Name: דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: חקור מודל עכברים לאסטמה אלרגית באמצעות חשיפה לאלרגן ומדידת תגובתיות דרכי הנשימה. שיטה זו מאפשרת הערכת חומרת דלקת ורמות IgE לפיתוח טיפולים חדשים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH גרנט HL093196 (RCR) לבין מחקר אטלנטה קרן החינוך (עארף).

<ol><li>Braman, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">The global burden of asthma.</a> Chest. 130, 4S-12S (2006).</li>
<li>Akinbami, L. J., Mooman, J. E., Liu, X. Asthma Prevalence, Health Care Use, and Mortality: 2005-2009. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAkinbami%2C+LJ+%22National+Health+Statistics+Reports%22">National Health Statistics Reports</a>. 32, National Center for Health Statistics. Hyattsville, MD. 2005-2009 (2011).</li>
<li>Bates, J. H., Rincon, M., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung.+Cell.+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of asthma.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 297, 401-410 (2009).</li>
<li>Drazen, J. M., Finn, P. W., De Sanctis, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+airway+responsiveness%3A+physiological+basis+of+observed+outcomes+and+analysis+of+selected+examples+using+these+outcome+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of airway responsiveness: physiological basis of observed outcomes and analysis of selected examples using these outcome indicators.</a> Annu. Rev. Physiol. 61, 593-625 (1999).</li>
<li>Epstein, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+mouse+models+of+allergic+asthma+mimic+clinical+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Arch.+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Do mouse models of allergic asthma mimic clinical disease.</a> Int. Arch. Allergy Immunol. 133, 84-100 (2004).</li>
<li>Blyth, D. I., Pedrick, M. S., Savage, T. J., Hessel, E. M., Fattah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+inflammation+and+epithelial+changes+in+a+murine+model+of+atopic+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Lung inflammation and epithelial changes in a murine model of atopic asthma.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 14, 425-438 (1996).</li>
<li>Martin, T. R., Gerard, N. P., Galli, S. J., Drazen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+responses+to+bronchoconstrictor+agonists+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary responses to bronchoconstrictor agonists in the mouse.</a> J. Appl. Physiol. 64, 2318-2323 (1988).</li>
<li>Hamelmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+measurement+of+airway+responsiveness+in+allergic+mice+using+barometric+plethysmography%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).</li>
<li>Gelfand, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro%3A+mice+are+a+good+model+of+human+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Pro: mice are a good model of human airway disease.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 166, 5-8 (2002).</li>
<li>Shapiro, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+asthma%3A+Pro%3A+Allergic+avoidance+of+animal+%28model%5Bs%5D%29+is+not+an+option%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Animal models of asthma: Pro: Allergic avoidance of animal (model[s]) is not an option.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 174, 1171-1173 (2006).</li>
<li>Zosky, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovalbumin-sensitized+mice+are+good+models+for+airway+hyperresponsiveness+but+not+acute+physiological+responses+to+allergen+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Allergy%22%5BJournal%5D)">Ovalbumin-sensitized mice are good models for airway hyperresponsiveness but not acute physiological responses to allergen inhalation.</a> Clin. Exp. Allergy. 38, 829-838 (2008).</li>
<li>Nials, A. T., Uddin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+allergic+asthma%3A+acute+and+chronic+allergen+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model.+Mech%22%5BJournal%5D)">Mouse models of allergic asthma: acute and chronic allergen challenge.</a> Dis. Model. Mech. 1, 213-220 (2008).</li>
<li>Wenzel, S., Holgate, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+trap%3A+It+still+yields+few+answers+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">The mouse trap: It still yields few answers in asthma.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 174, 1173-1178 (2006).</li>
<li>Rayamajhi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+Intratracheal+Instillation+of+Mice+with+Analysis+of+Lungs+and+Lung+Draining+Lymph+Nodes+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry.</a> J. Vis. Exp. (51), e2702(2011).</li>
<li>Swedin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+aerosol+and+intranasal+challenge+in+a+mouse+model+of+allergic+airway+inflammation+and+hyperresponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Arch.+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Comparison of aerosol and intranasal challenge in a mouse model of allergic airway inflammation and hyperresponsiveness.</a> Int. Arch. Allergy Immunol. 153, 249-258 (2010).</li>
<li>Gueders, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+asthma%3A+a+comparison+between+C57BL%2F6+and+BALB%2Fc+strains+regarding+bronchial+responsiveness%2C+inflammation%2C+and+cytokine+production%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of asthma: a comparison between C57BL/6 and BALB/c strains regarding bronchial responsiveness, inflammation, and cytokine production.</a> Inflamm. Res. 58, 845-854 (2009).</li>
<li>Zhu, W., Gilmour, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+allergic+lung+disease+in+three+mouse+strains+after+systemic+or+mucosal+sensitization+with+ovalbumin+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Immunogenetics%22%5BJournal%5D)">Comparison of allergic lung disease in three mouse strains after systemic or mucosal sensitization with ovalbumin antigen.</a> Immunogenetics. 61, 199-207 (2009).</li>
<li>Flandre, T. D., Leroy, P. L., Desmecht, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+somatic+growth%2C+strain%2C+and+sex+on+double-chamber+plethysmographic+respiratory+function+values+in+healthy+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of somatic growth, strain, and sex on double-chamber plethysmographic respiratory function values in healthy mice.</a> J. Appl. Physiol. 94, 1129-1136 (2003).</li>
<li>Hoymann, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+and+noninvasive+lung+function+measurements+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Invasive and noninvasive lung function measurements in rodents.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 55, 16-26 (2007).</li>
<li>Chong, B. T., Agrawal, D. K., Romero, F. A., Townley, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+bronchoconstriction+using+whole-body+plethysmograph%3A+comparison+of+freely+moving+versus+restrained+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Measurement of bronchoconstriction using whole-body plethysmograph: comparison of freely moving versus restrained guinea pigs.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 39, 163-168 (1998).</li>
</ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי VAMC אטלנטה IACUC לפי פרוטוקול ועדת # V010-10.

במודלים של בעלי חיים של מחלות דרכי הנשימה אלרגית לספק כלים חשובים מחקרים רלוונטיים אסטמה קליני. מספר דגמים שונים, המעסיקים מינים שונים ו אנטיגנים, פותחו. העכבר, זן מעבדה אטרקטיביים ומשמש לעתים קרובות, גם מציע מספר יתרונות על מודלים של מחלות דרכי הנשימה אלרגית. 9,10 למרות מודלים כאלה לא לחקות אסטמה לכל דבר, עם 11 האספקטים של מחלה כרונית להיות קשה במיוחד לשחזר, 12,13 נאשר כאן כי רבים מן המאפיינים העיקריים הם התרבו. כמו כן, אנו מראים כי, כמו אסטמה אנו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם החומר </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> Sigma-Aldrich סנט לואיס, מיזורי </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> אלומיניום הידרוקסיד </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 239186 </td><td></td></tr><tr><td> Acetyl-β-methylcholine כלוריד </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A2251 </td><td></td></tr><tr><td> נתרן Pentobarbital מלח </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P3761 </td><td></td></tr><tr><td> כל הגוף plethysmography (WBP) מערכת </td><td> Buxco לחקר מערכות בווילמינגטון, צפון קרוליינה </td><td></td><td> <a href="http://www.buxco.com" target="_blank">http://www.buxco.com</a> </td></tr><tr><td> FlexiVent </td><td>SCIREQ, Inc מונטריאול, קנדה </td><td></td><td> <a href="http://www.scireq.com" target="_blank">http://www.scireq.com</a> </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ אור </td><td> Leica Microsystems, Inc באפלו גרוב, אילינוי </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cytospin 4 </td><td> Thermo Scientific אשוויל, צפון קרוליינה </td><td></td><td></td></tr><tr><td> הבדל מהירה כתם </td><td> סימנס ניוארק, DE </td><td> B4132-1A </td><td></td></tr><tr><td> חוזר פיפטה </td><td> Tridak Torrington, CT </td><td> STP4001-0025 </td><td></td></tr></tbody></table>

דגם murine של אסטמה אלרגן מושרה

Murine Model of Allergen Induced Asthma

אסטמה היא הגורם העיקרי לתחלואה ותמותה, המשפיעים על כ -300 מיליון בני אדם ברחבי העולם. 1 יותר מ 8% מאוכלוסיית ארה&quot;ב יש אסטמה, עם שכיחות הולכת וגוברת. 2 כמו עם מחלות אחרות, מודלים בבעלי חיים למחלות דרכי הנשימה אלרגית מאוד להקל ההבנה של הפתופיזיולוגיה הבסיסית, לסייע בזיהוי מטרות טיפוליות אפשריות, ולאפשר בדיקה קליני של טיפולים חדשים אפשריים. מודלים של מחלות דרכי הנשימה אלרגית פותחו זנים של בעלי חיים שונים, אבל הם מודלים Murine אטרקטיבי במיוחד בשל עלות נמוכה, זמינות מוכן, מערכת חיסונית היטב מאופיין של חיות אלה. 3 זמינות של מגוון רחב של זנים מהונדס עוד יותר מגביר את האטרקטיביות של מודלים אלה. 4 כאן אנו מתארים שני מודלים של מחלות דרכי הנשימה Murine אלרגית, הן ovalbumin העסקת כמו אנטיגן. בעקבות רגישות ראשוני בזריקה intraperitoneal, מודל אחד delivERS אתגר אנטיגן על ידי ערפול, זאת על ידי משלוח intratracheal. אלו שני מודלים להציע יתרונות משלימים, עם כל מחקה את התכונות העיקריות של אסטמה האדם. 5 המאפיינים העיקריים של אסתמה חריפה כוללים תגובה מוגזמת לגירוי דרכי הנשימה כגון methacholine (hyperresponsiveness דרכי הנשימה; AHR) ו eosinophil עשיר דלקת דרכי הנשימה. אלה גם תופעות בולטות של אתגר האלרגן במודלים Murine שלנו 5,6, ואנחנו מתארים טכניקות למדידת אותם ובכך להעריך את ההשפעות של מניפולציה ניסויית. באופן ספציפי, אנו מתארים את שני 7 פולשניים ולא פולשניים 8 טכניקות למדידת hyperresponsiveness דרכי הנשימה, כמו גם שיטות להערכת חדירת תאים דלקתיים לתוך דרכי הנשימה ואת הריאות. תאים דלקתיים בדרכי האוויר נאספים על ידי שטיפה ברונכואלוואולרית תוך הריאות אנליזה פתולוגית בכליה שנועדה לבחון סמנים של דלקת לאורך האיבר. אלהטכניקות לספק כלים רבי עוצמה ללימוד אסטמה בדרכים שלא יהיה אפשרי בבני אדם.

מודלים העכבר ניסיוני של אסטמה אלרגית להציע אפשרויות חדשות ללימוד בהיווצרות המחלה ופיתוח ותרופות חדשות. דגמים אלה מתאימים גם לגורמים השולטים מדידה תגובה חיסונית אלרגית, דלקת בדרכי הנשימה, ו פתופיזיולוגיה ריאתי.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

אסתמה היא גורם מרכזי לתחלואה ותמותה, המשפיעה על כ-300 מיליון בני אדם ברחבי העולם.1 ליותר מ-8% מאוכלוסיית ארה"ב יש אסתמה, ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להפיק מודל עכברי לאסתמה. ראשית, עכברים עוברים רגישות ל-volin באמצעות הזרקה תוך-פריטונאלית, ובשלב שני העכברים נחשפים ל-volin, באופן תוך-טרכיאלי או באמצעות ערפיל (nebulization).פעולה זו גורמת לתגובה אלרגית בדרכי הנשימה הדומה להחמרה של אסתמה בבני אדם, וניתן למדוד אותה באמצעות בדיקת מאמץ למתילכולין (methylcholine challenge). בנוסף, ניתן לכמת את החלחול התאי בדרכי הנשימה ואת רמות ה-IgE בסרום כדי להעריך את חומרתן של מאפייני אסתמה טיפוסיים אלו. בסופו של דבר, העכברים מפתחים ביטויים דמויי אסתמה, שחומרתם עשויה להיות מושפעת ממניפולציות ניסיוניות נוספות.מודל בעלי חיים זה יכול לסייע במענה על שאלות חשובות בתחום האסמה, כגון השפעות של טיפול בתרופות ניסיוניות ספציפיות או השפעות של מודולציה של מסלולי איתות ספציפיים. את הפרוצדורה זו ידגימו היום סטודנטים לתארים מתקדמים, אירווין וסומיה, מהמעבדה שלי. הכינו את תמיסת הרגישות על ידי אימולסיה של 1 mg/mL של volin ב-PBS סטרילי המכיל 10 mg/mL של אלומיניום הידרוקסיד. חסנו את העכברים על ידי הזרקה אינטraperיטונית של 200 µL של תמיסת הרגישות, או תמיסת ביקורת ללא volin, עבור פרוטוקול זה.יש להרגיש את העכברים כפי שמתואר ביום אפס ושבעה. לאחר מכן, בצעו את החשיפה בימים חלופים, החל מיום 14 עד 22 עבור החשיפה התוך-קנה הנשימה (intra tracheal). הניחו את העכבר המורדם על משטח נטוי.השחילו חוט מתחת לשיניים הקדמיות של העכבר והחזיקו את הראש לאחור. לאחר מכן, יישרו את הכף כדי ליישר את הקנה והדביקו את הרגליים האחוריות למשטח העבודה. כדי להבטיח את המיקום, הרטיבו את אזור הצוואר והחזה של העכבר ב-70% ethanol ונגבו עם chlorhexidine כדי לחטא את אתר הניתוח. באמצעות פינצטה, צבטו את העור בגרון ומשכו אותו בעדינות קדימה באמצעות מספריים כירורגיים סטריליים.בצעו חתך אנכי קטן. מלאו מזרק של 1 ml ב-50 µL של 0.1% Volin ב-PBS. התאימו לו מחט בכישור (gauge) 27 והכניסו אותה לפיפט רפטיטי ביד אחת.השתמשו בפינצטה סטרילית כדי לחשוף את הקנה בעזרת היד השנייה. החזיקו את הפפיטה במקביל לקנה. הכניסו את המחט בזהירות והזריקו את התמיסה.סגרו בעדינות את הפצע ואטמו אותו באמצעות תפר, תוך הקפדה על שמירה על סטריליות. הניחו את העכבר על משטח חימום ואפשרו לו להתאושש לקראת אתגר הניבוליזציה.השתמשו בשיטה שתוארה קודם לכן כדי להרגיש את העכברים ביום אפס וביום ה-14. לאחר מכן, חשפו את העכברים למסב (challenge) מדי יום בין יום 21 ליום 25. כדי לבצע את החשיפה, הניחו את העכברים בתא הראשי של מערכת פלתיסמוגרפיה של הגוף השלם ואפשרו להם להסתגל למשך 10 דקות לפחות.לאחר מכן, העבירו מיליליטר אחד של 0.1% albumin ב-PBS סטרילי לכוס המנשמת ובצעו התזה למשך 30 דקות. כדי לבצע מדידות לא-פולשניות של תגובת-יתר של דרכי הנשימה, התאימו את העכברים לתא כפי שהודגם בעבר. לאחר מכן, רשמו את קריאות הבסיס למשך שלוש דקות.בשלב הבא, העבירו מיליליטר אחד של PBS לכוס המנשם, בצעו אינהלציה במשך שתי דקות ועקבו אחר המשתנים הנשימתיים למשך שש דקות נוספות במהלך שלב הייבוש לאחר האינהלציה. דוגמה זו ממחישה את הרגישות המוגברת של דרכי הנשימה שפיתחו עכברים שטופלו באובלבומין, לצורך ביצוע מדידות פולשניות של תגובתיות-יתר של דרכי הנשימה. הניחו את העכבר המורדם על גבו, חטאו את הצוואר באתנול וכלורהקסידין, וחשפו את הקנה כפי שמתואר קודם לכן בסרטון זה.ברגע שהקנה נראה, השתמשו במספריים סטריליות עדינות כדי לבצע חתך קטן. תוך הקפדה לא לקרוע את הקנה, הכניסו בעדינות את התובת הקנהית. קשרו תפר מסביב לקנה כדי למנוע דליפת אוויר.הנח את העכבר על גבו וחבר את צינור הקנה למנשם. התחל בהנשמה מכנית עבור עכבר במשקל 20 גרם. הגדר את קצב הנשימה ל-150 פעימות לדקה ואת נפח השאיפה ל-200 microliters לצורך מדידות נשימה בקו הבסיס.לאחר מכן חזור על הבדיקה לאחר מתן PBS או מינונים עולים של methylcholine באמצעות מכשיר ערפיל אולטרסוני. באמצעות המדידה הפולשנית, ניתן למדוד הן את התנגדות דרכי הנשימה והן את אלסטין הריאה כצפוי. עכברים שטופלו ב-Volin פיתחו התנגדות ואלסטין מוגברים בעקבות הגירוי.לאחר ההמתה, חשוף את חלל הבטן של העכבר, ולאחר מכן השתמש במספריים כדי לנקב בזהירות את הסרעפת. הקפד לא לנקב את הריאות או את הלב. גזור והסר את כלוב הצלעות.לאחר מכן, דקרו את הלב באמצעות מזרק של 1 mL המצויד במחט gauge 27, ואספו את הדם באיטיות; שמרו את הדם להפרדת סרום ולניתוח של נוגדני IgE ספציפיים לביצים. בשלב הבא, חשפו את הקנה והשתמשו במספריים מעוקלים כדי לפנות נתיב מתחתיו. העבירו את קצהו של פינצטה מעוקלת מתחת לקנה, ולאחר מכן קשרו חוט תפר בקשר חצי רפוי סביב הקנה במיקום נמוך בגרון.ברגע שהחוט במקומו, בצעו חתך קטן בקנה הנשימה מעל הקשר והחדירו בזהירות קנולה לחור. לאחר מכן, לחצו אותה בעדינות קדימה עד להגעה לפתח הריאות. הדקו והשלימו את הקשירה.לאחר מכן, חברו לקנולה מזרק של 1 mL המכיל PBS, והזריקו בעדינות את הנוזל לתוך הריאות. עקבו אחר ניפוח הריאות. היזהרו לא למלא יתר על המידה כדי למנוע קרע של הריאות.שאבו את נוזל השטיפה, תוך כדי סיבוב עדין או לחיצה עדינה של הקנולה מעט עמוק יותר במקרה של התנגדות. לאחר איסוף הנוזל, נתקו את המזרק והעבירו את הנוזל למבחנה על קרח. חזרו על הפרוצדורה פעמיים עם PBS טרי.לאחר הליך זה, ניתן לבודד את תאי דרכי הנשימה באמצעות סנטריפוגציה כפי שמוצג כאן. דרכי הנשימה של עכברים שעברו רגישות וחשיפה ל-volin מכילות מספר תאים כולל גבוה בהרבה מאשר אלו של עכברי ביקורת. באמצעות צביעות diff quick, ניתן להבחין ולספור אוזינופילים, נויטרופילים, מקרופאגים אלבולריים ולימפוציטים.בנוסף, ניתן לראות כי בעכברים מטופלים התפתחו רמות גבוהות יותר של נוגדני IgE ספציפיים ל-volin בסרום ובנוזל שטיפת הסימפונות (bronchoalveolar lavage fluid) לאחר פיתוחם. מודל חיות זה סלל את הדרך עבור חוקרים בתחום האסתמה לבחון את המנגנונים העומדים בבסיס מחלה חשובה זו במודל יוני conveniente.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מדידות חוזרות של הפיזיולוגיה מכרסם הנשימה דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר רצויות, אבל בדרך כלל לא ריאלי. כאן אנו מתארים את שיטת הדיר עבור בעל פה intubating עכברים המאפשר מדידות חוזרות של דרכי הנשימה ואת hyperreactivity דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר.

הפיך, לא פולשני שיטת ההתנגדות מדידות דרכי הנשימה ואת נוזל שטיפה ברונכואלוואולרית דגימה של עכברים

הפרוטוקול הנוכחי מספק תיאור מפורט צעד אחר צעד של הנהלים הנדרשים לביצוע מדידות של מכניקה של מערכת נשימה, כמו גם ההערכה של היענות נשימה לשאיפת מטכולין בעכברים באמצעות טכניקת התנודה נאלצה (flexiVent; SCIREQ Inc, מונטריאול, QC , קנדה).

הערכה של מכניקת מערכת נשימה בעכברים באמצעות טכניקת תנודה בכפייה

בעוד שמחקר במבחנה של אינטראקציות מארח-פתוגן מאפשר אפיון של תגובות חיסוניות ספציפיות, מודלים in vivo נדרשים כדי להתבונן בהשפעות של תגובות מורכבות. באמצעות חשיפה לקנדידה אלביקנס ואחריה זיהום ריאות בתיווך Pseudomonas aeruginosa, הקמנו מודל עכברי של אינטראקציות מיקרוביאליות המעורבות בפתוגניות של דלקת ריאות הקשורה למכונת הנשמה.

לומד קהילות חיידקים<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של אינטראקציה בתיווך בין מארח<em&gt; קנדידה אלביקנס</em&gt; ו<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; באיירווייס

השיטה המתוארת כאן מאפשרת הדמיה של IL- 8 האמרגן תלוי דלקת ההפעלה הריאות של עכברים באמצעות הדמיה פליטת אור לא פולשני (BLI). אותו בעל חיים יכול להיות נתון BLI מספר פעמים במשך עד חודשיים מזמן המסירה של הכתב לוציפראז לבנות.

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור<em&gt; בויבו</emמעקב ארוך טווח אחר תגובות דלקתיות

מטרת המאמר הנוכחי היא לספק תיאור מפורט של נהלים מומלצים כדי להעריך את תפקוד מערכת הנשימה בעכברים בהכרה מאת כפול-תא plethysmography.

הערכה של תפקוד מערכת הנשימה בעכברים בהכרה על ידי כפול-תא Plethysmography

פרוטוקול שהוצג כאן מאפשרת אפיון ריאות ביות של לימפוציטים אנושיים הראשי תחת תנאים דלקתיים ויוו. יכול להיות עם תמונה, לכמת על-ידי קרינה פלואורסצנטית אור גיליונות מיקרוסקופיה של רקמת הריאה כימית שנוקה ריאתי חדירה של תאים חיסוניים האנושי הועבר adoptively במודל של עכברים של דלקת אלרגית.

הדמיה של לימפוציטים אנושיים יונת ריאות ב ניסיוני במודל Vivo של דלקת אלרגית בהתבסס על מיקרוסקופ אור גיליונות מתקדמות

אלרגנים סביבתיים כגון קרדית אבק הבית (HDM) מכילים לעתים קרובות חומרים מיקרוביאלית המפעילים תגובות החיסונית מולדים לווסת דלקת אלרגית. הפרוטוקול המוצג כאן ממחיש את הזיהוי של מינים dsRNA ב אלרגנים HDM ואפיון של הפעילות החיסונית שלהם בדלקת ריאות אאוזינופילית.

זיהוי ואפיון של מינים החיסוני של RNA ב-HDM אלרגנים לווסת דלקת ריאות אאוזינופילית

פלטפורמה גבוהה יכולה לתקן חולדות ללא הגבלה ולחשוף לחלוטין את נקודות acupoints על הגב במהלך מניפולציה דיקור סיני. מאמר זה מתאר שיטות לייצור הפלטפורמה הגבוהה, קובע מודל עכברוש של אסטמה ומודד שינויים בתפקוד הנשימה באמצעות מערכת plethysmography (WBP) לא פולשנית ובזמן אמת.

דיקור במודל עכברוש של אסטמה

פרוטוקול זה מתאר טכניקה אימונופלואורסצנטית צבעונית להערכת מודל החולדה של נזלת אלרגית.

תיוג אימונופלואורסצנטי בחלקי רקמת רירית האף של חולדות נזלת אלרגיות באמצעות בדיקה חיסונית צבעונית

כאן, אנו מתארים את מדידת השיעול באמצעות מערכת פלטיסמוגרפיה לא פולשנית ובזמן אמת של כל הגוף (WBP) ואת ההליכים הנורמטיביים לקצירת דגימות רקמה של עכברים ומציגים כמה שיטות להערכת דלקת בדרכי הנשימה.

שיטות לאיתור שיעול ודלקת בדרכי הנשימה בעכברים

פרוטוקול זה מתאר פיתוח של מודל עכבר עם רגישות יתר לשיעול, שיכול לשמש מודל אידיאלי לחקר מנגנוני השיעול הכרוני.

הקמת מודל עכבר עם רגישות יתר לשיעול באמצעות שאיפת חומצת לימון

חקור מודל עכברים לאסטמה אלרגית באמצעות חשיפה לאלרגן ומדידת תגובתיות דרכי הנשימה. שיטה זו מאפשרת הערכת חומרת דלקת ורמות IgE לפיתוח טיפולים חדשים.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

גלה סרטונים נוספים