Name: Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: למד שיטה מהירה להערכת יעילות אנוקספארין בקרישת דם באמצעות הפרינאז. השיטה מאפשרת מדידת זמני קרישה בסיסיים ומסייעת בהתאמת טיפול אנטיקואגולנטי בחולים עם לקות כלייתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

החקירות בוצעו אך ורק עם תמיכה ממשאבים מחלקתיים ומוסדיים. מנגנון הקרישה (Hemochron 801) הושאל ללא התחייבות מהיצרן. מחסניות assay נרכשו בעלויות הקמעונאי שלהם. הדמות המקדימה בוידאו שונה מSanderink, et al. 12 הדמות השנייה בסרטון (כמובן זמן עיכול heparinase) שוחזרה באישור Inchiosa et al. 1

1. כינון Heparinase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> heparinase Lyophilized אני מתקבל באופן מסחרי (סימנס, ניוארק דלוור, DadeHepzyme REF B4240-10) בבקבוקונים המכילים 1 מיקרוגרם של החלבון המטוהר. החלבון הוא מומס ב0.25 מ&quot;ל של תמיסת מלח (0.9% NaCl). </li></ol> 2. איסוף דגימות דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שתי דגימות דם נמשכות על ידי ואקום לציטרט הנתרן (0.3 מ&quot;ל 0.109M; 3.2%) נאגרה Vacutainer צינורות (קיטון דיקינסון-; פרנקלין לייקס, ניו ג&#39;רזי); הצינורות שניהם מראש מחוזקים איתי ריכוז ידוע של enoxaparin; נפח הדם כי הוא נמשך הוא 2.7 מ&quot;ל. התוכן הכולל הוא אז 3.0 מ&quot;ל. </li></ol> 3. עיכול Heparinase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל תכולתו של בקבוקון heparinase שעלול להישאף לתוך מזרק (כ -0.2 מ&quot;ל, 80% מהבקבוקון; 0.8 מיקרוגרם של חלבון), עוברת לצינור Vacutainer אחד; 0.2 מ&quot;ל של תמיסת מלח (0.9% NaCl) הוא הוסיף המבחנה השנייה, המשמשת כבאזלמדינת ine לפני נטרול השפעת enoxaparin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני צינורות Vacutainer ממוקמים בבארות thermostated של מנגנון Hemochron לתקופה של 5 דקות. (הלימות זמן עיכול 5 דקות עם heparinase הוקמו בעבודה שלנו שפורסמה בעבר. 1) </li></ol> 4. מבחני קרישה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף דגירת heparinase, מיליליטר 2.0 של דם מועבר למחסנית assay. במקרה של צינור מאא, זה מראש מולא עם 0.1 מ&quot;ל של 250 המ&quot;מ CaCl 2 ליזום קרישה. המסחרית aPTT assay המחסנית (A104) נועדה ליזום קרישה בדם כולו שנמשכה לתוך צינורות Vacutainer המכילים ציטרט הנתרן כנוגד קרישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנגנון Hemochron מסמן את ההשלמה של קרישת דם ומשמר את זמני קרישה בשניות. ההבדלים בזמני קרישה בין מדגם heparinase טופל ומדגם המחקר, מחולקים בti הקרישהלהמדגם המחקר, מניב ירידת האחוזים כתוצאה מחיסול של enoxaparin. כפי שנראה להלן, מתאמים ליניארי חזקים הושגו על הקשר בין ירידה באחוז זמן קרישה והריכוז של enoxaparin בדגימות ממוסמרות של דם מלא, כמו גם למתאם עם ריכוזים מדודים של enoxaparin ידי assay chromgenic של אנטי Xa פעילות. מבחנים אנטי Xa של ריכוז enoxaparin נערכו עם ערכה מסחרית לבדיקת chromogenic שני שלבים (BIOPHEN; Aniara, מייסון, אוהיו). </li></ol>

<ol><li>Inchiosa, M. A. J. r, Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+development+of+a+point-of-care+assay+of+enoxaparin+anticoagulant+activity+in+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">Toward development of a point-of-care assay of enoxaparin anticoagulant activity in whole blood.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 32, 47-53 (2011).</li>
<li>Despotis, G. J., Filos, K. S., Levine, V., Alsoufiev, A., Spitznagel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aprotinin+prolongs+activated+and+nonactivated+whole+blood+clotting+time+and+potentiates+the+effect+of+heparin+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Aprotinin prolongs activated and nonactivated whole blood clotting time and potentiates the effect of heparin in vitro.</a> Anesth. Analg. 82, 1126-1131 (1996).</li>
<li>Pothula, S., Inchiosa, M. A. Jr, Sanchala, V. T., Sarabu, M., Inchiosa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effect+of+protamine+excess+on+blood+coagulation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">In vitro effect of protamine excess on blood coagulation assays.</a> Anesth Analg. 96, SCA39(2010).</li>
<li>Inchiosa, M. Jr, Pothula, S., Sanchala, V., Kubal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+low+plasma+levels+of+low+molecular+weight+heparin%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Detection of low plasma levels of low molecular weight heparin.</a> Anesth Analg. 102, SCA10(2010).</li>
<li>Gogarten, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+new+antithrombotic+drugs+on+regional+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Anaesthesiol%22%5BJournal%5D)">The influence of new antithrombotic drugs on regional anesthesia.</a> Curr. Opin. Anaesthesiol. 19, 545-550 (2006).</li>
<li>Gouin-Thibault, I., Pautas, E., Siguret, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+profile+of+different+low-molecular+weight+heparins+used+at+therapeutic+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Safety profile of different low-molecular weight heparins used at therapeutic dose.</a> Drug Saf. 28, 333-349 (2005).</li>
<li>Bazinet, A., Almanric, K., Brunet, C., Turcotte, I., Martineau, J., Caron, S., Blais, N., Lalonde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dosage+of+enoxaparin+among+obese+and+renal+impairment+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Dosage of enoxaparin among obese and renal impairment patients.</a> Thromb. Res. 116, 41-50 (2005).</li>
<li>El Rouby, S., Cohen, M., Gonzales, A., Hoppensteadt, D., Lee, T., Zucker, M. L., Khalid, K., LaDuca, F. M., Fareed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+a+HEMOCHRON+JR.+HEMONOXTM+point+of+care+test+in+monitoring+the+anticoagulant+effect+of+enoxaparin+during+interventional+coronary+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thromb.+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">The use of a HEMOCHRON JR. HEMONOXTM point of care test in monitoring the anticoagulant effect of enoxaparin during interventional coronary procedures.</a> J. Thromb. Thrombolysis. 21, 137-145 (2006).</li>
<li>Yang, V. C., Bernstein, H., Cooney, C. L., Kadam, J. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+anticoagulant+activities+of+the+low+molecular+weight+heparin+fractions+and+fragments+with+flavobacterial+heparinase%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of the anticoagulant activities of the low molecular weight heparin fractions and fragments with flavobacterial heparinase.</a> Thromb Res. 44, 599-610 (1986).</li>
<li>Maddineni, J., Walenga, J. M., Jeske, W. P., Hoppensteadt, D. A., Fareed, J., Wahi, R., Bick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Product+individuality+of+commercially+available+low-molecular-weight+heparins+and+their+generic+versions%3A+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Applied+Thrombosis%2FHemostasis%22%5BJournal%5D)">Product individuality of commercially available low-molecular-weight heparins and their generic versions: therapeutic implications.</a> Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 12, 267-276 (2006).</li>
<li>Wijnhoven, T. J., van de Westerlo, E. M., Smits, N. C., Lensen, J. F., Rops, A. L., vander Vlag, J., Berden, J. H., vanden Heuvel, L. P., van Kuppevelt, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+anticoagulant+heparinoids+by+immunoprofiling%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconj.+J%22%5BJournal%5D)">Characterization of anticoagulant heparinoids by immunoprofiling.</a> Glycoconj. J. 25, 177-185 (2008).</li>
<li>Sanderink, G. -J. C. M., Guimart, C. G., Ozoux, M. -L., Jariwala, N. U., Shukla, U. A., Boutouyrie, B. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+the+prophylactic+dose+of+enoxaparin+once+daily+over+4+days+in+patients+with+renal+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the prophylactic dose of enoxaparin once daily over 4 days in patients with renal impairment.</a> Thromb. Res. 105, 225-231 (2002).</li>
</ol>

המחברים אין לי מה לחשוף.

בדיקה זו של יעילות enoxaparin עשויה לשמש כאפשרות חשובה לקבוע את הבטיחות היחסית של ביצוע הליך פולשני שיש סיכון נלווה לדימום או לפיתוח של שטף דם. זה יהיה חשוב במיוחד כאשר זריקת אפידורל נשקלת. רוב ההנחיות ממליצות לתקופת מתנה של 12 שעות בין הזריקה של enoxaparin וייזום הליך פולשני ליקוי 5 כליות, השמנת יתר והריון עלול להשפיע על דרישות המינון של enoxaparin 6,7 מאז ניתן להשלים את מהלך הבדיקה בתוך 10.. - תקופת דקות, זה יכול לשמש גם במרפאה או במשרדו של הרופא, שבו יהיה לספק מידע על הלימות קרישה בחולים הנמצאים בסיכון להתפתחות של thromboembolism ורידים. התאמת מינון מיידית ניתן הנהיגה, לפי צורך. ריכוז enoxaparin בפלזמה ניתן למדוד chromogenicssay של מידת עיכוב של גורם הקרישה, Xa. עם זאת, זה רק מניב ריכוזו, ולאו דווקא יעילות קרישתו, שמשתנית מאוד בין חולים בודדים. 6-8 המחקרים שלנו בוצעו רק עם enoxaparin. עם זאת, ניתן לצפות שהבדיקה יכולה להיות מיושמת על כל LMWH שהוא מושפל על ידי heparinase הראשון זה כבר ידוע להיות המקרה לdalteparin, nadroparin וtinzaparin. 9-11 עצבנו את assay ביחס לתכונות של מכשיר זמן קרישת Hemochron. המכשיר הוא זול יחסית; גם, צינורות דם חד פעמיים גבייה, אמפולה heparinase ומכלה assay כדי להשלים ניתוח למטופל אחד הוא כ 15 דולרים בארה&quot;ב. לכן, זה יהיה צפוי להיות מתאים כדי לפקח על מצב קרישה במסגרות קליניות שונות.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Hepzyme </td><td> סימנס </td><td> B4240 </td><td> אני heparinase </td></tr><tr><td> מחסנית &quot;מאא&quot; </td><td> Technidyne </td><td> FTK-ACT </td><td> שונה על ידי הסרת קאולין </td></tr><tr><td> aPTT מחסנית </td><td> Technidyne </td><td> A104 </td><td></td></tr></tbody></table>

point-of-care assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

יש צורך בבדיקה קלינית כדי לקבוע את המידה שבה הדם של מטופל anticoagulated ביעילות על ידי---הפרין הנמוך משקל המולקולרי (LMWH), enoxaparin. ישנם גם מצבים קליניים דחופים שבו יהיו חשוב אם זה יכול להיקבע במהירות. הבדיקה הנוכחית נועדה להשיג את זה. אנו assayed דגימות דם אדם שתובלו בריכוזים ידועים של enoxaparin בלבד. המאפיין המהותי של assay הנוכחי הוא כימות של היעילות של enoxaparin בדגימת הדם של מטופל באמצעות השפלתו להשלים עם חוסר הפעילות heparinase. שתי דגימות דם נשאב לתוך Vacutainer צינורות (קיטון-דיקנסון; פרנקלין לייקס, ניו ג&#39;רזי) שתובלו בenoxaparin; מדגם אחד היה מתעכל עם heparinase למשך 5 דקות על 37 מעלות צלזיוס, המדגם האחר ייצג מעמד anticoagulated הבסיסי של החולה. קיצור האחוזים מזמן קרישה במדגם heparinase טופל, לעומת במדינת aseline, הניבה תרומת הקרישה של enoxaparin. אנחנו השתמשנו במכשיר הנייד, הסוללה המופעל Hemochron 801 למדידות של זמני קרישה (הבינלאומי Technidyne קורפ, אדיסון, ניו ג&#39;רזי). המנגנון יש 2 (37 ° C) בארות צינור assay מבוקרים תרמוסטטית. ערכנו את המבחנים בשני סוגים של מחסניות assay שזמינים מהיצרן של המכשיר. מחסנית אחת שונה כדי להגביר את הרגישות שלו. הוצאנו את קאולין מFTK-ACT המחסנית על ידי שטיפה נרחבת עם מים מזוקקים, ומשאיר רק את משטח הזכוכית של הצינור, ואולי מגנט זיהוי, כמפעילים. קראנו assay זה הופעל מינימאלי (מאא). השימוש בבדיקה הופעלה מינימאלי נחקר על ידינו ואחרים. 2-4 המחסנית השנייה שלמדה הייתה assay (A104) זמן thromboplastin חלקי פעיל (aPTT). זה היה בשימוש כפי שסופק מהיצרן. בארות thermostated של המכשיר werדואר משמש הוא לעיכול heparinase ומבחני קרישה. הבדיקה יכולה להסתיים בתוך 10 דקות. Assay מאא הראה שינויים חזקים בזמן קרישה לאחר עיכול heparinase של enoxaparin מעל טווח ריכוז קליני טיפוסי. ב0.2 אנטי Xa IU של enoxaparin למ&quot;ל של דגימת דם, עיכול heparinase נגרם ירידה ממוצעת של 9.8% (20.4 שניות) בזמן קרישה; ב1.0 IU למ&quot;ל של enoxaparin הייתה ירידת 41.4% (148.8 שניות). דוח זה מציג רק את היישום הניסיוני של assay; הערך שלו בסביבה קלינית עדיין צריך לקום.

איור 1 מציג את התוצאות ליחסים בין הירידה באחוז זמן קרישה בעקבות חיסול enoxaparin עם heparinase לסדרת ריכוזים ממוסמרים של enoxaparin (0.2, 0.4 ו -1.0 אנטי Xa IU למ&quot;ל). תוצאות מוצגות לשניהם מאא ומחסניות assay aPTT. הריכוזים המדודים של enoxaparin מassay chromogenic של פעילות אנטי Xa כלולים גם בabscissa של כל חלקה. איור 2 מציג את החלקות של אותם הנתונים כירידה באחוז זמן קרישה לעומת מדד chromogenic של פעילות אנטי Xa. מתאמים חזקים ליניארי, עם משמעויות סטטיסטיות גבוהות, נמצאו לכל הארבע מערכות היחסים. <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig1.jpg" alt="איור 1" /> האיור 1. נקודה של קביעות טיפוח של enoxaparin contr<html> ibution לזמני קרישה של דם כל קוצים המבוססים על אחוז השינוי (קיצור) זמן קרישה לאחר דגירה עם heparinase. ריכוזי enoxaparin הממוסמרים הוסיפו לכל דם והריכוזים אנטי Xa הפלזמה נמדדו (ממוצע ± SE, בסוגריים) ממוקמים בabscissa של כל גרף. כל שיעורי השינוי בזמני קרישה מוצגים כאמצעי וSE, יחד עם קיצור זמן הממוצע קרישה בשניות. נתונים מאותו המטופל מחוברים על ידי קווים מקווקווים. הנתונים לארבעת החולים שזוהו עם כוכביות בעלילה (תוצאות מאא) זהים לארבעה החולים בחלקה ב &#39;(מבחני aPTT). כל התוצאות מייצגים קביעות יחידות. מקדמי מתאם פירסון r = 0.869 (p = 1.9 x 10 -5) וr = 0.916 (p = 2.8 x 10 -5) למערכות היחסים עם מאא וaPTTassay, בהתאמה. לשכפל באישור Inchiosa et al. 1 יפ-together.within עמודים = &quot;תמיד&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/3852/3852fig2.jpg" alt="איור 2" /> . איור 2 התוצאות לשיעורי השינוי בזמני קרישה במבחני שלב של הטיפול מוצגים באיורי 1 א &amp; B הם זממו נגד ריכוזי Xa נגד גורם פלזמה, תוצאות מאא;. B, aPTT מבחנים. כל התוצאות ממבחנים בודדים קרישת זמנים וקביעות יחידות של ריכוזי Xa נגד גורם. מקדמי מתאם פירסון r = 0.910 (p = 2.5 x 10 -6) וr = 0.922 (p = 2.0 x 10 -5) למערכות היחסים עם מאא וassay aPTT, לשכפל בהתאמה באישור Inchiosa et al. 1

הפגנה של assay כמותית מהיר של עיכוב קרישת דם על ידי-הפרין נמוך משקל המולקולרי, enoxaparin. התרומה של enoxaparin מוערכת על ידי הסרת ההשפעה שלו דרך מערכת עיכול עם heparinase. תיאור מלא יותר של assay הוא מפורט במאמר שפורסם.<sup&gt; 1</sup&gt; Assay עדיין דורש אישור קליני.

Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

קיים צורך בבדיקה קלינית לקביעת המידה שבה דם של מטופל עבר נוגדי קרישה יעילים על ידי ה...

כדרך הקדמה, אנו מתייחסים כאן לעבודה שפורסמה בנושא מהלך הזמן של רמות הפלזמה של ההפרין בעל המשקל המולקולרי הנמוך Enoxaparin בנבדקים בני אדם. אנו מדגימים היום את תוצאותינו באמצעות בדיקה מהירה בנקודת הטיפול (point of care assay) להפרין בעל משקל מולקולרי נמוך. במקרה זה, הישות היא Enoxaparin.התוצאות המוצגות בשקופית זו מתארות את ריכוז הפלסמה בחולים שקיבלו את התרופה באופן כרוני פעם ביום, במינון של 40 milligrams ליום, ואת הזמן שחלף מאחר המנה האחרונה ועד להיעלמותה; ניתן לראות כי בערך ארבע שעות לאחר המתן, מושג ריכוז שיא של 0.4 international units per ML, ורמה זו נמצאת בטווח הטיפולי של התרופה. נקודה שמעניינת במיוחד, עם זאת, היא הכמות שנותרה 12 שעות לאחר המתן, מכיוון שקיימת הנחיה מקובלת קלינית לפיה יש להמתין לפחות 12 שעות לאחר מתן הפרין בעל משקל מולקולרי נמוך, במקרה זה Enoxaparin, לפני ביצוע הליך פולשני במיוחד שעלול להוביל לסיכון לדימום. מעניין אותנו שעדיין קיימת כמות שניתן לזהותה בבירור בנקודת זמן זו, והתמקדנו בכך בחלק מהמחקרים שלנו כפי שנראה בהמשך.בעבודה זו מוצג בנוסף על ידי השולח ועמיתיו העובדה כי לאנשים עם ליקוי כלייתי יש רמות גבוהות משמעותית של התרופה לאורך כל מהלך הזמן, ואנו רואים כי ההנחיה ל-12 שעות עשויה להיות לא מספקת במקרים של מטופל עם ליקוי כלייתי, או כפי שידוע, אצל אישה בהריון או במטופלים הסובלים מהשמנת יתר. ברצוני להציג את החוקרים שהיו מעורבים בפרויקט זה ב-New York Medical College. שמי הוא Mario Osa.אני פרופסור לפרמקולוגיה כאן. אני ד"ר Surya Patula, פרופסור חבר לאנסטזיולוגיה קלינית ב-New York Medical College. שמי Keshar Kal.אני סטודנט לרפואה בשנה השלישית. זהו המכשיר שבו אנו משתמשים עבור בדיקות אלו. המכשיר מיוצר על ידי חברת Omicron Corporation.ניתן להשתמש במכשיר בחיבור לרשת החשמל או באמצעות סוללות, ובכך הוא מהווה פתרון של point of care במובן זה. למכשיר שני תאים עם בקרה תרמוסטטית, ואנו משתמשים בתאים אלה לדגירה מוקדמת של הדגימות כחלק מההכנה לבדיקה עצמה, וכן עבור בדיקת הקרישה עצמה. מאפיין מרכזי של הבדיקה הוא השימוש בתכשיר heparinase מזוקק מאוד הזמין מסחרית.רכשנו זאת מחברת Siemens. החומר מסופק בצורה יציבה מאוד וממיס בקלות בתמיסת סלין או בכל תמיסה מימית אחרת. השימוש ב-heparin ACE בעל ערך רב בגישה שלנו, כיוון שהוא מאפשר לנו לקבל את ערכי הקרישה הבסיסיים (baseline) של המטופל.בהיעדר כל השפעה של הפרין, ACE מסוגל לפרק לחלוטין הפרין בעל משקל מולקולרי נמוך והפרין לא מופרד, אך העניין המרכזי שלנו כאן הוא בהפרין בעל משקל מולקולרי נמוך, פירוקו עד לאובדן פעילות והפקת ערך לזמן קרישה בהיעדר כל השפעה של הפרין. מה שאנו ממחישים כאן הוא מהלך הזמן של פירוק הפרין בעל המשקל המולקולרי הנמוך, במקרה זה Enoxaparin, על ידי heparinase. הנתונים מוצגים כאחוז מזמן החיתוך בקו הבסיס, כך שמה שאנו רואים כאן הוא ש-Enoxaparin שהוסף ב-one anti 10.ריכוז של יחידות בינלאומיות ל-ML גורם להארכה של כ-50% בזמן קרישת הדם. לאחר תקופות דגירה משתנות עם heparinase ב-37 degrees centigrade, אנו בוחנים את הזמן הדרוש להחזרת זמני הקרישה לבסיס. במילים אחרות, הפירוק המלא של Enoxaparin עד לאובדן פעילותו.בכל הנוגע לאפקט נוגד הקרישה, אנו רואים כי כבר לאחר דקה וחצי חלה התאוששות של כ-100% לזמן הקרישה הבסיסי. לאחר בחינת מהלך זמן זה, בחרנו להשתמש בחמש דקות של אינקובציה כזמן האינקובציה המקדימה הסטנדרטי של הדם לפני מדידת זמן הקרישה.מבחנות הבדיקה עבור בדיקת נקודת הטיפול (point of care) הזו עברו שינוי קל מהאופן שבו אנו מקבלים אותן מהיצרן. מבחנות אלו הכילו במקור אקטיבטור מסוג kaolin, שנועד למדידת זמן קרישה מופעל. מצאנו כי כאשר אנו משתמשים במבחנה ללא האקטיבטור, רגישותה עולה באופן משמעותי.כינינו זאת בבדיקה המופעלת באופן מינימלי שלנו, כיוון שבתחושתנו המקור היחיד האפשרי להפעלה יהיה כעת משטח הזכוכית של המבחנה ואולי המגנט. המגנט הוא החלק החיוני של הבדיקה האוטומטית. מבחנות אלה מסתובבות בתוך תאי המבחנות, וכאשר המגנט נלכד על ידי קריש בצפיפות שגורמת לאובדן תנועתו, הדבר מזוהה ומסמן את השלמת הקרישה.בחנו את הבדיקה גם באמצעות מחסנית omicron להפעלת זמן פרותרומבין חלקי. הבדיקה מבוצעת באופן זהה. במערכת זו קיימת רמה מעט גבוהה יותר של הפעלה.השלב הראשון שלנו הוא שחזור של ה-lily heparinase כפי שקיבלנו אותו בבקבוקון. אנו מוסיפים 0.25 ml של תמיסת סלין לבקבוקון ולאחר מכן ממתינים כ-20 שניות להמסה מלאה. לאחר מכן, אנו שואבים את כל תכולת הבקבוקון למזרק טוברקולין, כאשר בדרך כלל נשגב כ-0.2 ml בשלב זה.תוספות עבור דגירה מקדימה מתווספות לדגימות דם שנשאבו זה עתה המכילות enoxaparin בתוך מבחנות vacutainer בנפח של three ml. התוספת הראשונה היא heparinase, אשר מעורבבת בשלב זה. לאחר מכן, מתווספים 0.2 ml של saline למבחנה המכילה enoxaparin אך ללא heparinase, כדי להגיע לנפח סופי (VO) השוואתי.אנו משתמשים בטיימר המובנה של המכשיר כדי לספור לאחור 300 שניות. מדובר בחמש דקות של דגירה מקדימה. את מבחנות הוואקום מוציאים כאשר הדגירה המקדימה מסתיימת.השלב הסופי הוא העברה של 2 ml מהדגימות שעברו דגירה מוקדמת למבחנות הבדיקה המופעלות באופן מינימלי שלנו. מבחנות אלו מלאות מראש ב-100 µL של calcium chloride בריכוז 0.25 M כדי להתחיל את הקרישה. המבחנה הראשונה היא זו שעברה דגירה מוקדמת עם heparinase.הדגימה השנייה היא זו המכילה enoxaparin אך ללא heparinase. הטיימרים מציגים את הזמן שחלף מאז הוספת סידן כלורי, וכעת ניתן לראות שהדגימה הראשונה הושלמה. זוהי הבקבוקון העליון ב-200 שניות שנדרשו להשלמת הקרישה.הדגימה שלא הכילה heparinase נמשכת זמן רב יותר והיא הסתיימה כעת. זוהי סימולציה של התוצאה הטיפוסית שלנו עם דם שהוספו לו 0.4 יחידות בינלאומיות של Enoxaparin למל. בריכוז זה של enoxaparin, מדובר בקיצור של כ-45 שניות בזמן הקרישה, או בירידה של 18% בזמן הקרישה.כפי שניתן לראות, זיהוי הקרישה הוא אוטומטי והזמנים נשמרים במכשיר עד להשלמת הבדיקה. נציין כי בדלע we actually tested this assay בריכוז נמוך של עד 0.1 יחידות בינלאומיות של Enoxaparin ל-ml. כפי שציינו במבוא, זהו הריכוז שעשוי להיות נוכח 12 שעות לאחר מנה טיפולית טיפוסית של Enoxaparin.הצלחנו לזהות באופן מהימן גם בריכוז זה.

rapid-point-care-assay-enoxaparin-anticoagulant-efficacy-whole

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מחקר זה מתאר assay microplate רומן שמודד את פעילות קרישת FV במהלך היווצרות קריש פיברין בפלזמה אנושית שלא דווח בעבר. השיטה משתמשת בקורא microplate הקינטית ברציפות כדי למדוד את השינוי בספיגה ב405nm במהלך היווצרות קריש פיברין בפלזמה אנושית.

מדידה של פעילות פקטור V בפלזמה אנושית באמצעות Assay קרישת Microplate

Assay כל cytotoxicity הדם (אש"ל) הוא assay cytotoxicity שפותח על ידי שילוב טכנולוגיית מיקום תא תפוקה גבוהה עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי ועיבוד תמונה אוטומטי. כאן, אנו מתארים כיצד ניתן לנתח תאי הלימפומה שטופלו בנוגדן anti-CD20 בזמן אמת בכל דם אדם כדי לספק ניתוח cytotoxicity סלולארי כמותי.

בזמן אמת Cytotoxicity מבחני בדם כל אדם

אנו מציגים במבחנה מודל המאפשר את מחקר וניתוח של קרישה בדם שאינו anticoagulated כולה,... בדיקות דם במערכת תלוי אפקט נוגד קרישה הטבעי של תאי אנדותל בריאים והתוצאה תא אנדותל הפעלת הקרישה.

הערכה של מאפייני תאי אנדותל באמצעות תרבית תאים 3D ושאינם-anticoagulated דם קרישה ואנטי דלקתיות

בזאת אנו מציגים פרוטוקול למדוד במיטה את פעילות האנדוטוקסין של דגימות הדם האנושיות. הבדיקה של פעילות אנדוטוקסין היא מבחן פשוט לבצע והוא עשוי להיות ביוארקר שימושי בחולים באורח אנוש חולה עם אלח דם.

שיטת פעילות אנדוטוקסין לאיתור דם כולו אנדוטוקמיה בחולים חולי אנוש

אנו מציגים מודל מחלת כלי דם במבחנה לחקור אינטראקציות דם שלם עם אנדותל נגזר המטופל. מערכת זו מאפשרת לחקור תכונות טרומבוגניות של תאי אנדותל ראשוניים בנסיבות שונות. השיטה מתאימה במיוחד להעריך את הטיפול situ thrombogenicity ונוגדי קרישה בשלבים שונים של קרישה.

במודל מחלה מיקרופלוידיקית במבחנה ללמוד אינטראקציות דם-אנדותל שלם ודינמיקת קריש דם בזמן אמת

פרוטוקול זה חוקר את השימוש בפלזמה עשירה בשלפוחית חוץ-תאית (EV) כאינדיקטור ליכולת הקרישה של EV. פלזמה עשירה ב- EV מתקבלת באמצעות תהליך של צנטריפוגה דיפרנציאלית והסתיידות לאחר מכן.

קביעת פעילות הקרישה של שלפוחית חוץ-תאית (EV) באמצעות זמן קרישה המופעל על ידי EV (EV-ACT)

אנו מציגים פרוטוקול שולחני לגרימת פקקת במכשירי עזר לחדרים (VAD) בתוך פלטפורמת בדיקה מחזורית. שיטה זו משמשת לזיהוי נקודות חמות טרומבוגניות בנתיב זרימת הדם ויכולה לסייע בשיפור עמידות לפקקת לקראת ניסויים פרה-קליניים במודלים של בעלי חיים.

במבחנה בדיקת פקקת למכשירי עזר לחדרים

פרוטוקול זה מתאר את מבחן ניימכן המוסטזיס, המאפשר מדידה סימולטנית ובזמן של יצירת טרומבין ופלסמין כדי לספק הערכה משולבת של קרישה ופיברינוליזה. המבחן שואף לשפר את אפיון האיזון ההמוסטאטי במחקרים ובהקשרים קליניים, מעבר להיקף הבדיקות המוסטטיות המקובלות.

בדיקת ניימכן המוסטזיס: מדידה פלואורוגנית סימולטנית של יצירת תרומבין ופלסמין בבאר אחת

אנו מתארים מתודולוגיה לעיבוד דם מלא כדי להשיג מגוון רכיבים להמשך ניתוח. ביצענו אופטימיזציה של פרוטוקול יעיל המאפשר עיבוד מהיר ותפוקה גבוהה בו-זמנית של דגימות דם מלא בסביבה לא קלינית.

פלזמה מהירה ובידוד של מרכיבי דם שלמים בדגימות שהתקבלה מהגדרה מבוססת-קהילה

פרוטוקול למדידת לויקוציטים בדם היקפי באמצעות מנתח לויקוציטים מבוסס כרטיס POCT מוצג כאן. אותן דגימות דם נבדקו על ידי שני מנתחי המטולוגיה אוטומטיים כדי להעריך את העקביות והדיוק של התוצאות. התוצאות הראו כי למנתח המוערך היה מתאם טוב עם מערכת הייחוס.

הערכה של מנתח בדיקת נקודת טיפול למדידת לויקוציטים בדם היקפי

למד שיטה מהירה להערכת יעילות אנוקספארין בקרישת דם באמצעות הפרינאז. השיטה מאפשרת מדידת זמני קרישה בסיסיים ומסייעת בהתאמת טיפול אנטיקואגולנטי בחולים עם לקות כלייתית.

Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

גלה סרטונים נוספים