או שלשולים, לפעמים עם עדות דימום רקטלי. 4,5 כאן, אנו מתארים את השיטות שבהן התפתחות קוליטיס ואת התגובה הדלקתית וכתוצאה מכך ניתן לאפיין הממשל הבא של DSS. שיטות אלה כוללות ניתוח היסטולוגית של hematoxylin / eosin סעיפים במעי הגס מוכתם, מדידה של תומכי ציטוקינים דלקתיים, והנחישות של myeloperoxidase (MPO) פעילות, אשר יכול לשמש כסמן פונדקאית של דלקת. 6 היקף התגובה הדלקתית במצב המחלה ניתן להעריך על ידי נוכחות של סימפטומים קליניים או על ידי שינוי ב היסטולוגיה ברקמה הרירית. הנזק מוערך היסטולוגית הגס באמצעות שיטת הניקוד הרואה הפסד של האדריכלות הקריפטה, חדירה לתא דלקתיות, שריר לאhickening, תא דלדול הגביע, וגם בקריפטה מורסה. 7 כמותית, רמות ציטוקינים דלקתיים הפרו עם מאפיינים דלקת חריפה, כגון אינטרלוקין (IL)-1β, IL-6 ו נמק הגידול גורם (TNF)-α, ניתן לקבוע באמצעות שיטות קונבנציונליות ELISA. בנוסף, פעילות MPO ניתן למדוד באמצעות assay colorimetric ומשמש כמדד של דלקת. 8 ב קוליטיס ניסיוני, חומרת המחלה קשורה לעיתים קרובות עם גידול בפעילות MPO ורמות גבוהות יותר של תומכי ציטוקינים דלקתיים. חומרת קוליטיס ודלקת הקשורים הנזק ניתן להעריך על ידי בחינת עקביות צואה ודימום, בנוסף להערכת מצב histopathological של המעי באמצעות hematoxylin / eosin סעיפים מוכתם רקמת המעי הגס. שברי רקמת המעי הגס יכול לשמש כדי לקבוע פעילות MPO ייצור ציטוקינים. יחדיו, אמצעים אלה ניתן להשתמש כדי להעריך את התגובה הדלקתית של המעימודלים בבעלי חיים של קוליטיס ניסיוני.

דגמים ניסיוניים של מחלות מעי דלקתיות אפשרו לנו לבחון את התגובות מורכב החיסון המולדת ובעלי כושר הסתגלות הקשורים בפתוגנזה. באמצעות הניקוד היסטולוגית, כימות של תומכי ציטוקינים דלקתיים ופעילות myeloperoxidase, אפשר להתחיל להעריך את התגובות הללו לראות מחלות מעי דלקתיות.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

מחלות מעי דלקתיות (IBD) מקיפות קשת של פתולוגיות של המעי, הנפוצות שבהן הן קולוריטיס כיבית (UC) ומחלת קרון...

המטרה הכללית של הליך זה היא להעריך את התגובה החיסונית במעי המושרה על ידי dextron sulfate sodium, באמצעות קביעת כמויות הפעילות של myelo peroxidase ושל ציטוקינים פרו-דלקתיים המיוצרים כמענה לדלקת. ראשית, colitis המושרה על ידי DSS נגרמת בעכברים באמצעות הוספת תמיסת DSS SALT למי השתייה. לאחר מכן, חומרת המחלה של ה-colitis מוערכת באמצעות דירוג מאקרוסקופי, והמעי הגס מוסר לצורך ניתוח נוסף.לאחר מכן, המעי הגס המוצא הוא מחולק לשלושה חלקים לצורך היסטולוגיה, כימות ציטוקינים ובדיקת פעילות MPO. לבסוף, רקמת המעי הגס עוברת הומוגניזציה והעליון משמש לקביעת פעילות MPO. בסופו של דבר, ניתן לקבוע שינויים בפעילות MPO באמצעות נתוני הבליעה שנאספו בעזרת ספקטרופוטומטר.שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי מידע כרוני במודלים שונים של מחלה דלקתית של המעי (IBD), כגון קוליטיס המושרה על ידי DSS ו-TNBS. בנוסף, ניתן להשתמש בשיטה זו באיברים אחרים כגון הריאה והכבד. לפני תחילת הפרוצדורה, החליפו את מי השתייה בכל כלוב עכבר בתמיסת DSS כדי להשרות את הדלקת.ספקו לעכברי הביקורת מי שתייה שעברו עיקור באוטוקלב ללא DSS. לאחר מכן, ביום הניסוי, הוציאו את המעי הגס (colon) כפי שהודגם בעבר במאמר של JoVE על ידי Whitham Williams ו-Williams. סחטו בזהירות את הצואה מכל המעי הגס באמצעות פינצטה כפופה, תוך כדי איסוף הצואה לנייר שקילה על ידי שטיפת הרקמה ב-PBS סטרילי.העריכו את הצואה באמצעות זוג פינצטות כדי ללחוץ על הצואה ולקבוע את עקביותה, לצורך קביעת ניקוד עבור דם בצואה. שימו לב לצבע הצואה ותקפו את ההערכה באמצעות בדיקת hemoccult, הכוללת מריחת צואה על נייר hemoccult, הוספת חומר פיתוח, ורישום של הצבע הכחול המעיד על תוצאה חיובית לנוכחות דם בצואה. לאחר מכן, השתמשו בטבלה זו כדי לקבוע ערך לכל אחד מהתנאים.בשלב הבא, תוך שמירה על הכיוון הפרוקסימלי-דיסטלי של המעי הגס, חתכו את המעי הגס לשלושה מקטעים שווים. לאחר מכן, קחו מקטעי דגימה מהחלקים הפרוקסימליים והמרכזיים של המעי הגס, והניחו את הדגימות בשפופרות Eppendorf של 1.5 milliliter בנפרד. כדי להעריך את הנזק ההיסטולוגי של חומרת הקוליטיס, השתמשו במקטע הרקמה הדיסטלי ביותר של המעי הגס וחתכו מקטע קטן באורך של חצי עד סנטימטר אחד.הניחו את הפסגמנט בקסטרה לרקמה והטבילו את הקסטרה בתמיסת פורמלין 10% ממותקנת. לאחר מכן, הכינו חתכי רוחב של מקטעי הרקמה מוטמעים בפראפין, וצבעו את החתכים ב-hematoxylin and eosin לצורך דירוג על ידי צופה מסוכך. לבסוף, הקפיאו את הדגימות ממקטעי המעי הגס הפרוקסימלי והמרכזי בחנקן נוזלי ואחסנו אותן עד לשימוש בטמפרטורה של 70- מעלות צלזיוס.לאחר הוצאת דגימות המעי הגס מאחסון בטמפרטורה של 70°C-, הניחו אותן על קרח. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה כפופה להסרת צואה או שומן נראים, והעבירו את הדגימות למבחנות בנפח 2 ml המתאימות לשימוש בהומוגנייזר. לאחר מכן, קבעו ורשמו את המשקל של כל דגימה.בשלב הבא, הוסיפו חרוזי הומוגניזציה לכל מבחנת דגימה, ולאחר מכן הוסיפו למבחנה את הכמות המתאימה של בופר H tab בהתאם למשקל הרקמה שנקבע זה עתה; פרקו את השברים באמצעות הומוגניזר רקמות למשך ארבע דקות ב-30 hertz. לבסוף, סנטריגו את תמיסת התאים למשך שש דקות ב-13,400 ×g ובטמפרטורה של 4 °C. אספו את הסופרנאט למבחנה נקייה, ולאחר מכן השליכו את המשקע שהתקבל תוך כדי שמירה על חרוזי ההומוגניזציה במבחנה.ניתן לאחסן את הנוזל העליון בטמפרטורה של 70- עד למועד השימוש. התחילו שלב זה על ידי הוספה של 7 µL מההומוגנאט של הרקמה שהוכן קודם לכן, בשלוש חזרות, לתוך פלטת 96 בארות. לאחר מכן, הוסיפו 50 µL של מימן פéroक्साइड מהול ל-OD Dion iodine שהוכן לאחרונה.באמצעות פיפט רב-ערוצי, יש להוסיף 200 µL מתערובת מימן הפרוקסיד לכל אחת מהבארות. כעת, מדדו את הבליעה באורך גל של 550 nm באמצעות ספקטרופוטומטר, כאשר נבצע שלוש קריאות במרווחים של 32 שניות. לאחר מכן, באמצעות נתוני הבליעה, משקל הרקמה ונפח התמיסה הבאפר, חשבו את פעילות ה-NPO בהומוגנאטים כפי שמוצג בחישוב לדוגמה זה.במהלך תקופת הטיפול ב-DSS, ניתן להשתמש במדד הפעילות של המחלה (disease activity index) כדי להעריך את ההתקדמות הקלינית של המחלה. בעלי חיים שטופלו ב-DSS מראים ירידה משמעותית במשקל בהשוואה למשקלם ההתחלתי, צואה רכה ודימום בעטיפה הצואית. ככל שהסימנים המקרוסקופיים בולטים יותר, כך מדד הפעילות של המחלה גבוה יותר.בעקבות הקרבה ובדיקת המעי הגס של עכברים שקיבלו 5% DSS במי השתייה במשך חמישה ימים, נקבע כי חומרת הקוליטיס – בהתבסס על דירוג מאקרוסקופי של קיצור אורך המעי הגס, דימום במעי הגס, דימום בצואה, ריכוך של עקבי הצואה וסימנים לדימום רקטלי בניסוי מייצג זה – הייתה גרועה פי חמישה בערך מזו של קבוצת הביקורת שטופלה במים בלבד; כפי שמוצג בנתונים אלו, חתכים רוחביים של דגימות רקמה מהמעי הגס של עכברים שטופלו ב-DSS, המצולמים ב-h and e, מראים ציונים היסטולוגיים גבוהים יותר מאשר ביקורות שטופלו במים. כאן, ניתן להבחין במבנה נורמלי ובהיעדר חדירה תאית באזור המסומן בכוכבית בחתך רוחבי זה, הצבוע ב-h and e ונלקח מבעל חיים מקבוצת הביקורת שקיבל מים בלבד. כעת השוו את צביעת ה-h and e של דגימה מבעל חיים שטופל ב-DSS לדמות הקודמת.המעי הגס של בעל חיים זה מציג נזק היסטולוגי רב יותר, כפי שניתן לראות בחדירה תאית מוגברת (מסומנת בסימן הסולמית), ובבלילה רבה יותר של תאי גובלט ועיוות ניכר יותר. נזק למבנה קריפטות ה-K מסומן בסימן הכוכבית. כדי לאפיין יותר את מידת חומרת המחלה בעכברים שטופלו ב-DSS, ניתן להעריך את פעילות ה-NPO, המשמשת כסמן עקיף לדלקת, מדגימות רקמה הומוגניזיות מהמעי הגס.כפי שניתן היה לצפות, למעיים שטופלו ב-DSS יש פעילות NPO גבוהה יותר מאשר למשבקי הביקורת. בנוסף, חומרת הקוליטיס המושרה על ידי DSS קשורה לרמות מוגברות של ציטוקינים פרו-דלקתיים, כגון IL-1β, IL-6 ו-TNF-α. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור שפעילות MPO עלולה לרדת עם הזמן.לפיכך, בדיקת MPO צריכה להיות אחת הבדיקות הראשונות שיבוצעו בעת קביעת חומרת הדלקת במעיים.

investigating-intestinal-inflammation-in-dss-induced-model-of-ibd

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Dextran נתרן סולפט (DSS) מנוהל במי השתייה הוא מודל הוקמה Murine פגיעה דלקתית חריפה של קוליטיס. פרוטוקול זה מתאר את שיטת הטיפול DSS והכנת רקמות.

קוליטיס דוגמנות Murine באמצעות נתרן dextran סולפט (DSS)

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת מודל מורין המושרה על ידי כימיקלים של קוליטיס - מחלת מעי דלקתית. העכבר רשאי לצרוך תמיסת דקסטרן נתרן סולפט (DSS) למשך זמן הולם. עם הצריכה, DSS פוגע במחסום הריר ושכבת האפיתל במעי הגס, ומאפשר לחיידקי המעי להיכנס לרקמה הבסיסית - שם הם חשים על ידי תאי החיסון המקומיים כדי לתווך תגובה חיסונית מוגזמת, וכתוצאה מכך דלקת.

טכניקה ליצירת מודל מורין של קוליטיס הנגרמת על ידי דקסטרן סולפט נתרן

סרטון זה מדגים את שיטת צביעת המטוקסילין ואוזין (H&amp;E) להערכת נזק למעי הגס במודל מורין של קוליטיס הנגרמת על ידי DSS - מחלת מעי דלקתית. לאחר בידוד המעי הגס מעכבר שטופל ב- DSS וקבלת חלקים של הרקמה, צביעת H&amp;E של החלקים מסייעת לזהות את הנזק לרקמה בתיווך דלקת.

צביעת המטוקסילין ואוזין להערכת נזק למעי הגס בקוליטיס הנגרמת על ידי DSS

קוליטיס המושרה DNBS / TNBS מציע אלטרנטיבה ושיטה זולה ללמוד pathobiology של מחלות מעי דלקתיות. הפרוטוקול שנדון במאמר זה מתאר את היישום המוצלח של DNBS כדי לגרום לדלקת מעי גסה בעכברים וחולדות ומאפשר לאדם ללמוד ביסודיות את תגובות מעיים בתיווך מארחת.

מודלים DNBS / TNBS קוליטיס: מתן תובנות מחלת מעי דלקתי והשפעות של התזונה שומן

הערכה מדויקת של השפעות אנטי דלקתיות היא בעלת חשיבות עליונה להערכת תרופות חדשות פוטנציאליות לטיפול במחלות מעי דלקתיות. מיקרוסקופיה הולוגרפית דיגיטלית מספקת הערכה של דלקת בדגימות רקמת המעי הגס של עכברים ובני אדם, כמו גם הערכה מולטי-מודאלית אוטומטית של ריפוי פצעי אפיתל במבחנה.

בשלב הדמיה כמוני מולטימודליות עם דיגיטלי הולוגרפי מיקרוסקופי מדויקת מעריך דלקת מעיים ו אפיתל ריפוי פצעים

טיפולים עכשוויים של מחלות מעי דלקתיות (IBD) מכוונים להקל תסמיני מחלה אך הוא עשוי לגרום לתופעות לוואי חמורות. לכן, אסטרטגיות חלופיות נחקרות במודלי קוליטיס חיה. הנה, נסביר כיצד את ההשפעות המיטיבות של תוספי תזונה על סימנים קליניים IBD מנותחים כגון מודל קוליטיס.

ניתוח מועיל אפקטים של תוספי תזונה על פונקציות מעיים אפיתל מכשול במהלך ניסיוני קוליטיס

הגששים במטרה לייצג כלי חדשני עבור ניתוח המנגנונים המולקולריים, כגון חלבון ביטוי בסוגים שונים של המחלה (למשל, דלקת, זיהום, ו- tumorigenesis). במחקר זה, אנו מתארים הערכה כמותית טומוגרפי תלת מימדי של הסתננות מקרופאג מעיים במודל מאתר של קוליטיס באמצעות טומוגרפיה בתיווך פלורסצנטיות F4/80-ספציפיות.

בתיווך פלורסצנטיות טומוגרפיה זיהוי, כימות הקשורות מקרופאג דלקת מעיים מאתר

כאן אנו מציגים פרוטוקול לחקור את ההשפעה של הביטול של גנים הקשורים הטעימה על תגובות חיסוניות נתרן גופרתי לתוספי (DSS)-induced מעי דלקתיות (מחלת המעי הדלקתי) מחלת העכבר מודל.

ההשפעות של טעם איתות חלבון ביטול על דלקת מעיים במודל עכבר מחלות מעי דלקתיות

ניקוד שיטתי של דלקת מעיים באמצעות מערכת חופשית בסיוע מחשב הוא כלי רב עוצמה להשוות כמותית שינויים היסטופטולוגיים במודלים קוליטיס המאופיינת על ידי נוכחות של כיבים ושינויים דלקתיים. הערכת ניקוד קוליטיס היסטולוגית מחזקת תצפיות קליניות ומאפשרת פרשנות נתונים.

ניתוח ניקוד שיטתי עבור דלקת מעיים במודל קוליטיס נתרן סולפט הנגרמת על ידי מורין

ג'ארד לידבטר מסביר מדוע הקהילה טרמיטים חיידקים במעיים היא מערכת מצוינת ללמוד את יחסי הגומלין המורכבים בין חיידקים. הקשר הסימביוטי הקיים בין חרקים המארח lignocellulose-משפיל החיידקים במעיים הוא הסביר, כמו גם שימושים תעשייתיים של חיידקים אלו ביומסה במפעל משפיל להפקת דלק ביולוגי.

חקירת הקהילה חיידקים במעי האחורי הטרמיטים - ראיון

חקור את התגובה החיסונית במעי בעכברים עם דלקת קוליטיס מושרית DSS. השיטה כוללת הערכת פעילות מיאלופרוקסידז וציטוקינים דלקתיים, ניתוח היסטולוגי וניקוד מקרוסקופי לקביעת חומרת המחלה.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

גלה סרטונים נוספים