Name: שיטות Assay תסיסנית התנהגות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: למדו שיטות להערכת התנהגויות מוטוריות וחישתיות ב-Drosophila melanogaster באמצעות מבחני crawling, ring ו-courtship. שיטות אלו מאפשרות זיהוי מוקדם של ליקויי תנועה וחקר מחלות נוירודגנרטיביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו רוצים להודות Astha Maltare להפקת הנתונים זוחלים הזחל. ברצוננו להודות לד&quot;ר ניקולס Lanson הבן למתן את דבריו על כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי רוברט פקארד מרכז ALS באוניברסיטת ג&#39;ונס הופקינס (כדי UBP) ו amyotrophic לרוחב טרשת האגודה (UBP) ו R01MH083689 מן המכון הלאומי לבריאות הנפש (CDN).

א הזחל Assay זחילה 1. הזחלים אוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הבקבוק 8 ​​גרם של זבובים (10-15 + 10-15 זכרים ונקבות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הזבובים להטיל את הביצים למשך 24 שעות, אז ברור בקבוק של זבובים. (העברת המבוגרים לתוך בקבוק חדש וחזור לפי הצורך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בקבוק 3-4 ימים, או עד 3 זחלים instar גלויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50-100 מ&quot;ל של סוכרוז 20% על בקבוק עם הזחלים ולתת לשבת במשך 20 דקות. הזחלים יצוף למעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף הזחלים בעזרת פיפטה 25 מ&quot;ל סרולוגית עם קצה מנותק, מקום בסל רשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הזחלים בסל רשת פעמיים עם deionized H 2 O. הזחלים מוכנים כעת עבור הניסויים. </li></ol> 2. הזחלים לטיפול בתרופה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו במברשת כדי להעביר את המספר הרצוי של הזחלים כדי מבחנה 5 מ&quot;ל מכיל סוכרוז פתרון 5% + תרופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו להאכיל זחלים במשך לפחות 15 דקות.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים תחת טיפול תרופתי הזחלים לתוך סל רשת ולשטוף. עכשיו הם מוכנים לשימוש. </li></ol> 3. Assay של תנועה (מדידת המרחק הכולל נסע או קיר התכווצויות הגוף) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו במברשת כדי להעביר הזחל הפרט: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 ס&quot;מ צלחת פטרי שמכילה agarose 2% (שפכו קודם לכן מותר להקשות) על נייר מילימטרי עם רשת 0.2 ס&quot;מ 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת מספר קווי הרשת שחצו דקה 1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היטב בכלי זכוכית לנתיחה המכיל פתרון לדלל הדבק שמרים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת הצירים תנועה פריסטלטית (קדמית מלאה לתנועה האחורי = 1 התכווצות) בתוך דקה אחת תוך התבוננות במיקרוסקופ לנתיחה. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הפעולה עד המספרים הרצויים של הזחלים נספרו. </li></ol> ב ראפיד איטרטיבי geotaxis שליליות (טבעת) פרוטוקול Assay זה דה במקורscribed ידי Gargano ואח&#39; 5. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף שעלו לאחרונה זבובים זכרים בוגרים תחת הרדמה קלה CO 2 ומקום למזון המכיל בקבוקון רגיל (או מזון + תרופות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על זבובים בטמפרטורת החדר (על הספסל. ~ 22 מעלות צלזיוס) במשך 2-3 ימים, כדי לאפשר התאוששות של CO 2 (וצבירת היציב רמות התרופה במידת הצורך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת כ -25 זבובים ללא anesthetizing כדי צלוחיות קלקר מוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב צלוחיות עם זבובים לתוך המנגנון טבעת (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר זבובים להסתגל לסביבה, באין מפריע, למשך 15-20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך מצלמה דיגיטלית מקום הזמן ~ 1 מ &#39;מול המנגנון (על פלטפורמת אם יש צורך ליישר את מרכז העדשה בגובה אמצע של צלוחיות), להתמקד זום המצלמה על המנגנון, ולהגדיר טיימר ל 3.0 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לאחוז מכשיר טבעת עם יד שמאל כדי לא distUrb הזבובים, והכילו את השעון ביד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חד לנצל את המנגנון על פני הספסל שלוש פעמים, להבטיח כי ברז זה מספיק קשה כדי להפיל את כל הזבובים אל החלק התחתון של צלוחיות את. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בד בבד עם השלמת ברז 3, להפעיל את הטיימר 3 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלוש שניות לצלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפס את שעון העצר לדקה 1 ולהתחיל. במהלך תקופה זו לאפס את המצלמה ולהתמקד המנגנון, ולהגדיר ערוץ אחר של טיימר למשך שלוש שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי דקה 1, חזור על שלבים 1.7-1.10 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סכום כולל של 5-6 ניסויים, להעלות תמונות למחשב ולהשתמש הצופה תמונה האהוב עליך לפתוח, וציון ממוצע קומה טיפס על כל בקבוקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בביצוע ניתוחים סטטיסטיים על קבוצות שונות שלך המשווים את הגובה הממוצע טיפס. </li></ol> ג החיזור Assay הזדווגות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבר ראשון בבוקר, נקה היטב לייצור בקבוקי flies לשמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך היום (כל 3-4 שעות), לאסוף גברים תמימים מינית שעלו לאחרונה ונקבות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים גברים בנפרד צלוחיות או צינורות עם המדיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים 5-6 נקבות יחד לכל בקבוקון / צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את זבובים שנאספו על 25 מעלות צלזיוס מתחת לפנס שעה 12 / כהה במשך 5 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים 1 נקבה החדרה של גלגל החיזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת זכר אחד לתוך תא של גלגל החיזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו לב זוג תחת מיקרוסקופ לנתיחה על הפעולה הבאים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האוריינטציה (את מכוונת כלפי זכרים ונקבה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקשה (זכר ונקבה הברזים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השיר כנף (זכר מרחיב רוטט כנף אחת) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליקוק (מלקק את איבר המין הנשי גברים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרלינג (זכר תלתלים הבטן שלה תחת עצמה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניסיון הזדווגות (מתפתל פעילות בעת שניסה לעלות על הנקבה) </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו לב ל 10 דקות או עד להזדווגות מוצלחת, תוך ציון המועד שבו התנהגות זו מתרחשת (latency), את סך כל הזמן עוסקת בהתנהגות החיזור עד ההזדווגות (כדי לחשב את המדד חיזור), כמו גם את מספר הזוגות בהצלחה לבצע התנהגות מסוימת ( תדר). 100% של זוגות מסוג בר בדרך כלל להזדווג תוך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב ראשי חיזור (CI) על ידי חלוקת משך הזמן החיזור חלקי הזמן הכולל עד ההזדווגות. עבור זוגות מסוג בר זה בדרך כלל נע בין 0.6-0.8. </li></ol> ד נציג תוצאות זחילה assay סוג רגיל הזחל בר ינדדו ~ 3 ס&quot;מ לדקה, ולהציג ~~~HEAD=NNS 40-50 קיר הגוף התכווצויות בתוך דקה אחת. פיתחנו לאחרונה מודל תסיסנית של טרשת FUS / TLS הקשור לרוחב amyotrophic המציגה פגם זחילה הזחל, תוחלת החיים נמוכה ומבוגרים טיפוס ליקוי 6. אנו ממוקדים ביטוי OF סוג פראי צורות משתנות של FUS / TLS לתאי העצב המוטוריים (OK-371-gal4 הנהג) וביצע assay זחילה הזחל. כפי שנראה להלן, זחלים מסוג בר לזחול עד 12 ס&quot;מ, ואילו הביטוי של FUS סוג בר ירד היכולת לזחול הזחל של כ 6 ס&quot;מ. בעלי חיים המבטאים R521C מחא גורמי מוטציה FUS / TLS להוכיח פגיעה חמורה מאוד בתנועת זחילה שלהם (איור 1), זוחל רק על 1 ס&quot;מ לדקה. Geotaxis שלילית טבעת assay צעירים wild-type זבובים בוגרים צריך לטפס לגובה הממוצע של ~ 4-5 ס&quot;מ בתקופה 3-2 (הזמן יכול להיות מותאם מ 3 שניות כדי להתאים זנים שונים או רמת הפעילות להגדיר גובה הממוצע שניתן על נתון להתאמץ / טיפול). זבובים שנותרו בתחתית מוקצים הערך 0. לא מומלץ להשתמש ביותר מ -25 זבובים בכל בקבוקון כי זה הופך להיות קשה לקבוע את המיקום של זבוב בנפרד למדוד גובה. לא זמין<html> הפחתת רגישות o נצפתה במהירות של עד 6 משפטים רצופים במרווחים 1 דקה זה מזה, כי השתמשנו. זה קריטי, לא לעשות שימוש חוזר הבדיקה פוליסטירן בקבוקונים ב assay זה אחרי סטים הראשונים של הנתונים נאספים כי זבובים חדשים להציב לתוך צלוחיות בשימוש לא יטפס באותה מידה כמו צלוחיות טריים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig1.jpg" /> באיור 1. תוכנית ההתקנה של Assay הטבעת. המצלמה ממוקמת ~ 1 מ &#39;לפני מתקן המכיל זבובים של צלוחיות קלקר, להתמקד זום המצלמה על המנגנון, ולהגדיר טיימר ל -3.0 שניות. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig2.jpg" /> באיור 2. נתונים מייצגים של assay זחילה הזחל באמצעות זבובים ectopically להביע כטב&quot;מ FUS-WT, ו-כטב&quot;מ FUS R521C תחת שליטה של נהג רכב נוירון (OK371-gal4). class = &quot;jove_content&quot;&gt;

<ol><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li>
<li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Mar%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature Mar. 23 (6776), 394-398 (2000).</li>
<li>Auluck, P. K., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+prevention+of+Parkinson+disease+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila.</a> Nat. Med. 8 (11), 1185-1186 (2000).</li>
<li>Whitworth, A. J., Theodore, D. A., Greene, J. C., Benes, H., Wes, P. D., Pallanck, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glutathione+Stransferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Increased glutathione Stransferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Lanson, N. A., Maltare, A., King, H., Smith, R., Kim, J. H., Taylor, J. P., Lloyd, T. E., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+FUS-related+neurodegeneration+reveals+genetic+interaction+between+FUS+and+TDP-43%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of FUS-related neurodegeneration reveals genetic interaction between FUS and TDP-43.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (13), 2510-2523 (2011).</li>
<li>Batlevi, Y., Martin, D. N., Pandey, U. B., Simon, C. R., Powers, C. M., Taylor, J. P., Baehrecke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynein+light+chain+1+is+required+for+autophagy%2C+protein+clearance%2C+and+cell+death+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dynein light chain 1 is required for autophagy, protein clearance, and cell death in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (2), 742-747 (2010).</li>
<li>Sang, T. K., Chang, H. Y., Lawless, G. M., Ratnaparkhi, A., Mee, L., Ackerson, L. C., Maidment, N. T., Krantz, D. E., Jackson, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+mutant+human+parkin-induced+toxicity+demonstrates+selective+loss+of+dopaminergic+neurons+and+dependence+on+cellular+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of mutant human parkin-induced toxicity demonstrates selective loss of dopaminergic neurons and dependence on cellular dopamine.</a> J. Neurosci. 27 (5), 981-992 (2007).</li>
<li>Stacey, S. M., Muraro, N. I., Peco, E., Labbé, A., Thomas, G. B., Baines, R. A., van Meyel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+glial+glutamate+transporter+Eaat1+is+regulated+by+fringe-mediated+notch+signaling+and+is+essential+for+larval+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila glial glutamate transporter Eaat1 is regulated by fringe-mediated notch signaling and is essential for larval locomotion.</a> J. Neurosci. 30 (43), 14446-14457 (2010).</li>
<li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li>
<li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li>
<li>Nedelsky, N. B., Pennuto, M., Smith, R. B., Palazzolo, I., Moore, J., Nie, Z., Neale, G., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+functions+of+the+androgen+receptor+are+essential+to+pathogenesis+in+a+Drosophila+model+of+spinobulbar+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Native functions of the androgen receptor are essential to pathogenesis in a Drosophila model of spinobulbar muscular atrophy.</a> Neuron. 67 (6), 936-952 (2010).</li>
<li>Lorenzo, D. N., Li, M. G., Mische, S. E., Armbrust, K. R., Ranum, L. P., Hays, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 189 (1), 143-158 (2010).</li>
<li>Wang, J. W., Brent, J. R., Tomlinson, A., Shneider, N. A., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ALS-associated+proteins+FUS+and+TDP-43+function+together+to+affect+Drosophila+locomotion+and+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The ALS-associated proteins FUS and TDP-43 function together to affect Drosophila locomotion and life span.</a> J. Clin. Invest. , (2011).</li>
<li>Choi, J. K., Jeon, Y. C., Lee, D. W., Oh, J. M., Lee, H. P., Jeong, B. H., Carp, R. I., Koh, Y. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+GSS+syndrome+suggests+defects+in+active+zones+are+responsible+for+pathogenesis+of+GSS+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of GSS syndrome suggests defects in active zones are responsible for pathogenesis of GSS syndrome.</a> Hum. Mol. Genet. 19 (22), 4474-4489 (2010).</li>
<li>Ruan, H., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+interaction-mediated+lifespan+extension+of+Drosophila+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Social interaction-mediated lifespan extension of Drosophila Cu/Zn superoxide dismutase mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (21), (2008).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
<li>Becnel, J., Johnson, O., Luo, J., Nässel, D. R., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+serotonin+5-HT7+Dro+receptor+is+expressed+in+the+brain+of+Drosophila%2C+and+is+essential+for+normal+courtship+and+mating%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The serotonin 5-HT7 Dro receptor is expressed in the brain of Drosophila, and is essential for normal courtship and mating.</a> PLoS One. 6 (6), e20800(2011).</li>
<li>Johnson, O., Becnel, J., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+5-HT%282%29+and+5-HT%281A%29-like+receptors+differentially+modulate+aggressive+behaviors+in+Drosophila+melanoga-+ster%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Serotonin 5-HT(2) and 5-HT(1A)-like receptors differentially modulate aggressive behaviors in Drosophila melanoga- ster.</a> Neuroscience. 158 (2), 1292-1300 (2009).</li>
<li>Bastock, M., Manning, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Courtship+of+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">The Courtship of Drosophila Melanogaster.</a> Behaviour. , 85-111 (1955).</li>
<li>Greenspan, R. J., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Courtship in Drosophila.</a> Annu. Rev. Genet. 34, 205-232 (2000).</li>
<li>Villella, A., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenetics+of+courtship+and+mating+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurogenetics of courtship and mating in Drosophila.</a> Adv. Genet. 62, 67-184 (2008).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

התנהגות תסיסנית מוסדר היטב על ידי גורמים גנטיים וסביבתיים. אנחנו, ואחרים, השתמשו בעבר את מבחני המתוארים כאן כדי לאסוף נתונים כדי לבחון גנים הקשורים לטוס התנהגויות למחלות ניווניות אנושיות המודל ב תסיסנית 5-19. עבור assay זחילה, בחירה זהירה של הזחלים 3 instar השלישי הוא שלב קריטי. אם בטיפול בתרופה, זה ייקח 10-15 דקות (או יותר בהתאם לסוג ואופי התרופה) כדי להשיג אפקט מקסימלי אם יש לו מסיסות טובה. לכן, אנו שגרתי להאכיל טס את התרופה במשך 15 דקות ו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> S5-500 </td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> 6 גר &#39;בקבוק תסיסנית </td><td> Genesee מדעי </td><td> 32-130 </td></tr><tr><td> מברשת צבע (# 1) </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 11859 </td></tr><tr><td> טוס מרכיבי מזון </td><td></td><td></td></tr><tr><td> קמח תירס </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> NC9109741 </td></tr><tr><td> אגר </td><td> Genesee מדעי </td><td> 66-104 </td></tr><tr><td> דבשה </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> NC9349176 </td></tr><tr><td> Propionic חומצה </td><td> Acros </td><td> 14930-0010 </td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> שיא </td><td> 20-258 </td></tr><tr><td> אתנול </td><td> דיגמדעי </td><td> BP2818-4 </td></tr><tr><td> שמרים </td><td> Genesee מדעי </td><td> 62-107 </td></tr></tbody></table>

שיטות assay תסיסנית התנהגות

Methods to Assay Drosophila Behavior

תסיסנית melanogaster, זבוב פירות, נעשה שימוש כדי לחקור מנגנונים מולקולריים של מגוון רחב של מחלות כגון סרטן, מחלות לב וכלי דם ומחלות נוירולוגיות שונות 1. יש לנו אופטימיזציה מבחני התנהגות פשוטים ויציב לקביעת תנועה הזחל, יכולת טיפוס מבוגר (assay RING), והתנהגויות החיזור של דרוזופילה. אלה מבחני התנהגות חלים נרחב בחקר התפקיד של גורמים גנטיים וסביבתיים על התנהגות זבוב. יכולת זחילה הזחל ניתן להשתמש באופן אמין לקביעת שינויים בשלבים מוקדמים של יכולות סריקה של הזחלים תסיסנית וגם לבחינת השפעת סמים או גנים מחלות אנושיות (ב זבובים מהונדס) על תנועה שלהם. Assay זחילה הזחל הופך רלוונטי יותר אם ביטוי או ביטול של הגן גורמת הקטלניות בשלבים גלמי או מבוגר, כמו זבובים אלו אינם שורדים לבגרות שם אחרת ניתן היה להעריך. זה בסיסיssay יכול לשמש גם בשילוב עם אור בהיר מתח או לבדוק תגובות התנהגותיות נוספות הזחלים תסיסנית. התנהגות החיזור נעשה שימוש נרחב לחקור הבסיס הגנטי של ההתנהגות המינית, והוא יכול לשמש גם כדי לבחון את פעילות ותיאום, כמו גם למידה וזיכרון. התנהגות תסיסנית החיזור כרוך בהחלפה של גירויים חושיים שונים, כולל חזותית, שמיעתית, אותות chemosensory בין זכרים ונקבות להוביל סדרה מורכבת של התנהגויות מוטוריות מאופיין היטב ושיאה הזדווגות מוצלחת. מבחני הבוגרים המסורתית טיפוס (geotaxis שליליים) הם עבודה מייגעת, אינטנסיבית, זמן רב, עם וריאציה משמעותי בין ניסויים שונים 2-4. מהיר איטרטיבי geotaxis שליליות (טבעת) assay 5 יש יתרונות רבים על פני פרוטוקולים בשימוש זמן רב יותר, מתן גישה התפוקה לשחזור, רגיש, גבוה לכמת של תנועה מבוגרים שלילית geotaxis בehaviors. ב assay הטבעת, גנוטיפים שונים או טיפולים תרופתיים, ניתן לבדוק בו זמנית באמצעות מספר רב של בעלי חיים, עם גישה תפוקה גבוהה מה שהופך אותו נוח יותר עבור ניסויים ההקרנה.

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

*Drosophila melanogaster*, זבוב הפירות, שימש למחקר של מנגנונים מולקולריים של מגוון רחב של מחלות אנושיות כגון סרטן, מחלות קרדיווסקולריות...

המטרה הכללית של הליך זה היא להדגים שיטות לבחינת התנהגויות תחושתיות, מוטוריות ושל קואורדינציה ב-drosophila. זאת מושג על ידי הערכה ראשונית של התפקוד המוטורי של הזחלים באמצעות מבחן זחילה, הערכה של התפקוד המוטורי של הבוגרים באמצעות מבחן הטבעת, והערכה של יכולות התחושה והקואורדינציה של הבוגרים באמצעות מבחן חיזור. בסופו של דבר, פאנל זה של מבחנים התנהגותיים יכול להראות כיצד גורמים גנטיים וגורמים חיצוניים, כגון טיפולים תרופתיים, יכולים להשפיע על הפעילות והקואורדינציה.בתוך הסופלה. היתרון העיקרי של בדיקה זו על פני שיטות קיימות כמו negative geo axis, הוא שבבדיקת הטבעת (ring assay) התפוקה גבוהה יותר והיא רגישה יותר. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום המחלות הנוירודגנרטיביות, כגון זיהוי בשלב מוקדם של פגמים במוטוריקה.ד"ר ג'יימי בקנל (Jamie Becknell), פוסט-דוקטורנט במעבדתי, תדגים בדיקה זו. בדיקת זחילה של זחלים משמשת למדידת ההשפעה של גורמים גנטיים וסביבתיים על הניידות. כדי להתחיל, יש להכין הכלאה של 10 עד 15 זכרים ו-10 עד 15 נקבות בתולות בבקבוק סטנדרטי. לאחר 24 שעות, בוגרים בריאים יטילו מספיק ביצים כדי לאכלס את הבקבוק, כך שהאוכלוסייה תהיה בעלת גיל תואם של 24 שעות.העבירו את הבוגרים לבקבוק נקי וחזרו על התהליך. כעת, דגרו את הבקבוק עד שיופיעו בתוך המצע המזין בבקבוק זחלים בשלב ה-third instar. הוסיפו 50 עד 100 milliliters של סוכרוז 20% והמתינו 20 דקות.הזחלים יצופו למעלה; אספו את הזחלים באמצעות פיפט סרולוגית של 25 milliliter שקצהה נגזז והניחו אותם בסלסילת רשת. שטפו את הזחלים שבסלסילת הרשת פעמיים במים דאיוניים. כעת ניתן לבצע עליהם את הניסוי.כדי לטפל בזחלים באמצעות תרופה, השתמשו במברשת כדי להעביר את מספר הזחלים הרצוי לכלי כימי של 5 milliliters המכיל תמיסה של 5% sucrose ואת התרופה הנבדקת. אפשרו להם להזין מהתמיסה הסוכרית עם התרופה במשך 15 דקות, לאחר מכן שפכו אותם חזרה דרך סל הסנן, שטפו אותם, והמשיכו במדידת השפעת התרופה על הניידות. השתמשו במברשת כדי להעביר זחל בודד לצלחת פטרי של 15 centimeter המכילה 2% agarose.הניחו מעל דף נייר גרף. כעת אספו את הנתונים. פשוט ספרו את מספר קווי הרשת שהלבה חוצה בדקה אחת.בשלב הבא, השתמש במברשת כדי להעביר את הלרווה לבאר של צלחת ניתוח מזכוכית המכילה תמיסת משחת שמרים מדוללת תחת מיקרוסקופ ניתוח; לאורך פרק זמן של דקה אחת, ספור את התכווצויות ה-Percy. התכווצות בודדת נספרת כתנועה מלאה מהחלק האחורי אל החלק הקדמי. חזור על הפעולה עד לספירת מספר הלרובות הרצוי.פרוטוקול הטבעת מודד את מהירות התנועה של בעלי חיים בוגרים. אספו זבובים זכרים בוגרים שזה עתה בקעו תחת הרדמה קלה והעבירו אותם לבקבוקון סטנדרטי המכיל מזון רגיל או מזון עם תרופה. הניחו כ-25 זבובים בכל בקבוקון. החזיקו את הזבובים בטמפרטורת החדר למשך יומיים עד שלושה ימים לצורך התאוששות מלאה מההרדמה והגעה לרמות תמידיות של התרופה.לאחר מכן, העבירו כ-25 זבובים ללא הרדמה למבחנות פוליסטירן עם פקקים מעוצבים, והרכיבו את המבחנות במכשיר טבעת אחד או יותר. אפשרו לזבובים לנוח במשך 15 עד 20 דקות, ובזמן זה כווננו מצלמה דיגיטלית לצילום המבחנות ממבט צדי; הכינו טיימר והגדירו אותו למשך הזמן הרצוי עבור הבדיקה. בדרך כלל נדרשות שלוש שניות לביצוע הבדיקה.החזיקו את מכשיר הטבעת ביד אחת מבלי להפריע לזבובים, והחזיקו את טיימר המצלמה ביד השנייה בצורה מוכנה. הקישו את המכשיר על ספסון המעבדה שלוש פעמים כדי להפיל את הזבובים, ובמקביל הפעילו את טיימר הספירה לאחור של המצלמה. חזרו על הניסוי פעם לדקה עד לביצוע חמישה או שישה ניסיונות.קריטי שלא להשתמש שוב בבקבוקוני הבדיקה העשויים פוליסטירן לאחר איסוף סדרות הנתונים הראשוניות. זאת מכיוון שזבובים חדשים שיונחו בבקבוקונים משומשים לא יטפסו באותה מידה כזבובים שיונחו בבקבוקונים טריים. כדי לאסוף את הנתונים באמצעות תוכנה לצפייה בתמונות, יש לדרג את הגובה הממוצע של הטיפוס עבור הקבוצות השונות.בדיקה זו דורשת הכנת הכלאות גנטיות בבקבוקים המפיקים צאצאים בשפע, על מנת לאסוף זבובים לצורך הבדיקה. בתוך מספר שעות מהשחר הסובייקטיבי של בעלי החיים, רוקנו את הבקבוקים כדי לאסוף את כל הבוגרים במרווחי זמן של שלוש עד ארבע שעות. אספו זכרים ונקבות שזה עתה בקעו וטרם נחשפו מינית; שכן את הזכרים באופן פרטני במבחנות עם מזון, ואת הנקבות בקבוצות של חמש עד שש.בכלובים דומים, נדרש מספר שווה של זכרים ונקבות לצורך הבדיקה. לאחר בידוד הזבובים שנאספו למשך חמישה ימים, הכינו אותם להעברה לגלגל הזיווג ובצעו את הבדיקה. לאחר מכן, העבירו בזהירות נקבה אחת וזכר אחד לתא של גלגל הזיווג תחת מיקרוסקופ דיסקציה.הצפו בזוג במשך 10 דקות או עד להשגת זיווג מוצלח במהלך זמן זה. רשמו מתי נצפתה לראשונה כל אחת ממספר התנהגויות. רשמו מתי הזכר פנה לראשונה לעבר הנקבה.כאשר הזכר נוגע לראשונה בנקבה עם רגלו, רשמו זאת; כאשר הזכר פורש ומרעיד כנף לראשונה, רשמו זאת; כאשר הזכר לוקק לראשונה את איברי המין של הנקבה, רשמו זאת; כאשר הזכר מקמט לראשונה את בטנו מתחת לגופו, רשמו זאת. רשמו כאשר הזכר מנסה לראשונה להזדווג עם הנקבה. לבסוף, רשמו את סך הזמן שהוקדש להתנהגות חיזור עד להתרחשות ההזדווגות.עבור בעלי חיים מסוג בר, הדבר קורה כמעט תמיד בתוך חמש עד 10 דקות; יש לאסוף נתונים לפי שלושה פרמטרים שונים. ראשית, השהייה (latency) להופעת התנהגות היא הזמן שחולף עד שהיא נצפית לראשונה. שנית, התדירות של התנהגות היא האם היא נצפתה או לא.ושלישית, מדד החיזור הוא הזמן שהושקע בחיזור חלקי הזמן הכולל עד לזיווג בניסוי עם בעלי חיים. מוטציות ב-F-U-S-T-L-S קשורות לטרשת נרנית שרירית. מוטנטים של הגן עם הכנסה במרכז הראו מחצית מיכולת הזחילה של בישControls מסוג בר (wild type) משמאל, ומוטציית missense מסוג R 5 21 C הפחיתה את מהירות הזחילה לכ-1 cm/min בלבד.בדיקת טבעת של זבובים בוגרים צעירים מסוג בר (wild type) הניבה גובה ממוצע של טיפוס שבין שלושה לחמישה סנטימטרים בפרק זמן של שלוש שניות. במבחן זה, לא נצפתה דסנסיטיזציה (הפסקת רגישות) גם לאחר עד חמישה ניסיונות רצופים במרווחים של דקה אחת ביניהם במהלך ביצוע מבחן הטבעת. חשוב לזכור להיות מדויקים ככל האפשר בכל הנוגע לתזמון.ברגע שהשיטה נשלטת, ניתן לבצע את ניסוי הצפיפות של ה larvae תוך 30 עד 40 דקות לצפייה ב-10 ניסיונות עבור גנוטיפ אחד, אם הוא מבוצע כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו גם הבנה טובה של האופן שבו יש לצפות ולמדוד התנהגויות חיזור בזבוב.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מבחני התנהגות למדידת פונקציות של תנועה, למידה, ויכולות...

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

תוקפנות היא התנהגות מולדת וניסיון לחימה קודם משפיע על אסטרטגיית הלחימה ועל התוצאה של תחרויות מאוחרות יותר בזבובים. סרטון זה מתאר בדיקה ששימשה לחקר התנהגותה התוקפנית של דרוזופילה. הפרוטוקול לדוגמה כולל את הבדיקה המבוצעת במערך שמבטל את הטיפול בזבובים ולכן מפחית את הלחץ עבור בעלי החיים, מה שאחרת היה משפיע על ביצועי הנבדקים.

דרוזופילה בדיקת תוקפנות: שיטה לבדיקת פלסטיות התנהגותית בזבובים

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

כאן אנו מתארים שיטה למדידה מהירה ומדויקת של ביצועי טיסה בדרוזופילה, המאפשרים תפוקה גבוהה הקרנה.

שיטה משופרת למדידה מדויקת והמהירה של טיסה בביצועים<em&gt; דרוזופילה</em

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

על מנת לזהות מוטציות חדשות המשפיעות על תחושה מכנית, תכננו בדיקה המודדת את התגובה ההתנהגותית לגירוי מישוש של זיפי זבובים בשיבוטים מוטנטיים שנוצרו בשיטת MARCM. שילוב הטכניקות מאפשר לזהות מוטציות רגישות למכניקה שאחרת היו קטלניות.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

אנו מתארים כאן הגדרה התנהגותית ושיטת ניתוח נתונים לבדיקת תגובות הריח של עד 100 זבובי חומץ (Drosophila melanogaster). ניתן להשתמש במערכת זו עם גירוי ריח יחיד או מרובה, וניתנת להתאמה להפעלה אופטוגנטית או להשתקה של תת-קבוצות עצביות.

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

הפרוטוקול הנוכחי מעריך את הפעילות המוטורית של דרוזופילה על ידי מעקב וניתוח תנועת הזבובים בזירה בעבודת יד באמצעות תוכנת קוד פתוח פיג'י, התואמת לתוספים לפלח פיקסלים של כל פריים בהתבסס על הקלטת וידאו בחדות גבוהה כדי לחשב פרמטרים של מהירות, מרחק וכו '.

טכניקה פשוטה להערכת פעילות לוקומוטורית בדרוזופילה

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) קשורה להתנהגות חברתית ותקשורתית לקויה ולהופעתה של התנהגות חזרתית. לצורך חקר הקשר בין גנים אוטסיים וליקויים התנהגותיים במודל דרוזופילה , מתוארות במאמר זה חמש פרדיגמות התנהגותיות להערכת ריווח חברתי, תוקפנות, חיזור, טיפוח והתנהגות הרגלה.

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

הפרוטוקול מציג שיטה בעלת תפוקה גבוהה וחסכונית להערכת רעילות עצבית בזבוב הפירות באמצעות כימות תפקוד לקומוטורי כחלופה למודלים מסורתיים של יונקים. מטרתו להעריך את ההשפעות הנוירוטוקסיות של תרכובות פרמצבטיות, גורמים סביבתיים או שינויים גנטיים באמצעות מודל רגיש, ניתן לשחזור וחיובי מבחינה אתית.

ניתוח התנהגותי של תפקוד לקומוטורי ב-Drosophila melanogaster כקריאה לרעילות עצבית

פרוטוקול זה מספק מסגרת להערכת שינויים התנהגותיים הנגרמים מלחץ ב-Drosophila melanogaster. שילוב בדיקות משלימות מאפשר כימות של פעילות, חקר וקבלת החלטות עבור זבובים בודדים. הגישה גמישה וניתנת להתאמה למגוון רחב של מחקרים החוקרים ביולוגיה של לחץ, חילוף חומרים ותפקוד נוירו-התנהגותי.

פנוטיפ התנהגותי רב-מודלי של מצבים דמויי דיכאון הנגרם מלחץ בדרוזופילה מלנגסטר

למדו שיטות להערכת התנהגויות מוטוריות וחישתיות ב-Drosophila melanogaster באמצעות מבחני crawling, ring ו-courtship. שיטות אלו מאפשרות זיהוי מוקדם של ליקויי תנועה וחקר מחלות נוירודגנרטיביות.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

גלה סרטונים נוספים