Name: Immobilization Planarian, הקרנה חלקית, השתלת רקמות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: למד שיטת השתלת רקמות מדויקת בפלנריות לחקר התנהגות תאי גזע ותהליכי התחדשות. השיטה כוללת קרינה חלקית ואימוביליזציה לניתוח דינמיקת תאי גזע בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות Chiyoko קוביאשי ו Kiyokazu אגתה עבור עצות מועילות על השתלת planarian כמו גם חברים בעבר ובהווה של המעבדה סאנצ לדיונים יסולא בפז במהלך הפיתוח של טכניקות אלה. עבודה זו נתמכה על ידי NIH הדרכה גרנט (5T32 HD0791) כדי OCG ו NIH R37GM057260 את אס&quot;א. אס&quot;א הוא הווארד יוז חוקר רפואי במכון.

<ol><li>Morgan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+the+regeneration+of+Planaria+maculata%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Entw.+Mech.+Org%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of the regeneration of Planaria maculata.</a> Arch. Entw. Mech. Org. 7, 364-397 Forthcoming.</li>
<li>Reddien, P. W., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+of+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Fundamentals of planarian regeneration.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 20, 725-757 (2004).</li>
<li>Randolph, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regeneration+of+the+tail+in+lumbriculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morphol%22%5BJournal%5D)">The regeneration of the tail in lumbriculus.</a> J. Morphol. 7, 317-344 Forthcoming.</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332, 811-816 (2011).</li>
<li>Santos, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+transplantation+in+planaria%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Studies on transplantation in planaria.</a> Biological Bulletin. 57, 188-197 (1929).</li>
<li>Morgan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+grafted+pieces+of+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zo%C3%B6l%22%5BJournal%5D)">Regeneration of grafted pieces of planarians.</a> J. Exp. Zoöl. 3, 269-294 (1906).</li>
<li>Dubois, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+%C3%A1+l+%27%C3%A8tude+de+la+migration+des+cellules+de+r%C3%A8g%C3%A8n%C3%A8ration+chez+les+Planaires+dulcicoles%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Biol.+Fr.+Belg%22%5BJournal%5D)">Contribution á l 'ètude de la migration des cellules de règènèration chez les Planaires dulcicoles.</a> Bull. Biol. Fr. Belg. 83, 213-283 (1949).</li>
<li>Purton, L. E., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limiting+factors+in+murine+hematopoietic+stem+cell+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays.</a> Cell Stem Cell. 1, 263-270 (2007).</li>
<li>Cebria, F., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+homologs+of+netrin+and+netrin+receptor+are+required+for+proper+regeneration+of+the+central+nervous+system+and+the+maintenance+of+nervous+system+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Planarian homologs of netrin and netrin receptor are required for proper regeneration of the central nervous system and the maintenance of nervous system architecture.</a> Development. , 132-3691 (2005).</li>
<li>Newmark, P. A., Sánchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bromodeoxyuridine+specifically+labels+the+regenerative+stem+cells+of+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Bromodeoxyuridine specifically labels the regenerative stem cells of planarians.</a> Dev. Biol. 220, 142-153 (2000).</li>
<li>Miller, W., Kennedy, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+attenuation+in+lead%2C+aluminum%2C+and+concrete+in+the+range+275+to+525+kilovolts%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">X-ray attenuation in lead, aluminum, and concrete in the range 275 to 525 kilovolts.</a> Radiology. 65, 920-925 (1955).</li>
<li>Pearson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-based+whole-mount+in+situ+hybridization+method+for+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-based whole-mount in situ hybridization method for planarians.</a> Dev. Dyn. 238, 443-450 (2009).</li>
<li>Hayashi, T., Asami, M., Higuchi, S., Shibata, N., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+planarian+X-ray-sensitive+stem+cells+by+fluorescence-activated+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Isolation of planarian X-ray-sensitive stem cells by fluorescence-activated cell sorting.</a> Dev. Growth Differ. 48, 371-380 (2006).</li>
<li>Reddien, P. W., Oviedo, N. J., Jennings, J. R., Jenkin, J. C., Sánchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SMEDWI-2+is+a+PIWI-like+protein+that+regulates+planarian+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">SMEDWI-2 is a PIWI-like protein that regulates planarian stem cells.</a> Science. 310, 1327-1330 (2005).</li>
<li>Stéphan-Dubois, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Les+cellules+de+r%C3%A9g%C3%A9n%C3%A9ration+chez+la+planaire+Dendrocoleum+lacteum%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+de+la+Soci%C3%A9t%C3%A9+Zooologique+de+France%22%5BJournal%5D)">Les cellules de régénération chez la planaire Dendrocoleum lacteum.</a> Bulletin de la Société Zooologique de France. 86, 172-185 (1961).</li>
<li>Gurley, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+secreted+Wnt+pathway+components+reveals+unexpected+complexity+of+the+planarian+amputation+response%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of secreted Wnt pathway components reveals unexpected complexity of the planarian amputation response.</a> Dev. Biol. 347, 24-39 (2010).</li>
<li>Salvetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cell+plasticity%3A+neoblast+repopulation+in+non-lethally+irradiated+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Adult stem cell plasticity: neoblast repopulation in non-lethally irradiated planarians.</a> Dev. Biol. 328, 305-314 (2009).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

החשיבות של חוסר תנועה Immobilization הוא ללא ספק השלב הקריטי ביותר על ההשלמה המוצלחת של כל התהליכים האלה. אם planaria הם משותקים באופן לא תקין לפני הקרנה חלקית, הם עלולים לעבור מתחת למגן את ההובלה, ייצור תוצאות לא עקביות ולא בלבול. בנוסף, אם בעלי חיים משותקת במידה מספקת לאחר ההשתלה, תולעת המארחת צפויה להתרחק רקמת השתל, והתוצאה היא כישלון של שתל להחלים בצורה נאותה לארח. חוסר תנועה נכונה מושגת על ידי התאמת ריכוז או או...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> כללי העברת מטרת פיפטה </td><td> Samco </td><td> 691 </td></tr><tr><td> צינורות נימי (0.75 מ&quot;מ ID) </td><td> Fhc </td><td> 30-30-0 </td></tr><tr><td> צינורות נימי (OD 0.7 מ&quot;מ) </td><td> Fhc </td><td> 30-50-08 </td></tr><tr><td> Parafilm M </td><td> VWR </td><td> 52858-076 </td></tr><tr><td> Kimwipes 34155 </td><td> VWR </td><td> 500029-891 </td></tr><tr><td> מסנן נייר שחור </td><td> שלייכר &amp; Schuell </td><td> 10310809 </td></tr><tr><td> Whatman # 2 מסנן נייר 1002-055 </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 09-810B </td></tr><tr><td> Whatman # 3 מסנן נייר 1003-185 </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 09-820E </td></tr><tr><td> סיגריה מתגלגל נייר </td><td> זיג זג, מקורי </td><td> NA </td></tr><tr><td> פטרימנות </td><td> VWR </td><td> 82050-544 </td></tr><tr><td> מלקחיים דומונט, Inox # 5 </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td></tr><tr><td> Chloretone </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> 112054 </td></tr><tr><td> קזאין </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> C3400 </td></tr><tr><td> להוביל שילדס </td><td> אלפא מערכות קורפ, Bluffdale, UT </td><td> עיצוב מותאם אישית </td></tr><tr><td> XRAD-320 ביולוגית Irradiator </td><td> Precision X-Ray, צפון Branford, CT </td><td> NA </td></tr></tbody></table>

immobilization planarian, הקרנה חלקית, השתלת רקמות

Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation

Planarian, השטוחה מים מתוקים, הוכיחה להיות מערכת רב עוצמה לנתח התחדשות מטזואניים ו תא גזע 1,2 ביולוגיה. התחדשות Planarian של כל רקמות חסרים או פגומים מתאפשרת על ידי בתאי גזע בוגרים כינה neoblasts 3. למרות אלה בתאי גזע הוכחו בוודאות להיות pluripotent ומסוגלים לשחזר להפליא של כל בעל חיים 4, ההטרוגניות בקרב האוכלוסייה לתאי גזע ואת הדינמיקה של התנהגות הסלולר שלהם נותרו לא פתורות, במידה רבה. בשל ריבוי והפצה רחב של בתאי גזע ברחבי תוכנית הגוף planarian, שיטות מתקדמות של subpopulations מניפולציה בתאי גזע לצורך מחקר מולקולרי ומתפקד in vivo יש צורך. השתלת רקמות הקרנה חלקית שתי שיטות שבו subpopulation בתאי גזע planarian ניתן לבודד למחקר נוסף. הטכניקה לכל אחד יש יתרונות ברורים. Tהשתלת הנושא מאפשר הקדמה של בתאי גזע, לתוך שורה תמימה, כי הם או מטבעו שונה גנטית או טופלו בעבר פרמקולוגית. לחלופין, הקרנה חלקית מאפשר בידוד בתאי גזע בתוך הפונדקאי, זה לצד זה לרקמות ללא בתאי גזע, ללא הקדמה של פצע או עכוז של שלמות רקמות. באמצעות שתי השיטות, ניתן לחקור את הגורמים תאים אוטונומיים ולא אוטונומיים הנובעות בקרת התא פונקציות, כגון התפשטות, בידול, והגירה. הן רקמות להשתלה 5,6 ו חלקית קרינה 7 שימשו היסטורית בהגדרת רבים של שאלות על התחדשות planarian שנותרו תחת מחקר היום. עם זאת, טכניקות אלה נשארו underused בשל אופי מייגע ובלתי עקבית של השיטות הקודמות. הפרוטוקולים המוצגים כאן מייצגים צעד גדול קדימה בהפחתת זמןND המאמץ הנדרש כדי reproducibly לייצר מספר רב של בעלי חיים מורכבים או מוקרן באופן חלקי עם efficacies מתקרב 100 אחוז. אנו מכסים את כל התרבות של בעלי חיים גדולים, חוסר תנועה, לקראת הקרנת חלקית, השתלת רקמות, אופטימיזציה של התאוששות בעלי חיים. יתר על כן, העבודה המתוארת כאן ממחיש את היישום הראשון של שיטת הקרנה חלקית לשימוש עם planarian ביותר למד נרחב, Schmidtea mediterranea. בנוסף, רקמות יעיל השתלת ב planaria פותחת את הדלת לבדיקה תפקודית של subpopulations של בתאי גזע נאיבי או מטופלים מבחני repopulation, אשר כבר זמן רב את שיטת תקן הזהב של מנסה לאמוד את הפוטנציאל למבוגרים בתאי גזע אצל יונקים 8. אימוץ רחב של שיטות אלו יהיה ללא ספק להוביל להבנה טובה יותר של התנהגויות הסלולר של בתאי גזע בוגרים במהלך הומאוסטזיס רקמה והתחדשות.

השיטה יעילה השתלת רקמות בגודל מוגדרת ועקבית בין planaria מתואר. היא כללה גם תיאור של איך להשתמש בטכניקה immobilization להשתלה ניתן להתאים, בשיתוף עם מגן עופרת, הקרנה חלקית של בעלי חיים.

Immobilization Planarian, הקרנה חלקית, השתלת רקמות

הפלנריה, תולעת שטוחה שחיה במים מתוקים, הוכחה כמערכת עוצמתית להבנת תהליכי רגנרציה וביולוגיה של תאי גזע ברב-תאיים1,2. פלנריה...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא למקם אוכלוסייה של תאי גזע בריאים בסמיכות לרקמה שבה הושמדו תאי גזע בתוך פאריאן (parian), וזאת כדי לנתח את התנהגות תאי הגזע והצאצאים שלהם in vivo במהלך התחדשות. מטרה זו מושגת על ידי הרדמה וקיבוע של פאריאן שלא הוקרן או של פאריאן שעבר הקרנת Leafly לצורך מניפולציות נוספות. לאחר מכן, הפאריאן המקובע שלא הוקרן ממוגן חלקית בעופרת ולאחר מכן עובר הקרנת x-ray, פעולה היוצרת פאריאן ללא פגיעה, שבו רקמה עם תאי גזע מושמדים נמצאת בסמיכות לרקמה המוגנת שנותרה עשירה בתאי גזע.לחלופין, ניתן להשתיל רקמה נלקחת מתורם שלא הוקרן אל תוך מאחסן שהוקרן בעבר, וזאת כדי ליצור פרט עם אוכלוסייה מבודדת של תאי גזע. תוצאות המאחסן שבו הושמדו תאי הגזע מראות אוכלוסיות מבודדות של תאי גזע הסמוכות לרקמות שבהן הושמדו תאי הגזע, כפי שעולה מהיברידיזציה של RNA in situ עבור גנים המסמנים תאי גזע בשיטת whole mount.השיטות המתוארות כאן שואפות להבין טוב יותר את תהליך הרגנרציה בפלנריות על ידי חקר התנהגות תאי גזע הן במודל של השתלה והן במודל של הקרנה חלקית, המאפשרים לבחון האם הרקמות הסובבות והסביבות המקומיות שבהן שוהים תאי גזע אלו משפיעות על התנהגות הניובלסטים או תאי הגזע. במהלך תהליך הרגנרציה, חודש עד חודשיים לפני הניסוי, יש להאכיל את הפלנריות בהתאם לכתב היד המצורף. כדי להשיג את הגודל הרצוי בהדגמה זו, נבחרות

planarian-immobilization-partial-irradiation-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מתארים את העכברוש orthotopic איבר האחוריות, הליך ההשתלה, אשר נראה כי תקן...

השתלת orthotopic לימב הינד-בחולדות

אדם בתאי גזע perivascular (PSCs) הם גזע הרומן הסלולרי בכיתה לשחזור רקמות השלד דומה בתאי גזע mesenchymal (MSCs). PSCs יכול להיות מבודד על ידי FACS (תא הקרינה מיון פעיל) מרקמת השומן רכש במהלך הליכים סטנדרטיים שאיבת שומן, בשילוב מכן עם פיגום osteoinductive להשיג היווצרות...

שימוש בתאי גזע לשחזור עצם Perivascular

מודל אטרקטיבי עבור הלומדים תא גזע בידול בתוך החי הוא התולעת השטוחה planarian. התחדשות הוא למד על ידי ניסויים פשוטים קטיעה מבוצעים בקלות במעבדה בסיסי הנוחות (תרופתי ו...

מבחני גנטית תרופתי ו פונקציונלית לתפעל התחדשות של Planarian Japonica Dugesia</em

פרוטוקול זה מראה כיצד שיחתוך עיני planarian בעקביות (כוסות אופטיות) מבלי להפריע רקמות סובבות. באמצעות מחט אינסולין במזרק, או אחת או בשתי העיניים יכול להיות מלוטשים על מנת להקל על חקירת מנגנוני ויסות התחדשות העין, את האבולוציה של התחדשות ויזואלית, ואת הבסיס העצבי של התנהגות האור המושרה.

אבלציה כירורגית Assay עבור לימוד Regeneration Eye ב Planarians

השתלת תאי סרטן היא כלי חשוב לזיהוי מנגנוני סרטן ותגובות טיפוליות. הטכניקות הנוכחיות תלויים בבעלי חיים חסרי יכולת. כאן, אנו מתארים שיטה להשתלת תאים דג הזברה תאים לתוך עוברי המוסמכת-המוסמכת לניתוח לטווח ארוך של התנהגות התא הגידול בתגובות סמים vivo .

השתלת דג הזברה גידולים מוחיים במוח לתוך מארחים המוסמכת החיסונית עבור מחקר לטווח ארוך של התנהגות תאים סרטניים והתגובה לסמים

מחקר על אסטרטגיות טיפול teratomas נגזר תאי גזע pluripotent חשוב התרגום קלינית של טיפול בתאי גזע. כאן, אנו מתארים לפרוטוקול, ראשית, להפיק תאי גזע-derived teratomas בעכברים ולאחר, מכן, ל סלקטיבי היעד ולטפל ויוו שימוש בעוצמה קטנה-חיה של גידולים אלה.

טיפול ממוקד, סלקטיבי של Teratomas נגזר תאי גזע Pluripotent באמצעות קרינה חיצוני קרן במודל של חיית-קטן

סדרה של שיטות הנייח הוקם כדי לאפשר את ההקרנות יישוב של חיה Caenorhabditis elegans יחידים באמצעות microfluidic polydimethylsiloxane דקים שפותחו לאחרונה על שבב עם החזקת מים. קיבעון על שבב הרומן הזה מספיקה גם הדמיה תצפיות. טיפול מפורט ודוגמאות ליישום של השבב מוסברים.

קיבעון של אנשים חיים Caenorhabditis elegans באמצעות שבב Microfluidic של דקים ועומדים בטמפרטורות Polydimethylsiloxane עם החזקת מים

השתל המורכב של vascularized מציע יתרונות משנים חיים לנמעני ההשתלה, אך הגורמים הביולוגיים לדחיית השתל והעיקור נשארים ברורים לקוי. המודל הכירורגי מכרסם הציג כאן מציע המודל הרלוונטי קלינית של השתלת, המאפשר לחוקרים להעריך את אירועי דחייה ואסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות כדי למנוע את התרחשותן.

שונה הטרולנושא הגפיים האוסטאופהעורית מודל החולדה על השתלת ואסימטיקה מורכבת מחקר האלוגרפט

פרוטוקול זה מציג מודל חזק, לשחזור של כלי דם מרוכבים allotransplant (VCA) מכוון למחקר בו זמנית של אימונולוגיה והתאוששות תפקודית. הזמן שהושקע בטכניקה קפדנית בהשתלה אורתוטופית ירך ימין באמצע הירך האחורי עם תפורים ביד וסמיכות עצבית מניב את היכולת ללמוד התאוששות תפקודית.

לוקח את הצעד הבא: מודל השתלת גפיים אחוריות קופטציה עצבית כדי למקסם את ההתאוששות תפקודית בחולדה

מאמר זה מציג פרוטוקול השתלת דש אוסטאומיו-עורית הטרוטופית חלקית בחולדות ותוצאותיו הפוטנציאליות במעקב אמצע הטווח.

מודל השתלת הינדימבה הטרוטופית חלקית בחולדות

התקפים משפיעים לרעה על תפקודים שונים ועל איכות החיים. תולעי פלנריה נחשפו לריכוזים משתנים של פרכוסים כימיים כדי להעריך את פנוטיפים ההתקפים ואת התנועתיות המשבשת שלהן. מחקר זה מציע להשתמש בתולעי פלנריה כמודל להתקפים חריפים בבני אדם ויש לו משמעות בפיתוח תרופות לאפילפסיה.

פלנר כמודל חיה להתקף חריף ניסיוני

למד שיטת השתלת רקמות מדויקת בפלנריות לחקר התנהגות תאי גזע ותהליכי התחדשות. השיטה כוללת קרינה חלקית ואימוביליזציה לניתוח דינמיקת תאי גזע בזמן אמת.

Immobilization Planarian, הקרנה חלקית, השתלת רקמות

גלה סרטונים נוספים