Name: קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת Moxi מיני מונה אוטומטי Cell (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: למדו ספירת תאים וניתוח בריאות תרביות יונקים באמצעות Moxi Z, מונה תאים אוטומטי מיניאטורי. השיטה מספקת תוצאות מדויקות ביותר מ-95% תוך שמונה שניות בלבד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Fernyhough, M. E., Helterline, D. L., Vierck, J. L., Hill, R. A., Dodson, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coulter+counter+use+in+the+enumeration+of+muscle+and+fat+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Coulter counter use in the enumeration of muscle and fat stem cells.</a> Methods. Cell. Sci. 25, 221-225 (2003).</li>
<li>Blades, A. N., Flavell, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+use+of+the+Coulter+model+D+electronic+cell+counter+in+clinical+haematology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Observations on the use of the Coulter model D electronic cell counter in clinical haematology.</a> J. Clin. Pathol. 16, 158-163 (1963).</li>
<li>Morris, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+Size+Analysis+of+Beer+Solids+using+a+Coulter+Counter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inst.+Brew%22%5BJournal%5D)">Particle Size Analysis of Beer Solids using a Coulter Counter.</a> J. Inst. Brew. 90, 162-166 (1984).</li>
<li>Marth, E. H. Electronic Somatic Cell Counting Procedure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarth%2C+EH+%22Standard+Methods+for+the+Examination+of+Dairy+Products%22">Standard Methods for the Examination of Dairy Products</a>. , Amer. Publ. Health Assoc., Inc. 134-140 (1978).</li>
<li>Parks, L. R., Jurbergs, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Number+and+size+distribution+of+particles+in+cellulosic+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Polym.+Sci%22%5BJournal%5D)">Number and size distribution of particles in cellulosic solutions.</a> J. Appl. Polym. Sci. 11, 193-199 (1960).</li>
<li>Davis, R. E., Green, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+platelet+counting+with+the+Couler+particle+counter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Automatic platelet counting with the Couler particle counter.</a> J. Clin. Pathol. 20, 777-779 (1967).</li>
<li>Dittami, G. D., Rabbitt, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrically+evoking+and+electrochemically+resolving+quantal+release+on+a+microchip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Electrically evoking and electrochemically resolving quantal release on a microchip.</a> Lab on a Chip. 10, 30-35 (2010).</li>
<li>Nahreini, P., Hanson, A., Prasad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-yield+production+of+recombinant+antibody+fragments+in+HEK-293+cells+using+sodium+butyrate%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechiques%22%5BJournal%5D)">High-yield production of recombinant antibody fragments in HEK-293 cells using sodium butyrate.</a> BioTechiques. 34, 968-972 (2003).</li>
<li>Escuyer, V., Collier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthrax+Protective+Antigen+Interacts+with+a+Specific+Receptor+on+the+surface+of+CHO-K1+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Anthrax Protective Antigen Interacts with a Specific Receptor on the surface of CHO-K1 Cells.</a> Infection and Immunity. 59, 3381-3386 (1991).</li>
<li>Isaacs, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borrelia+bugdorferi+bind+to+epithelial+cell+proteoglycans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Borrelia bugdorferi bind to epithelial cell proteoglycans.</a> J. Clin. Invest. 93, 809-819 (1994).</li>
<li>Saito, Y., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+selenoprotein+P+as+a+selenium+supply+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Characterization of selenoprotein P as a selenium supply protein.</a> Eur. J. Biochem. 269, 5746-5751 (2002).</li>
<li>Kataoka, S., Tsuruo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physician+Education%3A+Apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Physician Education: Apoptosis.</a> Oncologist. 1, 399-401 (1996).</li>
<li>Liegler, T. J., Hyun, W., Yen, T. S., Stites, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantification+of+live%2C+apoptotic%2C+and+necrotic+human+peripheral+lymphocytes+by+single-laser+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Diagn.+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantification of live, apoptotic, and necrotic human peripheral lymphocytes by single-laser flow cytometry.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 2, 369-376 (1995).</li>
<li>Sheridan, J. W., Bishop, C. J., Simmons, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+and+morphological+correlates+of+kinetic+change+and+death+in+a+starved+human+melanoma+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Biophysical and morphological correlates of kinetic change and death in a starved human melanoma cell line.</a> J. Cell. Sci. 49, 119-137 (1981).</li>
<li>Dittami, G. M., Rabbitt, R. D., Ayliffe, H. E. ORFLO Moxi Z: Revolutionizing electronic cell count accuracy and cell viability estimates through curve fitting. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDittami%2C+GM+%22Life+Science+Magazine%2C+VWR+International%22">Life Science Magazine, VWR International</a>. , Forthcoming (2011).</li>
</ol>

גרגורי מ Dittami ו HE Ayliffe הם עובדי Orflo טכנולוגיות, החברה נועד, מייצרת ומשווקת צ&#39;Moxi ריצ&#39;רד ד Rabbitt מספק חלקית, התמחות בייעוץ ששולם Orflo טכנולוגיות. הפקה וגישה חופשית למאמר זה ממומן על ידי Orflo טכנולוגיות.

יישום הגישה הבסיסית קולטר יכול להיות דטרמיניסטי מאוד הדיוק הכולל של המדידות. אזור קריטי הוא תיקון של ספירת תאים גלם &quot;אירועים צירוף מקרים&quot; שבהם שני תאים או יותר בו זמנית שעוברים דרך פתח, והם נמדדים כאירוע חשמל אחת. &quot;אירועים צירוף מקרים&quot; לתרום שגיאה אשר משתנה בהתאם למספר גורמים, ביניהם גודל התא ומידת אשכולות (Davis et al 1967) 6. כתוצאה מכך, תיקון במקרה הנדרש למדגם נתון לא ניתן לחזות, משתנה באופן נרחב בין התא / סוגי החלקיקים וגם בין תרבויות שונות של סוגי תאים זהים. הוקמה התיאוריה, נעוצה בפרסומים הראשונים של קולטר, כולל החלת התאמה לוגריתמי של ספירת גלם המבוססים על מספר האירועים שנצפו ו אמפירי שנקבע, חלקיק מסוים גורם התיקון, z. בעוד ספירת מדויקים ניתן להשיג כראוי עם לאאלגוריתם תיקון שלו, זה מוגבל תחולת המעשי בשל שוני גדול בין מספר ערכים זי בין סוגי תאים ועל הקושי המקביל לנבא בדייקנות את הערך שלו. כאן, באמצעות ספירת &quot;נכון&quot; תא מזוהה על ידי מתאים Moxi עקומת Z יחד עם אלגוריתם תיקון צירוף מקרים, Z Moxi דינמי מתקנת עבור מקרה כדי להשיג את הריכוזים האמיתיים. בהשוואה לתוצאות שהושגו באמצעות high-end קולטר Z2, המיוצר Z Moxi סעיפים דומים על פני טווח הריכוז של 0 - 500,000 תאים למ&quot;ל (קלטת סוג M) ו 3000 - 2-2.5e 6 תאים למ&quot;ל (קלטת S Type) . יתר על כן, Z Moxi משיגה דיוק ספירת עם מקדם נמוך דומה של שונות בספירת ו דיוק לשינוי גודל החלקיקים האופייני תקן זהב, קולטר, טכניקה ספירת תאים. יתר על כן, הנתונים שהוצגו כאן מצביעים על כך Z Moxi יכול לספק מידע רב ערךלגבי הבריאות הכללית של תרביות תאים. Z Moxi ממנף את הגישה העקומה הולמת עם אלגוריתם תוכנה קניינית כדי לקבוע הערכה בריאות ותרבות. שינויים מורפולוגיים הקשורות מוות של תאים, כגון blebbing, מתפרקת, ועיוותים נפחי (Kataoka ו Tsuruo 1996, Liegler et al 1995, Sheridan et al 1981) 12-14, מאפשרים Moxi-Z כדי להבחין בהבדלים בין impedimetric חיים אוכלוסיות תאים מתים / פסולת האוכלוסיות. MVI מופק על ידי ניתוח התפלגות תרבות / החלקיקים בגודל לזהות את התרומה היחסית של פסולת החלקיקים, תאים נמקי מכווץ, ואת עקומת-מצויד האוכלוסייה התא של עניין. ערך MVI ובכך משקף המדד האוכלוסייה או מידה ratiometric של ספירת אוכלוסין monodisperse ביחס לפרופיל החלקיקים הכולל האוכלוסייה. ערך זה הוא אז אלגוריתמית עונתיות נתוני האוכלוסייה המבוססים על תצפיות אמפיריות. Becausדואר MVI מסתכל פרמטרים אחרים מאשר גישות צביעה מסורתיות, זה לא צפוי לשקף את הטכניקות הללו אלא מספק תצוגה חלופית חשובה לבריאותם של התרבות תאים, במיוחד ביחס פסולת ומזהמים חיידקים. לסיכום, נגד Moxi-Z התא היא מכשיר אולטרה benchtop קטן המספק מדויקים, מבחני לשחזור של ספירת תאים, גודל התא, בריאות התא באמצעות העיקרון קולטר עקומת-הולם האלגוריתמים בשילוב עם טכנולוגיית סרט דק פטנט חיישן . עם קלטת M סוג הוא מסוגל לספור חלקיקים הנעים בין 4 - 25 מיקרון בקוטר (טווח דינמי של 2 - 34 מיקרון), ב -8 שניות. עם קלטת S Type היא מסוגלת לספור חלקיקים הנעים בין 3 - 20 מיקרון בקוטר (טווח דינמי של 2 - 26 מיקרון), תוך 15 שניות. יתר על כן, Moxi-Z מבצעת הערכות בריאות ללא שימוש של חומרים כימיים. זה Inte העבודה הרבה פחותnsive וסובייקטיבי יותר לספור ידנית. לעומת ספירת קולטר רגיל, Moxi הוא מהיר יותר, משמעותית יותר, מספק מידע נוסף, דורש תחזוקה הרבה פחות, קל יותר לשימוש, ומהווה חלק קטן מהעלות.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> ORFLO diluent </td><td> ORFLO </td><td> MXA006 </td><td></td></tr><tr><td> קלטת Dispenser </td><td> ORFLO </td><td></td><td> חנויות עד 25 קלטות של מחלק נוח </td></tr><tr><td> כבל USB </td><td> ORFLO </td><td></td><td> המכשיר מתחבר למחשב / Mac או מתאם מתח </td></tr><tr><td> מתאם מתח (ארה&quot;ב והאיחוד האירופי דגמים בלבד) </td><td> ORFLO </td><td></td><td> מתחבר כבל ה-USB לשקע ה-AC </td></tr><tr><td> USB Flash Drive </td><td> ORFLO </td><td></td><td> חנויות Moxאני Z תוכנה הוראות שימוש </td></tr><tr><td> בדוק כיול חרוזים </td><td> ORFLO </td><td></td><td></td></tr><tr><td> כיול אלקטרוני קלטת </td><td> ORFLO </td><td></td><td> קלטת אלקטרונית לאימות פעולת המערכת כיול נכונה </td></tr></tbody></table>

קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת moxi מיני מונה אוטומטי cell

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

ספירת חלקיקים ותאים משמשת למגוון יישומים, כולל תרביות תאים שגרתיות, אנליזה המטולוגית ובקרות תעשייתיות1-5. פריצת דרך קריטית בטכנולוגיות לספירת תאים/חלקיקים הייתה פיתוחה של שיטת קולטר (Coulter technique) על ידי וולס קולטר לפני למעלה מ-50 שנה. הטכניקה כוללת הפעלת שדה חשמלי על פני מפתח במימדי מיקרון ומיקוד הידרודינמי של חלקיקים בודדים דרך המפתח. חסימת המפתח על ידי החלקיקים גורמת לשינוי מדיד בעכבה החשמלית, שניתן להקרין אותו באופן ישיר ומדויק לגודל או לנפח התא. ההכרה בגישה זו כבנצמרק לספירת תאים/חלקיקים נובעת מהדיוק והרגישות יוצאי הדופן של מדידת גודל החלקיקים וספירתם, במיוחד בהשוואה לטכנולוגיות ידניות או מבוססות דימוי (דיוקים בסדר גודל של 98% עבור מוני קולטר לעומת 75-80% עבור מערכות ידניות ומבוססות ראייה). ניתן לייחס זאת לכך שבניגוד לגישות לספירת תאים המבוססות על דימוי, שיטת קולטר מבצעת מדידה תלת-ממדית (3-D) אמיתית של תאים/חלקיקים, מה שמפחית באופן דרמטי הפרעות בספירה הנגרמות משאריות (debris) ומצברים, וזאת באמצעות חישוב מידע נפחי מדויק על התאים/חלקיקים. באופן כללי, הדבר מספק אמצעי למנייה ומדידת גודל של תאים באופן מדויק יותר, פחות שוחק, פחות גוזל זמן ופחות סובייקטיבי מאשר טכניקות ספירה אחרות6.
למרות בולטותה של שיטת Coulter בספירת תאים, השימוש הנרחב בה במחקרים ביולוגיים שגרתיים היה מוגבל בשל העלות והגודל של המכשירים המסורתיים. למרות שיוצר מכשיר המבוסס על שיטת Coulter במחיר נמוך יותר, קיימות לו מגבלות בהשוואה למקביליו היקרים יותר בכל הנוגע לתיקון של "אירועי התלכדות" (coincidence events), שבהם שני תאים או יותר עוברים דרך הפתח ונמדדים בו-זמנית. מגבלה נוספת בטכנולוגיות Coulter קיימות היא המחסור במדדים לבריאות הכללית של דגימות התאים. כתוצאה מכך, לעיתים קרובות יש להשתמש בטכניקות נוספות בשילוב עם ספירת Coulter כדי להעריך את חיוניות התאים. דבר זה מאריך את זמן ההכנה של הניסוי ומגדיל את העלות, שכן השיטות המסורתיות להערכת חיוניות דורשות צביעת תאים ו/או שימוש בציוד יקר ומסורבל, כגון ציטומטר זרימה.
סופר התאים האוטומטי הזעיר Moxi Z, המתואר כאן, הוא מכשיר שולחני קומפקטי ביותר המשלב את הדיוק של עקרון קולטר (Coulter Principle) עם טכנולוגיית חיישן שכבה-דקה כדי לאפשר מדידת גודל וספירה מדויקת של חלקיקים בטווח של 3-25 מיקרון, בהתאם לקסטת ספירת התאים שבה נעשה שימוש. ניתן להשתמש בקסטה מסוג M לספירת חלקיקים עם קטרים ממוצעים של 4 - 25 מיקרון (טווח דינמי של 2 - 34 מיקרון), ובקסטה מסוג S ניתן להשתמש לספירת חלקיקים עם קוטר ממוצע של 3 - 20 מיקרון (טווח דינמי של 2 - 26 מיקרון). כיוון שהמערכת משתמשת בשיטת מדידה נפחית, הטווח של 4-25 מיקרון תואם לטווח נפח תאים של 34 - 8,180 fL והטווח של 3 - 20 מיקרון תואם לטווח נפח תאים של 14 - 4200 fL, נתון הרלוונטי כאשר נמדדים חלקיקים שאינם כדוריים. לביצוע ספירת תאי יונקים באמצעות ה-Moxi Z, התאים לספירה מדוללים תחילה עם ORFLO או מדלל דומה. קסטת ספירת תאים מוכנסת למכשיר, והדגימה נטענת לתוך פתח הקסטה. אלפי תאים נמשכים בטור אחד דרך "אזור חישוש תאים" (CSZ) בממברנת השכבה-הדקה לאורך 8-15 שניות. לאחר ההרצה, המכשיר משתמש בהתאמת עקומות קניינית בשילוב עם אלגוריתם תוכנה קנייני כדי לספק תיקון לאירועי חפיפה (coincidence event correction) יחד עם הערכה של בריאות התרבית הכללית על ידי קביעת היחס בין מספר התאים באוכלוסיית העניין למספר החלקיקים הכולל. ספירת החלקיקים הכוללת כוללת תאים מתים מכווצים ומפורקים, וכן פסולת ומזהמים אחרים. התוצאות מוצגות בפורמט של היסטוגרמה עם התאמה אוטומטית של העקומה, עם שערים (gates) שניתן להתאימם ידנית לפי הצורך.
בסופו של דבר, ה-Moxi Z מאפשר ספירה ברמת דיוק ורבדיות הניתנות להשוואה ל-Coulter Z2, המהווה כיום את תקן הזהב, תוך אספקת מידע נוסף על בריאות התרבית. יתרה מכך, הוא משיג תוצאות אלו בזמן קצר יותר, בתפיסת מקום קטנה יותר, עם תפעול ותחזוקה קלים משמעותית, ובשבריר מהעלות של טכנולוגיות מקבילות.

Z Moxi נגד מיניאטורי תא אוטומטי הוא כלי רומן המשלב עקרון קולטר עם הטכנולוגיה סרט דק פטנט חיישן אלגוריתם תוכנה קניינית לבצע שינוי גודל ועוד היד נטויה של מגוון רחב של גודל החלקיקים, כמו גם כדי לקבוע את הבריאות הכללית של monodisperse תא תרבויות יונקים. פרוטוקול זה מתאר את השימוש בכלי זה לספור ולהעריך את הבריאות של תרביות תאים.

קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת Moxi מיני מונה אוטומטי Cell

ספירת חלקיקים ותאים משמשת למגוון יישומים, הכוללים תרביות תאים שגרתיות, אנליזה המטולוגית ובקרות תעשייתיות1-5. A ...

מונה התאים האוטומטי Mxi Z Mini הוא מכשיר שולחני קטן במיוחד המבצע ספירת תאים וחלקיקים ברמת דיוק גבוהה. המכשיר משלב את עיקרון ה-TER, הנחשב לתקן הזהב בתחום, עם טכנולוגיית חיישן קולט דק רשומה כפטנט. הקסטות המשמשות את ה-Mxi Z הן חיישני מיקרופלואידיקה מדויקים להשגת ספירת תאים.קסטרט מוחדרת לחלקו הקדמי של המכשיר ו-75 microliters של דגימה נטענות לפתח הדגימה. עם תחילת ההפעלה, תאים נמשכים בטור אחד דרך אזור חישוש תאים בממברנת הסרט הדק של הקסטרט, כאשר אלפי תאים לכל דגימה נספרים בעודם נעים דרך אזור החישוש. הנפח המדויק של כל תא נקבע באמצעות מדידת עכבה (impedance).לאחר שמונה שניות, מוצגים ריכוז התאים, גודל התא הממוצע ומדד בריאות התאים, יחד עם היסטוגרמה מלאה ברזולוציה גבוהה של כל אוכלוסיית החלקיקים. במידה ויש דגימה, ניתן לנתח ולאחסן את נתוני הדגימה במכשיר עצמו או להעבירם למחשב Mac או PC באמצעות Bluetooth או USB. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני מערכות אחרות, כגון המוציטומטרים או סופרי תאים אוטומטיים מבוססי תמונה, הוא שהיא אמינה הרבה יותר, עם דיוק ורגישות העולים על 95%, בהשוואה ל-75% עד 80% במערכות מבוססות תמונה.בנוסף, היא מודדת את גודל התאים, היא מהירה הרבה יותר והיא אינה סובייקטיבית. שיטה זו אידיאלית לספירה של מיליוני תאים. ניתן ליישמה במגוון רחב של יישומים לספירת תאים הודות לטווח הדינמי הרחב שלה.יישומים אלו כוללים ספירת תאי דם לבנים, תאי דם אדומים, פרוטוזואה, אצות ושמרים. התחילו ניסוי זה על ידי דילול של סספנסיה שניתקה זה עתה של תאי HEK 2 93 בתוך מדיום בעל מוליכות פיזיולוגית, כגון all flow diluent או PBS, לריכוז המתאים. בצעו טריטורציה בעדינות כדי למזער התקבצויות של תאים, וודאו שהמכשיר מנותק מאספקת החשמל.לאחר מכן, הפעילו את ה-mxi Z על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה, והמסך הראשי יוצג. ה-Mxi Z משתמש בקסטות חד-פעמיות מסוג M או S, שהן חיישנים מיקרופלואידיים מדויקים. לכל קסטה יש שני פתחי טעינה המסומנים בעיגול כחול ומסומנים במספר אחת או שתיים.ניתן להשתמש בכל קסטה עבור שתי בדיקות. לקסטות מסוג M טווח פעולה של 3000 עד 500,000 תאים למילליליטר. הטווח עבור קסטות מסוג S הוא 3000 עד 2.5 מיליון תאים למילליליטר.לחץ את המגש למטה והכנס קסטה כדי להבטיח הומוגניות של הדגימה על ידי היפוך איטי מספר פעמים. לאחר מכן, שאיבב 75 µL מהדגימה. הנח את קצה הפפטי בצורה יציבה בפתח הדגימה, כאשר הפפטה מוחזקת בזווית של 45 מעלות, ולאחר מכן העבר את הדגימה אל הפתח בתנועה אחת חלקה, תוך וידוי שכל הדגימה הועברה.גע במסך בתוך העיגול המסומן או בכל מקום אחר מלבד תיבת מצב החלקיקים הקטנים (small particle mode) כדי להתחיל בספירה. ה-mxi Z יתחיל בבדיקה ותוצאות ספירת התאים יושלמו תוך שמונה שניות. עם קסטה מסוג Type M, התוצאות מוצגות באופן אוטומטי באמצעות אלגוריתם התאמת עקומות קנייני המתאים את אוכלוסיית התאים הבודדים הרלוונטית, וכן מתקן את הספירה הכוללת עבור מקרים של חפיפה (coincidence).אירועים שבהם מספר חלקיקים או צבירים עוברים דרך אזור החשיפה של התא בו-זמנית. שימו לב שבעוד שאירועי התואם אלו נופלים מחוץ לאזור התאמת העקומה מימין, הם עדיין נכללים בספירות הכוללות. לאחר מציאת התאמה מתאימה, מוצגת היסטוגרמה ברזולוציה גבוהה של כל אוכלוסיית הדגימה, יחד עם הערכים המספריים עבור ריכוז התאים, הקוטר הממוצע והנפח הממוצע.בנוסף, ניתן מדד אוכלוסיית moxie או ערך MPI כאינדיקטור לבריאות הכללית של התרבית. הספירות בקצה השמאלי של ההיסטוגרמה הן נורמליות ומייצגות את סף הרעש הבסיסי של המערכת, אשר הותאם כדי למקסם את רגישות המערכת ואת ספירות השאריות האפשריות בדגימה. עם השלמת הרצת הדגימה, הוצא את הקסטה מהמכשיר ובחר ב-done כדי לשמור ולחזור למסך הבית.מחוון חזותי מאשר כי הדגימה נסרקה. אם יש להריץ דגימה שנייה, סובב את הקסטה והכנס אותה פנימה. שוב, לאחר הרצה במצב רגיל, התוצאות מוצגות עבור ספירת התאמה לעקומה (curve fit count) על סולם גודל של 4 עד 34 מיקרון עבור קסטה מסוג M או 3 עד 26 מיקרון עבור סוג S; כדי לשנות את קנה המידה של ציר ה-x ל-4 עד 26 מיקרון, גע בסמל שינוי קנה המידה (rescale).לחץ מספר פעמים באופן רצוף על סמל כיול המقياس (rescale) כדי לשנות את קנה המידה של ציר ה-x לפי הסדרה הבאה: 4 עד 18 מיקרון, 4 עד 10 מיקרון, ובחזרה ל-4 עד 34 מיקרון. במידת הצורך, חזור למצב התאמת העקום (curve fit). מספר הבדיקה עבור הניתוח הנוכחי מוצג בחלקו העליון של ההיסטוגרמה בתוך תיבה ירוקה.הנתונים יישמרו לפי מספר הבדיקה. געו בסמל השער (gating icon) כדי להחליף למצב שערים, המאפשר ביצוע שערים ידניים להיסטוגרמה. פעולה זו הופכת את הגדרת השערים למצב הרכישה ברירת המחדל. ניתן לשנות את השערים על ידי הזזת סממני השערים הכחולים השמאלי והימני, או על ידי נגיעה באחד הסממנים והזזתם באופן הדרגתי באמצעות מקשי החיצים המופיעים.הספירות המוצגות ומידע הגודל הממוצע מחושבים רק עבור החלקיקים בטווח הגating. לחץ על סמל ה-done כדי לשמור את התוצאות ולחזור למסך הבית. כדי לפתוח בדיקה שמורה, לחץ על סמל ההיסטוגרמה במסך הבית.סמלים עבור עד תשע היסטוגרמות שמורות יוצגו בבת אחת; געו ב-page down או page up, או החליקו את התצוגה למעלה או למטה. כדי לצפות בתוצאות בדיקה נוספות לפי הצורך, בחרו בסמל של הבדיקה הרלוונטית. כל היסטוגרמה תיפתח במצב התאמת עקומה (curve fit) או במצב שערים (gated).בהתאם לאופן השמירה, סוג הקסטט ששימש לבדיקה, M או S, יופיע בפינה השמאלית העליונה של המסך. ניתן גם להחליף בהיסטוגרמות בין מצב gating למצב curve fit כדי לבצע auto gate על ידי לחיצה על הפס desired peak. פעולה זו קובעת את מיקומי ה-gait האופטימליים עבור הפס שנבחר.דבר זה שימושי במיוחד במצבים של מספר שיאים. כדי לסמן שיא רלוונטי, לחצו על אייקוני החיצים להגדלה ולהקטרה כדי להתאים את קנה המידה של הספירה בציר Y של ההיסטוגרמה. ניתן לשנות את קנה המידה האנכי גם על ידי החלקת אצבע מעל השיא כלפי מעלה כדי להקטין או כלפי מטה כדי להגדיל; לחצו על אייקון החזרה כדי לסגור בדיקה זו ולחזור למסך הבית.ניתן להעביר נתונים למחשב Mac או PC באמצעות אפליקציית moxie chart. כדי לעשות זאת, ראשית לחצו על סמל ה-Bluetooth במסך הבית של יחידת ה-Moxie Z. היחידה תדווח על מזהה ה-Bluetooth שלה; במחשב, פתחו את אפליקציית moxie chart ולחצו על סמל ה-Bluetooth בפינה הימנית העליונה.לאחר מכן, בחרו את המכשיר התואם למזהה ה-Bluetooth של ה-Z ואת תיכיית היעד שנבחרה עבור הקבצים המועלים, בנוסף ל-Bluetooth. דרך נוספת להעברת נתונים מה-Mxi Z למחשב היא באמצעות כבל USB והתייחסות אליו כמכשיר USB רגיל. עבור קבצי נתונים, ניתן להעתיק קבצי נתונים מיחידת Mxi Z המחוברת באמצעות USB לכל ספריה במחשב.ניתן לפתוח ולנתח את הקבצים ישירות באמצעות אפליקציית Mxi Charles, או מכיוון שהם מעוצבים כקבצי CSV, ניתן לפתוח אותם ישירות ב-Microsoft Excel או בתוכנות לניתוח נתונים אחרות לצורך ניתוח הלקוח, כדי להשוות את תוצאות הספירה ב-Mxi Z לאלו שהתקבלו. באמצעות בקרת איכות, נספרו תרחיפים זהים של חרוזי כיול מדויקים ותאים של יונקים בשתי השיטות. נבחנו חרוזים בארבעה גדלים שונים, בקוטר שבין 6 ל-15.6 microns, בתוספת מספר שורות תאים שונות.הממוצע של שלושה עד ארבעה ספירות שורטט כפי שניתן לראות כאן. הספירות שהתקבלו היו כמעט זהות, מה שמעיד על כך שה-Moxie Z מסוגל להשיג ספירות מדויקות בטווח רחב של גדלים, כדי להדגים את טווח הריכוזים שניתן להעריך במדויק באמצעות ה-Moxi Z. אותם חרוזים ותאים דוללו בסדרה מריכוז ראשוני של 500,000 תאים למילילטר עבור קסטה מסוג M, או בערך 2.5 מיליון תאים למילילטר עבור סוג S. ריכוזי התאים התאורטיים שורטטו לאחר מכן אל מול הספירות שהתקבלו, כפי שמוצג כאן. הריכוזים שנמדדו תאמו את ריכוזי התאים התאורטיים, מה שמעיד על ספירה מדויקת לאורך הטווח הדינמי של כל קסטה: 3,000 עד 500,000 תאים למילילטר עבור קסטות מסוג M, ו-3,000 עד 2.5 מיליון תאים למילילטר עבור סוג S. כדי לבחון את השונות של התוצאות שהתקבלו, בוצעו חמש ספירות נפרדות של תאי HEK 293 ותאי HELOC בטווח של 200,000 עד 300,000 תאים למילילטר באמצעות call to Z two, Moxi Z והמוציטומטר.כפי שניתן לראות בגרף זה, מקדם השונות הממוצע היה דומה ב-Z two וב-mxi Z ונמוך הרבה יותר מזה של ה-hemo cytometer, מה שמעיד על כך שהשחזוריות של ה-Mxi Z דומה לזו של ה-call to Z two ועולה מזו של ה-Hema cytometer. כדי להוכיח את הדיוק של ה-Mxi Z בקביעת גודל חלקיקים, נמדדו חרוזיים מיוצרים באמצעות ה-Mxi Z. נערכו חמש מדידות עבור כל גודל חרוזי, הן שורשרו לממוצע ושורטטו מול גודל החרוזיים שדיווח היצרן. ה-Mxi Z מדד את החרוזיים בגודל שדווח על ידי היצרן.ערך ה-R squared היה 0.9989 כדי להדגים את היכולת של ה-mxi Z להעריך תרבית. מדידות של מדד בריאות התאים נרשמו באמצעות ה-Mxi Z עבור הכנות זהות של תאי HEK, תאי hela ותאי דגימה עם הוספת תאים מתים (dead cell spike), והושוו לתוצאות ויזואליות של בדיקת הדחייה של trypan blue מאותה דגימה, לאחוז חיוניות של hemotoma או ל-flow cytometer guava PCA לצורכי השוואה. מדידות החיוניות עבור הדגימות שורטטו גם הן על הגרף כפי שניתן לראות כאן.החיוניות המחושבת עבור תאי HGK ו-LAR שהתקבלה באמצעות ה-Mxi Z הייתה דומה למדידות החיוניות שהתקבלו בשיטת הדירה של Trypan blue, עם ערכי r squared של 0.9937 ו-0.9728 בהתאמה. הנתונים שהתקבלו דומים גם לאלו שהתקבלו באמצעות guava PCA עם ציטומטר זרימה (flow cytometer), עם ערכי R squared של 0.9724 עבור תאי EK ו-0.9585 עבור תאי hela. בעוד שבמקרים מסוימים מדד בריאות התאים עשוי להסכים עם גישות סטנדרטיות לבדיקת חיוניות, מדובר בטכניקה חדשה ושונה לחלוטין להערכת בריאות, ולפיכך היא לא תמיד תהיה זהה לטכניקות הוותיקות יותר.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי הדרך להשיג בקלות מידע על בריאות התאים, גודל התאים ומספר התאים. במהלך ביצוע הליך זה, חשוב לוודא שצפיפות התאים נמצאת בטווח הנכון.

determination-mammalian-cell-counts-cell-size-cell-health-using-moxi

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מונה Cell שרביט השלטון הוא מכשיר כף יד אוטומטיים שניתן להשתמש בהם כדי לספור תאים, צג בקוטר של התא נפח לשמש כדי לבדוק את בריאות ואיכות הסלולר אוכלוסיות מתרבות אחת לאחרת.

קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון

מאמר זה מתאר את הכימות של מיקרוגרפים המוציטומטריים והנדידה/פלישה באמצעות שני תוספים חדשים של ImageJ בקוד פתוח, מחשבון ריכוז תאים ומונה בדיקת הגירה.  יתר על כן, הוא מתאר פרוטוקולי קליטת וכיול תמונה וכן דן בפירוט בדרישות הקלט של התוספים.

כימותים אוטומטיים וניתוח הליכי ספירה הניידת באמצעות תוספי ImageJ

מיטוגנזה של לימפוציטים מסוג T מלווה בטרנספורמציה בלסטוגנית, שבה נפח התא גדל לפני חלוקת התא. כאן, אנו מתארים שיטה לכימות בלסטוגנזה בלימפוציטים מסוג T באמצעות מונה תאים אוטומטי עם יכולת מדידת קוטר תאים.

כימות מהיר של Blastogenesis mitogen-Induced T לימפוציטים לזיהוי סמים המערכת החיסונית

וידאו ללא עדשה מיקרוסקופ מאפשר לנו לעקוב אחר תרביות תאים ישירות בתוך החממה. כאן נתאר את פרוטוקול מלא נהגה לרכוש וניתוח של 2.7 היום רכישת בתרבית תאים הלה, שמוביל dataset של 2.2 x 10 שירים6 מדידות של תא בודד ומורפולוגיה 10584 מחזור התא.

ללא עדשה מיקרוסקופ וידאו עבור הדינמיקה וניתוח כמותי של תרבית תאים חסיד

צילום אופטי במכשיר מיקרוסקופ באתרו פותחה כדי לפקח על גודל של תאים בודדים ישירות בתא ההשעיה. מדידה בזמן אמת מתבצעת על ידי צימוד sterilizable הבדיקה צילום אופטי לניתוח תמונה אוטומטית. שינויים מורפולוגיים מופיעים בתלות במצב הגדילה ובתנאי הטיפוח.

באתרו מיקרוסקופיה לקביעת בזמן אמת של מורפולוגיה תא חד בBioprocesses

הבחנה בשיטת החוץ הגופית היא שיטה מבוססת היטב להערכת הרעילות והרעלת הציטוזה, אך הבקיע את השימוש במיקרוסקופיה ידנית, הוא מפרך וסובל מהבדלים בין השונות לבין השערים. מאמר זה מתאר את הפרוטוקול שפותח כדי לבצע גרסה אוטומטית לחלוטין של השיטה באמצעות זרימת הדמיה רב ספקטנטרי.

שיטה אוטומטית לביצוע השימוש בשיטת ההדמיה באמצעות הדמיה רב ספקטקטרלית באמצעות זרימה

לעתים קרובות יש צורך להעריך את הרעילות הפוטנציאלית של מערכת תרכובות על תאים מתורבתים. כאן, אנו מתארים אסטרטגיה למסך מהימן עבור תרכובות רעילות בפורמט 96-היטב.

אסטרטגיה לזיהוי תרכובות המשפיעות על צמיחת תאים והישרדות בתאי מיונקים מתורבתים בתפוקה נמוכה לבינונית

כאן אנו מתארים את ההטמעה והפרשנות של התוצאות של שיטת ההתחדשות הכמותית העצמית של ממוגרפיה.

קוונפיקציה של התחדשות עצמית בתרבויות מורנה במוספירה

בדיקת שטף מטבולי של תאים בזמן אמת מודדת את קצב צריכת החמצן ואת קצב ההחמצה החוץ-תאית, המתאים לייצור אדנוזין טריפוספט מיטוכונדריאלי וגליקוליטי, באמצעות חיישני pH וחמצן. כתב היד מסביר שיטה להבנת מצב האנרגיה של אוסטאובלסטים ואפיון ופרשנות של המצב הביו-אנרגטי התאי.

שימוש במנתח שטף מטבולי של תאים בזמן אמת לניטור ביו-אנרגיה של אוסטאובלסט

קביעת יחידות יוצרות מושבות (CFU) היא הטכניקה הסטנדרטית לכימות חיידקים, כולל Mycobacterium tuberculosis אשר יכול לקחת שבועות כדי ליצור מושבות גלויות. כאן אנו מתארים מיקרו-CFU לקביעת CFU עם יעילות זמן מוגברת, שטח מעבדה מופחת ועלות מגיב, ומדרגיות לניסויים בתפוקה בינונית וגבוהה.

בדיקת יחידה להקמת מושבות מיקרו להערכת יעילות חיסונים נגד שחפת

למדו ספירת תאים וניתוח בריאות תרביות יונקים באמצעות Moxi Z, מונה תאים אוטומטי מיניאטורי. השיטה מספקת תוצאות מדויקות ביותר מ-95% תוך שמונה שניות בלבד.

קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת Moxi מיני מונה אוטומטי Cell

גלה סרטונים נוספים