Name: Intravital הדמיה של בלוטות לימפה popliteal עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: למד הדמיה תוך-חייתית של בלוטות לימפה popliteal בעכבר באמצעות מיקרוסקופיית שני-פוטון. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחרי נדידת לימפוציטים ואינטראקציות תאיות בגוף החי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי תרומות של 1R01CA154656 NCI, NIAID 1R21AI092299, לחקר הסרטן במכון, קרן רחוב Baldrick של, דנה קרן, מלאך גבריאל הקרן, ויונדאי מוטורס של אמריקה &quot;תקווה על גלגלים&quot; התוכנית.

1. מחזיק עכבר האסיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבת כיסוי של צלחת פטרי 100 מ&quot;מ זכוכית על גבי מכסה של 100 מ&quot;מ צלחת פטרי פלסטיק כלפי מטה. זכוכית יש בקושי נוגע נקודת המרכז של צלחת פלסטיק. באמצעות זכוכית כמו סטנסיל, לעקוב אחר סימן על גבי צלחת פלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מקדח יד (כלומר Dremel) להסיר חלק המכסה 100 מ&quot;מ צלחת פלסטיק כדי ליצור פלטפורמה בצורת חצי סהר. זה מכסה בצורת חצי סהר פלסטיק תשמש תמיכה עבור הגוף העליון של העכבר (איור 1 א). לקדוח שני חורים על מכסה בצורת חצי סהר להבטיח מסכת גז עם עניבה טוויסט מתכת. לאבטח את מכסה הפלסטיק לקצה צלחת פטרי מזכוכית באמצעות דבק סופר או דבק חזק שקול (1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדבק את המכסים של 2 בעל כיפת יתר PCR צינורות (לחתוך את ציר) 1 ס&quot;מ זה מזה למרכז הצלחת התחתונה לצורך עיגון דשי העור popliteal. </li></ol> 2. עכבר הכנה <strong&gt; הערה: בעזרת תרגול מספיק, צריך להיות מסוגל לבצע הכנה העכבר צעדים כירורגית ב 20-30 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם isoflurane (2-2.5% לזירוז, 1.5 עד 2% לניתוח / הדמיה) ונכללה ב 01:01 O 2: תערובת אוויר בקצב זרימת 1L/min באמצעות הליך IACUC המאושרת. לאחר העכבר הוא הרדים, להבטיח מסכת גז על האף עם הקלטת. לקבוע אם העכבר הוא בהרדמה מלאה של חוסר בתגובה אצבע ו / או צובט הזנב. רמת isoflurane עשוי להיות בהתאם כדי להבטיח את בעל החיים הוא מסומם לגמרי, עם קצב קבוע, שאינו עמל הנשימה בין 60-80 נשימות / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש גוזם חשמלי להסרת שיער על רגל אחורית ימין באזור מפשעתי של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבריש את השיער פזור בעדינות להחיל את המעיל הצנוע של קרם נאיר על אזור מגולח עם מקלון צמר גפן. אחרי דקה אחת של היישום הראשוני, הסר נאיר ולנקות את העור חשוף עם לחהנייר מגבת. ודא העכבר נקי ויבש לפני שתמשיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן 2-3 מ&quot;מ עם מספריים בברך את הזכות לחשוף את הגיד פושטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל Vetbond יחד במרכז מחזיק את העכבר שבו הגוף העכבר הרגל ימוקמו. בזהירות להבטיח את העכבר על בעל, עם ברך ימין למטה, כדי לחשוף את הפוסות popliteal הנכון. להבטיח את גיד הברך הימנית עם Vetbond של בין 2 בעלי דש העור כדי לעזור לייצב את תחום ההדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למתוח סרט הזרועות רגל שמאל לפלטפורמה העליונה של בעל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש עניבה טוויסט כדי לאבטח את מסיכת הגז במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בעל תחת מיקרוסקופ לנתיחה. LN חייב להישאר דוממים, ללא תנועה נשימה של העכבר. לכן, יש לנקוט באמצעי זהירות בעת ביצוע ניתוח כדי לייעל את יציבות הרגל. לקבוע את המיקום של הזנב (בדרך כלל מעל לראש), כי תתרום הגדול ביותריציבות ברגל ימין קלטת הזנב למטה. </li></ol> 3. כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד היקף תחת לנתיחה, לשמור על גוף העכבר הטמפרטורה באמצעות תנור חימום או כרית חימום. הדמיה מוצלחת של LN popliteal, חשוב לשמר את חום הגוף הנכונה במהלך הניתוח, כמו גם לשמור על לחות הרקמה על ידי יישום כל הזמן PBS חם לרקמות חשוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את העור בבטאדין. בעזרת מספריים סטריליות, לעשות חתך קו האמצע דרך העור בקצה הימני באמצע השוק, ולהמשיך לחתוך אנכית עד החלק עליון של הירך הימני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות שני חתכים אופקיים העור בחלק העליון של קו חתך אנכי ליצור יריעות עור משני הצדדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור בו ולהדביק את שני שולי העור עם Vetbond. מושך את העור מתוח לפני החלת Vetbond יהיה עוד יותר לקדם את היציבות הרגל, אולם לוודא כי מתח העור לא לחסום את זרימת הדם (כלומר שינויים vesseאני צבע או קוטר). ממשיכים את הדבק במקומות אחרים בגוף, כדי להבטיח יציבות של הרגל לפני חשיפת LN. גודלו של העכבר תקבע עד כמה העור הנוסף נדרש דבק למטה. בדרך כלל, עכברים גדולים ידרוש העור יותר להיות דבוק בעל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> LN צריך לשכב בתוך השקע popliteal או ימינה או שמאלה של הווריד popliteal, בהתאם למיקום של העכבר על בעל. בזהירות להפריד LN מרקמות השומן והשרירים הסמוכים באמצעות מיקרו המבתרים פינצטה או מלקחיים. כדי למזער את הדימום טראומה, להשתמש בטכניקות פילוח עם מיקרו לנתח פינצטה לרקמות שונות. בזהירות לחשוף LN popliteal מבלי לסכן את תקינות כלי הדם מביא ו efferent וכלי הלימפה מביא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליציבות רקמות הוסיף, זכוכית מכסה מרובע עשוי להיות ממוקם מעל LN לח, בקושי נוגע LN תוך הימנעות חסימת כלי הדם. הזכוכית המכסה יכול להיות securאד עם פלסטלינה משני צדי העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צבעי ניאון כלי בגדלים שונים (למשל TRITC-dextran, לפחות 70kDa) יכול להיות מוצג דרך הווריד בשלב זה כדי לעזור להדגיש את מערכת היחסים השלמות המבנית של LN במהלך ההדמיה. </li></ol> 4. 2-Photon הדמיה רכישת ** <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר LN נחשף בצורה נאותה את היציבות מושגת, מיד להעביר את מכלול שלם בעל העכבר על הבמה מיקרוסקופ מצויד בלוק לתכנות משוב טמפרטורת חימום מבוקר בתא מיקרוסקופ הסביבה כל הזמן על 37 ° C. הוסף סטרילית מספיק חמים (37 מעלות צלזיוס) PBS או HBSS לצלול LN. נפח ישתנה בהתאם לגודל והמיקום של העכבר. לחלופין, PBS חם או HBSS ניתן להחיל ישירות LN גזור באמצעות פיפטה כוס בסדר מצויד למשאבה peristaltic והדביקה לעמודה המטרה העדשה טבילה. זרימת הנוזל צריך להיות כךעמודת המים יציבה יכולה להתקיים בין העדשה רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על PBS או הטמפרטורה HBSS על 37 מעלות צלזיוס באמצעות כרית חימום עם החללית משוב. בדיקה נפרדת בטמפרטורה צריך להיות ממוקם מחזיק את העכבר כדי לאשר את הטמפרטורה של PBS בטווח של 36.5-37.5 ° C. בדיקה רקטלית יכול לשמש גם כדי לעקוב אחר הטמפרטורה של ליבת הגוף העכבר ניסיוני במהלך הפגישה הדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש EPI-מנורת פלורסנט לעזור מיקום מדריך LN תחת המטרה. לרכישת ערימות תמונה ניאון באמצעות מרווחי זמן המתאימים אינטראקציה הסלולרי הרצוי (בדרך כלל 10 שניות עד 1 דקה בין כל ערימה התמונה XYZ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על מצב בעלי החיים בתא מיקרוסקופ לעתים קרובות על ידי בדיקה ויזואלית או באמצעות מערכת ניטור בעלי חיים. לקבוע אם העכבר הוא בהרדמה מלאה של חוסר בתגובה אצבע ו / או צובט ציפורניים, ו יציב, בלתי מאומצת קצב הנשימה בין ב 60-80reaths / דקה. רמת isoflurane עשוי להיות בהתאם על מנת להבטיח כי בעל החיים הוא מסומם לגמרי. עם ניטור נוזלים תקין, בעלי חיים ניתן הדמיה למשך 4-6 שעות, או אולי יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניסוי הדמיה, להרדימו בתא 2 CO באמצעות IACUC המאושרת פרוטוקול המתת חסד. בעלי חיים אסור לצאת מן ההרדמה לפני המתת חסד. </li></ol> ** זה הליך כירורגי עשוי להיות שימושית גם עבור סוגים אחרים של הדמיה intravital מלבד LSM-2P. 5. נציג תוצאות תאים חיסוניים שונים במחזור מגויסים כדי LN בקצב שונה בעקבות העברת המאמצת. עבור CD4 + CD8 + ו לימפוציטים, תאים אלה מתחילים להגיע LN דרך גבוהה אנדותל (HEV) ורדיד דקות לאחר העברת הרביעי עם מספרים משמעותיים המגיעים LN popliteal לאחר 2 עד 4 שעות 6,17-18. עבור B cells, מספר לא מבוטל יצטברו לאחר 8 עד 24 שעות 19. DCS הופעל צריך להתחיל להופיע הייבוש popliteal הוזהרו 8 עד 16 שעות לאחר הזרקת 3,11,16-17 שודד דרכים. איור 2 א &#39;עולה כי גם ללא נקודות ציון אחרות, כגון מבנים זקיקי ב התא ניתן להבחין בקלות על ידי הצטברות תא עגול כדורי גלוי תחת 2P-LSM 19. באמצעות כתב ניאון אנדוגני כגון splenocytes היוביקוויטין-GFP (איור 2, סרטונים תוספת 1 ו 2), ניתן לעקוב אחר העברות אלה הלימפוציטים והתנהגויות ימים עד שבוע בתנאים פיזיולוגיים גירוי לא. עם הרב ערוצית גלאי רגישות גבוהה, אפשר לרכוש הדמיה זמנית במערך שכולל מידע מבניים, כמו גם הדינמיקה של אינטראקציה בין בני זוג הסלולר מספר 17,19. כאשר טכניקות כירורגיות מתבצעות כראוי את תנאי הסביבה במעקב צמוד, lymphocyTES צריך להפגין מהירות הגירה אופיינית, כפי שמודגם באיור 2 ג, 2 ד ובמקומות אחרים 13-14,16. לימפוציטים יכול גם להפגין ההבדלים במהירות העברה בהתאם תתי אזורים של הדמיה LN עוברת, ציוני דרך נוספים כך כמו כלי דם (מסומן על ידי כניסתה של צבעים כלי) יסייע לקבוע את איכות ההדמיה הכללי (כלומר שליטה בטמפרטורה הנכונה , טראומה מינימלית LN, וכו &#39;) 3,6,20. <img alt="באיור 1." src="/files/ftp_upload/3720/3720fig1.jpg" /> באיור 1. הבנייה של בעל העכבר על העכבר popliteal LN Imaging) שרטוטים של ההרכבה בעל העכבר,. ב) הכנת נציג העכבר intravital, ג) השלימו בעל הרכבה העכבר, ד) תקריב הדעות של LN popliteal לאחר חשיפה כירורגית. <img alt="איור 2." src="/files/ftp_upload/3720/3720fig2.jpg" /> איור 2. הגירה ניתוח של ה-GFP + לימפוציטיםב LN popliteal. (א) תמונת מצב 3D מתוך רצף 2P-LSM הדמיה של LN popliteal בעכבר C57BL / 6 הנמען העביר adoptively עם 1x10 7 יום GFP + 1 לימפוציטים לפני הדמיה. קו דש מציין את הגבול של זקיקים ב &#39;תא (ב) שירים של הגירה לימפוציטים במהלך שעה 1 של הדמיה רציפה, ג) התפלגות המהירות הכוללת העברת לימפוציטים. מהירות ממוצעת = 10.04 ± 4.26 מיקרומטר / ד &#39;(סך של 15,125 שירים, ניתח) ד) הגירה הסלולר דיפרנציאלי מהירות הפצה של תאים הנמצאים זקיק תא B (ברים פתוחים, מהירות ממוצעת = 8.79 ± 3.90 מיקרומטר / ד&#39;, 1,525 שירים, בסך הכל נותחו ) ו-T לתא שטח (ברים סגורות, מהירות ממוצעת = 13.77 ± 5.93 מיקרומטר / ד &#39;, סך של 1,250 שירים ניתח). סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. משלימה וידאו 1. צילום בהילוך מהיר intravital 2P-LSM הדמיה של LN העכבר popliteal כמתואר באיור 2. סך של 7 לימפוציטים 1x10 בודדו frאום ubiquitin-GFP + התורם העכבר והעבירו adoptively לווריד לעכבר C57BL / 6 הנמען 24 שעות לפני הדמיה. סדרה של XY (750 מיקרומטר צילומי 750 מיקרומטר) התמונות צולמו באמצעות הקרינה קבועה z ערימות (5 שלבים מיקרומטר, 13 שלבים) להניב מחסנית הדמיה XYZ (750 מיקרומטר צילומי 750 מיקרומטר 65 x מיקרומטר), אשר חזר על עצמו כל 20 שניות עבור סכום כולל של 60 דקות, והתוצאה היא רצף הדמיה xyzt לניתוח מהירות (איורים 2 ג, 2 ד). פלייבק מהירות = 450X. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. חותמת זמן = דקות: שניות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3720/Huang_Jove_video1.avi" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בווידאו משלימה</a> . משלימה וידאו 2 הוגדל-נוכח רצף הדמיה וידאו משלימה &#39;1 של זקיק תא B -. אזור T גבול התא. פלייבק מהירות = 450X. סרגל קנה מידה = 25 מיקרומטר. חותמת זמן = דקות:. שניות <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3720/Huang_Jove_video2.avi" target="_blank">C</a>ללקק כאן כדי לצפות בווידאו משלימה.

<ol><li>Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Cell+activation+by+dendritic+cells+in+the+lymph+node%3A+lessons+from+the+movies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">T-Cell activation by dendritic cells in the lymph node: lessons from the movies.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 675-684 (2008).</li>
<li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+friends+in+out-of-the-way+places%3A+how+cells+of+the+immune+system+get+together+and+how+they+conduct+their+business+as+revealed+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Making friends in out-of-the-way places: how cells of the immune system get together and how they conduct their business as revealed by intravital imaging.</a> Immunol. Rev. 221, 163-181 (2008).</li>
<li>Huang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+landscape+of+in+vivo+immunity%3A+insights+from+dynamic+in+situ+imaging+of+secondary+lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Illuminating the landscape of in vivo immunity: insights from dynamic in situ imaging of secondary lymphoid tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li>
<li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-recognition+promotes+the+foreign+antigen+sensitivity+of+naive+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-recognition promotes the foreign antigen sensitivity of naive T lymphocytes.</a> Nature. 420, 429-434 (2002).</li>
<li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+self-recognition+in+T+cell+responses+to+foreign+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">On the role of self-recognition in T cell responses to foreign antigen.</a> Immunol. Rev. 191, 97-106 (2003).</li>
<li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li>
<li>Celli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+the+dynamics+of+T+cell-dendritic+cell+interactions+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Decoding the dynamics of T cell-dendritic cell interactions in vivo.</a> Immunol. Rev. 221, 182-187 (2008).</li>
<li>Mempel, T. R., Junt, T., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rulers+over+randomness%3A+stroma+cells+guide+lymphocyte+migration+in+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Rulers over randomness: stroma cells guide lymphocyte migration in lymph nodes.</a> Immunity. 25, 867-869 (2006).</li>
<li>Worbs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR7+ligands+stimulate+the+intranodal+motility+of+T+lymphocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">CCR7 ligands stimulate the intranodal motility of T lymphocytes in vivo.</a> J. Exp. Med. 204 (3), 489-495 (2007).</li>
<li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((byways+and+breadcrumbs%3A+directing+lymphocyte+traffic+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">byways and breadcrumbs: directing lymphocyte traffic in the lymph node.</a> Trends Immunol. 28, 346-352 (2007).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li>
<li>Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomous+T+cell+trafficking+examined+in+vivo+with+intravital+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 2604-2609 (2003).</li>
<li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+visualizing+immunity+in+context%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: visualizing immunity in context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li>
<li>von Andrian, U. H., Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homing+and+cellular+traffic+in+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Homing and cellular traffic in lymph nodes.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 867-878 (2003).</li>
<li>Bousso, P., Robey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+CD8%2B+T+cell+priming+by+dendritic+cells+in+intact+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dynamics of CD8+ T cell priming by dendritic cells in intact lymph nodes.</a> Nat. Immunol. 4, 579-585 (2003).</li>
<li>Castellino, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+enhance+immunity+by+guiding+naive+CD8%2B+T+cells+to+sites+of+CD4%2B+T+cell-dendritic+cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction.</a> Nature. 440, 890-895 (2006).</li>
<li>Halin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+lymphocyte+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of lymphocyte trafficking.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 21, 581-603 (2005).</li>
<li>Qi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrafollicular+activation+of+lymph+node+B+cells+by+antigen-bearing+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Extrafollicular activation of lymph node B cells by antigen-bearing dendritic cells.</a> Science. 312, 1672-1676 (2006).</li>
<li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extended+vision+for+dynamic+high-resolution+intravital+immune+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">An extended vision for dynamic high-resolution intravital immune imaging.</a> Semin. Immunol. 17, 431-441 (2005).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

ההתקדמות ברזולוציה גבוהה בטכניקות הדמיה באתרו, במיוחד 2P-LSM, היה מלווה עניין הולך וגדל בחקר התנהגות הסלולר הדינאמי in vivo. טכניקת הדמיה 4D על LN popliteal של עכבר חי מאפשר ניתוחים כאלה בהתנהגות הדינמית של תאים חיסוניים בתוך רקמת undisrupted מיקרו סביבה. השימוש LSM-2P עם גלאי מרובים רוחב הקשת כולו גלוי מאפשר הדמיה נתונים בו זמנית אוסף של אוכלוסיות תאים שונות. זה יכול להיות מושג על ידי שימוש בתא ספציפיים בעכברים ב vivo הכתב ניאון (לדוגמה ubiquitin-eGFP,-RFP, או eCFP-) בשילוב עם שימוש של העברת המאמצת של אוכלוסיות תאים אורגניים שכותרתו דיפרנציאלי באמצעות צבעי ניאון סלולריים (למשל CFSE , SNARF-1, תא כתום Tracker) לבחון מנגנונים תאיים ותפקוד בתוך LN. בנוסף תצפית ישירה של יחסי הגומלין בין ג מעקב דיפרנציאליאוכלוסיות גיד, במערך ההדמיה זמנית יכולים לעבור ניתוח נוסף עם זמינים מסחרית עיבוד הדמיה תוכנות (למשל Imaris, BitPlane Inc) להמשיך להסביר, התנהגות התא ותפקודו. מגוון רחב של אפשרויות קיים ללמוד מנגנוני האינטראקציה הסלולר באמצעות אלה in vivo ו בטכניקות סיליקו. המגבלה העיקרית של גישה הניסוי המתואר כאן הוא המורכבות הטכנית הטמונה בגישה הניתוח. טכניקה זו דורשת אימון קפדני על מנת להכיר את האנטומיה רלוונטי בהליכים טכניים מדויקים ומיומנויות כנדרש על ידי פרוטוקול זה. גורמים מסבכים עוד כוללים קושי מזעור הנזק לרקמות במהלך החיפושים LN, אופטימיזציה של יציבות רקמות במהלך ההדמיה, ומניעת פגיעה תרמית לייזר LN לפני ובמהלך ניסוי הדמיה. ההפרעות לכל הגורמים הללו תגרום הלימפה פחות מ-אופטימליתנועתיות ocyte ועל כן להפריע הפרשנות הנכונה של הנתונים וכתוצאה מכך ניתוחים הדמיה.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; מגיב</strong</td&gt;<td<strong&gt; החברה</strong</td&gt;<td<strong&gt; מספר קטלוגי</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurane, USP</td&gt;<td&gt; Baxter Healthcare Corporation</td&gt;<td&gt; NDC 10019-773-60</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vetbond</td&gt;<td&gt; 3M</td&gt;<td&gt; 1469SB</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; נאיר - קרם להסרת שיער</td&gt;<td&gt; נאיר</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PBS, 1X</td&gt;<td&gt; Cellgro</td&gt;<td&gt; 21-040-CV</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; כרית חימום</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; חימום Pad בקר</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; האוויר O<sub&gt; 2</sub</td&gt;<td&gt; Airgas</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; טמפרטורת בדיקה</td&gt;<td&gt; הרווארד Apparatus</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מלקטת דומון # 5</td&gt;<td&gt; העולם Precision מכשירים, Inc</td&gt;<td&gt; 14101</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מלקחיים, גרפה איריס, 7 ס&quot;מ מעוקל</td&gt;<td&gt; העולם Precision מכשירים, Inc</td&gt;<td&gt; 14141</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מספריים</td&gt;<td&gt; Roboz כירורגית כלי ושות&#39; בע&quot;מ</td&gt;<td&gt; RS-5880</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; כיסוי של צלחת זכוכית 100x20 מ&quot;מ התא התרבות</td&gt;<td&gt; קורנינג</td&gt;<td&gt; 70165-102</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; כיסוי של צלחת 100x20 מ&quot;מ קלקר תא תרבות</td&gt;<td&gt; קורנינג</td&gt;<td&gt; 430167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; בבטאדין פתרון (10% Povidine-יוד פתרון מקומי)</td&gt;<td&gt; פרדו מוצרים, LP</td&gt;<td&gt; NDC 67618-150-08</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

intravital הדמיה של בלוטות לימפה popliteal עכבר

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

בלוטות הלימפה (LNs) הם איברי הלימפה משניים, אשר ממוקמים אסטרטגית בכל הגוף, כדי לאפשר לכידה והצגה של אנטיגנים זרים ברקמות היקפי ראשוניים תגובה חיסונית אדפטיבית. זה לצד זה בין התגובות החיסוניות מולד אדפטיבית, LN הוא אתר אידיאלי ללמוד 1,2 אינטראקציות החיסונית התא. (לימפוציטים ותאי T, תאים מסוג B ותאי נ&quot;ח), תאים דנדריטים (DCS), ומקרופגים מהווים את חלק הארי של מח עצם הנגזרות אלמנטים הסלולר של LN. תאים אלה ממוקמים אסטרטגית LN כדי לאפשר מעקב יעיל של אנטיגנים עצמיים ו אנטיגנים זרים פוטנציאליים 3-5. התהליך שבו לימפוציטים בהצלחה נתקלים אנטיגנים מאותו מקור הוא הנושא של חקירה אינטנסיבית בשנים האחרונות, וכולל שילוב של קשרים מולקולאריים כולל קולטנים אנטיגן, מולקולות הדבקה, כמוקינים, ומבנים סטרומה כגון רשת fibro-רשתי 2,6-12 . </p&gt; לפני התפתחות ברזולוציה גבוהה בזמן אמת ניאון in vivo הדמיה, חוקרים הסתמכו על הדמיה סטטי, אשר רק מציע תשובות לגבי, מורפולוגיה מיקום, ואדריכלות. בעוד שאלות אלה הם בסיסי להבנת התנהגות התא החיסונית, את המגבלות הפנימיות עם טכניקה זו אינה מאפשרת ניתוח לסחר לימפוציטים לפענח רמזים סביבתיים המשפיעים על התנהגות התא דינמי. לאחרונה, פיתוח intravital שני הפוטונים סריקת לייזר מיקרוסקופית (2P-LSM) אפשרה לחוקרים כדי להציג את תנועות דינאמיות ואת האינטראקציות של תאים בודדים בתוך LNs חיות 12-16 באתרו. בפרט, אנו ואחרים יישמו טכניקה זו התנהגות התמונה אינטראקציות הסלולר בתוך LN popliteal, שם, טבע צפופה קומפקטית שלה מציעה את היתרון של רכישת זמנית נתונים על שטח גדול עם מגוון רקמות רקמות תת מבנים 11,17-18 . זה אניחשוב לציין כי טכניקה זו מציעה יתרונות על פני הוסיף explanted הדמיה טכניקות רקמה, אשר דורשים הפרעה הדם, זרימת הלימפה, ובסופו של דבר הדינמיקה הסלולר של המערכת. בנוסף, רקמות explanted יש חלון מצומצם מאוד של הזמן שבו הרקמה עדיין מעשית עבור הדמיה לאחר explant. עם לחות ניטור נאות של תנאי הסביבה של בעלי חיים, זמן דימות ניתן להרחיב באופן משמעותי עם טכניקה זו intravital. כאן, אנו מציגים שיטה מפורטת של הכנת LN popliteal העכבר לצורך ביצוע הדמיה intravital.

ההתקדמות מיקרוסקופיה 2-פוטון אפשרו בזמן אמת<em&gt; ב</em&gt; דימות של רקמות חיות באתרו במודלים של בעלי חיים, ובכך משפרים את היכולת שלנו לחקור את התנהגות הסלולר בתנאים הן פיזיולוגי פתולוגי. כאן אנו מתארים את ההכנות הדרושות כדי לבצע הדמיה של intravital הלימפה popliteal העכבר.

Intravital הדמיה של בלוטות לימפה popliteal עכבר

קשרי לימפה (LNs) הם איברים לימפואידיים משניים, הממוקמים באופן אסטרטגי ברחבי הגוף כדי לאפשר לכידה והצגה של גורמים זרים...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לחשוף ולייצב את קשרי הלימפה הפופליטליים (popliteal lymph node) לצורך דימוי תוך-חי (intra vital imaging). דבר זה מושג תחילה על ידי יצירת מחזיק לעכבר, המאפשר את ייצוב הרגל במהלך הפרוצדורה. השלב השני הוא הנחה נכונה של העכבר המורדם על גבי המחזיק.השלב השלישי הוא חשיפה זהירה של קשרי הלימפה הפופליטליים (popliteal lymph nodes) ללא גרימת נזק להם או לכלי הדם שסביבם. השלב הסופי הוא ביצוע דימיון תוך-חי (intravital imaging) של קשרי הלימפה הפופליטליים החשופים. בסופו של דבר, ניתן לצפות ולנתח את הנדידה והאינטראקציות של תאי חיסון בקשרי הלימפה בזמן אמת באמצעות מיקרוסקופיה תוך-חי.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מאחר שהשלבים הכירורגיים קשים ללמידה והשגת ייצוב נאות של קשרי הלימפה ללא גרימת נזק להם היא חיונית. את הפרוצדורה תדגים Rachel Liu.טכנאי במעבדה שלנו מתחיל בהנחת המכסה של צלחת פטרי זכוכית בקוטר 100 מילימטר בצורה ישרה על גבי מכסה של צלחת פטרי פלסטיק בקוטר 100 מילימטר המונח הפוך, כך שהזכוכית תיגע קלות בנקודת המרכז של צלחת הפלסטיק. באמצעות הזכוכית כשבלונה, יש לשרטט קו בצורת סהר על פני צלחת הפלסטיק. לאחר מכן, השתמש במקדחה ידנית כדי לחתוך את מכסה צלחת הפלסטיק בקוטר 100 מילימטר לפלטפורמה בצורת סהר.קדחו שני חורים בפלטפורמה ולאחר מכן הדביקו את המכסה הפלסטי לקצה של פטריית הזכוכית באמצעות דבק חזק. לבסוף, גזרו שני מכסי PCR בעלי כיפה מהמבחנות שלהם באזור הצירים, והדביקו את המכסים במרכז התחתית של הפטרייה במרווח של סנטימטר אחד זה מזה. לאחר הרדמת העכבר, הצמידו את מסכת הגז מעל אפו של בעל החיים בעזרת סרט דביק.כווננו את רמות ה-isoflurane בהתאם כדי להבטיח שהבעל החיים נמצא תחת הרדמה מלאה. לאחר מכן, השתמשו במכונה חשמלית להסרת שיער כדי להסיר את הפרווה מהרגל האחורית הימנית ומהאזור המפשקתי של העכבר. הסמירתו את השיער המשוחרר ולאחר מכן השתמשו במקלון צמר גפן כדי למרוח בעדינות שכבה דקה של קרם להסרת שיער על האזור הגזור.דקה לאחר היישום הראשוני, הסר את קרם ההסרה ונקה את העור החשוף באמצעות נייר סופג לח. כאשר העכבר יבש, בצע חתך קטן של שני עד שלושה מילימטרים בעזרת מספריים בברך ימין כדי לחשוף את הגיד המייืด. כעת, מרח vet bond לאורך מרכז מחזיק העכברים, כאשר גוף העכבר והרגל ימוקמו שם בזהירות.קבעו את העכבר על המחזיק, כאשר ברך ימין מורדת כדי לחשוף את הגומחה הפופליטאלית (popal fossa) הימנית. לאחר מכן, קבעו את גיד ברך ימין באמצעות vebo בין שני מחזיקי סביבתי העור כדי לסייע בייצוב שדה הדימות. השלימו במתיחה והדבקה של זרועות העכבר והרגל השמאלית לפלטפורמה העליונה של המחזיק.השחילו שני מנקי pipe מתכת דרך החורים והשתמשו בהם כדי להדביק את מסכת הגז למכסה. לבסוף, הניחו את התפס מתחת למיקרוסקופ הדיסקציה. מקמו את הזנב במקום שיסייע ליציבות המרבית של הרגל הימנית, בדרך כלל מעל הראש כפי שמוצג כאן.הדביקו את הזנב למקומו. בזמן העבודה תחת מיקרוסקופ הדיסקציה, שמרו על טמפרטורת גוף העכבר באמצעות תנור חימום. התחילו את הפרוצדורה על ידי עיקור העור עם Betadine באמצעות מספריים סטריליים.בצעו חתך לאורך בקו האמצע דרך העור במרכז השוק הימנית והמשיכו לחתוך אנכית עד לחלק העליון של הירך הימנית. לאחר מכן, בצעו שני חתכי עור אופקיים בראש קו החתך האנכי כדי ליצור פ flaps של עור משני הצדדים. שמרו על לחות הרקמה על ידי החלה רציפה של PBS חם על הרקמה החשופה.מתחו את העור, ולאחר מכן מרחו vet bond על המגופים כדי להגביר את יציבות הרגל. המשיכו להדביק אזורים נוספים של העור כדי להגביר את יציבות הרגל לפני חשיפת קשרי הלימפה. חשיפת קשרי הלימפה ללא פגיעה ברקמות הסובבות היא החלק המאתגר ביותר בפרוצדורה זו.הפעלו זהירות יתרה בעת הפרדת הרקמה השומנית והשרירים, והקפידו לא לפגוע בכלי הדם ובכלי הלימפה הסמוכים. הדרך הטובה ביותר לעשות זאת היא להרים מספר גדילי שריר בכל פעם, כלפי מעלה והרחק מהקשרית הלימפטית, בעת הפרדתם. כעת, השתמשו בפינצטות למיקרו-דיסקציה ובמלקחים כדי להרחיב בזהירות את הרקמות השומניות והשרירים שסביב, כך שייחשף הבלנורס (popal lymph node) מבלי לסכן את שלמותם של כלי הדם האפרנטיים וה-ENT וכלי הלימפה האפרנטיים.לאחר חשיפה מספקת של קשרית הלימפה והשגת יציבות, העבירו במהירות את כל מכלול מחזיק העכבר אל שולחן מיקרוסקופ הדימות דו-פוטוני, עם כמות מספקת של PBS סטרילי בטמפרטורה של 37 °C בתא המיקרוסקופ הסביבתי כדי להטביל את קשרית הלימפה. שמרו על טמפרטורת ה-PBS ב-37 °C באמצעות פד חימום בעל חיישן משוב. מקמו חיישן טמפרטורה נפרד במחזיק העכבר כדי לוודא שטמפרטורת ה-PBS נשארת בטווח של 36.5 עד 37.5 °C.ניתן להשתמש גם בגשושית רקטלית כדי לנטר את טמפרטורת הליבה של חיית הניסוי. השתמשו במנורת פלואורסצנציה אפיגנריטית כדי לסייע במיקום קשרי הלימפה תחת העדשה. לאחר מכן, רכשו סדרות תמונות פלואורסצנטיות במרווחי זמן המתאימים לאינטראקציה התאית הרצויה.פעולה.יש לנטר לעיתים קרובות את מצב החיה בתא המיקרוסקופ באמצעות בדיקה ויזואלית. תצלום תלת-ממדי זה נלקח מרצף דימויים של מיקרוסקופיית סריקה לייזר דו-פוטונית של קשרית הלימפה הפופליטלית בעכבר שקיבל העברה אדופטיבית של 1×10⁷ לימפוציטים חיוביים ל-GFP יום אחד לפני הדימוי. זאת, גם ללא נקודות ציון אחרות.ניתן להבחין בקלות במבנים כגון זקיקי תאי B, המסומנים כאן בקוים מקווקווים, באמצעות התא הכדורי העגול. באיור זה מוצגת הצטברות של נתיבי נדידת לימפוציטים במהלך שעה אחת של דימות רציף. הדבר מאפשר מעקב אחר דפוסי נדידת תאים, וכן ניתוח מורכב של התנהגות התאים, כגון מהירות, כיווניות ואינטראקציות בין תאים.שימו לב לצורת ה-OID של הלימפוציטים הנודדים. כאן מוצג פיזור של מהירות הנדודים הכללית של לימפוציטים שהועברו באופן אדופטיבי, אשר נמעקו בדגימה של קשרי לימפה, מתוך סך של 15,125 מסלולים שנותחו. מהירות הממוצע נקבעה להיות בין 6 ל-14 µm/min.גרף זה מציג את התפלגות מהירות הנדידה התאית הדיפרנציאלית של תאים שנמצאו בזקיק של תאי B, המיוצגים על ידי עמודי הנתונים הפתוחים, ובאזור תאי T, המיוצגים על ידי עמודי הנתונים הסגורים. בממוצע, תדירות הנדידה התאית בזקיק תאי B עלתה מזו של הנדידה התאית שנערכה במעקב באזור תאי T. למרות שהתאים באזור תאי T נדדו במהירויות ממוצעות גבוהות יותר בסרטון מיקרוסקופיית סריקה בלייזר דו-פוטוני אינטרוויטלי בשיטת time-lapse של קשרית לימפה של עכבר, סך של 1×10⁷ לימפוציטים בודדו מעכבר תורם חיובי ל-ubiquitin GFP והועברו באופן אדופטיבי תוך-ורידי לעכבר המקבל 24 שעות לפני ההדמיה, כפי שניתן לראות בסרטון.טכניקה זו מאפשרת ויזואליזציה דינמית של התנהגות לימפוציטים בקשרית הלימפה. כאן מוצג תצוגה מוגדלת של רצף ההדמיה של אזור הגבול בין זרם תאי ה-B לאזור תאי ה-T מהסרטון הקודם. באמצעות ניתוח מדויק, ניתן להבחין בהתנהגויות תאים בסביבות המיקרו השונות של קשרית הלימפה.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו יוצרים מחזיק עכברים המתאים לדימוג של קשרי הלימפה הפופיליטאיים, כיצד לחשוף בניתוח את קשרי הלימפה הפופיליטאיים וכיצד לבצע מיקרוסקופיה תוך-חיה (intra vital microscopy) כדי לצפות בהתנהגות של תאי מערכת החיסון ב-C two.

intravital-imaging-of-the-mouse-popliteal-lymph-node

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

שני הפוטונים הדמיה חשף תנועתיות הלימפוציטים אינטראקציות הסלולר בתוך הצומת לימפה בתנאי הבסיס, במהלך תגובה חיסונית 1. הנה, אנחנו מדגימים העברת המאמצת של תאים T, בידוד של בלוטות הלימפה, ועל תנועתיות הדמיה של CD4 + T תאים בתוך הצומת לימפה explanted.

Dissection ו 2-Photon הדמיה של בלוטות לימפה הפריפריה עכברים

הטכניקה לביצוע מיקרוסקופיה intravital של הצומת לימפה מפשעתי (LN) הוא התווה. טכניקה כזו מאפשרת בזמן...

מיקרוסקופית Intravital של הצומת לימפה מפשעתי

שיטות הדמיה שפותחו לאחרונה באמצעות פלואורסצנטי קרוב אינפרא אדום (NIRF) עשויות לעזור להבהיר את תפקיד מערכת הלימפה משחקת בהתפשטות גרורה סרטני, תגובה חיסונית, תיקון פצע, ומחלות אחרות הקשורים לימפטי.

דימות אופטי לא פולשנית של כלי דם הלימפה של עכבר

סרטון זה מדגים טכניקת דיסקציה לקצירת בלוטות לימפה מנקזות פופליטליות מהרגליים האחוריות של העכבר. בלוטות הלימפה ממלאות תפקיד קריטי בגישור בין מערכת החיסון המולדת והנרכשת, וקצירת בלוטות לימפה שלמות – עם מבנה רקמה שמור ויכולת קיום תאית – יכולה לסייע בחקר תגובות חיסוניות מקומיות וסיסטמיות.

שיטת דיסקציה לקצירת בלוטות לימפה מנקזות מורין פופליטל להדמיית Ex Vivo

ההדמיה intravital ברזולוציה גבוהה עם ניגודיות משופרת עד 120 מיקרומטר עומק בבלוטות הלימפה של עכברים בוגרים מושגת על ידי מרחבית ויסות דפוס העירור של מיקרוסקופ שני פוטונים רב המוקדים. ב100 עומק מיקרומטר מדדנו החלטות 487 ננומטר (לרוחב) ו551 ננומטר (צירי), ובכך לעקוף את מגבלות פיזור ועקיפות.

מיקרוסקופית Intravital הפסים תאורה נפתר מאוד של מרכזי ז&#39;רמינל

אנו מפרטים פרוטוקול לניטור התנהגותם של נויטרופילים ומונוציטים בוורידים מזנטריים במצב יציב ובתנאים דלקתיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חיונית בעכברים מורדמים.

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

פרוטוקול זה מתאר טכניקה לתמונה אוכלוסיות תאים שונות בבלוטות לימפה ניקוז ללא שינויים במבנה האיברים.

חזותי מבנה צומת לימפה ולוקליזציה לסלולר באמצעות Ex-Vivo Confocal מיקרוסקופ

פרוטוקול זה מתאר את הדור של מעורבות מח עצם מאתר כימרות עם ספונטנית למרכזי נבטי אוטואימונית, באיזה autoreactive לימפוציטים לשאת photoactivatable חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP-הרשות) כתב. פעולה זו מספקת את היכולת לקשר מיקום סלולארי ברקמות עם ניתוחים פונקציונליים המולקולריים במורד הזרם.

חוקרים למרכזי נבטי Autoreactive בודדים על-ידי Photoactivation במודל של Chimeric מעורבת של מחלת חיסון עצמי

פרוטוקול לחסום את זרימת הלימפה על ידי תפירה כירורגית של כלי לימפה שונים מוצג.

חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי לימפה אפילנט בעכברים

פרוטוקול זה מעריך ניקוז לימפה לאחר שבר על ידי שילוב הדמיה אינדוציאנית ירוקה (ICG) קרובה לאינפרא-אדום עם אולטרסאונד, כדי לכמת את ניקוי ה-ICG הפלנטרי ואת הגדלת בלוטות הלימפה הפופליטאלית בעכברים.

הערכת ניקוז לימפה באמצעות הדמיית ICG אינפרא-אדום קרובה ואולטרסאונד לאחר השבר

למד הדמיה תוך-חייתית של בלוטות לימפה popliteal בעכבר באמצעות מיקרוסקופיית שני-פוטון. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחרי נדידת לימפוציטים ואינטראקציות תאיות בגוף החי.

Intravital הדמיה של בלוטות לימפה popliteal עכבר

גלה סרטונים נוספים