Name: Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: למדו שיטת אובריאקטומיה והחלפת הורמונים בחולדות ועכברים לשליטה בריכוזי אסטרדיול בדם. השיטה משתמשת בכמוסות סילסטיות ותערובת נוטלה לשמירה על רמות הורמונליות יציבות לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר מומן על ידי אוניברסיטת Linköping המועצה של מחוז Östergötland.

1. Ovariectomy דרך כביש הגבי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את בעל החיים, למשל באמצעות 1.5% isoflurane (4% לזירוז) ב תחמוצת החמצן / החנקן 30% / 70% תערובת. מניחים את חיה במצב נוטה על צלחת חימום מחובר מדחום רקטלי. חשוב יש שכבה דקה של בידוד בין החיה לבין צלחת, וכי במערכת ההזנה גב המדחום שומר על טמפרטורת הגוף בתוך 37 ± 0.5 ° C. החל ג&#39;ל להגנה העין ולנהל 5 מ&quot;ג Rimadyl / ק&quot;ג משקל גוף מדולל מלוחים מתחת לעור על ההיבט לרוחב הצוואר של החיה להקלה על הכאב לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבי 4 * 4 ס&quot;מ (3 * 3 ס&quot;מ עבור עכברים) באזור cephally מפסגת הכסל. לשטוף את האזור ביסודיות עם מגולח עבור Jodopax למשל לפני המכסה את חיה עם 4 * 4 ס&quot;מ צמצם גיליון הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו האמצע 2-3 ס&quot;מ בוטה לנתח את העור fascia הבסיסית. אחד ס&quot;מ לרוחב של קו האמצע, לעשות עוד thro החתךאיכס fascia. חד וחלק לנתח רוחבית תחת fascia זאת באופן שטחי ככל האפשר להגיע עד חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות פינצטה, לתפוס את רקמת השומן המקיף את השחלה בחלל הבטן בעדינות למשוך אותו החוצה. זהה את השחלה ו ולקשור את קרני הרחם וכלי 0.5-1 ס&quot;מ proximally של מבנה זה. לחתוך את השחלה ורקמת השומן ligated והחזרתי את הרקמה שנותרה לתוך חלל הבטן. לעשות עוד חתך ב fascia הנגדי וחזור על התהליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגור את הפצעים, רצוי באמצעות תפר monofilament, ולתת חיים ער מן ההרדמה. מניחים את בעל החיים בכלוב מחוממת (25-27 מעלות צלזיוס) במשך לפחות 2 שעות לאחר הניתוח. בעלי החיים צריכים להיות מאוחסנים בנפרד בימים הראשונים לאחר הניתוח. זה מרכזי כי הוא ניקה את הכלוב לעתים קרובות / להחליף בשלב ההתאוששות. עשרים וארבע שעות לאחר הניתוח, מזריקים את החיות מתחת לעור עם עוד משקל גוף 5 Rimadyl / ק&quot;ג מ&quot;ג מדוללמי מלח. </li></ol> 2. תת עורית מינהל 17β-אסטרדיול דרך קפסולות Silastic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים היטב את הכמות הרצויה של 17β-אסטרדיול בשמן שומשום. עבור ריכוזים פיזיולוגיים אצל חולדות ועכברים, אנו ממליצים על 180 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​ו - 18-36 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​בהתאמה. כמוסות פלסבו מלאים שמן שומשום טהור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך 3 ס&quot;מ (2 ס&quot;מ על עכברים) באורכים של צינורות silastic ו -5 מ&quot;מ (3 מ&quot;מ על עכברים) אורכי מקלות המוליך עץ עבור חיבור. באמצעות מלקחיים, לסחוט 1 תקע עץ לתוך הקפסולה silastic לפני הזרקת הפתרון שמן 17β-estradiol/sesame למלא את אורכו. בעדינות מכסה את הקפסולה silastic בסופו של דבר לפתוח עם חבר אחר עץ (את המצתים אמורים להישאר באופן קבוע קפסולה). דגירה כמוסות בתמיסה 17β-אסטרדיול הנותרים לילה לפני ההשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתלת הקפסולה ניתן לבצע במהלך ההרדמה בשימוש ovariectomy בחולדות. עבור מייללספירה, עם זאת, תקופה של 14 יום לאחר ההתאוששות ovariectomy מומלץ כדי למזער את הסיכון של הקפסולה בולטות דרך העור שביר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ההכנות כירורגית כמו 1.1, או לאחר סגירת החתך ovariectomy, להתגלח ולשטוף 2 * 2 ס&quot;מ באזור בהיבט הגבי של הצוואר של בעל החיים. לעשות חתך 1 ס&quot;מ בוטה לנתח בכיס תת עורית caudolaterally, עם שטח נרחב של הקפסולה. נגב את הקפסולה silastic (שעד נקודת זמן זו כבר מודגרות בפתרון 17β-אסטרדיול) ובעדינות להתקין אותו דרך חתך, אשר נסגר לאחר מכן על ידי תפר. זה מרכזי על מנת לוודא כי זנים הקפסולה העור מעט ככל האפשר, בעיקר באזור קרוב הפצע. מייצור של כמוסות עד ההשתלה, חשוב כי זיהום הוא התחמק. </li></ol> 3. מינהל Peroral של 17β-אסטרדיול דרך נוטלה אגוזים, קרם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפזר ביסודיות 17β-אסטרדיול בשמן שומשום, ואז לערבב עם שמן שומשום הנוטלה. אנו ממליצים כי כל חלק מכיל 28 מיקרוגרם ביום 17β-אסטרדיול, 5 שמן שומשום μL ו 1 הנוטלה גרם לכל קילוגרם משקל גוף לחולדות ו 1.12 מיקרוגרם 17β-אסטרדיול, 0.312 שמן שומשום μL ו 60 מ&quot;ג הנוטלה על העכבר 30 גר &#39;כל אחד. פלצבו אגוז קרם מוכן זהה רק בלי 17β-אסטרדיול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכשיר את בעלי החיים לאכול הורמון ללא קרם אגוזים במשך חמישה ימים לפני הניסוי. הראשונים שלושה ימים של אימונים, החולדות בצורה אופטימלית צריך לאמן בקבוצות (בערך 0.5 גרם ל 2-5 הנוטלה בעלי חיים), בכלובים מוצאם. בימים רביעי וחמישי של אימונים, החיות לשים בכלובים נפרדים לפני שקיבל את החלק היומי לדמות את המצב ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הניסוי, החיות לשים בכלובים נפרדים לכל אירוע האכלה, לאחר מכן את החלק הנוטלה מוגשת על אריחי קרמיקה קטנים. אם האימונים שבוצעה לעיל, oניסיון ur היא כי יותר מ 95% של חולדות ועכברים לקבל אגוז, שמנת, ופעם מורגל לחלוטין, רוב בעלי החיים צורכים אותו תוך שניות. </li></ol> 4. נציג תוצאות פיזיולוגיים בסרום 17β-אסטרדיול ריכוזי, אשר השיטות הקיימות שמטרתם לשחזר, הם כ 5-140 pg / mL עבור חולדות 5-35 pg / mL על עכברים 4,6. את הכמוסות תת עורי silastic בהתאם להוראות הנ&quot;ל, כאשר מנוהל ל -300 גר &#39;נשים Sprague-Dawley חולדות, לייצר לאט יורד 17β-אסטרדיול ריכוז בסרום של היום סביב 40 ​​pg / mL יום pg / mL 2-10 35. עם זאת, מיד לאחר מתן, לשיא הריכוז בדם סביב 1000 pg / mL ניתן לצפות, נופל לטווח הפיזיולוגי בתוך 8 שעות (איור 1 א) 4,5. את הכמוסות silastic עבור עכברים שתוארו לעיל עם 17β-estradiol/mL 36 מיקרוגרם, כאשר מנוהל עד 25 גרם נקבה C57BL / 6 עכברים, להפוך קונצרט כלשהו סרוםentrations כי לאט לאט להפחית מן PG כ 90 / יום מ&quot;ל 2-25 pg / mL 35 יום. זה קדמו כנראה לשיא דומה נמצאה אצל חולדות, אם כי זה לא נחקר (איור 1 ב) 6. שיטת הנוטלה peroral עם מינונים שתוארו לעיל, כאשר מנוהל ל -300 גר &#39;נשים Sprague-Dawley חולדות, הופך רמות פיזיולוגיות של 17β-אסטרדיול עם תנודות יומיות בין 10-70 pg / mL (איור 2 א) 4. על עכברים באמצעות המינון לעיל, רמות יומיות משתנות בין כ 20 ו - 120 pg / mL (איור 2 ב) 6. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4013/4013fig1.jpg" /> <st<html> Rong.&gt; איור 1 גרפים המציגים מסוגננים 17β-אסטרדיול ריכוזים של חולדות (, n = 10 בזמן נקודות עד 24 שעות, n = 15 ב מאוחרים יותר זמן נקודות) 4.5 ו עכברים (B, n = 10) 6 לאחר ההשתלה הקפסולה. את הכמוסות silastic לייצר שיא ראשונית קצרה של ריכוזים בסרום עד 1000 pg / mL, אבל ירידה תוך מספר שעות לרמות נמוכות 100 pg / mL. בשבועות הקרובים 4-5, קפסולות התשואה יציבה, למרות יורדת בהתמדה, ריכוז בסרום. באזורים מוצלים מתאימות 17β-אסטרדיול בסרום ריכוזים פיזיולוגיים של חולדות נקבות ועכברים שלמים בהתאמה. גם אם לא הוכיח ראייה הגרפים, יש בין הפרט השונות של 17β-אסטרדיול ריכוזי, עיבוד מקדמי השונות בין 27% ל 183 בחולדות מ 28 ל 115% בעכברים עם שיטת הקפסולה silastic (ממוצע נמוך מאוד לעתים קרובות ליצור ריכוז גבוה של מקדמי השונות). iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg &quot;/&gt; איור 2 גרפים המציגים מסוגננים 17β-אסטרדיול ריכוזים של חולדות (, n = 15). 4 ו עכברים (B, n = 10) 6 כתוצאה של הממשל הורמון מדי יום הנוטלה. שיטת הנוטלה peroral הופך פסגות היומי, אך לא בהרבה גבוה ככל המיוצר על ידי תת עורית או בשיטות תוך ורידי. זה מחקה את פרמקוקינטיקה של טיפול הורמונלי חלופי האדם, והטיפול peroral יכול להמשיך כל עוד הצורך, גם אם בדוגמה לעיל רק להציג ראשונית 96 שעות. באזורים מוצלים מתאימות 17β-אסטרדיול בסרום ריכוזים פיזיולוגיים של חולדות נקבות ועכברים שלמים בהתאמה. גם אם לא הוכיח ראייה הגרפים, יש בין הפרט השונות של 17β-אסטרדיול ריכוזי, עיבוד מקדמי וריאציה מ% 40-132 בחולדות מ 13 ל 219% בעכברים עם שיטה את הנוטלה (ריכוזים ממוצעים נמוכים מאוד לעתים קרובות יוצרים גבוההמקדמי השונות).

<ol><li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose-related+neuroprotective+versus+neurodamaging+effects+of+estrogens+in+rat+cerebral+ischemia%3A+a+systematic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Dose-related neuroprotective versus neurodamaging effects of estrogens in rat cerebral ischemia: a systematic analysis.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 29, 1359-1372 (2009).</li>
<li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Holm, L., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+for+administering+17beta-estradiol+to+ovariectomized+rats+result+in+opposite+effects+on+ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Different methods for administering 17beta-estradiol to ovariectomized rats result in opposite effects on ischemic brain damage.</a> BMC Neurosci. 11, 1471-2202 (2010).</li>
<li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormesis+and+Female+Sex+Hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Hormesis and Female Sex Hormones.</a> Pharmaceuticals. 4, 15(2011).</li>
<li>Isaksson, I. M., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+17beta-estradiol+administration+to+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+journal+of+clinical+and+laboratory+investigation%22%5BJournal%5D)">Methods for 17beta-estradiol administration to rats.</a> Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation. , (2011).</li>
<li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Order+of+magnitude+differences+between+methods+for+maintaining+physiological+17beta-oestradiol+concentrations+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scand.+J.+Clin.+Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Order of magnitude differences between methods for maintaining physiological 17beta-oestradiol concentrations in ovariectomized rats.</a> Scand. J. Clin. Lab Invest. 68, 814-822 (2008).</li>
<li>Ingberg, E., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+long-term+17beta-estradiol+administration+to+mice%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+comparative+endocrinology%22%5BJournal%5D)">Methods for long-term 17beta-estradiol administration to mice.</a> General and comparative endocrinology. , (2011).</li>
<li>Kalliokoski, O., Jacobsen, K. R., Hau, J., Abelson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+concentrations+of+buprenorphine+after+oral+and+parenteral+administration+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Serum concentrations of buprenorphine after oral and parenteral administration in male mice.</a> Vet. J. 187, 251-254 (2011).</li>
<li>Simpkins, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogens+may+reduce+mortality+and+ischemic+damage+caused+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+female+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Estrogens may reduce mortality and ischemic damage caused by middle cerebral artery occlusion in the female rat.</a> J. Neurosurg. 87, 724-730 (1997).</li>
<li>Wise, P. M., Dubal, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+protects+against+ischemic+brain+injury+in+middle-aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Estradiol protects against ischemic brain injury in middle-aged rats.</a> Biol. Reprod. 63, 982-985 (2000).</li>
<li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 281, 1531-1539 (2001).</li>
<li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 25, 414-420 (2005).</li>
<li>Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+17beta-estradiol+upon+stroke+damage+in+stroke+prone+and+normotensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Differential effects of 17beta-estradiol upon stroke damage in stroke prone and normotensive rats.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 24, 298-304 (2004).</li>
<li>Yong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+potentiates+ischemia-reperfusion+injury+in+diabetic+ovariectomized+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol potentiates ischemia-reperfusion injury in diabetic ovariectomized female rats.</a> Brain Res. 1054, 192-199 (2005).</li>
<li>Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+increases+brain+lesions+in+the+cortex+and+lateral+striatum+after+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats%3A+no+effect+of+ischemia+on+galanin+in+the+stroke+area+but+decreased+levels+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Estradiol increases brain lesions in the cortex and lateral striatum after transient occlusion of the middle cerebral artery in rats: no effect of ischemia on galanin in the stroke area but decreased levels in the hippocampus.</a> Peptides. 26, 2257-2264 (2005).</li>
<li>Levin-Allerhand, J. A., Sokol, K., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safe+and+effective+method+for+chronic+17beta-estradiol+administration+to+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp.+Top+Lab+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Safe and effective method for chronic 17beta-estradiol administration to mice.</a> Contemp. Top Lab Anim. Sci. 42, 33-35 (2003).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

מצבי ניהול שהוצגו לעיל יש מחקרים קודמים הוכיחו עליונות שחרור איטי כדורי מסחריים זריקות במונחים של הפקת ריכוזים בסרום הפיזיולוגיות של 17β-אסטרדיול. בעוד כדורי שחרור איטי לייצר גבוהות מאוד וממושכת פסגות ריכוז בסרום, הזריקות גורמים קיצוניים, תנודות ההורמונים היומיות ודורשים טיפול מלחיצה חוזרות ונשנות של בעלי החיים 4-6. החשיבות של בחירת מצבי ניהול הולמים מודגשת על ידי מחקרים חדשים המצביעים על כך תוך במינון נמוך 17β-אסטרדיול משטרי האמריקני (כגון הטכניקות שהוצגו במאמר הנוכחי)...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Rimadyl, 50 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> פייזר </td><td> 462986 </td><td> שיכוך כאבים לאחר הניתוח לאחר ovariectomy. </td></tr><tr><td> Lubrithal ג&#39;ל עיניים </td><td> ליאו מעבדות </td><td></td><td> עין ההגנה במהלך הניתוח. </td></tr><tr><td> Jodopax הווטרינר </td><td> Pharmaxim </td><td></td><td> ניתוח חיטוי. </td></tr><tr><td> תפר 4-0 Vicryl </td><td> ג&#39;ונסון אנד ג&#39;ונסון </td><td></td><td> בסופו של תפר ו קשירת השחלה. </td></tr><tr><td> 17β-אסטרדיול,&gt; 98% </td><td> סיגמא </td><td> E8875-1G </td><td> בשמן שומשום על קפסולות silastic ו נוטלה. </td></tr><tr><td> שמן שומשום </td><td> סיגמא </td><td> S3547-1 ליטר </td><td> המסת 17β-אסטרדיול. </td></tr><tr><td> צינורות Silastic, מזהה / OD: 1.575/3.175 מ&quot;מ </td><td> Dow Corning </td><td> 508-008 </td><td> ייצור של כמוסות silastic. </td></tr><tr><td> המוליך מעץ מקל </td><td> Selefatrade </td><td> 12-0783 </td><td> מכסת של כמוסות silastic. </td></tr><tr><td> נוטלה </td><td> פררו </td><td></td><td> בינונית peroral 17β-אסטרדיול. </td></tr></tbody></table>

ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

אסטרוגנים הם משפחה של הורמונים המין הנשי עם קשת רחבה של תופעות. כאשר חולדות ועכברים משמשים במחקר אסטרוגן הם ovariectomized בדרך כלל על מנת לקטוע את ייצור הורמון במהירות רכיבה על אופניים, החלפת 17β-אסטרדיול exogenously. יש, עם זאת, חוסר הסכמה לגבי אופן ההורמון צריכה להינתן להשיג ריכוזים בסרום פיזיולוגיים. זה קריטי, מאחר 17β-אסטרדיול ברמה / שיטת הממשל באופן עמוק משפיע על תוצאות הניסוי 1-3. יש לנו בשורה של מחקרים שאפיינו את מצבים שונים של הממשל 17β-אסטרדיול, שמצא כי תת עורי כמוסות silastic ו לכל בעל פה אגוז קרם נוטלה נעלים על שחרור איטי כדורי זמינים מסחרית (המיוצר על ידי החברה מחקר חדשני של אמריקה) זריקות יומיות במונחים של הפקת ריכוזים בסרום הפיזיולוגיות של 17β-אסטרדיול 4-6. בין עו&quot;דantages של שיטת קרם אגוזים, שקודם לכן שימש במשך 7 עצירות הממשל, היא כי כאשר נעשה שימוש לניהול אסטרוגן הוא דומה peroral טיפול הורמונלי חלופי והוא לא פולשנית. את silastic כמוסות תת עורי נוח לייצר הריכוזים בסרום יציבה ביותר. מאמר זה סרט וידאו כולל שלב אחר שלב הפגנות של ovariectomy ו-17β אסטרדיול הורמונלי על ידי קפסולות silastic ו נוטלה peroral אצל חולדות ועכברים, ואחריה לדיון על היבטים חשובים של תהליכי הניהול.

Ovariectomy והחלפת הבאות של 17β-אסטרדיול באמצעות כמוסות silastic ו נוטלה peroral הם הפגינו חולדות ועכברים.

Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

אסטרוגנים הם משפחה של הורמונים מיניים נקביים בעלי קשת רחבה באופן חריג של השפעות. כאשר משתמשים בחולדות ועכברים במחקרי אסטרוגן, הם...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להשיג בקרה קפדנית על ריכוזי האסטרוגן המשתנים בנסיוב (serum) של נקבות חולדות ועכברים. דבר זה מושג תחילה על ידי הסרת השחלות דרך השורש הגבי. לאחר מכן, מכינים קפסולות אלסטיות של תאי תאי ותערובת Nutella.לבסוף, מוחדרת קפסולה באופן תת-עורי, או שמרכיב הנוטלה ניתן דרך הפה. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות באמצעות בדיקת radioimmunoassay המראה ריכוזי 17 beta estradiol יציבים או תנודתיים בסרום עבור שיטת הקפסולה ושיטת הנוטלה, בהתאמה. היתרון המרכזי של טכניקות אלו על פני שיטות קיימות, כגון גרגירים לשחרור איטי, הוא שהוכח כי הן מייצרות ריכוזים פיזיולוגיים של estradiol למשך פרקי זמן ממושכים.שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום האסטרוגן, כגון הבדלים בהשפעות בין דרכי מתן, שורשים ומנות. לאחר הרדמת בעל החיים, הנח אותו בתנוחת שכיבה על הבטן על פלטת חימום המחוברת למדחום רקטלי. החדר IGEL ולשיכוך כאבים לאחר הניתוח באופן תת-עורי בצד הלטראלי של צוואר בעל החיים.החדירו 5 mg/kg של IL בתוך תמיסת סליין בחלק הקדמי של אזור של 4x4 ס"מ מה-iliac crest shaver. לאחר מכן, חטאו את האזור בתמיסת אנטיספטית לפני כיסוי בעל החיה בסדיון ניתוח עם פתח של 4x4 ס"מ. בצעו חתך קו אמצע של 2 עד 3 ס"מ ובצעו דיסקציה קהה של העור מהפציה שמתחתיו, במרחק של 1 ס"מ לטרלית מקו האמצע.בצעו חתך נוסף דרך הפסציה. לאחר מכן, באופן השטחי ביותר האפשרי, בצעו דיסקציה קהה לצדדים מתחת לפסציה זו עד להגעה לחלל הבטן. בעזרת פינצטה, תפסו את רקמת השומן המקיפה את השחלה בחלל הבטן ומשכו אותה החוצה בעדינות.זהו את השחלה וקשור את קרני הרחם ואת כלי הדם, במרחק של 0.5 עד סנטימטר אחד פרוקסימלית למבנה זה. גזור את השחלה ואת הרקמה השומנית הקשורה, והחזר את הרקמה הנותרת לחלל הבטן.בצעו חתך נוסף בבסיס הרקמה (fascia) בצד הנגדי והסירו את השחלה השנייה. סגרו את הפצעים, ובמידה שאינכם מחלקים באופן מיידי 17 beta estradiol, המתינו שהבעל חיים יתעורר מההרדמה.הנח את בעל החיים בכלוב מחומם למשך שעתיים לפחות לאחר הניתוח. שכן את החולדה בנפרד במהלך הימים הראשונים לאחר הניתוח. 24 שעות לאחר הניתוח באופן תת-עורי.הזריקו לבעלי החיים חמש מיליגרם לקילוגרם נוספים של IL כדי למתן 17 beta estradiol באמצעות קפסולות scholastic. ערבבו היטב את הכמות הרצויה בשמן שומשום. גזרו קטעים של שלושה סנטימטרים של צינור scholastic וקטעים של חמישה מילימטרים של מקלוני אפליקטור מעץ עבור הסתימה, באמצעות פינצטה.דחפו פקק שעם אחד לתוך הקפסולה הלימודית לפני הזרקת תמיסת ה-17 beta estradiol בשמן שומשום. כדי למלא את מלוא אורכה, סגרו בעדינות את הקצה הפתוח של הקפסולה הלימודית עם פקק שעם נוסף. דגרו את הקפסולות בתמיסת 17 beta estradiol הנותרת למשך לילה לפני השתלה.לאחר סגירת חתכי האקטומיה, גלחו וחטאו שטח ריבועי של שני על שני סנטימטרים בחלק הגבי של צוואר החולדה. בצעו חתך של סנטימטר אחד והרחיבו אותו לצדדים באופן קהה. דללו כיס תת-עורי תוך יצירת מרחב מספיק עבור הקפסולה.נגב את הקפסולה הלימודית והחדר אותה בעדינות דרך החתך. לאחר מכן סגור את החתך באמצעות תפר. ודא שהקפסולה מפעילה לחץ מינימלי ככל האפשר על העור, ובמיוחד מסביב לפצע.כדי להשתמש בקרם אגוזים מסוג נוטלה כמנשא למתן אסטרוגן, המיסו באופן יסודי 17 beta estradiol בשמן שומשום, ולאחר מכן ערבבו את שמן השומשום עם קרם האגוזים. הכינו קרם אגוזים פלצבו ללא 17 beta estradiol חמישה ימים לפני הניסוי. אמנו את החולדות לאכול קרם אגוזים ללא הורמונים בימים הראשון עד השלישי.אמנו את בעלי החיים בקבוצות ביומיים הרביעי והחמישי. האכילו אותם בקרם אגוזים בכלובים נפרדים לאורך כל הניסויים. מקמו את בעלי החיים בכלובים נפרדים כאשר הם מוזנים בקרם אגוזים עם סרום פיזיולוגי.ריכוזי 17 beta estradiol, אשר השיטות הנוכחיות שואפות לשחזר, הם בערך 5 עד 140 picograms per milliliter עבור חולדות, ו-5 עד 35 picograms per milliliter עבור עכברים. כפי שמוצג כאן. כאשר הם ניתנים לחולדות נקבות מסוג Sprague Dawley במשקל 300 gram.הקפסולות האלסטיות התת-עוריות מייצרות ריכוזי 17 beta estradiol בסרום היורדים באיטיות מכ-40 picograms per milliliter ביום השני ל-10 picograms per milliliter עד היום ה-35. עם זאת, מיד לאחר המתן, ניתן לצפות לשיא בריכוז הסרום של כ-1000 picogram per milliliter, אשר ירד לטווח הפיזיולוגי בתוך שמונה שעות כאשר הקפסולות הומתנו לעכברי C 57 black six נקבות במשקל 25 gram.ריכוז הסרום ירד באיטיות מכ-90 picograms per milliliter ביום השני ל-25 picograms per milliliter ביום 35 כאשר הטיפול ניתן באמצעות קרם אגוזים לחולדות Sprague Dawley במשקל 300 grams. רמות פיזיולוגיות של 17 beta estradiol תנודו מדי יום בין 10 ל-70 picograms per milliliter בעכברים.רמות ה-17 beta estradiol תגו בין 20 ל-120 picograms per milliliter. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את טכניקת ה-ectomy והשתלת הקפסולה בתוך 10 דקות אם הפעולה מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להקפיד באופן קפדני על הנחיות ההיגיינה.

ovariectomy-17-estradiol-replacement-rats-mice-visual

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שתי פרדיגמות תרגיל נבדקו על חדש שפותח במודל עכבר בגיל המעבר כימי שגרם לבחון את ההשפעה של גיל המעבר על יכולת גופנית והסתגלות לב לפעילות גופנית.

שיטה לחקר ההשפעה של כשל שחל מושרה כימי ביכולת גופנית ולב הסתגלות בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור live-הדמיה של fluorescently שכותרתו קטעי רירית הרחם האנושי הושתל בעכברים. השיטה מאפשרת ללמוד את השפעות הסמים על גודל הנגע endometriotic באמצעות ניטור, כימות של זריחה הנפלטים על ידי הכתבת פלורסנט בזמן...

ניטור לא פולשנית של גודל הנגע במודל של עכברים Heterologous ' של אנדומטריוזיס

קלינית, מחסור באסטרוגן בנשים בגיל המעבר עלול להחמיר את השכיחות של שיבוש השומנים טרשת עורקים. הקמנו במודל למחסור באסטרוגן vivo על-ידי כריתת אופוקטומיה דו צדדית באמצעות חתך כפול-רוחבי-לרוחב ב-apoE-/- עכברים. מודל העכבר ישים לסינון טיפולי אסטרוגן אקסוגני של בעיות לב וכלי דם לאחר גיל המעבר.

A In Vivo אסטרוגן מחסור בעכבר מודל עבור ההקרנה הטיפולים האסטרוגן אקסודוגני של בעיות לב וכלי דם אחרי גיל המעבר

מאמר זה מתאר כיצד לבצע בדיקות התנהגות מינית בעכברים זכרים.

הערכה של התנהגות מינית של עכברים זכרים

פרוטוקול זה מתאר את בנייתה של מערכת מיקרו-הפעלה בעלות נמוכה, את ההשתלה הסטריאוטקסית שלה לתוך מבנים עמוקים במוח ואת ההליך למיקרו-נג'קציה מתוזמנות של טטרודוטוקסין בחולדות ערות וחסרות מעצורים. המטרה היא לחשוף את ההשתתפות של מבנים היפותלמיים ברגולציה של הביוץ על ידי עיכוב הפעילות העצבית שלהם.

חשיפת תפקידם של אזורים נפרדים במוח העכברוש בוויסות הביוץ באמצעות אי-פעילות הפיכה על ידי מיקרו-גניזמים של טטרודוטוקסין

כתב יד זה מתאר דרך עקבית לבצע במהירות כריתת מכרסמים הישרדותית וכריתת שחלות.

Murine Orchiectomy ו Ovariectomy כדי להפחית את ייצור הורמוני המין

ביסוס הריון הוא תהליך דינמי הכולל הצלבה מורכבת של עוברים ורחם. התרומות המדויקות של סביבת הרחם האימהית לתהליכים אלה נותרו תחום מחקר פעיל. כאן, פרוטוקולים מפורטים מסופקים כדי לסייע בעיצוב מודלים של בעלי חיים in vivo כדי לענות על שאלות מחקר אלה.

שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות

מוצג כאן פרוטוקול המראה כי קפסולת באזי בושן (BZBS) יכולה לווסת את מסלול האיתות RANKL/OPG במודל המכרסם השחלתי באמצעות האפקט דמוי האסטרוגן שלו.

השפעה דמוית אסטרוגן של קפסולת באזי בושן בחולדות שעברו כריתת שחלות

הורמון מגרה זקיק (FSH) ברקמות ואיברים חוץ-גונדליים שונים קשור לפתוגנזה של מחלות מרובות. ניתן להשתמש במודל העכבר שעבר כריתת שחלות וטיפול ב- FSH (OVF) כדי לחקור את הפעולות החוץ-גונדליות של FSH.

חקר השפעות עצמאיות של הורמון מגרה זקיקים in vivo במודל עכבר

פרוטוקול זה מציג טכניקה לגרימת מודלים של תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) בעכברים באמצעות שחרור לטרוזול מבוקר באמצעות משאבות זעירות. תחת הרדמה מספקת, המשאבה הקטנה הושתלה תת עורית, ו- PCOS הושרה בהצלחה בעכברים לאחר תקופה מסוימת של שחרור המשאבה.

טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים

למדו שיטת אובריאקטומיה והחלפת הורמונים בחולדות ועכברים לשליטה בריכוזי אסטרדיול בדם. השיטה משתמשת בכמוסות סילסטיות ותערובת נוטלה לשמירה על רמות הורמונליות יציבות לאורך זמן.

Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

גלה סרטונים נוספים