Name: סינתזה של ב-vivo-MRI לגילוי אפופטוזיס בדיקה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: למד לסנתז בדיקת אפופטוזיס לזיהוי MRI in vivo באמצעות חיבור Annexin V לננו-חלקיקי תחמוצת ברזל SPIO. השיטה מאפשרת זיהוי מוקדם של תאים אפופטוטיים בתרביות תאי מח עצם עכברים ויישומים באבחון אוטם שריר הלב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המכונים הלאומיים לבריאות, NHLBI (RD, PY, PS). איגוד הלב האמריקני (JL). סטנפורד, VPUE גרנט (JL).

מעובד מתוך מחקר לפני 1. 1. נטיה של Annexin V כדי SPIO <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמצן חלקיקים SPIO (האוקיינוס ​​ננוטק Inc, 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל) עבור 1 שעה בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס בחושך בתמיסה עם 0.15 מ &#39;נתרן periodate (NaIO 4) (4:01 משקל: יחס משקל) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה SPIO חמצון במשך שעה עם 12 מטוהרים חלבון ANX (1:1 יחס, משקל: משקל) ב borate M 0.15 נתרן (Na 2 B 4 O 7 10 שעות 2 O) בשעה 20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את תערובת נוספת שעה 1 עם borohydride נתרן (NaBH 4) מתחת למכסה המנוע קטר ואז להרוות עם 0.15 מ &#39;טריס-HCl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד ANX ללא ANX-SPIO ידי צנטריפוגה ב XG 14,000 (75 נקבוביות מיקרומטר Microcon מסנן, Millipore, Billerica, MA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחדד עוד יותר את המתחם על ידי הסרת זיהומים מאוגד באמצעות מכשיר מפריד מגנטי (האוקיינוס ​​ננוטק, Inc). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את retentate מסנן (ANX-SPIO) רמות החלבוןעל ידי assay חלבון ברדפורד וחנות ב -80 ° C ב 2 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​0.1 M Tris-HCl עם 1% מעכבי פרוטאז אלבומין בסרום (פרוטאז האלט מעכב, Thermo Scientific, 1-50 מ&quot;ג / ANX מ&quot;ג). </li></ol> 2. פיזור אור דינאמי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנפרד לדלל את SPIO ANX ו-SPIO ב PBS צפיפות אופטית של 0.1 ולנתח ידי פיזור אור דינאמי על מכונת ננו DLS Zetasizer (Malvern בע&quot;מ, ווסטרשייר, בריטניה) 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג פסגות monomodal (באופן אידיאלי) עבור המתחם, בגודל Z-הממוצע החלקיקים ואת ראשי polydispersity (PDI). תשוו את זה גודל לגודל DLS-מדודה של nanoparticle תחמוצת ברזל בלבד. ANX-SPIO תוצאות DLS הראה חלקיק המצומד הידרודינמית בקוטר של 78 ננומטר עם פ&quot;ד של 0.13 1, המשקף הומוגניות ANX-SPIO המינים 3. </li></ol> 3. תרבית תאים, אינדוקציה של אפופטוזיס בתרבות, ו-MRI של תאים בתרבית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבוגרים תרבות העכבר מח עצם של mesenchymalתאים TEM (mMSCs) ב DMEM השלימו עם 10% ו 1% FBS פניצילין, סטרפטומיצין (Invitrogen, Inc), רצוי במעבר 20-30 אפריל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום אפופטוזיס בתאי תרבית ידי טיפול עבור משתנה פעמים ב 37 ° C עם DOX (Sigma, 1 מ&quot;מ מלוחים 0.9%, ריכוז 1 מיקרומטר בתקשורת) 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את כמות אפופטוזיס בתרבות או באמצעות MRI עם ANX-SPIO (המתואר 3.4 להלן) או באמצעות מיקרוסקופ לאחר TUNEL כתם (APO-BrdUTM TUNEL Assay קיט, בדיקות מולקולריות / Invitrogen, יוג&#39;ין, OR) או אחריו כתם עם ANX-FITC (Roche, שוויץ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתייג את התאים עם ANX-SPIO (10 חלבון / mL מ&quot;ג בינוני למעט כאמור), או עם משקל שווה ערך חינם SPIO (5 מ&quot;ג), במשך 15 דקות ב 37 ° C. לשטוף 4 פעמים עם PBS, וכן כיסוי עם 1 מ&quot;ל של agarose 1% כדי למנוע דיפוזיה של חלקיקים SPIO. לבצע בדיקת MRI של המנות (כמתואר בהמשך). לחלופין, לשטוף את התאים לאחר trypsinize DOX ANX ו-SPIO תיוג, ואז לאפשר לתאיםיוצרים כדורי ב Eppendorf צינורות. </li></ol> 4. במבחנה MRI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 1.5 או 3 טסלה GE Signa סורק Excite עם סליל המקלט תקן הברך בניתוח MRI חוץ גופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הכלים תרבות או צינורות לתוך רפאים אגר, ואת התמונה, תוך שימוש ברצף הדרגתי, הד שיפוע מפונק: זמן החזרה (TR) 550 מילישניות, זמן אקו (TE) 10 ms, זווית להעיף 15 °, מטריקס 256 x 256, שדה של נוף 3 ס&quot;מ X 3 ס&quot;מ, עובי פרוסת 1.3 מ&quot;מ, מספר ממוצעים (NEX) 2, 0 המרווח 5 מ&quot;מ. תמונה axially דרך שכבת תאים בצלחת על אובדן האות * T2, תוך שימוש באזורים של ריבית (ROIs) של אזור קבוע (למשל, 0.8 מ&quot;מ 2). להתאים את הרקע באמצעות אותות בקרה ROI מ רפאים אגר. למדוד את רעשי הרקע של האות האוויר המקיף את הפנטום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב יחס ניגודיות MRI לרעש (CNR: [SI SI-ROI מדגם השליטה ROI] / [SD של SI של רעשי רקע], שם SI היא עוצמת האות,SD הוא סטיית התקן) חושב על כל מאכל התרבות. </li></ol> 5. נציג תוצאות מדידה של אובדן * האות T2 במבחנה דורש פנטום אגר הומוגנית וחוסר בועות אוויר, אשר תיצור חלל חפץ האות. ממצא זה קשה להבחין בין אובדן אמיתי * T2 האות של SPIO, הוא קריטי לתוצאות לפירוש. אנא ראה איור 1 למשל של חפץ האוויר כמו גם תחמוצת ברזל אמיתי T2 * אובדן האות. עבור הדמיה מנה חוץ גופית התרבות, החל נפח מתאים של ג&#39;ל אגר לצלחת בכל תרבות, כך מספיקות פרוסות ה-MRI צירית, שהם כ 1 מ&quot;מ עובי, ניתן לבצע את התמונה כראוי את המנה כולה. איור 2 ממחיש את האות הצפוי MRI מצלחות תרבות בודדים אגר. יש בדרך כלל איזו וריאציה האות בשולי הצלחת, לכן ניתוח של אזורים של interest יש להימנע באזורים אלה לא אחידים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3775/3775fig1.jpg" /> באיור 1. ANX-SPIO מזהה אפופטוזיס בתרבית cardiomyocytes חולדה היילודים. איור 1 א מציג תמונה של cardiomyocytes היילודים pelleted שטופלו פתרון שליטה (צינור משמאל), ANX-SPIO (צינור באמצע), ו-DOX + ANX SPIO (צינורית מימין) . הערה צבע חום של DOX + ANX-SPIO תאים שטופלו, המשקף שמירה מוגברת של המתחם ANX-SPIO בתאים אפופטוטיים. 1B איור בתמונות חוץ גופית ה-MRI הראו אינטנסיבי T2 * אובדן האות של + DOX ANX-SPIO תאים. כמו כן, בועת אוויר נתפס בין ה 4 ו 5 th Eppendorf צינורות (אות קטנה חלל שחור), אשר דומה הריק את האות של ANX-SPIO, ואשר יכול להשפיע על ניתוח של CNR. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3775/3775fig2.jpg" /> איור 2. ANX-SPIOמחייב הוא ספציפי של תאים אפופטוטיים בתרבות. 2A איור מדגים cardiomyocytes חולדה אפופטוטיים היילודים על הכלים תרבות, נתון מכתים ANX-FLUOS או ANX-SPIO מכתים, עם ריכוז נמוך וגבוה (ימינה ושמאלה, בהתאמה) של ANX-SPIO. הערה אחרת T2 * אובדן האות (סיגנל שחור) של תאים אפופטוטיים כי טופלו ANX ניאון (ANX-FLUOS) ורמות נמוכות לעומת רמות גבוהות של ANX-SPIO. יותר T2 * אובדן האות בצד ימין קשורה האות ANX-FLUOS מופחת במידה ניכרת, אשר התחרו את ידי ASX-SPIO ריכוזים גבוהים יותר. איור 2B מדגים מחייב התחרותי של ANX-SPIO לעומת ANX-FLUOS האות דיסוציאציה קבוע, K i. ציר ה-X מציין את ריכוז החלבון Annexin בהיקף יומן. סרט 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3775/3775movie1.mov" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג משלימה</a>הסרט.

<ol><li>Dash, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+MRI+probe+to+detect+treatment+of+cardiac+apoptosis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">A molecular MRI probe to detect treatment of cardiac apoptosis in vivo.</a> Magn. Reson. Med. , (2011).</li>
<li>Khym, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reaction+of+methylamine+with+periodate-oxidized+adenosine+5%27-phosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">The reaction of methylamine with periodate-oxidized adenosine 5'-phosphate.</a> Biochemistry. 2, 344-350 (1963).</li>
<li>Liu, Y. Y., Yu, Y., Zhang, G. B., Tang, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation%2C+characterization%2C+and+controlled+release+of+novel+nanoparticles+based+on+MMA%2Fbeta-CD+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Preparation, characterization, and controlled release of novel nanoparticles based on MMA/beta-CD copolymers.</a> Macromol. Biosci. 7, 1250-1257 (2007).</li>
<li>Seo, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FeCo%2Fgraphitic-shell+nanocrystals+as+advanced+magnetic-resonance-imaging+and+near-infrared+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">FeCo/graphitic-shell nanocrystals as advanced magnetic-resonance-imaging and near-infrared agents.</a> Nat. Mater. 5, 971-976 (2006).</li>
<li>Hsiao, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+nanoparticle+labeling+of+mesenchymal+stem+cells+without+transfection+agent%3A+cellular+behavior+and+capability+of+detection+with+clinical+1.5+T+magnetic+resonance+at+the+single+cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Magnetic nanoparticle labeling of mesenchymal stem cells without transfection agent: cellular behavior and capability of detection with clinical 1.5 T magnetic resonance at the single cell level.</a> Magn. Reson. Med. 58, 717-724 (2007).</li>
<li>Zhao, M., Beauregard, D. A., Loizou, L., Davletov, B., Brindle, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+detection+of+apoptosis+using+magnetic+resonance+imaging+and+a+targeted+contrast+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Non-invasive detection of apoptosis using magnetic resonance imaging and a targeted contrast agent.</a> Nat. Med. 7, 1241-1244 (2001).</li>
<li>van Tilborg, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internalization+of+annexin+A5-functionalized+iron+oxide+particles+by+apoptotic+Jurkat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Internalization of annexin A5-functionalized iron oxide particles by apoptotic Jurkat cells.</a> Contrast Media Mol. Imaging. 4, 24-32 (2009).</li>
<li>Sosnovik, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+cardiomyocyte+apoptosis+with+a+novel+magneto-optical+nanoparticle%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of cardiomyocyte apoptosis with a novel magneto-optical nanoparticle.</a> Magn. Reson. Med. 54, 718-724 (2005).</li>
<li>Sosnovik, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+MRI+detects+low+levels+of+cardiomyocyte+apoptosis+in+a+transgenic+model+of+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Cardiovasc.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Molecular MRI detects low levels of cardiomyocyte apoptosis in a transgenic model of chronic heart failure.</a> Circ. Cardiovasc. Imaging. 2, 468-475 (2009).</li>
<li>Dumont, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiomyocyte+death+induced+by+myocardial+ischemia+and+reperfusion%3A+measurement+with+recombinant+human+annexin-V+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiomyocyte death induced by myocardial ischemia and reperfusion: measurement with recombinant human annexin-V in a mouse model.</a> Circulation. 102, 1564-1568 (2000).</li>
<li>Blankenberg, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+detection+and+imaging+of+phosphatidylserine+expression+during+programmed+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">In vivo detection and imaging of phosphatidylserine expression during programmed cell death.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 6349-6354 (1998).</li>
<li>Schellenberger, E. A., Sosnovik, D., Weissleder, R., Josephson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magneto%2Foptical+annexin+V%2C+a+multimodal+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug.+Chem%22%5BJournal%5D)">Magneto/optical annexin V, a multimodal protein.</a> Bioconjug. Chem. 15, 1062-1067 (2004).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

שיטת הצמידה תיאר לקישור SPIO כדי Annexin V מנצל את שרשרת לוואי אמין קבוצות Annexin ואת moieties carboxyl של nanoparticle SPIO. דרך הפחתת חמצון צעדים ספציפיים, הצמדה קוולנטי של תרכובות אלה ניתן להשיג, ואת nanoparticle פונקציונליות וכתוצאה מכך יכול להיות מבודד. שיטה זו עשויה להכליל את חלבונים אחרים חלקיקים של עניין. השלבים הקריטיים ביותר הם חמצון והפחתת התנאים, שבוצעו הטמפרטורות מתאימות עם ערבוב עדין. תשואה נמוכה ע...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td></tr><tr><td> ברזל פאראמגנטי תחמוצת </td><td> האוקיינוס ​​ננוטק, Inc </td><td> איכס-40-005 </td></tr><tr><td> דוקסורוביצין </td><td> סיגמא </td><td> D1515-10 מ&quot;ג </td></tr><tr><td> SuperMag מפריד </td><td> האוקיינוס ​​ננוטק, Inc </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Zetasizer ננו מכונת DLS </td><td> Malvern, Inc </td><td> N / A </td></tr></tbody></table>

סינתזה של<em&gt; ב-vivo</em&gt;-mri לגילוי אפופטוזיס בדיקה

Synthesis of an In vivo MRI-detectable Apoptosis Probe

אפופטוזיס נייד הוא מאפיין בולט של מחלות רבות, וזה מוות תאים מתוכנת מתרחשת בדרך כלל לפני הביטויים הקליניים של המחלה ניכרות. אמצעי לזהות אפופטוזיס הראשונים שלה, בשלבים הפיך היה להרשות לעצמו קדם קליניים &quot;חלון&quot; שבמהלכו אמצעי מניעה או טיפול שניתן לנקוט כדי להגן על הלב מפני נזק בלתי הפיך. אנו מציגים כאן שיטה פשוטה חזקים כדי להטות האדם Annexin V (ANX), אשר נקשר לתאי בשקיקה אותם בשלבים הראשונים הפיך של אפופטוזיס, לגהץ פאראמגנטי תחמוצת (SPIO) חלקיקים, המשמשים כסוכן-MRI לגילוי ניגוד. שיטת הצמידה מתחיל חמצון של חלקיקים SPIO, אשר מתחמצנים קבוצות carboxyl על הקליפה פוליסכריד של SPIO. מטוהרים חלבון ANX נוסף ואז במסגרת של פתרון נתרן borate כדי להקל על האינטראקציה קוולנטי של ANX עם SPIO במאגר צמצום. השלב האחרון עם ירידה borohydrid נתרןהדואר מתבצעת על מנת להשלים את הירידה, ואז התגובה היא הרווה. ANX Unconjugated יוסר תערובת ידי סינון microcentrifuge. גודל והטוהר של המוצר ANX-SPIO מאומת על ידי פיזור אור דינאמי (DLS). שיטה זו אינה דורשת בנוסף, או שינוי, פוליסכריד SPIO פגז, בניגוד צולבים תחמוצת ברזל החלקיקים שיטות לצמידה או ביוטין, שכותרתו חלקיקים. כתוצאה מכך, שיטה זו מייצגת גישה פשוטה, חזקה כי ניתן להאריך את הצמידה של חלבונים אחרים בעלי עניין.

גילוי מוקדם של אפופטוזיס עשוי לזהות אוכלוסיות בסיכון סלולריים במגוון רחב של מחלות. כאן אנו מראים שיטה לקשר חלבון מוקדם אפופטוזיס איתור (Annexin V) כדי nanoparticle-MRI לגילוי תחמוצת ברזל (SPIO). שיטה זו עשויה להתארך עד חלבונים אחרים בעלי עניין לייצר-MRI לגילוי בדיקות הדמיה מולקולרית.

סינתזה של<em&gt; ב-vivo</em&gt;-MRI לגילוי אפופטוזיס בדיקה

אפופטוזיס תאי הוא מאפיין בולט של מחלות רבות, ומוות תאי מתוכנן זה מתרחש בדרך כלל לפני שהביטויים הקליניים של המחלה הם...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לסנתז גשוש לאפופטוזיס הניתן לגילוי ב-MRI in vivo. דבר זה מושג על ידי חמצון ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל הניתנים לגילוי ב-MRI, או SPIO, וצימודם לחלבון נקסין. לאחר מכן, מושרה אפופטוזיס בתאים מזנכימליים ממח העצם של עכברים בוגרים, אשר מדגריים לאחר מכן עם הגשוש A-N-X-S-P-I-O, הנצמד לתאים אפופטוטיים.לבסוף, נעשה שימוש ב-MRI כדי לדגום את צלחות תרבית התאים במטרה להעריך את יעילות הגשש. התוצאות המתקבלות מראות אות הנובע מההיצמדות המכוונת של A-N-X-S-P-I-O לתאים אפופטוטיים על בסיס דימוי MRI. להשלכות של טכניקה זו יש השפעה על הטיפול והאבחון של אוטם שריר הלב, שכן זיהוי מוקדם יאפשר טיפול מנע מוקדם. כדי לצמד xin five ל-SPIO, התחילו בחמצון של חלקיקי SPIO בתמיסה של 0.15 molar sodium per iodate למשך שעה אחת בחושך בטמפרטורה של 20 °C.דגרו את ה-SPIO המחומצן עם חלבון A NX מטוהר ב-0.15 מולארי sodium borohydride למשך 12 שעות ב-20 °C כדי להפחית את התערובת עוד יותר תחת מנדף כימיים. הוסיפו מיליליטר אחד של sodium borohydride ודגרו למשך שעה אחת. לאחר מכן, בצעו השבחה (quench) של התמיסה עם מיליליטר אחד של 0.15 מולארי tris HCL כדי להפריד את ה-A NX החופשי מקומפלקסי ה-A-N-X-S-P-I-O.העבירו את התגובה למסנן צנטריפוגלי של 75 מילימטר וסובבו במהירות של 14,000 ×g למשך 15 דקות. הוציאו מהצנטריפוגה כדי ל

synthesis-of-an-in-vivo-mri-detectable-apoptosis-probe

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) מנגן עם כלוריד...

ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית

הר שלם<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של E8.5 לעוברי E11.5 עכבר

Live-תא הדמיה של אפופטוזיס caspase-3 בתיווך ב-N19 oligodendrocyte תרבויות הנציח התא...

ביקע ניטור caspase-3 פעילות אפופטוזיס של תאים Oligodendroglial הונצח באמצעות Live-תא הדמיה Cleaveable Fluorogenic-צבע מצעים בעקבות שלילת קוטביות אשלגן-Induced ממברנה

אנו מציגים פרוטוקול פשוט לדמיין אזורים של מות תאים מתוכן (PCD) בעוברי עכברים ומבדילים (ES) תרבויות תאי גזע עובריות באמצעות צבע מסיס מאוד בשם LysoTracker.

שימוש בLysoTracker לזהות מות תאים מתוכנים בעוברים ומיון תאי גזע עובריים

הפרעות גנטיות מסוימות או חשיפה לרעלים עלולות לשבש תהליכי התפתחות תקינים ולהוביל למוות של סוגי תאים ספציפיים. הניתוח של Caspase 3 המופעל על ידי אימונופלואורסצנציה שלמה בעוברי דג הזברה חושף לוקליזציה ספציפית לשלב ולרקמות של תאים העוברים אפופטוזיס באופן ספציפי.

ניתוח של אפופטוזיס בעוברי דג הזברה על ידי כל הר Immunofluorescence לזיהוי caspase הופעל 3

פרוטוקול זה מתאר שיטת הכלאה מהירה ופשוטה באתרה אידיאלית למוח עם קידומת פרה-פורמלדהיד, ובכך מפחית את הצורך בשלבים מורכבים ממושכים תוך שימוש ברקמות קפואות טריות.  השיטה מאומתת באמצעות זיהוי גן הקולטן סרוטונין 5-HT2A htr2a בחולדות.

מהיר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה באמצעות oligonucleotide בדיקות במוח-התחילית Paraformaldehyde של חולדות עם סרוטונין תסמונת

נמוך-שדה (L-band, 1.2 GHz) אלקטרון פאראמגנטיים תהודה באמצעות הגששים nitroxyl ו- trityl מסיס הוא הפגין עבור הערכה של פרמטרים חשובים מבחינה פיזיולוגית ב microenvironment הגידול במודלים של העכבר של סרטן השד.

אין ויוו הערכת EPR pH, pO2, מצב חמצון-חיזור, ואת ריכוזים של פוספט גלוטתיון ב Microenvironment הגידול

Efferocytosis, הסרת phagocytic בתאים אפופטוטיים להיפגע, הוא נדרש כדי לשמור על הומאוסטזיס, בהנחייתם של רצפטורים, איתות המסלולים המאפשרים זיהוי, היבלעות של הפנמה של מוות תאים. במסמך זה, אנו מציגים מיקרוסקופ פלורסצנטיות פרוטוקול עבור כימות של efferocytosis וכן את פעילותם של efferocytic איתות המסלולים.

כימות של Efferocytosis על-ידי קרינה פלואורסצנטית תא בודד מיקרוסקופ

DetectSyn הוא בדיקה פלואורסצנטית מהירה ובלתי משוחדת המודדת שינויים במספר הסינפסות היחסי (טרום ופוסט-סינפטי) בין טיפולים או מצבי מחלה. טכניקה זו משתמשת בטכניקת קשירת קרבה שניתן להשתמש בה הן בתאי עצב בתרבית והן ברקמות קבועות.

DetectSyn: שיטה פלואורסצנטית מהירה ובלתי משוחדת לזיהוי שינויים בצפיפות הסינפסה

מחקר זה פיתח שיטה לא פולשנית ובזמן אמת להערכת ההתפלגות של ליגנד מוות מתוכנת 1 בכל הגוף, בהתבסס על הדמיה טומוגרפית של פליטת פוזיטרונים של אנטגוניסט D-dodecapeptide [68Ga]. לטכניקה זו יתרונות על פני אימונוהיסטוכימיה קונבנציונלית והיא משפרת את יעילות זיהוי החולים המתאימים אשר יפיקו תועלת מטיפול בחסימת נקודות בקרה חיסוניות.

פיתוח של 68גלייום מסומן D-פפטיד PET Tracer עבור הדמיה מתוכנת מוות-ליגנד 1 ביטוי

מחקר זה משתמש בסמנים מבוססי פלואורסצנטיות מרובי כתמים של מוות תאים ואפופטוזיס בשילוב עם מיקרוסקופיה קונפוקלית כדי להעריך אפופטוזיס המושרה על ידי ציטוקינים ומוות ספציפי לתאי β באיי הלבלב. הוא חושף שינויים מרחביים וזמניים במוות תאים ואפופטוזיס בתגובה לגירויים חוץ-תאיים.

טיפול באי לבלב מבודד ומדידת אפופטוזיס

למד לסנתז בדיקת אפופטוזיס לזיהוי MRI in vivo באמצעות חיבור Annexin V לננו-חלקיקי תחמוצת ברזל SPIO. השיטה מאפשרת זיהוי מוקדם של תאים אפופטוטיים בתרביות תאי מח עצם עכברים ויישומים באבחון אוטם שריר הלב.

סינתזה של

גלה סרטונים נוספים