Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

הפגנה של assay כמותית מהיר של עיכוב קרישת דם על ידי-הפרין נמוך משקל המולקולרי, enoxaparin. התרומה של enoxaparin מוערכת על ידי הסרת ההשפעה שלו דרך מערכת עיכול עם heparinase. תיאור מלא יותר של assay הוא מפורט במאמר שפורסם.

כהקדמה, אנו מתייחסים כאן לעבודה שפורסמה על מהלך הזמן של רמות הפלזמה של הפרין אנוקספרין במשקל מולקולרי נמוך בנבדקים אנושיים. אנו מדגימים היום את התוצאות שלנו עם בדיקת נקודת טיפול מהירה להפרין במשקל מולקולרי נמוך. במקרה זה, הישות היא אנוקספרין.

התוצאות המוצגות בשקופית זו מתארות את ריכוז הפלזמה בחולים שקיבלו את התרופה באופן כרוני פעם ביום, 40 מיליגרם ליום, ועלות הזמן של המתן האחרון שלאחר מכן להיעלמות נוספת יכולה לראות שבערך ארבע שעות לאחר מתן התרופה מושג ריכוז שיא של 0.4 יחידות בינלאומיות למ"ל. והרמה הזו נמצאת בטווח הטיפולי של התרופה. עם זאת, נקודה מעניינת במיוחד היא כמה נשאר 12 שעות לאחר מתן מכיוון שיש הנחיה מקובלת קלינית שיש להמתין לפחות 12 שעות לאחר מתן הפרין במשקל מולקולרי נמוך, במקרה זה אנוקספרין לפני ביצוע הליך פולשני במיוחד, שעלול לגרום לסיכון לדימום. מעניין אותנו שעדיין קיימת כמות ברורה של כמות באותו זמן, והתמקדנו בכך בחלק מהמחקרים שלנו כפי שנדגים.

כמו כן, מוצגת בעבודה זו על ידי השולח ב-etal העובדה שלאנשים עם ליקוי כלייתי יש רמות גבוהות בהרבה של התרופה לאורך כל הזמן, ואנו רואים שההנחיה של 12 שעות עשויה להיות מאוד לא מספקת במקרה של מטופל עם ליקוי כלייתי או כפי שידוע אצל אישה בהריון או בחולים הסובלים מהשמנת יתר. ברצוני להציג את החוקרים שהיו מעורבים בפרויקט זה בקולג' הרפואי של ניו יורק. שמי מריו אוסה.

אני פרופסור לפרמקולוגיה כאן. אני ד"ר סוריה פאטולה, פרופסור חבר להרדמה קלינית, המכללה הרפואית של ניו יורק. שמי קשר קל.

אני סטודנט שנה שלישית לרפואה. זהו המנגנון שבו אנו משתמשים עבור מבחנים אלה. המכשיר מיוצר על ידי תאגיד האומיקרון.

ניתן להשתמש בו בקו או בסוללה, ולכן הוא באמת נקודת טיפול במובן זה. למנגנון שני תאים מבוקרים תרמוסטטית ואנו משתמשים בתאים אלה לדגירה מוקדמת של הדגימות בהכנה לבדיקה עצמה כמו גם לבדיקת הקרישה עצמה. מאפיין עיקרי של הבדיקה הוא השימוש בתכשיר מטוהר מאוד וזמין מסחרית של הפרינאז.

רכשנו את זה מתאגיד סימנס. הוא מסופק בצורה יציבה מאוד ומסיס בקלות במי מלח או בכל תמיסה מימית. השימוש בהפרין ACE הוא בעל ערך מיוחד בגישה שלנו מכיוון שהוא מאפשר לנו להיות מסוגלים לקבל את ערך הקרישה הבסיסי של המטופל.

בהיעדר השפעה כלשהי של הפרין, הפרין, ACE מסוגל לפרק לחלוטין הפרין מולקולרי נמוך והפרין לא מקוטע, אך העניין המיוחד שלנו כאן הוא בהפרין מולקולרי נמוך ולהתפרק לחוסר פעילות ולייצר ערך לזמן קרישה בהיעדר כל השפעה של הפרין. מה שאנו מדגימים כאן הוא מהלך הזמן של הפירוק של הפרין במשקל מולקולרי נמוך, במקרה זה אנוקספרין על ידי הפרינאז. הנתונים משורטטים כאחוז מזמן החיתוך הבסיסי, כך שמה שאנחנו רואים כאן הוא שאנוקספרין הוסיף אנטי 10 אחד.

יחידה בינלאומית ל-ML גורמת להארכה של כ-50% בזמן הקרישה של הדם. לאחר מכן, לאחר תקופות שונות של דגירה עם הפרינאז ב-37 מעלות צלזיוס, אנו רואים את עלות הזמן להתאוששות זמני הקרישה הבסיסיים. במילים אחרות, התדרדרות מוחלטת של אנוקספרין לחוסר פעילות.

מבחינת ההשפעה נוגדת הקרישה, אנו רואים את זה כבר בדקה וחצי. יש למעשה התאוששות של 100% של זמן הקרישה הבסיסי. לאחר בדיקה של מהלך זמן זה, בחרנו להשתמש בחמש דקות של דגירה כדגירה מוקדמת סטנדרטית של הדם לפני מדידת זמן הקרישה.

צינורות הבדיקה לבדיקת נקודת טיפול זו שונו מעט מהאופן שבו אנו מקבלים אותם מהיצרן. צינורות אלה נכללו במקור בקאולין מפעיל, הקיים למדידת זמן קרישה מופעל. גילינו שכאשר אנו משתמשים בצינור ללא המפעיל, זה אכן מגביר את הרגישות שלו באופן משמעותי למדי.

קראנו לזה הבדיקה המינימלית שלנו מכיוון שאנו מרגישים שמקור ההפעלה האפשרי היחיד יהיה כעת משטח הזכוכית של הצינור ואולי המגנט. המגנט הוא החלק החיוני של הבדיקה האוטומטית. צינורות אלה מסתובבים בבארות הצינור וכאשר המגנט נלכד על ידי קריש צפיפות כדי לגרום לאובדן התנועה שלו, אז זה מתגלה ומאותת על השלמת הקרישה.

חקרנו גם את הבדיקה באמצעות מחסנית הזמן Platin המופעלת על ידי אומיקרון. הבדיקה מתבצעת באופן זהה. יש מעט יותר הפעלה במערכת זו.

הצעד הראשון שלנו הוא להרכיב מחדש את השושן הפרינאז כפי שאנו מקבלים אותו בבקבוקון שלו. אנו מוסיפים 0.25 מ"ל מי מלח לבקבוקון ואז מאפשרים כ -20 שניות לפירוק מוחלט. לאחר מכן אנו שואבים את כל תכולת הבקבוקון למזרק טוברקולין, בדרך כלל משחזרים כ-0.2 מ"ל בשלב הבא.

תוספות לדגירה מוקדמת מתווספות לדגימות דם טריות המכילות אנוקספרין בצינורות ואקוטטיינר של שלושה מ"ל. המהדורה הראשונה מייצגת את הפרינאז וזה מעורבב בשלב זה. לאחר מכן, מדובר בתוספת של 0.2 מ"ל מי מלח לשפופרת המכילה אנוקספרין אך ללא הפרינאז לנפח כולל VO דומה.

אנו משתמשים בטיימר המובנה של המכשיר כדי לספור לאחור את 300 השניות. זה חמש דקות של דגירה מוקדמת. צינורות הוואקו מוסרים לאחר השלמת הדגירה המוקדמת.

השלב האחרון הוא העברה של שני מ"ל מהדגימות המודגרות מראש לצינורות הבדיקה המופעלים מינימלית שלנו. צינורות אלה ממולאים מראש במאה מיקרוליטר של 0.25 סידן כלורי מולארי כדי ליזום קרישה. הצינור הראשון הזה הוא זה שהודגר מראש עם הפרינאז.

הדגימה השנייה היא זו המכילה אנוקספרין אך ללא הפרינאז. הטיימרים מבטאים את הזמן שפג תוקפו מאז הוספת הסידן הכלורי, ואנו יכולים לראות כעת שהדגימה הראשונה הושלמה. זהו הבקבוקון העליון ב-200 שניות הנדרשות להשלמת הקרישה.

הדגימה שלא הכילה הפרינאז ממשיכה זמן רב יותר וזה נגמר עכשיו. זוהי סימולציה של התוצאה האופיינית שלנו עם דם עם 0.4 יחידות בינלאומיות של אנוקספרין למ"ל. כלומר קיצור של כ-45 שניות של זמן הקרישה בריכוז זה של אנוקספרין או ירידה של 18% בזמן הקרישה.

כפי שניתן לראות, זיהוי הקרישה הוא אוטומטי והזמנים נשמרים במכשיר עד להשלמת הבדיקה. עלינו להזכיר שלמעשה בדקנו את הבדיקה הזו בריכוז נמוך כמו 0.1 יחידות בינלאומיות של אנוקספרין למ"ל. כפי שציינו בהקדמה, זהו הריכוז שעשוי להיות נוכח 12 שעות לאחר מינון טיפולי טיפוסי של אנוקספרין.

הצלחנו לזהות באופן אמין גם בריכוז זה.