Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

המטרה הכללית של הליך זה היא להשיג שליטה קפדנית בריכוזי האסטרוגן המשתנים בנסיק בנסיקות ובמעבדות נקבה. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הסרת השחלות באמצעות השורש הגבי. לאחר מכן, מכינים קפסולות אלסטיות של תאי סל ותערובת נוטלה.

לבסוף, מוחדרת קפסולה תת-עורית, או שתערובת הנוטלה ניתנת דרך הפה. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות באמצעות בדיקת radioimmunoassay המראה ריכוזי 17 beta estradiol יציבים בסרום עבור שיטת הקפסולה וריכוזים תנודתיים עבור שיטת הנוטלה. היתרון העיקרי של טכניקות אלו על פני שיטות קיימות, כגון גלובולין לשחרור איטי (slow release pellets), הוא שהוכח כי הן מייצרות ריכוזים פיזיולוגיים של estradiol למשך פרקי זמן ממושכים.

שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום האסטרוגן, כגון הבדלים בהשפעות בין דרכי מתן, שורשים ומספר מינונים. לאחר הרדמת בעל החיים, הניחו אותו בתנוחה הפוכה (prone) על פלטת חימום המחוברת למד חום רקטלי. הניחו IGEL ולמניעת כאבים לאחר הניתוח תת-עורית בצד הלטראלי של צוואר בעל החיים.

הנח 5 mg/kg של IL בתוך סליין בחלק הקדמי של אזור של 4x4 ס"מ מהמעמקים של הרכס הכסלי (iliac crest). לאחר מכן, חטא את האזור בחומר אנטיספטי לפני כיסוי בעל החיה עם סדין ניתוח בעל פתח של 4x4 ס"מ. בצע חתך של 2-3 ס"מ בקו האמצע ובצע דיסקציה קהה של העור מהפציה שמתחתיו, מרחק של 1 ס"מ לטרלית לקו האמצע.

בצעו חתך נוסף דרך הפסציה. לאחר מכן, באופן השטחי ביותר האפשרי, בצעו דיסקציה קהה לצדדים מתחת לפסציה זו עד להגעה לחלל הבטן. בעזרת פינצטה, תפסו את רקמת השומן המקיפה את השחלה בחלל הבטן ומשכו אותה בעדינות החוצה.

זהו את השחלה וקשרו את קרני הרחם ואת כלי הדם, במרחק של 0.5 עד סנטימטר אחד פרוקסימלית למבנה זה. כרתו את השחלה ואת רקמת השומן הקשורה, והחזירו את הרקמה שנותרה לחלל הבטן.

בצעו חתך נוסף בפציה בצד הנגדי והסִירו את השחלה השנייה. סגרו את הפצעים, ואם אין להחדיר 17 beta estradiol באופן מיידי, המתינו עד שהבעלי החיים יתעוררו מההרדמה.

השקיפו את בעל החיים בכלוב מחומם למשך שעתיים לפחות לאחר הניתוח. שקינו את החולדה בנפרד במהלך הימים הראשונים לאחר הניתוח. 24 שעות לאחר הניתוח באופן תת-עורי.

הזריקו לבעלי החיים חמישה מיליגרם לקילוגרם נוספים של IL כדי למתן 17 beta estradiol באמצעות קפסולות scholastic. ערבבו ביסודיות את הכמות הרצויה בשמן שומשום. חתכו בעזרת פינצטה מקטעים של שלושה סנטימטרים של צינור scholastic ומקטעים של חמישה מילימטרים של מקלוני אפליקטור מעץ לאטימה.

דחפו פקק שעם אחד לתוך הקפסולה הסכולסטית לפני הזרקת תמיסת 17 beta estradiol בשמן שומשום. כדי למלא את כל האורך, סגרו בעדינות את הקצה הפתוח של הקפסולה הסכולסטית עם פקק שעם נוסף. דגרו את הקפסולות בתמיסת 17 beta estradiol שנותרה למשך לילה לפני ההשתלה.

לאחר סגירת חתכי האקטומיה, גלחו וחטאו שטח ריבוע של שני על שני סנטימטרים בצד הגבי של צוואר החולדה. בצעו חתך של סנטימטר אחד והרחיבו אותו לצדדים באופן קהה. דחפו את הרקמה כדי ליצור כיס תת-עורי עם מספיק מקום עבור הקפסולה.

נגבו את הקפסולה הסכולסטית והחדירו אותה בעדינות דרך החתך. לאחר מכן, סגרו את החתך באמצעות תפר. ודאו שהקפסולה מפעילה מינימום מתיחה על העור, ובמיוחד מסביב לפצע.

כדי להשתמש בממרח האגוזים נוטלה כתווך למתן אסטרוגן, המיסו באופן יסודי 17 beta estradiol בשמן שומשום, ולאחר מכן ערבבו את שמן השומשום עם ממרח האגוזים. הכינו ממרח אגוזים פלצבו ללא 17 beta estradiol למשך חמישה ימים לפני הניסוי. הגמירו את החולדות לאכול ממרח אגוזים נטול הורמונים בימים הראשון עד השלישי.

אמנו את בעלי החיים בקבוצות ביום הרביעי והחמישי. האכילי אותם בקרם האגוזים בכלובים נפרדים לאורך הניסויים. הניחי את בעלי החיים בכלובים נפרדים כאשר הם מוזנים בקרם האגוזים עם סרום פיזיולוגי.

ריכוזי 17 beta estradiol, אותם השיטות הנוכחיות שואפות לשחזר, הם בערך 5 עד 140 picograms per milliliter עבור חולדות, ו-5 עד 35 picograms per milliliter עבור עכברים. כפי שמוצג כאן. כאשר הם ניתנים לחולדות Sprague Dawley נקבות השוקלות 300 גרם.

הקפסולות האלסטיות התת-עוריות מייצרות ריכוזי 17 beta estradiol בסרום היורדים לאיטם, מכ-40 picograms per milliliter ביום השני ועד ל-10 picograms per milliliter ביום ה-35. עם זאת, מיד לאחר המתן, ניתן לצפות לשיא בריכוז הסרום של כ-1000 picogram per milliliter, אשר יירד לטווח הפיזיולוגי בתוך שמונה שעות כאשר הקפסולות הומתנו לעכברי C 57 black six נקבות במשקל 25 gram.

ריכוז הסרום ירד לאט מכ-90 picograms per milliliter ביום השני ל-25 picograms per milliliter ביום 35 כאשר חומר זה ניתן באמצעות קרם אגוזים לחולדות Sprague Dawley במשקל 300 grams. רמות פיזיולוגיות של 17 beta estradiol תגו ביומיום בין 10 ל-70 picograms per milliliter בעכברים.

רמות ה-17 beta estradiol תגו בין 20 ל-120 picograms per milliliter. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע את ה-ectomy והשתלת הקפסולה תוך 10 דקות, אם הפעולה מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להקפיד באופן קפדני על הנחיות ההיגיינה.