Name: ייצור ושימוש של microarrays Microenvironment (MEArrays) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-11T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 57 s
Description: חקור את השפעת המיקרואנביבה על תפקודי תאים שונים באמצעות שיטת סקרינג קומבינטורית מתקדמת. שיטה זו מאפשרת ניתוח מערכי מיקרואנביבה ומדידת השפעתם על הידבקות, התמיינות והתרבות של תאים שונים במעבדה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ML נתמך על ידי NIA (R00AG033176 וR01AG040081) ועל ידי מעבדת מחקר ופיתוח בימוי, ארה&quot;ב מחלקת אנרגית החוזה # DE-AC02-05CH11231.

<ol><li>Bissell, M. J., Labarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Context%2C+tissue+plasticity%2C+and+cancer%3A+are+tumor+stem+cells+also+regulated+by+the+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Context, tissue plasticity, and cancer: are tumor stem cells also regulated by the microenvironment.</a> Cancer Cell. 7, 17-23 (2005).</li>
<li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+elasticity+directs+stem+cell+lineage+specification%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Matrix elasticity directs stem cell lineage specification.</a> Cell. 126, 677-689 (2006).</li>
<li>McBeath, R., Pirone, D. M., Nelson, C. M., Bhadriraju, K., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+shape%2C+cytoskeletal+tension%2C+and+RhoA+regulate+stem+cell+lineage+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Cell shape, cytoskeletal tension, and RhoA regulate stem cell lineage commitment.</a> Dev. Cell. 6, 483-495 (2004).</li>
<li>LaBarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mammary+progenitor+cell+fate+decsions+are+products+of+interactions+with+combinatorial+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Human mammary progenitor cell fate decsions are products of interactions with combinatorial microenvironments.</a> Integrative Biology. 1, 70-79 (2009).</li>
<li>Kim, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+Methods+for+Polymers+in+Cell+and+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+biomedical+engineering%22%5BJournal%5D)">Patterning Methods for Polymers in Cell and Tissue Engineering.</a> Annals of biomedical engineering. , (2012).</li>
<li>Boudou, T., Ohayon, J., Picart, C., Pettigrew, R. I., Tracqui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+elastic+properties+of+polyacrylamide+gels%3A+implications+for+quantification+of+cellular+forces%5BTitle%5D)+AND+%22Biorheology%22%5BJournal%5D)">Nonlinear elastic properties of polyacrylamide gels: implications for quantification of cellular forces.</a> Biorheology. 46, 191-205 (2009).</li>
<li>Tse, J. R., Engler, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+hydrogel+substrates+with+tunable+mechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of hydrogel substrates with tunable mechanical properties.</a> Current protocols in cell biology. Chapter 10, Unit 10(2010).</li>
<li>Flaim, C. J., Chien, S., Bhatia, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extracellular+matrix+microarray+for+probing+cellular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">An extracellular matrix microarray for probing cellular differentiation.</a> Nat. Methods. 2, 119-125 (2005).</li>
<li>Soen, Y., Mori, A., Palmer, T. D., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+regulation+of+human+neural+precursor+cell+differentiation+using+arrays+of+signaling+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Syst.+Biol%22%5BJournal%5D)">Exploring the regulation of human neural precursor cell differentiation using arrays of signaling microenvironments.</a> Mol. Syst. Biol. 2, 37(2006).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

שיטת MEArray מוצגת כאן מאפשרת ניתוח פונקציונלי של תאים ואינטראקציות Microenvironment קומבינטורית 4. ניתוח MEArray משלב שימוש בטכנולוגיות בסיסיות micropatterning, ביולוגיה של תא, ורובוטי הדפסה microarray ומכשירי ניתוח הזמינים במתקנים מרובים משתמשים רבים. מסכי MEArray תואמים סוגי תאים חסידים ביותר, אם כי ניסוחי מדיה סרום נטולי ייתכן שיצטרכו להיות מותאמים במקרים מסוימים לכלול BSA או &lt;1% בסרום, אשר יכול לשפר את הקובץ מצורף. שיטה זו היא מוגבלת על ידי הזמינות של חומרים כימ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> זכוכית שקופיות 25 מ&quot;מ x 75 מ&quot;מ </td><td> VWR </td><td> 48311-600 </td><td></td></tr><tr><td> זכוכית coverslips (מס &#39;1) 24 מ&quot;מ x 50 מ&quot;מ </td><td> VWR </td><td> 48393-241 </td><td></td></tr><tr><td> מנה מכתימה (או צנצנת Coplan) </td><td> VWR </td><td> 25461-003 </td><td></td></tr><tr><td> צלחות פטרי (15 סנטימטרים) </td><td> BD פלקון </td><td> 351058 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH (1.0N) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> S2567 </td><td></td></tr><tr><td> קופים (&gt; 98% (3-Aminopropyl) triethoxysilane) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A3648 </td><td></td></tr><tr><td> Glutaraldehyde </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> G7651 </td><td> 50% במים </td></tr><tr><td> APS (&gt; 98% Persulfate אמוניום) </td><td> Sigma אולדריץ </td><td> A3678 </td><td> הכן 10% פתרון עובד עם DDH 2 O </td></tr><tr><td> TEMED (N, N, N &#39;, ניצבת בין Tetramethylethylenediamine) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td> Acrylamide (40%) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A4058 </td><td></td></tr><tr><td> Bis-acrylamide (2% w / v) </td><td> BioReagents הפישר </td><td> BP1404-250 </td><td></td></tr><tr><td> 0.45 מיקרומטר מזרק ניילון מסנן 4-מ&quot;מ </td><td> Nalgene </td><td> 176-0045 </td><td></td></tr><tr><td> FITC </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> F4274 </td><td></td></tr><tr><td> PDMS (polydimethylsiloxane) </td><td> Dow Corning </td><td> 3097358-1004 </td><td> ערכת אלסטומר Sylgard 184 באמצעות דבקי Ellsworth </td></tr><tr><td> שקופיות 2-קאמריות </td><td> NUNC </td><td> 177380 </td><td></td></tr><tr><td> Pluronic F108 </td><td> BASF </td><td> 30089186 </td><td></td></tr><tr><td> Aquאיטום arium </td><td> Dow Corning </td><td> DAP 00688 </td><td></td></tr><tr><td> Fluormount-G </td><td> דרום יוטק </td><td> 0100-01 </td><td></td></tr><tr><td> כוסות פלסטיק חד פעמיות </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> מקלוני לשון </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> כפפות Nitrile </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> שקופיות מיקרוסקופ תיבות פלסטיק </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> הספין coater </td><td> WS-400B-6NPP/LITE </td><td> Laurell טכנולוגיות חברה </td><td></td></tr><tr><td> תנור </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> פלטה חשמלית דיגיטלית </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> צלחות 384 גם </td><td></td><td></td><td> מותג מתאים לרובוט microarray </td></tr><tr><td> רובוט הדפסת microarray </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> שלב הפוך ומיקרוסקופ פלואורסצנטי </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> אקסון microarray סורקים </td><td> התקנים מולקולריים </td><td></td><td> תצורות מרובות קיימות </td></tr></tbody></table>

ייצור ושימוש של microarrays microenvironment (mearrays)

Fabrication and Use of MicroEnvironment microArrays (MEArrays)

יחסי הגומלין בין התאים וסביבתם Microenvironment יש השלכות תפקודיות להתנהגות סלולרית. ברמת התא הבודדה, microenvironments שונה יכול לכפות בידול, הגירה, ופנוטיפים תפוצה, וגם ברמת רקמות microenvironment תהליכים מורכב כמו המורפוגנזה וtumorigenesis 1. לא רק שתא ותכולה מולקולרית של השפעת microenvironments את התאים מבפנים, אבל כך גם הגמישות 2 ו 3 גיאומטריה של הרקמה. מוגדר כסכום הכולל של תאי תאים,-ECM, ומסיסות אינטראקציות של גורמים, בנוסף למאפיינים פיסיים, microenvironment הוא מורכב. פנוטיפים של תאים בתוך רקמה באופן חלקי בשל התכולה הגנומי שלהם וחלקו בשל האינטראקציות קומבינטורית עם microenviroment. אתגר גדול הוא לקשר שילובים ספציפיים של רכיבי microenvironmental עם התנהגויות ייחודיות. אף אוזן גרון &quot;&gt; כאן, אנו מציגים את פלטפורמת המיקרו microarray (MEArray) להקרנה פונקציונלית מבוססת תאים של אינטראקציות עם microenvironments קומבינטורית 4. השיטה מאפשרת שליטה בו זמנית של ההרכב המולקולרי ומודולוס האלסטיות, ומשלבת את השימוש של microarray הזמין באופן נרחב וטכנולוגיות micropatterning. מסכי MEArray דורשים מעטים כמו 10,000 תאים לכל מערך, המאפשרים לימודים תפקודיים של תאים מסוגים נדירים כגון תאי אב מבוגרים. מגבלה של הטכנולוגיה היא שmicroenvironments רקמות שלמים לא ניתן סכם לחלוטין על MEArrays. עם זאת, השוואה של תגובות באותו סוג תא לmicroenvironments נלווה רב, למשל שילובי pairwise של חלבוני ECM המאפיינים את הרקמה נתונה, תספקנה תובנה כיצד רכיבי microenvironmental לעורר פנוטיפים תפקודיים רקמות ספציפיות. MEArrays ניתן להדפיס תוך שימוש במגוון רחב של רקומביננטי groגורמי wth, הציטוקינים וחלבונים מטוהרים ECM, והצירוף. הפלטפורמה היא מוגבלת רק על ידי הזמינות של חומרים כימיים ספציפי. MEArrays ניתן לניתוח נושן, אבל לרוב משמש לניתוחי נקודת סיום של פונקציות תאיות הניתנות למדידה בבדיקות ניאון. לדוגמה, סינתזת דנ&quot;א, אפופטוזיס, רכישה של מדינות מובחנות, או ייצור של מוצרי גן ספציפיים נמדדת בדרך כלל. בקצרה, את הזרימה הבסיסית של ניסוי MEArray היא להכין שקופיות מצופות מצע הדפסה ולהכין את צלחת ההורים של חלבונים, כי הם להיות מודפסים. אז המערכים מודפסים עם רובוט microarray, תאים מותר לצרף, לגדול בתרבות, ולאחר מכן כימי קבועים עם הגיע לנקודת סיום הניסוי. מבחני פלורסנט או colorimetric, הדמיה עם מיקרוסקופים מסורתיים או סורקי microarray, משמשים כדי לחשוף פנוטיפים מולקולריים ותאיים הנוגעים בדבר (איור 1).

שיטת הקרנה פונקציונלית קומבינטורית לתובנה להשפעות של ההרכב המולקולרי של microenvironments על תפקודים תאיים מתוארת. השיטה מנצלת את הטכנולוגיות קיימות microarray מבוססים לייצר מערכים של microenvironments קומבינטורית מוגדר התומכים הידבקות תא וניתוח פונקציונלי.

ייצור ושימוש של microarrays Microenvironment (MEArrays)

האינטראקציות בין תאים לבין המיקרו-סביבה המקיפה אותם גוררות השלכות פונקציונליות על ההתנהגות התאית. ברמת התא הבודד, ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא למדוד את ההשפעות של מיקרו-סביבות שונות על תפקודים תאיים של סוגי תאים נצמדים, על ידי חשיפתם במקביל לאוסף מגוון של מיקרו-סביבות קומבינטוריות. דבר זה מושג תחילה על ידי ייצור של מצעי הדפסה התומכים בספיגה של תערובות של חלבונים מיקרו-סביבתיים. לאחר מכן מוכנות לוחיות מאסטר של חלבונים מיקרו-סביבתיים, המשמשות להדפסת מערכי ME באמצעות רובוט להדפסת מערכי מיקרו-סיכות מסוג quill או capillary.בשלב הבא מכינים פלטות מאסטר של חלבונים מיקרו-סביבתיים. לאחר מכן, מגדלים תאים נצמדים על מערך ה-ME, עם אפשרות להגבלת מספר התאים. התוצאות המתקבלות מראות את השפעת הסביבות המיקרו-סביבתיות השונות על תפקודים תאיים, כגון דיפרנציאציה או פרוליפרציה, בהתבסס על ניתוח אימונופלואורסצנציה.הרעיון לשיטה זו עלה תחילה כאשר ביקשנו לכמת את השפעותיהם של מיקרו-סביבות רקמה על החלטות לגבי גורלן של תאי גזע של הזיכרון האנושי, אך הבנו כי עבודה in vivo אינה אפשרית. כעת, לאחר שפותחה, יש לה יישומים רבים בביולוגיה של התא, במחקר ובגילוי תרופות. PDMS משמש כמצע המדמה רקמות קשיחות יותר, היות שהוא זול, קל להכנה וקל להדפסה.עם זאת, ההידרופוביות של PDMS עלולה להפוך אותו לבלתי תואם עם קווי תאים מסוימים בעת עבודה עם רכיבי PDMS. יש להשתמש בכפפות ללא לטקס, מכיוון שלטקס עלול לעכב את הפולימריזציה של ה-PDMS. כדי להתחיל, ערבבו בכוס פלסטיק חד-פעמית בסיס אלסטומר סיליקון מסוג SYLGARD 184 עם חומר המקשה ביחס של 10 ל-1, וערבבו בעוצמה באמצעות מדחף לשון מעץ או מפלסטיק.בשלב הבא, יש לבצע ניקוי גזים (degassing) לתערובת בפעמון ואקום בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. כעת, מרכזו שקופית מיקרוסקופ סטנדרטית על גבי תפסן הוואקום המופעל של מכשיר Spin Coater, לאחר מכן טפטפו 0.5 milliliters של פולימר האלאסטומר המעורב למרכז פני השקופית ובצעו ציפוי ספין (spin coating) במהירות של 6,000 RPM למשך 60 שניות. יש להקשות את השקופיות המצופות ב-PDMS בטמפרטורה של 70 °C למשך ארבע שעות או עד למשך הלילה.ניתן לאחסן את השקופיות באטימה להוויר בטמפרטורה של החדר למשך מספר חודשים. PA הוא הידרוג'ל שיכול לחקות רקמות רכות בטווח שבו תאים של PA ייצמדו רק לנקודות שבהן קיימים חלבונים התומכים בהיצמדות תאים. התחל בתעשיית השקופיות באמצעות נתרן הידרוקסיד.הניחו את השקופיות על בלוק חימום בטמפרטורה של 80 °C. טפטפו מיליליטר אחד של נתרן הידרוקסיד 0.1 normal על כל שקופית. ודאו כי כל שטח השקופית מכוסה, אחרת ה-PA ייכשל.הניחו לסודיום הידרוקסיד להתאדות עד להשארת שכבה לבנה. חזרו על תהליך זה אם הפני השטח אינם מכוסים לחלוטין. ניתן לשמור את הזכוכית בטמפרטורת החדר למשך מספר ימים במידת הצורך.בשלב הבא, יש לצפות את העגילות ב-PES בתוך מ常用的 מנדף. מקמו את העגילות בצלחת של 15 milliliter. הוסיפו 300 microliters של PES על כל עגילה שנצרבה בנתרן הידרוקסיד.הניחו ל-APES להגיב עם שקופיות הסודיום הידרוקסיד למשך חמש דקות בדיוק. לא יותר מכך. שטפו את ה-APES ביסודיות במים דה-יוניים שתיים עד שלוש פעמים משני צידי השקופיות.אחרת, הוא יתחמצן ויהווה משק了一种 חום על השקופיות בשלב הבא. כעת, שאבו את כל התמיסות ממשטחי השקופיות לכל צלחון. הוסיפו 25 milliliters של 0.5%glutaraldehyde ב-PBS.הניחו את השקופיות בחושך והמתינו 30 דקות. לאחר 30 דקות, שאבו את כל תמיסת הגלוטראלדהיד מפני השטח של השקופית. לאחר מכן ייבשו את השקופיות בזהירות באמצעות נייר סופג ללא סיבים.ניתן כעת לאחסן את השקופיות בטמפרטורת החדר למשך הלילה במידת הצורך. לאחר הכנת תערובות ה-PA וניקוז הגזים מהן, יש להניחן על קרח כדי להאט את הפולימריזציה שלהן. ממש לפני הכנת השקופיות לכל תערובת על קרח, יש להוסיף ammonium per sulfate ו-temid ולערבב אותם באמצעות פיפטה במשך 5 עד 10 שניות.כעת טפטפו באמצעות פיפט את תערובת ה-PA על פני השטח של העגלה. כמות ה-PA משתנה בהתאם לקשיחות הג'ל הנדרשת. לאחר מכן, הניחו כיסויי זכוכית מעל ה-PA ללא הפעלת לחץ, כדי למנוע היווצרות בועות.הניחו לג'ל ה-PA להתבלגנת במשך שעתיים ולאחר מכן הסירו את כיסיי הזכוכית תחת מים דאיוניים. שטפו את שקופיות ג'ל ה-PA במים בתוך צנצנות Coplan גדולות למשך הלילה. כדי להסיר אקרילאמידים שאינם פעילים, ייבשו את השקופיות למחרת עד שג'ל ה-PA יתקשה לחלוטין.ניתן לאחסן את השקופיות בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך חודש בתיבת שקופיות אטומה. ראשית, מותאם תא פלסטיק כך שיקיף את המערך המודפס משקופית בעלת שני תאים. הסירו את התאים וחתכו אותם לחצי באמצעות להב תער.השתמשו בטיפ של פיפט של 1 ml כדי למרוח פס דק של סיליקון לאקווריום על קצה התא והדביקו אותו לפני השטח של מערך Emmy. הימנעו ממגע של הסיליקון עם כל אחד ממאפייני המערך. הבטחת היצמדות טובה של דפנות התרבית למערך ה-Emmy היא קריטית, מכיוון שדפנות לא צמודות מאפשרות למצע לדלוף מהתאים, דבר שעלול להוביל למות תאים נרחב.עבור שקופיות מצופות PDMS, חסמו את השקופיות על ידי הדגרה שלהן ב-1% onic F 108 מימי במשך 15 דקות תחת ואקום עבור כל אחד מסוגי הג'ל; שטפו את המערכים עם מצע תרבית תאים עם אנטיביוטיקה שלוש פעמים, למשך חמש דקות לכל שטיפה. פעולה זו מסירה מונומרים שאינם תגובתיים, שעלולים להיות רעילים לתאים במקרה של ג'לי PA. לאחר השטיפה השלישית, המתינו ל-30 דקות נוספות של הדגרה במצע כדי להמחיא את הג'ל.כעת הניחו ארבעה עד חמישה מערכים בתוך צלחת פטרי סטרילית של 15 סנטימטרים. הוסיפו לצלחת מחצית מנפח המדדי הסופי עם התאים הרלוונטיים בריכוז הנדרש ליישומם. יש להניח מערכי ME באינקובטור המתאים לתחזוקת סוג התאים שבהם נעשה שימוש.בדקו תחת מיקרוסקופ את ההיצמדות האחידה של התאים למבנים המודפסים מדי 15 עד 20 דקות במהלך התצפית. נערה בעדינות את מערכי ה-ME כדי להבחין בין תאים היצמדו לתאים צפים. זמן ההיצמדות ישתנה, אך בדרך כלל הוא נמשך כשעתיים במערך ME מקודד PA.לאחר הגעה לרוויית היצמדות או לאחר תום פרק הזמן שנקבע, שאבו את התאים שאינם קשורים ומלאו את הצלחת לנפח הסופי במערכי ME מצופים ב-PDMS. הסרה מוחלטת של כל המצע תהרוג את התאים. לכן, עבור כל החלפת מצע בגלשיות אלו, החליפו בהדרגה מחצית מנפח המצע ולאחר מכן מלאו את הצלחת לנפח הסופי.ניתן להמשיך בגידול במשך מספר ימים עם החלפות מדיה רגילות. מקבעים נפוצים כגון paraform, aldehyde, ו-methanol acetone תואמים למערכות ה-Emmy array. זכרו שגם בזמן צביעה, מערכי ME מצופים ב-PDMS חייבים להישאר רטובים.המשיכו בטכניקה של החלפת חצי הנפח כדי להכין שקופיות של מערכי ה-ME הצבועים. השתמשו בלהב תער כדי להסיר את התאים והדביקו זכוכיות כיסוי באמצעות flora. חלבון G הופקד על מערך ME מודפס ומקודד ב-PDMS באמצעות פינים סיליקוניים בעלי קצה מרובע על גבי quill pin.השקעה של חלבונים שונים על ידי רובוט הדפסת מיקרו-מערכים אומתה באמצעות אימונופלואורסצנציה בעזרת נוגדנים. הדילולים של תמיסות החלבון בלוח המאסטר שיקפו את הכמות שהושקעה על פני השטח של תת-הנשאי להדפסה; תאים נצמדו לתבניות המודפסות באופן דפוסוסי ברור. באופן דומה, אותו דפוס ברור של היצמדות תאים מתרחש כאשר מערך Emmy מודפס בקנה מידה של 40,000 מעברים.שני חלבונים של מיקרו-סביבה ב-PA gel עוררו פרופילים של ביטוי קרטין תלויי-ריכוז בשורת תאים של תאי אב אפיתליאליים של השד בעלי פוטנציאל רב-כווני באדם. יחס הלוגריתם של אותות קרטין 8 לאותות קרטין 14 ממחיש את השונות ואת השחזוריות של האות. לאחר 24 שעות של תרבית, תאים שאינם קשורים נשטפים בניתוח של 12 מערכי me.נעשה שימוש בניתוחים סטטיסטיים סטנדרטיים כדי לקבוע האם הדילול השונים של קולגן מסוג 1 ו-p-cadherin אנושי רקומביננטי גורמים לשינויים בביטוי קרטין. בתחילה, לא נצפתה שונות מהממוצע בין התאים על המבנים מיד לאחר ההיצמדות. עם זאת, לאחר 24 שעות, ריכוזים גבוהים של קולגן מסוג 1 עוררו ביטוי גבוה באופן מובהק של קרטין 8.בעוד שריכוזים גבוהים של PCA גרמו לאות חזק של keratin 14. ממצא זה עקבי עם דיווחים קודמים על תאי פרוגניטור זיכרון דו-פוטנציאליים. בשל הטבע הדינמי וההדדי של אינטראקציות אלו עם מיקרו-סביבת התאים, תאים אלו יכולים לשנות בעצמם את הרכב המיקרו-סביבות המודפסות.לפיכך, כדי להבין את ההשפעות האקוטיות של המיקרו-סביבות שהדפסתם, זמן החשיפה לא יעלה על 48 שעות לאחר ביצוע הליך זה. ניתן לבחון כל תהליך תאי הניתן למדידה, באופן פלואורסצנטי או כימי, כפונקציה של המיקרו-סביבה במטרה לענות על שאלות נוספות, כגון: כיצד מיקרו-סביבות שונות משנות תגובות לתרופות בקווי תאים של סרטן? ניתן למדוד זאת באמצעות שינויים באפופטוזיס ובשגשוג תאים.או כיצד מיקרו-סביבות משנות את הגבשת התאים הפרוגניטורים.

fabrication-and-use-of-microenvironment-microarrays-mearrays

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הליך פשוט של ביצוע ניסויים אישית microarray microRNA מתואר. הצעדים כוללים בידוד RNA, תיוג RNA ו-DNA התייחסות, והכלאה דגימות כדי microarrays, סורקת את microarrays, כימות וניתוח אותות הכלאה.

ביצוע ניסויים אישית microarray MicroRNA

תיאור של ההיווצרות של הפולימר microarray באמצעות טכניקת photopolymerization על שבב. אפיון משטח התפוקה הגבוהה באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי, מדידות זווית מגע מים, ספקטרוסקופיה Photoelectron רנטגן ושעה של ספקטרומטריית טיסה משנית יון המוני וassay מצורף תא גם תאר.

Microarrays פולימר לגילוי תפוקה גבוהה של Biomaterials

סרטון זה מדגים טכניקה המיישמת טכנולוגיית מיקרו-מערך פפטידי כדי לאפיין את הספציפיות של נוגדנים המזהים שינויים לאחר תרגום (PTM) על פפטידי היסטון. שקופית מיקרו-מערך המכילה פפטידים מצומדים פלואורופורים משותקים עם שילובי PTM ידועים מטופלת בנוגדנים ספציפיים ל-PTM מטרה. תהליך זה מסייע לזהות את הספציפיות של הנוגדן למטרה ואת התגובתיות הצולבת הפוטנציאלית שלו עם PTM שאינם מטרה.

טכנולוגיית מיקרו-מערך פפטידי לפרופיל ספציפיות של נוגדנים

Microarray הגברה משלב הכלאת הגברה וmicroarray PCR אסימטרי לתוך תא בודד, אשר מייעל באופן משמעותי את זרימת עבודה microarray למשתמש הקצה. פישוט זרימת העבודה microarray הוא צעד ראשון הכרחי ליצירת אבחון מבוסס microarray שניתן להשתמש באופן שיגרתי בסביבות נמוכים יותר משאבים.

הוכחת סמים רבים עמידים<em&gt; חפת Mycobacterium</em&gt; Microarray ההגברה

מתוארים פרוטוקולים לכימות אינטראקציות מכניות בין תאים דבקים ומצעים מיקרו-מובנים. אינטראקציות אלו קשורות קשר הדוק להתנהגויות תאים חיוניות כולל נדידה, התפשטות, התמיינות ואפופטוזיס. הפרוטוקולים מציגים תוכנת ניתוח תמונות בקוד פתוח הנקראת MechProfiler, המאפשרת קביעת הכוחות המעורבים עבור כל מיקרו-פוסט.

Mechano-פרופיל קל ומדויק על מערכי Micropost

התמיינות תאים מוסדרת על ידי שורה של גורמי microenvironmental, כוללים שני תכונות חומר רכב מצע מטריקס. אנו מתארים כאן טכניקת ניצול microarrays תא בשיתוף עם מיקרוסקופ כוח המתיחה להעריך הן התמיינות תאי אינטראקציות תא-מצע ביומכנית כפונקציה של הקשר microenvironmental.

פלטפורמת Microarray Cell תפוקה גבוהה עבור ניתוח גומל של התמיינות תאי כוחות המתיחה

הפיתוח של קהילות חיידקים תלוי בשילוב של גורמים, כולל אדריכלות סביבתית, שפע חבר, תכונות, ואינטראקציות. פרוטוקול זה מתאר סביבה סינתטי, microfabricated למעקב בו זמנית של אלפי קהילות הכלול בארות femtoliter, שבו גורמים מרכזיים כגון גודל נישה כליאה ניתן בקירוב.

העצרת ומעקב אחר פיתוח הקהילה מיקרוביאלית בתוך פלטפורמת מערך Microell

מאמר זה מתאר את המתודולוגיה מפורט כדי להכין מערך מרובב מלאכותי תאית MicroEnvironment (MACME) עבור תפוקה גבוהה מניפולציה גופנית, כימית רמזים היה שווה ויוו הסלולר microenvironments וכדי זיהוי הסביבה התאית אופטימלית עבור תאי גזע pluripotent אנושי (hPSCs) עם פרופיל תא בודד.

ייצור של מערך מרובבת MicroEnvironment הסלולר מלאכותי

מטרת השיטה המוצגת כאן היא להראות כיצד מיקרומערכים מיקרואקולוגיה (MEMA) ניתן לזייף ולהשתמש כדי לחקור את ההשפעה של אלפי קומבינטורית מיקרו סביבות פשוטות על הפנוטיפ של תאים מתורבתים.

שימוש במיקרו מערכים לחקור השפעה מיקרוסביבתית על פנוטיפים סלולריים בסרטן

Gene Expression חיידקית ניתוח שימוש microarrays

חקור את השפעת המיקרואנביבה על תפקודי תאים שונים באמצעות שיטת סקרינג קומבינטורית מתקדמת. שיטה זו מאפשרת ניתוח מערכי מיקרואנביבה ומדידת השפעתם על הידבקות, התמיינות והתרבות של תאים שונים במעבדה.

ייצור ושימוש של microarrays Microenvironment (MEArrays)

גלה סרטונים נוספים