Name: המבדק Electroantennographic ככלי מיון עבור נדיפים צמחים מארח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: למד שיטת סינון מהירה של תרכובות נדיפות מצמחים מארחים באמצעות ניתוח אלקטרואנטנוגרפי ב-Amyelois transitella. שיטה זו מאפשרת זיהוי רכיבים פעילים לניהול מזיקים ביעילות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נערך על פי USDA-ARS קריס Project 5325-42000-037-00D ועם תוצאות CRADA 58-3K95-7-1198 ו TFCA 58-5325-8-419. המחברים מודים Suterra בתודה על המתנה של (Z, Z) -11,13-hexadecadienal, ב Higbee לדיונים פוריים, וג&#39; בייקר לקבלת סיוע טכני.

<ol><li>Bruce, T. J. A., Wadhams, L. J., Woodcock, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+host+location%3A+a+volatile+situation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Insect host location: a volatile situation.</a> Trends in Plant Sci. 10, 1360-1385 (2005).</li>
<li>Unsicker, S. B., Kunert, G., Gershenzon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+perfumes%3A+the+role+of+vegetative+volatiles+in+plant+defense+against+herbivores%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Protective perfumes: the role of vegetative volatiles in plant defense against herbivores.</a> Curr. Opin. Plant Biol. 12, 479-485 (2009).</li>
<li>Norin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semiochemicals+for+insect+pest+management%5BTitle%5D)+AND+%22Pure+Appl.+Chem%22%5BJournal%5D)">Semiochemicals for insect pest management.</a> Pure Appl. Chem. 79, 2129-2136 (2007).</li>
<li>Beck, J. J., Merrill, G. B., Higbee, B. S., Light, D. M., Gee, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+seasonal+study+of+the+volatile+production+of+almonds+%28Prunus+dulcis%29+var.+%27nonpareil%27+and+relationship+to+navel+orangeworm%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">In situ seasonal study of the volatile production of almonds (Prunus dulcis) var. 'nonpareil' and relationship to navel orangeworm.</a> J. Agric. Food Chem. 57, 3749-3753 (2009).</li>
<li>Beck, J. J., Higbee, B. S., Gee, W. S., Dragull, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+orchard+volatiles+from+California+almonds%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem.+Lett%22%5BJournal%5D)">Ambient orchard volatiles from California almonds.</a> Phytochem. Lett. 4, 199-202 (2011).</li>
<li>Coffelt, J. A., Vick, K. W., Sonnet, P. E., Doolittle, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+identification%2C+and+synthesis+of+a+female+sex+pheromone+of+the+navel+orangeworm%2C+Amyelois+transitella+%28Lepidoptera%3A+Pyralidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Isolation identification, and synthesis of a female sex pheromone of the navel orangeworm, Amyelois transitella (Lepidoptera: Pyralidae).</a> J. Chem. Ecol. 5, 955-933 (1979).</li>
<li>Leal, W. S., Parra-Pedrazzoli, A. L., Kaissling, K. -E., Morgan, T. I., Zalom, F. G., Pesak, D. J., Dundulis, E. A., Burks, C. S., Higbee, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+pheromone+chemistry+in+the+navel+orangeworm%3A+novel+sex+attractants+and+a+behavioral+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Unusual pheromone chemistry in the navel orangeworm: novel sex attractants and a behavioral antagonist.</a> Naturwissenschaften. 92, 139-146 (2005).</li>
<li>Kanno, H., Kuenen, L. P. S., Klingler, K. A., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attractiveness+of+a+four-component+pheromone+blend+to+male+navel+orangeworm+moths%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Attractiveness of a four-component pheromone blend to male navel orangeworm moths.</a> J. Chem. Ecol. 36, 584-591 (2010).</li>
<li>Takacs, S., Gries, G., Gries, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semiochemical-mediated+location+of+host+habitat+by+Apanteles+carpatus+%28Say%29+%28Hymenoptera%3A+Braconidae%29%2C+a+parasitoid+of+cloths+moth+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Semiochemical-mediated location of host habitat by Apanteles carpatus (Say) (Hymenoptera: Braconidae), a parasitoid of cloths moth larvae.</a> J. Chem. Ecol. 23, 459-472 (1997).</li>
<li>Karimifar, N., Gries, R., Khaskin, G., Gries, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+food+semiochemicals+attract+omnivorous+German+cockroaches%2C+Blattella+germanica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">General food semiochemicals attract omnivorous German cockroaches, Blattella germanica.</a> J. Agric. Food Chem. 59, 1330-1337 (2011).</li>
<li>Molyneux, R. J., Schieberle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+identification%3A+a+Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Compound identification: a Journal of Agricultural and Food Chemistry perspective.</a> J. Agric. Food Chem. 55, 4625-4629 (2007).</li>
<li>Marion-Poll, F., Thiery, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+EAG+responses+to+host-plant+volatiles+delivered+by+a+gas+chromatograph%5BTitle%5D)+AND+%22Entomol.+Exp.+Appl%22%5BJournal%5D)">Dynamics of EAG responses to host-plant volatiles delivered by a gas chromatograph.</a> Entomol. Exp. Appl. 80, 120-123 (1996).</li>
<li>Beck, J. J., Higbee, B. S., Merrill, G. B., Roitman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+volatile+emissions+from+undamaged+and+mechanically+damaged+almonds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sci.+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">Comparison of volatile emissions from undamaged and mechanically damaged almonds.</a> J. Sci. Food Agric. 88, 1363-1368 (2008).</li>
<li>Lucas, P., Renou, M., Tellier, F., Hammoud, A., Audemard, H., Descoins, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiology+and+field+activity+of+halogenated+analogs+of+%28E%2CE%29-8-10-dodecadien-1-ol%2C+the+main+pheromone+component+in+codling+moth+%28Cydia+pomonella+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiology and field activity of halogenated analogs of (E,E)-8-10-dodecadien-1-ol, the main pheromone component in codling moth (Cydia pomonella L.).</a> J. Chem. Ecol. 20, 489-503 (1994).</li>
<li>Rodriguez-Saona, C., Poland, T. M., Miller, J. R., Stelinski, L. L., Grant, G. G., de Groot, P., Buchan, L., MacDonald, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+electrophysiological+responses+of+the+emerald+ash+borer%2C+Agrilus+planipennis%2C+to+induced+volatiles+of+Manchurian+ash%2C+Fraxinus+mandshurica%5BTitle%5D)+AND+%22Chemoecology%22%5BJournal%5D)">Behavioral and electrophysiological responses of the emerald ash borer, Agrilus planipennis, to induced volatiles of Manchurian ash, Fraxinus mandshurica.</a> Chemoecology. 16, 75-86 (2006).</li>
<li>Burks, C. S., Brandl, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+abundance+of+navel+orangeworm+%28Leipidoptera%3A+Pyralidae%29+in+figs+and+effect+of+peripheral+aerosol+dispensers+on+sexual+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Seasonal abundance of navel orangeworm (Leipidoptera: Pyralidae) in figs and effect of peripheral aerosol dispensers on sexual communication.</a> J. Insect Sci. 4, 1-8 (2004).</li>
</ol>

מחבר המחקר יש שיתוף פעולה קיים הסכם פיתוח עם חברת פרמאונט חקלאות, חברה עם קשרים Suterra LLC.

השימוש בהקלטות electroantennogram כמו המבדק לקבוע התגובות chemoreception של חרק היעד נפוץ למדי, מחקרים רבים ניצול EAG כגלאי של שפכים מן הכרומתוגרמה גז (GC-EAD) ניתן למצוא בספרות. 9,10 שיטת הדגימה תספק סינון מהיר של כמויות מקבילות של מרכיבים נדיפים עם משוכפלים גבוהות המשימה בטוחים היענות יחסית. תוכנית AutoSpike בתוכנה Syntech היא תוכנית טובה נדיפים ההקרנה שכן היא מסוגלת לספק הסטייה המרבית משרעת האות אנטנות (איורים 1-3), אשר אנו מציגים כאן את הערך &quot;ה...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Acetophenone </td><td> אלפא-Aesar </td><td> A12727 </td><td> בקרה חיובית נקבה </td></tr><tr><td> (Z, Z) -11,13-Hexadecadienal </td><td> Suterra </td><td></td><td> בקרה חיובית זכר </td></tr><tr><td> α-Humulene </td><td> אולדריץ </td><td> 53675 </td><td> Sesquiterpene </td></tr><tr><td> 2-Undecanone </td><td> אולדריץ </td><td> U1303 </td><td> חומצת שומן הנגזרת </td></tr><tr><td> 2-Phenylethanol </td><td> אולדריץ </td><td> 77861 </td><td> Benzenoid </td></tr><tr><td> פנטן </td><td> EMD </td><td> PX0167-1 </td><td> ממס </td></tr><tr><td> 4-Channel רכישת בקר </td><td> Syntech </td><td> אניDAC-4 </td><td></td></tr><tr><td> EAG בדיקה, קדם מגבר </td><td> Syntech </td><td> סוג PRG-2 </td><td></td></tr><tr><td> בעל אנטנה </td><td> Syntech </td><td> עבור PRG-2 </td><td> מזלג האלקטרודה </td></tr><tr><td> גירוי בקר </td><td> Syntech </td><td> CS-55 </td><td> זרימת האוויר שאיפות </td></tr><tr><td> אלקטרודה ספקטרה ג&#39;ל </td><td> פרקר </td><td> 12-02 </td><td></td></tr><tr><td> המבדק דיסקים </td><td> Whatman </td><td> 2017-006 </td><td> 6 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> פסטר pipets </td><td> VWR </td><td> 14673-010 </td><td> 5 ¾ &quot;(14.6 ס&quot;מ) </td></tr><tr><td> Parafilm M </td><td> Bemis </td><td> PM-992 </td><td></td></tr></tbody></table>

המבדק electroantennographic ככלי מיון עבור נדיפים צמחים מארח

Electroantennographic Bioassay as a Screening Tool for Host Plant Volatiles

נדיפים צמחים תפקיד חשוב במפעל, חרקים אינטראקציות. חרקים אוכלי עשב להשתמש נדיפים צמחים, המכונה kairomones, לאתר את הצמח הפונדקאי שלהם. 1,2 כאשר הצמח הפונדקאי היא האכלה חשוב אגרונומית מצרך נזק על ידי חרקים מזיקים יכולים לגרום הפסדים כלכליים קשים על המגדלים. בהתאם לכך, kairomones יכול לשמש משיכה לפתות או לבלבל את החרקים, ולכן להציע חלופה ידידותית לסביבה חומרי הדברה עבור חרקים. 3 למרבה הצער, צמחים יכולים לפלוט כמה נדיפים מספר עצום עם יצירות ויחסים שונים של פליטות תלויים בפנולוגיה של הנכס או השעה ביום. זה הופך את זיהוי המרכיבים בעלי הפעילות הביולוגית או תערובות של מרכיבים נדיפים תהליך מפרך. כדי לזהות את המרכיבים של הצמח ביו פליטות המארחות נדיפים נשתמש במעבדה מבוסס המבדק ההקרנה electroantennography (EAG). EAG הוא כלי יעיל להערכת recorד electrophysiologically התגובות חוש הריח של החרק דרך קולטנים מחושים שלהם. תהליך המיון EAG יכול לעזור להפחית את מספר נדיפים שנבדקו לזהות רכיבים ביו מבטיחות. עם זאת, bioassays EAG רק לספק מידע אודות הפעלת הקולטנים. זה אינו מספק מידע על סוג של התנהגות חרקים המתחם מעורר, שיכול להיות סוג, מושך ודוחה או אחר של תגובה התנהגותית. נדיפים לעורר תגובה משמעותית על ידי EAG, ביחס לשליטה חיובית מתאימה, נלקחים בדרך כלל על בדיקות נוספות של תגובות התנהגותיות של חרקים מזיקים. מערך הניסוי הציג יפרט את המתודולוגיה מועסקים למסך שקדים מבוססי צמחים מארחים נדיפים 4.5 ידי מדידת התגובות מחושים אלקטרו של הדברה מבוגר חרק הטבור orangeworm (Amyelois transitella) לרכיבים בודדים תערובות פשוטות של רכיבים באמצעות EAG המבדק. השיטה משתמשת 2 לשעבראנטנות cised ממוקם על פני בעל &quot;מזלג&quot; האלקטרודה. פרוטוקול הפגינו כאן מציג מהירה, תפוקה גבוהה שיטה סטנדרטית נדיפים ההקרנה. כל תנודתי הוא בסכום קבוע מראש, קבוע על מנת לתקנן את רמת הגירוי ובכך לאפשר תגובות מחושים כדי להצביע על chemoreceptivity יחסית. הביקורת השלילית עוזר לחסל את התגובה אלקטרו לכוח הן ממס מכני שיורית של עלים. הביקורת החיובית (ב acetophenone זה למשל) הוא תרכובת אחת אשר עוררה תגובה עקבית זכר ונקבה עש orangeworm (NOW) הטבור. תקן semiochemical נוסף המספק מענה עקבי משמש ללימודי המבדק עם עש עכשיו הוא זכר (Z, Z) -11,13-hexdecadienal, מרכיב אלדהיד מ פרומון הנקבה בייצור מין. 6-8

השיטה במהירות המארחות נדיפים מסך צמחים ידי מדידת התגובה של אלקטרו orangeworm הטבור מבוגר (<em&gt; Amyelois transitella</em&gt;) אנטנות לרכיבים בודדים תערובות באמצעות ניתוח electroantennographic באה לידי ביטוי.

המבדק Electroantennographic ככלי מיון עבור נדיפים צמחים מארח

תרכובות נדיפות של צמחים ממלאות תפקיד חשוב באינטראקציות בין צמחים לחרקים. חרקים צמחוניים משתמשים בתרכובות נדיפות של צמחים, הידועות כקאירומונים (kairomones), כדי לאתר את המארח שלהם...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לסרוק במהירות מספר רב של חומרים נדיפים מצמחי מאכס כדי לבדוק פעילות ביולוגית פוטנציאלית. דבר זה מושג תחילה על ידי איסוף וניתוח של החומרים הנדיפים הרלוונטיים מצמחי המאכס באמצעות GCMS. לאחר מכן, הרכיבים הכימיים מזוהים ומאומתים.השלב השלישי הוא סריקת הרכיבים הבודדים במספר חזרות מספיק לבדיקת פעילות ביולוגית באמצעות אנליזה אלקטרוגרפית. השלב הסופי הוא ניסוח והערכה של תערובות מרכיבים פעילים. בסופו של דבר, התוצאות יכולות לספק סדרה מקוצרת של רכיבים או תערובת רכיבים המוכנה להמשך חקירה במחקרים התנהגותיים עם החרק הרלוונטי.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון מחקרים התנהגותיים הגוזלים זמן רב, הוא שסריקה מהירה באמצעות אנליזה אלקטרוגרפית מפחיתה משמעותית את מספר התרכובות שיהיה צורך לבחון במחקרים אחרים להדגמת פרוצדורה. האם MR Wage הוא טכנאי במעבדה שלי? ברגע שהחומרים הנדיפים הרלוונטיים זוהו באמצעות כרומטוגרפיית גז ומספקטרומטריית מסות, ניתן לבצע תחילה אנליזת אלקטרו-אייקונוגרפיה או EAG עבור כל חומר נדיף זמין.עם זאת, יש להכין את החומרים הנדיפים הזמינים. הכין תמיסה של כל חומר נדיף ב-pentane בריכוז של 5 mg/mL במיכל שניתן לאטום היטב ולאחסן בטמפרטורה של 4 °C. לאחר מכן, הכן את פיפטות הגירוי.סמנו 10 פיפטות פסטוריות עבור כל חומר נדיף ועטפו את הקצוות שלהן בחתיכה קטנה של Parafilm. 10 פיפטות מספיקות להעברת החומר הנדיף לכל מין בסינון מקדמי עם מספר חזרות נמוך. כעת, סדרו את שאר סט חמשת הפיפטות במעמד פיפטות והכניסו דיסקית לבדיקה ביולוגית לקצה הפתוח של כל פיפטה.קפלו בעדינות דיסקית בעזרת פינצטה והניחו אותה באופן חלקי בקצה הרחב של הפ pipette כך ששני עד שלושה מילימטרים מהדיסקית יהיו חשופים. בעזרת pipetter או מזרק, טפטפו 10 µL של תמיסה נדיפה על כל דיסקית. חשוב ביותר לחשב, לנסח ולהכין את התמיסות בצורה מדויקת כדי להבטיח חזרות עקביות.המתינו שתי דקות ולאחר מכן דחפו את הדיסקים באופן מלא אל תוך הפ pipette שלהם. לאחר הטעינה, אטמו מיד כל pipette באמצעות param. חזרו על הכנת ה-pipette עבור מספר החזרות הרצוי.באמצעות אותו פרוטוקול, הכינו בקרת שלילית המכילה פנטנים בלבד ובקרות חיוביות, במקרה זה אצטופנון והורמון מיני. כעת המשיכו להכנת קרני התחושה של החרק.בניסוי זה, קדם-מגבר מעביר את האות מאלקטרודת מזלג למכשיר רכישת ה-EAG. יש להגדיר את התוכנה המצורפת למכשיר ה-EAG באופן מתאים. הגדירו את ההגדרות על ידי קביעת קצב הדגימה ל-106.7 תחילה.הגדירו את מתג ה-rectify למצב know והגדירו את המסנן לטווח של 0 עד 42 hertz תחת לשונית ה-filter. הגדירו את מסנן ה-EAG למצב on והגדירו את ה-low cutoff ל-0.1 hertz. לאחר מכן, שמרו את ההגדרות לקובץ קונפיגורציה לשימוש עתידי.הפעלת התוכנה היא פשוטה כפתיחת קובץ פרויקט חדש, שמירתו תחת שם ספציפי והמשך להקלטה. סמל המשולש האדום מתחיל את תהליך ההקלטה ונשאר פעיל למשך זמן שנקבע מראש עבור כל נשיפה בודדת. כאשר כל הנשיפות לקרניות הושלמו, סמל ה-X השחור עוצר את ההקלטה כדי להקל על קריאה מדויקת של תגובות ה-EAG.ניתן להדביק סרגל קטן על מסך המחשב בקו הבסיס של האות. התגובה נמדדת במילימטרים ולאחר מכן מומרת לאמפליטודה במיקרו-וולט. במידת הצורך, ניתן להשמיע או להריץ שוב את ההקלטות לצורך הערכה נוספת.בדוגמה זו, נעשה שימוש בנמליות תפוזים (naval orange) זכרים ובנקבות שהזדווגו, בני שלושה עד ארבעה ימים. עם זאת, ניתן להתאים פרוטוקול זה לחרקים אחרים. העבר כל חרק למכל פלסטיק קטן עם מכסה.ביום הניתוח, רגע לפני הבדיקה הביולוגית, הכניסו את החרק אל הפתח הגדול של טיפ פפיטה, שפתחו הקטן מספיק רק כדי להכניס את ראשו. לאחר מכן, באמצעות טיפ פפיטה קטן יותר, דחפו בזהירות את החרק לכיוון הפתח הקטן עד שראשו יהיה חשוף תחת סטריאוסקופ. ודאו שהמחושים מקובעים בתוך צינור ההחזקה ושבסיס המחושים חשוף לצורך כריתה.בשלב הבא, מקמו את מחזיק המזלג, שעליו שכבה דקה של ג'ל אלקטרודות, בסמיכות רבה לאנטנה. בעזרת מספרי מיקרו, הפרדו ולאחר מכן חתכו את שתי האנטנות, והפעילו טיימר כדי לתעד את הזמן שעבר בין אירוע זה לבין הגרייה הבאה. בעזרת כלי בעל קצה סיבי עם מעט ג'ל בקצהו, הרימו אנטנה אחת והניחו אותה על המזלג. ודאו שבסיס האנטנה מונח על אלקטרודת ההארקה הניטרלית (שאינה אדומה) של המזלג.בצעו את הפעולה באופן דומה עבור האנטנה השנייה. הניחו את בסיס האנטנה באותו צד של המזלג, במרחק של שני עד שלושה מילימטרים מהאנטנה הממוקמת. קצצו את קצות האנטנה לפי הצורך.מרחו ג'ל אלקטרודות על האלקטרודה בעזרת מברשת וודאו שבסיסן וקצותיהן טבולים בג'ל האלקטרודות, כך שלא יישארו בועות בתוך הג'ל. הימנעו מכיסוי החלק המרכזי של האנטנה בג'ל כדי למקסם את שטח הפנים של האנטנה החשוף לנפיחת החומרים הנדיפים. לאחר שההכנה קובעה כראוי בג'ל, חברו את המזלג למגבר המקדים של הפרובה.כעת יש להזרים אוויר לח על גבי הדגימה כדי לשמור על חיוניותה של הכנה של מחוש. 10 דקות לאחר זמן הכריתה, יש להמשיך בהחלת הגירויים הראשונים. סדר הפעולות לגירוי דגימה מתחיל ומסתיים בביקורת חיובית, וביניהם גירוי ברצף אקראי של תרכובות ללא תרכובות זהות ברצף, ועם ביקורת שלילית אחת לפחות; מספר התרכובות המועברות למחוש משתנה בהתאם למין.הכנה של עש תפוזים ימי (naval orange worm moth) יכולה להישאר פעילה במשך למעלה מ-30 דקות, מה שמאפשר ניתוח קל של עד 10 חומרים נדיפים במספר חזרות נמוך. אותו עיקרון של הובלת דגימות חל גם על סריקות עוקבות של תערובות תרכובות שנמצאו כמעוררות תגובות בסריקה הראשונית. יש להכין את פיפט הגירויים הראשונה 30 שניות לפני יישום נשיפת האוויר; יש להסיר את האטם של הפיפט ולמקם אותה במחזיק כך שזרימת האוויר תופנה למרחק של שני עד שלושה מילימטרים מהמחושים, 10 דקות לאחר חיתוך המחוש.הנח את נפיחת הגירוי הראשונה במשך אחת עד שתיים שניות בקצב של 300 milliliters per minute. כעת, החלף במהירות את הפיפטה כך שהגירוי השני יונח דקה אחת לאחר הגירוי הראשון. שמירה על עקביות בין הדגימות תמזער את השונות בכמויות החומרים הנדיפים שננפחו בפועל.לאחר מתן נפיחת בקרת החיובי האחרונה, הסר את האנטנה ונקה את המזלג. השתמש במטלית ספוגה באתנול והשאר אותה להתייבש לחלוטין לפני השימוש הבא. כדי להגדיל את תפוקת הבדיקות, על עוזר להכין את האנטנה הבאה עם מזלגים נקיים 10 דקות לפני סיום ההכנות הקודמות.רצף הבדיקה: למתודה זו נדרש יותר מפיסוק אחד. לאחר כל ניסוי, יש להקרין את פרפרי המבחן בסביבת קרח יבש ולבצע נתיחה לפרפרים הנקבות כדי לבדוק את מצב ההזדווגות שלהם. יש להניח שהזכרים ששהו במקום עשויים היו להזדווג. הכנות לאנטנות של תולעת התפוז הניב (naval orange worm) עוררו באמצעות נשיפות של שני שניות, והקלטות של עשר שניות בוצעו בחלון של עשר שניות על סולם של 5 mV.סטייה שלילית הייתה התגובה האופיינית. עם זאת, הערכים המוחלטים נרשמו. כל הדגימות מנקבי נקבות שהראו תגובה חלשה לבקרת החיובי נפסלו.התגובה הממוצעת של שאר הדגימות הייתה 2,600 microvolts. באופן דומה, התגובה הממוצעת של הזכרים לבקרת ה-pH המינית הייתה בדרך כלל 3000 microvolts. לפיכך, דגימות עם תגובה נחותה מהסטנדרט נפסלו, ונתונים מאנטנות שהראו ירידה בתגובה במהלך הניסוי נפסלו אף הם.פירוק התרחש אם תגובת ה-Anton לנשיפה של בקרת החיובי האחרונה הייתה נמוכה מ-75% מהנשיפה הראשונה של בקרת ה-pre-con, או נמוכה מהנשיפה השנייה של בקרת ה-pre-con עבור שאר ההרצות הניסוייות. ערכי התגובה נותחו על ידי לקיחת המדידות הגולמיות מכל הרצה והחסרת תגובת בקרת השלילה של אותה הרצה מכל ערך באותה הרצה. לאחר מכן, כל בקרות החיובי בכל הרצה חושבו כממוצע ותוקנו ל-1000 Microvolts, תוך רישום יחס התיקון ל-1000 microvolts עבור כל הרצה.לאחר מכן, הערכים עבור התרכובות שנבחנו הוכפלו ביחס התיקון של הביקורת החיובית. לבסוף, התגובה המתוקנת הממוצעת של כל תרכובת שנבחנה על פני כל הרצות הניסוי הושוותה כדי להעריך את מידת התאמתה של כל תרכובת להמשך חקירה. זכרו כי עבודה עם כימיקלים עלולה להיות מסוכנת ביותר ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות מתאימים.

electroantennographic-bioassay-as-screening-tool-for-host-plant

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מערכות חוש הריח חרקים לספק הזדמנויות ייחודיות עבור odorant-Induced התגובות הקלטה בצורות של electroantennograms (EAG) והקלטות sensillum יחיד (SSR), אשר סיכם תגובות מכל קולטן נוירונים odorant (ORNs) הממוקם על האנטנה ועל מאלה שוכנו הפרט sensilla, בהתאמה.

מדידות אלקטרו ממערכת עש חוש הריח

רמזי ריח לתווך התנהגויות רבות ושונות בחרקים, ולעתים קרובות הם תערובות מורכבות מורכבות מעשרות עד מאה תרכובות נדיפות. שימוש בגז כרומטוגרפיה עם הקלטה רבה ערוצית באונת מחושי החרקים, אנו מתארים שיטה לזיהוי של תרכובות ביו.

זיהוי נדיפים חוש ריח באמצעות קלטות כרומטוגרפיה-Multi-יחידת גז (GCMR) באונת מחושי החרקים

בסרטון זה אנו מדגימים בדיקת סקר לזיהוי היעילות של נמטידים של מולקולות קטנות נגד נמטודות. Nematicides נחשבים יעילים אם הם גורמים לירידה במספר הנמטודות הניידות במדגם לאחר החשיפה.

בדיקת סינון של מולקולות קטנות Nematicides: שיטת תפוקה בינונית לסינון נמטיקוטים פוטנציאליים נגד דיפסאצ'י דיפסאצ'י

Olfactometer אנכי, T-מבוך מתואר לassaying התגובה התנהגותית של פרוקי רגליים. Olfactometer מאפשר הנסיין למדוד בחירות שבוצעו על ידי נבדקים, כאשר נתון שני שדות ריח פוטנציאליים. שניהם המשיכה ולדחייה מodorants ניתן למדוד במכשיר זה.

Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

אנו מתארים פרוטוקול לשימוש באנטנות חרקים בצורה של אלקטרואנטנוגרמות (EAGs) על רובוטים אוטונומיים. העיצוב הניסיוני שלנו מאפשר הקלטות יציבות תוך יום ופותר כתמי ריח בודדים עד 10 הרץ. היעילות של חיישני EAG לחיפושי ריח מודגמת בהנעת רובוט לעבר מקור ריח.

באמצעות חיישני Electroantennogram חרקים על אוטונומי רובוטים לחיפושי חוש הריח

פשפשי מיטה מסתמכים על נוירונים של קולטני ריח השוכנים ברגישות הריח של האנטנות שלהם כדי לזהות סמיוכימיקלים בסביבה. תוך שימוש בהקלטת סנסילום יחידה, אנו מדגימים שיטה להערכת תגובת פשפש המיטה לסמיוכימיקלים ולחקור את תהליך הקידוד הכרוך בכך.

שימוש יחיד Sensillum הקלטה לזיהוי תגובות חוש הריח Neuron של באגס במיטה לSemiochemicals

צילום-אטרקציה bioassay ארנאס משמשים כדי לקבוע את צבעי אור אופטימלי כדי למקסם את האטרקציה חרקים; עם זאת bioassays ושיטות הם ספציפיים כדי להתמקד בהתנהגויות חרקים, בתי גידול. ציוד להתאמה אישית ושינויים מוסברים עבור חרקים ליליים, ההשתנות היומית, יבשתי או אווירי.

המרכיבים העיקריים של צילום Bioassay משיכה עבור מחקרים חרקים או תוכניות ניטור

כאן, אנו מתארים את הבנייה ואת השימוש במנהרת רוח עבור ריח מתווכת מבחני התנהגותי עם חרקים. העיצוב מנהרת רוח מקלה על שחרורו של ריח מקורות באמצעות מספר שיטות, עם וללא גירויים חזותיים. מנהרת רוח ניסויים הם אמצעי חשוב לזיהוי כימיקלים נדיפים פעיל בהתנהגותו.

במנהרת רוח עבור ריח מתווכת מבחני התנהגותי חרקים

המאמר הנוכחי מפרט פרוטוקול שלב אחר שלב לאלקטרואנטנוגרמות מוצלחות ובעלות רעש נמוך במספר סוגים של יתושים, כולל נקבות וזכרים כאחד.

מדריך שלב אחר שלב לאלקטרואנטנוגרפיה של יתושים

מחקר זה מציג פרוטוקולים ניסיוניים עבור מזל"ט גילוי ריח ביו-היברידי המבוסס על אנטנות משי. הפעלת מכשיר אלקטרואנטנוגרם ניסיוני עם אנטנות משי מוצגת, בנוסף למבנה של מזל"ט ביו-היברידי המיועד לוקליזציה של מקור ריח באמצעות אלגוריתם נחשול הספירלה.

רחפן גילוי ריח ביו-היברידי מבוסס אלקטרואנטנוגרפיה באמצעות אנטנות Silkmoth עבור לוקליזציה של מקור ריח

פרוטוקול זה קובע שיטות לחילוץ וכימות תגובות לפרומון המין הנדיף ב- C. elegans, ומספק כלים לחקר תקשורת כימית ומסלול ניווט.

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

למד שיטת סינון מהירה של תרכובות נדיפות מצמחים מארחים באמצעות ניתוח אלקטרואנטנוגרפי ב-Amyelois transitella. שיטה זו מאפשרת זיהוי רכיבים פעילים לניהול מזיקים ביעילות.

המבדק Electroantennographic ככלי מיון עבור נדיפים צמחים מארח

גלה סרטונים נוספים