Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להשיג בקרה קפדנית על ריכוזי האסטרוגן המשתנים בנסיוב (serum) של נקבות חולדות ועכברים. דבר זה מושג תחילה על ידי הסרת השחלות דרך השורש הגבי. לאחר מכן, מכינים קפסולות אלסטיות של תאי תאי ותערובת Nutella.

לבסוף, מוחדרת קפסולה באופן תת-עורי, או שמרכיב הנוטלה ניתן דרך הפה. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות באמצעות בדיקת radioimmunoassay המראה ריכוזי 17 beta estradiol יציבים או תנודתיים בסרום עבור שיטת הקפסולה ושיטת הנוטלה, בהתאמה. היתרון המרכזי של טכניקות אלו על פני שיטות קיימות, כגון גרגירים לשחרור איטי, הוא שהוכח כי הן מייצרות ריכוזים פיזיולוגיים של estradiol למשך פרקי זמן ממושכים.

שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום האסטרוגן, כגון הבדלים בהשפעות בין דרכי מתן, שורשים ומנות. לאחר הרדמת בעל החיים, הנח אותו בתנוחת שכיבה על הבטן על פלטת חימום המחוברת למדחום רקטלי. החדר IGEL ולשיכוך כאבים לאחר הניתוח באופן תת-עורי בצד הלטראלי של צוואר בעל החיים.

החדירו 5 mg/kg של IL בתוך תמיסת סליין בחלק הקדמי של אזור של 4x4 ס"מ מה-iliac crest shaver. לאחר מכן, חטאו את האזור בתמיסת אנטיספטית לפני כיסוי בעל החיה בסדיון ניתוח עם פתח של 4x4 ס"מ. בצעו חתך קו אמצע של 2 עד 3 ס"מ ובצעו דיסקציה קהה של העור מהפציה שמתחתיו, במרחק של 1 ס"מ לטרלית מקו האמצע.

בצעו חתך נוסף דרך הפסציה. לאחר מכן, באופן השטחי ביותר האפשרי, בצעו דיסקציה קהה לצדדים מתחת לפסציה זו עד להגעה לחלל הבטן. בעזרת פינצטה, תפסו את רקמת השומן המקיפה את השחלה בחלל הבטן ומשכו אותה החוצה בעדינות.

זהו את השחלה וקשור את קרני הרחם ואת כלי הדם, במרחק של 0.5 עד סנטימטר אחד פרוקסימלית למבנה זה. גזור את השחלה ואת הרקמה השומנית הקשורה, והחזר את הרקמה הנותרת לחלל הבטן.

בצעו חתך נוסף בבסיס הרקמה (fascia) בצד הנגדי והסירו את השחלה השנייה. סגרו את הפצעים, ובמידה שאינכם מחלקים באופן מיידי 17 beta estradiol, המתינו שהבעל חיים יתעורר מההרדמה.

הנח את בעל החיים בכלוב מחומם למשך שעתיים לפחות לאחר הניתוח. שכן את החולדה בנפרד במהלך הימים הראשונים לאחר הניתוח. 24 שעות לאחר הניתוח באופן תת-עורי.

הזריקו לבעלי החיים חמש מיליגרם לקילוגרם נוספים של IL כדי למתן 17 beta estradiol באמצעות קפסולות scholastic. ערבבו היטב את הכמות הרצויה בשמן שומשום. גזרו קטעים של שלושה סנטימטרים של צינור scholastic וקטעים של חמישה מילימטרים של מקלוני אפליקטור מעץ עבור הסתימה, באמצעות פינצטה.

דחפו פקק שעם אחד לתוך הקפסולה הלימודית לפני הזרקת תמיסת ה-17 beta estradiol בשמן שומשום. כדי למלא את מלוא אורכה, סגרו בעדינות את הקצה הפתוח של הקפסולה הלימודית עם פקק שעם נוסף. דגרו את הקפסולות בתמיסת 17 beta estradiol הנותרת למשך לילה לפני השתלה.

לאחר סגירת חתכי האקטומיה, גלחו וחטאו שטח ריבועי של שני על שני סנטימטרים בחלק הגבי של צוואר החולדה. בצעו חתך של סנטימטר אחד והרחיבו אותו לצדדים באופן קהה. דללו כיס תת-עורי תוך יצירת מרחב מספיק עבור הקפסולה.

נגב את הקפסולה הלימודית והחדר אותה בעדינות דרך החתך. לאחר מכן סגור את החתך באמצעות תפר. ודא שהקפסולה מפעילה לחץ מינימלי ככל האפשר על העור, ובמיוחד מסביב לפצע.

כדי להשתמש בקרם אגוזים מסוג נוטלה כמנשא למתן אסטרוגן, המיסו באופן יסודי 17 beta estradiol בשמן שומשום, ולאחר מכן ערבבו את שמן השומשום עם קרם האגוזים. הכינו קרם אגוזים פלצבו ללא 17 beta estradiol חמישה ימים לפני הניסוי. אמנו את החולדות לאכול קרם אגוזים ללא הורמונים בימים הראשון עד השלישי.

אמנו את בעלי החיים בקבוצות ביומיים הרביעי והחמישי. האכילו אותם בקרם אגוזים בכלובים נפרדים לאורך כל הניסויים. מקמו את בעלי החיים בכלובים נפרדים כאשר הם מוזנים בקרם אגוזים עם סרום פיזיולוגי.

ריכוזי 17 beta estradiol, אשר השיטות הנוכחיות שואפות לשחזר, הם בערך 5 עד 140 picograms per milliliter עבור חולדות, ו-5 עד 35 picograms per milliliter עבור עכברים. כפי שמוצג כאן. כאשר הם ניתנים לחולדות נקבות מסוג Sprague Dawley במשקל 300 gram.

הקפסולות האלסטיות התת-עוריות מייצרות ריכוזי 17 beta estradiol בסרום היורדים באיטיות מכ-40 picograms per milliliter ביום השני ל-10 picograms per milliliter עד היום ה-35. עם זאת, מיד לאחר המתן, ניתן לצפות לשיא בריכוז הסרום של כ-1000 picogram per milliliter, אשר ירד לטווח הפיזיולוגי בתוך שמונה שעות כאשר הקפסולות הומתנו לעכברי C 57 black six נקבות במשקל 25 gram.

ריכוז הסרום ירד באיטיות מכ-90 picograms per milliliter ביום השני ל-25 picograms per milliliter ביום 35 כאשר הטיפול ניתן באמצעות קרם אגוזים לחולדות Sprague Dawley במשקל 300 grams. רמות פיזיולוגיות של 17 beta estradiol תנודו מדי יום בין 10 ל-70 picograms per milliliter בעכברים.

רמות ה-17 beta estradiol תגו בין 20 ל-120 picograms per milliliter. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את טכניקת ה-ectomy והשתלת הקפסולה בתוך 10 דקות אם הפעולה מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להקפיד באופן קפדני על הנחיות ההיגיינה.