Name: הפקת RNA מן התאים Neuroprecursor שימוש Bio-Rad סך RNA Kit (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:51:30.000+00:00
Duration: 17 min 25 s
Description: למדו כיצד לחלץ RNA מתאי קדם-עצביים באמצעות ערכת Bio-Rad RNA mini kit. השיטה מספקת תוצאות עקביות ותפוקה גבוהה מקורטקסים עובריים לחקר ביטוי גנים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

הפקת rna מן התאים neuroprecursor שימוש bio-rad סך rna kit

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

הפקת RNA מן התאים Neuroprecursor שימוש Bio-Rad סך RNA Kit

שלום, אני ג'וש ש', סטודנט לתואר מתקדם במעבדתו של ד"ר אד מאקי באוניברסיטת קליפורניה ארווין. אדגים לכם כיצד להפיק RNA מתאי קדמיים נוירונליים באמצעות ערכת ה-BioRad to RNA mini kit. אני משתמש בערכה זו כבר מספר שנים במעבדה זו, והיא תמיד סיפקה לי תוצאות עקביות עם תתיב גבוה.התאים שבהם אנו משתמשים הם תאי אב עצביים מסוג Eton and a half שפורקו באופן אקוטי מקליפות מוח עובריות, ואנו זורעים אותם בדרך כלל בלוחית 24 בארות שעברה טיפול לתרביות רקמה וצופה ב-PD L ובלמינאט, ואני זורע אותם בריכוז של 100,000 תאים לבאר. לפני שאתחיל, עליי לציין שעליכם לעבוד על שולחן עבודה ייעודי שבו אתם מבצעים את עבודת ה-RNA שלכם. הדבר הראשון שיש לעשות הוא לוודא ששולחן ה-RNA נקי.הדרך המתאימה לניקוי השולחן היא להשתמש ב-RNA zap. למעשה, הוא משמיד את כל ה-RNAs, מכיוון שה-RNase בעצמו הורס את ה-RNAs שלכם. דבר נוסף הוא להרכיב כפפות תמיד בעת ביצוע ההפקה, כיוון שהעור שלכם מלא ב-RNAs אלו.לכן, זהו דבר שאסור לעשות. אוקיי, מה שיש לי כאן הוא ערכת ה-BioRad total RNA mini. הוצאתי את תכולתה, אז הרשו לי להראות לכם מה היא כוללת.ראשית, יש לנו PBS שעובד עם X dep C, וכן אתנול 70% שעובד עם DEP. יש לנו תמיסת רישוי ל-RNA כולל, לה נוסף אתנול. שנית, שטיפה ברמת מחומריות נמוכה (low stringency) לה נוסף אתנול 100%, שטיפה ברמת מחומריות גבוהה (high strin

rna-extraction-from-neuroprecursor-cells-using-bio-rad-total-rna

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מציגים שיטה להפקת cDNA מ-mRNA הסביבה. באופן כללי, הכולל RNA נאסף הראשון הסביבה, rRNA מוסר סלקטיבי, mRNA מוגבר באופן סלקטיבי, ועל cDNA מסונתז ממאגר mRNA מועשר הוא רצף. רצפים ששוחזרו ניתן להוסיף הערות באמצעות תקן טכניקות ביואינפורמטיקה כדי לזהות את הגנים לידי ביטוי.

ניתוח ביטוי גנים מקהילות מיקרוביאלית ימית באמצעות Transcriptomics הסביבה

אנו מתארים תהליך באמצעות לייזר ללכוד microdissection לבודד תמצית RNA מתוך אוכלוסייה הומוגנית תא, עצב פירמידליים, בשכבה III של gyrus הזמני מעולה במוח האנושי שלאחר המוות. לאחר מכן אנו להגביר באופן ליניארי (T7 מבוססי) mRNA, ועל להכליא את המדגם כדי האנושית Affymetrix X3P microarray.

קבלת RNA איכות גבוהה מאוכלוסיות תא בודד בתוך רקמות המוח האנושי שלאחר המוות

בשל האופי החולף של mRNA מראש, זה יכול להיות קשה לבודד...

שיטה מהירה תפוקה גבוהה עבור Ribonucleoproteins מיפוי (RNPs) על mRNA מראש אדם

במאמר זה אנו מתארים שיטה פשוטה קצירת של תאים בודדים מתרבויות עכברוש העיקרי העצבית וניתוח transcriptome הבאים באמצעות הגברה ארנה. גישה זו היא להכליל לכל סוג תא.

ניתוח Transcriptome של תאים בודדים

צעד אחר צעד לפרוטוקול בידוד וזיהוי RNA מתחמים הקשורים באמצעות RIP שבב.

שיטה לבידוד וזיהוי mRNAs, רנ&quot;א ורכיבי חלבון של מכלולי Ribonucleoprotein מתמציות סלולריות באמצעות שבב RIP

אינטראקציות חלבון RNA נמצאות בלב תהליכים תאיים רבים. כאן, אנו מתארים שיטת in vivo לבידוד RNA ספציפי וזיהוי חלבונים חדשים הקשורים אליו. זה יכול לשפוך אור חדש על האופן שבו RNA מווסתים בתא.

RNA מחייב רומן בידוד חלבונים לפי שיטת RAPID

שני שונים 3' מהירה הגברה של הקצוות cDNA (3' מירוץ) פרוטוקולים שתואר כאן הופכים את השימוש של שני polymerases דנ א שונים כדי למפות רצפים הכוללים קטע של מסגרת קריאה פתוחה (ORF) על stop codon, את כולה 3' UTR של תעתיק באמצעות ה-RNA להשיג שורות תאים סרטן שונים.

התאמת 3' הגברה מהירה של CDNA מסתיים למפות תעתיקים של סרטן

שיטה זו נפתחים RNA מאפשר זיהוי המטרות RNA של RNA לונג ללא קידוד (lncRNA). על סמך הכלאה תוצרת בית, מעוצב תחושה אנטי DNA oligonucleotide הגששים הספציפי הזה lncRNA רקמות כראוי קבוע או שורת התאים, ביעילות מאפשר לכידת כל המטרות RNA של lncRNA.

הליך RNA הנפתח כדי לזהות מטרות RNA לונג ללא קידוד RNA

RNAs מעגלית (circRNAs) הם RNAs שאינם מצפינה לקידוד שעשויים להיות בעלי תפקידים ברגולציה ובניהול אינטראקציות מדיה בין חלבונים. בעקבות הערכה של פרמטרים שונים לבניית ספריות רצף circRNA, פרוטוקול הושלם באמצעות הכנה נטוש הכולל הספריה RNA עם RNase R טרום טיפול והוא מוצג כאן.

זיהוי של RNAs מעגלית באמצעות רצפי RNA

ריצוף RNA לכימות מוחלט (AQRNA-seq) היא טכנולוגיה שפותחה כדי לכמת את הנוף של כל הרנ"א הקטן בתערובות ביולוגיות. כאן, הן שלבי הכנת הספרייה והן שלבי עיבוד הנתונים של AQRNA-seq מודגמים, המכמתים שינויים במאגר RNA העברה (tRNA) ב- Mycobacterium bovis BCG במהלך תרדמה הנגרמת מרעב.

AQRNA-seq לכימות רנ"א קטן

למדו כיצד לחלץ RNA מתאי קדם-עצביים באמצעות ערכת Bio-Rad RNA mini kit. השיטה מספקת תוצאות עקביות ותפוקה גבוהה מקורטקסים עובריים לחקר ביטוי גנים.

הפקת RNA מן התאים Neuroprecursor שימוש Bio-Rad סך RNA Kit

גלה סרטונים נוספים