Name: בסיסי Caenorhabditis elegans שיטות: סנכרון תצפית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: למדו שיטת סנכרון ל-Caenorhabditis elegans בשלב הלרווה הראשון באמצעות תמיסת היפוכלוריט אלקלי. פרוטוקול זה מאפשר מחקר מדויק של תהליכי התפתחות בביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים רוצים להכיר MICINN (התוכנית ועד ההורים תומכים מונסראט פורטה דה לה ריבה), AGAUR (PhD מלגה כדי לורה Fontrodona), Instituto de Salud קרלוס השלישי (תוכנית מיגל Servet תמיכה ג&#39;וליאן Cerón), ומארי קירי IRG, ISCIII ו IDIBELL למימון במעבדה.

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+WB+%22The+nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The nematode Caenorhabditis elegans</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (1988).</li>
<li>Potts, M. B., Cameron, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+and+cell+death%3A+Caenorhabditis+elegans+and+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cell lineage and cell death: Caenorhabditis elegans and cancer research.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 50-58 (2011).</li>
<li>Kimble, J., Hirsh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+postembryonic+cell+lineages+of+the+hermaphrodite+and+male+gonads+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The postembryonic cell lineages of the hermaphrodite and male gonads in Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 70, 396-417 (1979).</li>
<li>Sulston, J. E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-embryonic+cell+lineages+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Post-embryonic cell lineages of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 56, 110-156 (1977).</li>
<li>Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> WormBook. , 1-24 (2010).</li>
<li>Depuydt, G., Vanfleteren, J. R., Braeckman, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+metabolism+and+lifespan+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein metabolism and lifespan in Caenorhabditis elegans.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 694, 81-107 (2010).</li>
<li>Jia, K., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+longevity%3A+lessons+from+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Autophagy and longevity: lessons from C. elegans.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 694, 47-60 (2010).</li>
<li>Joshi, P. M., Riddle, M. R., Djabrayan, N. J., Rothman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+a+model+for+stem+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as a model for stem cell biology.</a> Dev. Dyn. 239, 1539-1554 (2010).</li>
<li>Waters, K. A., Reinke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrinsic+and+intrinsic+control+of+germ+cell+proliferation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Extrinsic and intrinsic control of germ cell proliferation in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Reprod. Dev. 78, 151-160 (2011).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Wormbook%22%5BJournal%5D)">Maintenance of C. elegans.</a> Wormbook. , (2006).</li>
<li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-+and+calorie-independent+life+span+extension+from+dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans.</a> BMC Dev. Biol. 8, 49(2008).</li>
<li>Olahova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+redox-sensitive+peroxiredoxin+that+is+important+for+longevity+has+tissue-+and+stress-specific+roles+in+stress+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A redox-sensitive peroxiredoxin that is important for longevity has tissue- and stress-specific roles in stress resistance.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 19839-19344 (2008).</li>
<li>Voisine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+potential+therapeutic+drugs+for+huntington%27s+disease+using+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identification of potential therapeutic drugs for huntington's disease using Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 2, e504(2007).</li>
<li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> Genetics. 161, 1101-1112 (2002).</li>
<li>Aceves, J., Erlij, D., Martinez-Maranon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+the+paralysing+action+of+tetramisole+on+Ascaris+somatic+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of the paralysing action of tetramisole on Ascaris somatic muscle.</a> Br. J. Pharmacol. 38, 602-607 (1970).</li>
<li>Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Wormbook%22%5BJournal%5D)">Methods in cell biology.</a> Wormbook. , (2006).</li>
<li>Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbardm, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+glp-1+mutants+suggests+receptor+interaction+or+competition%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition.</a> Genetics. 163 (1), 115-132 (2003).</li>
<li>Morley, J. F., Brignull, H. R., Weyers, J. J., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+threshold+for+polyglutamine-expansion+protein+aggregation+and+cellular+toxicity+is+dynamic+and+influenced+by+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The threshold for polyglutamine-expansion protein aggregation and cellular toxicity is dynamic and influenced by aging in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 10417-10422 (2002).</li>
<li>Protocols [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://protocols.mmml.nl">http://protocols.mmml.nl</a> (2012).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

נמטודות סנכרון פתרונות הלבנת מספר תוארו. ניסינו חמישה מתכונים שונים (טבלה I) ו, בידינו, הם לא הראו הבדלים משמעותיים הסנכרון של אוכלוסיות תולעת (איור 1). עם זאת, בניסויים שלנו לא מראים פרמטרים כגון טמפרטורה (איור 2), הפתרון יחס הלבנת: נפח של תולעים (איור 3) וכן את נפח M9 עם שבו עוברים מודגרת של הבקיעה (איור 4) עושים משפיע ההישרדות של...

בסיסי<em&gt; caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

מחקר בביולוגיה מולקולרית התפתחותית של Caenorhabditis elegans נמטודות החלה בתחילת שנות השבעים של סידני ברנר וזה ומאז נעשה שימוש נרחב כאורגניזם מודל 1. ג elegans הוא בעל תכונות מפתח כגון שקיפות ופשטות, ועל מחזור החיים הקצר שהפכו אותה מערכת ניסיונית מתאים למחקרים ביולוגיים בסיסיים במשך שנים רבות 2. תגליות נמטודות הזה יש השלכות רחבות בגלל תהליכים תאיים ומולקולריים רבים חיים פיתוח שליטה הם 3 משומר האבולוציוני. סי אלגנס מחזור החיים עובר בשלב העוברי וארבעה שלבים הזחל לפני בעלי החיים מגיעים לבגרות. הפיתוח יכול לקחת 2 עד 4 ימים, תלוי בטמפרטורה. בכל אחד מהשלבים התכונות האופייניות כמה ניתן לצפות. הידע של השושלת תא המוחלטת 4,5 יחד עם annotat עמוקיון של הגנום שלו להפוך את נמטודות למודל רב בתחומים מגוונים כמו לנוירוביולוגיה 6, הזדקנות 7,8, ביולוגיה לתאי גזע 9 וביולוגיה נבט קו 10. תכונה נוספת שהופכת ג elegans מודל אטרקטיבי לעבוד היא האפשרות לקבל אוכלוסיות של תולעים מסונכרנים בשלב מסוים באמצעות פרוטוקול פשוט יחסית. קלות תחזוקה להפצת נמטודות זה להוסיף אפשרות של סנכרון לספק כלי רב עוצמה כדי להשיג כמויות גדולות של תולעים, אשר ניתן להשתמש בהם עבור מגוון רחב של ניסויים קטנים או תפוקה גבוהה כגון מסכי RNAi, microarrays, רצף מסיבי, immunoblot או הכלאה באתרו, בין היתר. בגלל השקיפות שלה, ג מבנים elegans ניתן להבחין תחת מיקרוסקופ באמצעות התערבות דיפרנציאלי מיקרוסקופ ניגודיות, הידוע גם בשם Nomarski MICROSלהעתיק. השימוש קלסר DNA ניאון, DAPI (4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole), למשל, יכול להוביל לזיהוי לוקליזציה ספציפי של תאים בודדים, כמו גם מבנים subcellular / פגמים הקשורים אליהם.

קלות של תחזוקה להפצת נמטודות<em&gt; ג elegans</em&gt; להפוך אותו אורגניזם מודל נחמד לעבוד איתו. אפשרות של תולעים סינכרון מאפשר עבודה עם כמות משמעותית של הנושאים בשלב התפתחותי דומה, מה מאפשר לימוד של תהליך מסוים אצל בעלי חיים רבים.

בסיסי<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

המחקר בביולוגיה המולקולרית וההתפתחותית של הנמטודה Caenorhabditis elegans החל בראשית שנות השבעים על ידי סידני ברנר (Sydney Brenner) ומימשיך...

בסרטון זה, נראה לכם כיצד לסנכרן תולעי C. elegans בשלב לבה L1. זוהי שיטה פשוטה, אך נפוצה מאוד, ולכן היא תהיה שימושית למדי עבורכם כמתחילים.אם אתם מומחים בשפת C, ייתכן שתמצאו כאן מספר טיפים לאופטימיזציה של פרוטוקול זה. הבסיס לסנכרון התולעים מבוסס על העמידות היחסית של העוברים לעומת תולעי מבוגרים לתמיסת היפוכ לוריט בסיסית. תולעים בוגרות אלו, שבתוכן עוברים רבים, מדגירות עם תמיסת היפוכ לוריט כך שהן נהרגות ורק העוברים נותרים.החלק השני של הסנכרון מושג באמצעות מחסור במזון, כך שגם אם העוברים נלכדים בזמנים שונים, הם אינם מתפתחים מעבר לשלב L1. השלב הראשון להתחלת פרוטוקול ה-blitzing הוא להביא את התולעים לשלב הטלת הביצים, כאשר מספר ביצים מפוזרות על הפלטה. השתמש ב-M9 כדי להחלים את הבוגרים לצורך איסוף.בנוסף, ניתן לגרד את העובריים שכבר הגיעו לפני השטח של המצע באמצעות חומר רך, כגון פיסת סרט רנטגן, ולשטוף את החיידקים שנסחפו בעזרת מספר שטיפות של M9. בדרך כלל, שתי שטיפות מספיקות. לאחר שטיפת התולעים, ניתן להוסיף את תמיסת ההלבנה שהוכנה טרי, בהתאם להעדפותינו.שמרו על זמן הדגרה קבוע תוךما ניעור של המבחנה. ניתן לעקוב אחר התפתחות הבוגרים תחת מיקרוסקופ סטריאו. כאשר כמעט ולא נותרים פגריים, הפסיקו את התהליך על ידי הוספת M nine עד שהמבחנה תהיה מלאה לחלוטין.כדי להשלים את הפרוטוקול, בצעו לפחות שלושה שטיפות. ביצה ב-M

basic-caenorhabditis-elegans-methods-synchronization-and-observation

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה אנו מראים שיטה ליצירת אוכלוסייה מסונכרנת התפתחותית של C. elegans בוגרים סטריליים. הפרוטוקול לדוגמה מסנכרן תולעים כדי לחקור את שיעורי צריכת החמצן בבעלי חיים חיים.

סנכרון נמטודות: שיטה להשגת אוכלוסיות של תולעים בשלבי התפתחות זהים

כדי לחקור את הקשר בין הומאוסטזיס חלבון, מתח והזדקנות, עקבנו אחר שינויים בקיפול החלבון על ידי מעקב אחר תפקוד לקוי של חלבון, לוקליזציה של חלבון בתא ויציבות החלבון ברמת האורגניזם, התא והחלבון, תוך שימוש במטזואן Caenorhabditis elegans הניתן לטיפול גנטי כמערכת מודל.

שימוש ב-Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לחקר הומאוסטזיס חלבון באורגניזם רב-תאי

כאן, אנו מאפיינים את התגובות הסלולר מדגיש התגובה התאית ב-נמטודות C. אלגיה על ידי מדידת ההפעלה של כתבים פלורסנט ההמרה ולומר רגישות ללחץ פיזיולוגי.

מדידות התגובות הפיזיולוגיות של הלחץ בג. אלגיה

כאן, פרוטוקולים מתוקננת מוצגים כדי להעריך את האינדוקציה של תגובת הלם חום (HSR) בתוך האלגיה Caenorditis באמצעות RT-qpcr ברמה המולקולרית, כתבים פלורסנט ברמה התאית, ו thermorecovery אוד ברמה ארגונית.

שיטות מתוקננת למדידת אינדוקציה של תגובת הלם חום באלבורבדיוטיס

כאן אנו מציגים פרוטוקול להכנה והרכבה של עוברי Caenorhabditis elegans , רישום התפתחות תחת מיקרוסקופ 4D ואיתור שושלת תאים.

מיקרוסקופיה 4D: חשיפת קאנורהבדיטיס אלגנס התפתחות עוברית באמצעות מיקרוסקופיה של נומרסקי

מחקר זה מציג פרוטוקולים עבור שתי גישות ניתוח פעילות לוקומוטור חצי אוטומטי ב C. elegans קומפלקס I מחלות גז-1(fc21) תולעים, כלומר, ZebraLab (בדיקת תפוקה בינונית) ו- WormScan (בדיקה בעלת תפוקה גבוהה) ומספקים ניתוח השוואתי בין מגוון רחב של שיטות מחקר לכימות התנהגות נמטודה ותפקוד עצבי שרירי משולב.

ניתוח השוואתי של שיטות ניסיוניות לכימות פעילות בעלי חיים בקאנורבדיטיס אלגנס מודלים של מחלות מיטוכונדריאליות

פרוטוקול זה מתאר שיבוש של 96 קידוחים של קאנורהבדיטיס אלגאן (Caenorhabditis elegans ) המיושבים בחיידקים בעקבות שיתוק קר והלבנת פני השטח כדי לסלק חיידקים חיצוניים. התרחיף המתקבל מצופה על לוחות אגר כדי לאפשר כימות מדויק בתפוקה בינונית של עומס חיידקים במספר גדול של תולעים בודדות.

שימוש בנתונים של תולעת בודדת כדי לכמת את ההטרוגניות באינטראקציות של Caenorhabditis elegans-Bacterial

Caenorhabditis elegans משמשים כמערכת מודל מצוינת עם שיטות חזקות ובעלות נמוכה לסקר את תוחלת החיים, תוחלת החיים והחוסן ללחץ.

סקר שיטות בעלות נמוכה למדידת תוחלת החיים ותוחלת הבריאות ב - Caenorhabditis elegans

זוהי שיטה נפוצה עבור דיסקציה של גונאד C. elegans ואחריה סדק הקפאה, אשר מייצרת דגימות germline עבור immunofluorescence באמצעות צביעת נוגדנים, או עבור צביעת DAPI פשוטה כדי לדמיין DNA. פרוטוקול זה זכה להצלחה עבור סטודנטים לתואר ראשון במעבדת מחקר ובהתנסות מחקרית לתואר ראשון מבוססת קורסים.

ג. אלגנס גונד דיסקציה והקפאת סדק לאימונופלואורסצנציה וצביעת DAPI

פרוטוקול זה מספק גישה סטנדרטית להדמיית מורפולוגיה מיטוכונדריאלית ברקמות מרובות של C. elegans במהלך ההזדקנות.

הדמיה וכימות מורפולוגיה מיטוכונדריאלית ב - C. elegans במהלך ההזדקנות

מחקר זה בוחן את השפעת הגיל על התנועה ב-C. elegans על ידי מדידת מעריך ליאפונוב הגדול ביותר (LLE). ככל שהם מתבגרים, C. elegans מראים עלייה וירידה בשליטה המוטורית. התוצאות מראות שיא LLE לאחר חמישה ימים, ואחריו ירידה ככל שהתולעים מזדקנות.

דינמיקה תלוית גיל של תנועה ב- Caenorhabditis elegans: ניתוח מעריך ליאפונוב

למדו שיטת סנכרון ל-Caenorhabditis elegans בשלב הלרווה הראשון באמצעות תמיסת היפוכלוריט אלקלי. פרוטוקול זה מאפשר מחקר מדויק של תהליכי התפתחות בביולוגיה התפתחותית.

בסיסי

גלה סרטונים נוספים