Name: שלפוחית השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: למד ליצור מודל אורתוטופי של גידול בשלפוחית השתן בעכברים אימונו-פגועים. השיטה כוללת מתן RNA דו-גדילי קטן דרך השלפוחית ומעקב אחר הגידול באמצעות אולטרסאונד והדמיה ביולומינסצנטית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי הנרי AACR סרטן שלפוחית ​​השתן שפרד מענק מחקר (09-60-30-LI).

הנהלים הקשורים בנושאים בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש (IACUC) באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו. 1. תא הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלפוחית ​​השתן האנושית סרטן תאים קו KU-7-luc2-GFP (Caliper מדעי החיים, Hopkinton, MA) הוא גדל RPMI-1640 Media השלימו עם סרום 10% שור עוברית 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​גנטמיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבויות נשמרים על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 עם התקשורת משתנה כל יומיים שלושה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים נקצרו על ידי עיכול טריפסין וספר באמצעות hemocytometer. ההשעיה תא בודד של 2 x 10 6 תאים μl 50 הוכן פוספט שנאגרו מלוחים ושמרה על הקרח. </li></ol> 2. שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נשים בעירום (נו / נו) עכברים 8-10 שבועות (סימונסן מעבדה, Gilory, CA) היו בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים על משטח סטרילי וילון חימום לשרתSA כירורגית פלטפורמה. סיכה ריבה סטרילית, 24 guage צנתרים עם מחטים stylet, תמיסת כסף חנקתי, מים סטריליים מוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה כללית מושרה של עכברים עם isoflurane בשאיפה (3% לזירוז, 1-2% לצורך תחזוקה) ומתוחזק דרך nosecone. משחת עיניים סטרילית מוחל על העיניים של בעלי חיים, ועל משטח חום משמש כדי לשמור על חום הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר במצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לתפוס הפות של החיה עם מלקחיים לייצוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות קטטר 24-guage תוך ורידי עם stylet מחט הוסר, השופכה העכבר צינתור. שימון מספיק יש להשתמש. פרקדן עם העכבר, השופכה ממוקם האחורי מיד את קפלי בפות ו הקדמי אל הנרתיק. זווית של 45 מעלות הוא נלקח תחילה על מנת cannulate השופכה ועוברים מתחת לעצם הערווה. זווית רדודה יותר נלקח מכן לעבור דרך השופכה לתוך השלפוחית. פרה האגן עדינותבטוח ליישר השופכה יכול לעתים לעזור. יש להקפיד להימנע לדחוף חזק מדי כנגד התנגדות, כמו זה יכול להוביל נקב השופכה או בשלפוחית ​​השתן. שתן לראות בתוך קטטר מאשרת את המיקום בתוך לומן שלפוחית ​​השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aspirate השתן מן לומן קטטר לשלפוחית ​​השתן באמצעות מחט stylet. מחט stylet משמש את כל השאיפות וזריקות הבאות, והשאיר את הקטטר במקום. זה מאפשר הזרקה של כמויות מדויקות על ידי ביטול שטח מת, תוך קטטר, וזה גורם צנתורים חוזרים ונשנים מיותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפגוע בשכבת glycosaminoglycan של urothelium שלפוחית ​​השתן, 10 μL של חנקתי M 0.5 כסף מוזרק ואפשר לשבת במשך 10 שניות. זה עלול להיווצר משקע לבן עם השתן שנותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aspirate וזורקים את תלולה שלפוחית ​​השתן תוכן באמצעות מחט stylet. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את שלפוחית ​​השתן על ידי הזרקת מים סטריליים 100 μL. Aspirate וזורקים את המים. Repeב לשטוף עם מים סטריליים 3 פעמים עבור סכום כולל של 4 שוטף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עניבת משי סביב 4-0 meatus השופכה כדי לחסום את השופכה לקראת הסרת הקטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוכן להזריק בעבר 2 x 10 6 KU-7-luc2-GFP תאים μL 50 באמצעות מחט stylet. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקביל להסיר את הקטטר ואת המחט stylet, עוזב את השופכה האפילו על ידי עניבה ממשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר יישמר בהרדמה מלאה למשך 2 שעות לפני עניבת המשי יוסר חיות מתעורר. </li></ol> 3. אולטראסאונד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה כללית מושרה עם isoflurane אדי ומתוחזק באמצעות חרטומו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Vevo VisualSonics 770 in vivo ברזולוציה גבוהה Micro-Imaging System (VisualSonics Inc, טורונטו, אונטריו, קנדה) עם RMV-40 704 MHz החללית היה בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר במצב שכיבה על פלטפורמת אולטרסאונד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבטיח את הרגליים האחוריות של החיהעם הקלטת, כדי למנוע עודף תנועה במהלך מניפולציה של בדיקה אולטרסאונד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ג&#39;ל אולטרסאונד לאגן העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים RMV-704 (40 MHz) בדיקה אולטרסאונד על האגן העכבר כדי להשיג תמונות רוחביים או האורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הגידול נמצא, התמונות ניתן לשמור על מידה של ממדים סרטניים. </li></ol> 4. Bioluminescent הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הזרקת intraperitoneal של μL 200 (150 מ&quot;ג / ק&quot;ג) מצע luciferin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה כללית עם אדי isoflurane ולשמור באמצעות חרטומו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עכברים במצב שכיבה בתוך imager ביולומינציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמש דקות לאחר ההזרקה luciferin, למדוד את ביולומינציה מבעל חיים ב פוטונים בשנייה. </li></ol> 5. סרנה הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסנתז RNA oligonucleotides בקנה מידה של μmol 50-100. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשל משלימים יחיד תקועים oligonucleotides אניn כדי דופלקס saRNAs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שומנים בדם nanoparticle (LNP)-סרנה מוכנים עם השומנים ionizable 1,2-dilinoleyl-4 (2 - dimethylaminoethyl) - [1,3], dioxolane (DLinKC2-DMA), disteroylphosphatidyl כולין, כולסטרול, PEG-DMG באמצעות שלפוחית ​​היווצרות ספונטנית הליך ניסוח כפי שתואר לעיל. 1 </li></ol> 6. מינהל השלפוחית ​​של סרנה נוסחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הקמת מודל orthotopic גידול בשלפוחית ​​השתן, עכברים מטופלים השלפוחית ​​הפעלת RNA קטן (סרנה) ניסח חלקיקים שומנים בדם (LNPs) (טבלה 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה כללית הוא הוקם ומתוחזק עם אדי isoflurane, וכן חומר סיכה עיניים סטרילית מוחל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את חיה במצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע צנתור השופכה כפי שתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עניבת משי 4-0 סביב השופכה קטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את כל קטטר שתן ושלפוחית ​​השתן באמצעות מזרק ריק מחט stylet. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק LNP-סרנה intravesically במינון כולל של μL 50 (3 מ&quot;ג / ק&quot;ג). במקביל להסיר את הקטטר ואת המחט stylet, עוזב את השופכה האפילו על ידי עניבה ממשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר יישאר בהרדמה עם השופכה האפילו במשך 2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיפול השלפוחית ​​LNP-סרנה החלה ביום 4 לאחר ההשתלה הגידול. העכברים טופלו סדרתי, כל 3 ימים, עבור סכום כולל של 14 טיפולים. </li></ol> 7. נציג תוצאות גידולים בשלפוחית ​​השתן הנובעים KU-7-luc2-GFP בתאים יכול להיות פיקוח על ידי בלוציפראז bioluminescent הדמיה (איור 1 א &#39;ו - C) אולטרסאונד שלפוחית ​​השתן (איור 1 ב&#39; ו ד). הגידולים הם לעתים קרובות לזיהוי בתוך 3-5 ימים לאחר חיסון התא. מצאנו ההשתלה המוצלחת גידול שלפוחית ​​השתן ב 90% מעל של עכברים. כטיפול עם dsRNA השלפוחית ​​מתפתח, התקדמות של הגידול ניתן לפקח Wiה שיטות אלה. לאחר חיה הוא הקריב, הגידול יכול להיות גם אישר באמצעות GFP פלואורסצנטי. באופן כללי, אומר ביולומינציה בקורלציה עם ממדים אולטרסאונד ממוצע של גידולים בשלפוחית ​​השתן, כפי שניתן לראות ויזואלית ב 1C דמויות ו 1D. עם זאת, לאחר החיות הוקרבו ואת הגידול אושרה על ידי ה-GFP, מצאנו כי ביולומינציה מתואמים באופן הדוק יותר עם נוכחות של גידול בר קיימא מאשר מדידות אולטרסאונד. זה היה בולט במיוחד בקרב העכברים שטופלו סרנה (בניגוד שולטת) כי רקמת צלקת שיורית בעכברים שטופלו היה פעם דמיינו ידי אולטרה סאונד אך לא ניתן היה להבדיל בין גידול לחיות. <img src="/files/ftp_upload/4207/4207fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. קינטיקה הגידול של גידולים בשלפוחית ​​השתן. (א) הדמיה ביולומינציה מודד את הפעילות בלוציפראז בתוך גידולים בשלפוחית ​​השתן כדי לאשר את מיקומם וצמיחה. (ב) ultrasoun שלפוחית ​​השתן vivoד באמצעות בדיקה 40MHz מפיקה תמונות גידול שמידותיו ניתן למדוד באופן מדויק. (ג) גרף המדגים עלייה הדרגתית של הגידול בממדים ביולומינציה ו אולטרסאונד. הערכים מייצגים אומר (+ / - סטיית התקן) מדידות של 6 בעלי חיים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4207/4207fig1large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה</a> .

<ol><li>Semple, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+cationic+lipids+for+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rational design of cationic lipids for siRNA delivery.</a> Nature. 28, 172-176 (2010).</li>
<li>Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+dsRNAs+induce+transcriptional+activation+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+effect+of+dsRNA-induced+p21%28WAF1%2FCIP1%29+gene+activation+in+human+bladder+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cancer+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells.</a> Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).</li>
<li>Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+results+of+myoblast+injection+into+the+urethra+and+bladder+wall%3A+a+possible+method+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+impaired+detrusor+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+urodynamics%22%5BJournal%5D)">Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility.</a> Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Hadaschik, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU international. 100, 1377-1384 (2007).</li>
<li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Bladder+Wall+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), e2523(2011).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An Orthotopic Model of Murine Bladder.</a> Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535(2011).</li>
<li>Dinney, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
</ol>

LCL הוא ממציא בשם ממתינים על בקשות לפטנטים הקשורים סרנה אשר הוגשו על ידי אוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו ו ברשיון Alnylam Pharmaceuticals.

אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל orthotopic העכבר xenograft גידול בשלפוחית ​​השתן בעקבות הטיפול השלפוחית ​​של גידולים עם סרנה LNP ניסח שמכוונת את האמרגן של p21 CIP1/WAF1 (p21) להפעלה תעתיק. 2, 3 גידולים כתוצאה יכול להיות אישר פיקוח עם הדמיה bioluminescent ו אולטרסאונד שלפוחית ​​השתן. מודלים Orthotopic עשוי להיות עדיף על intraperitoneal, תת עורית, או על ידי מתן תוך ורידי מודלים בסביבה של שתן urothelium כי נוסף קרוב יותר לסרטן שלפוחית ​​השתן אנדוגני. מגוון רחב של...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (לא חובה) </td></tr><tr><td> KU-7-לוק-GFP בתאים </td><td> Caliper </td><td> 128091 </td><td></td></tr><tr><td> עכברים בעירום הרתי (נו / נו) </td><td> סימונסן מעבדות </td><td> 6-7 שבועות </td><td> סים: (NCR) נו / נו fisol </td></tr><tr><td> יחידת אולטראסאונד </td><td> Visualsonics </td><td> Vevo 770 </td><td> RMV-704 בדיקה </td></tr><tr><td> ביולומינציה היחידה </td><td> Caliper </td><td> IVIS ספקטרום </td><td></td></tr><tr><td> אקסל קטטר safelet </td><td> דיג </td><td> 14-841-21 </td><td> 24G X ¾ &quot; </td></tr><tr><td> כסף חנקתי </td><td> סיגמא </td><td> S8157 </td><td></td></tr><tr><td> המילטון המזרק </td><td> המילטון שיתוףmpany </td><td> 80301 </td><td></td></tr><tr><td> LNP-סרנה </td><td> Alnylam Pharmaceuticals </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> טבלה 1. ריאגנטים ספציפיים וציוד.

שלפוחית ​​השתן orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

אנו מציגים שיטה חדשה לטיפול בסרטן שלפוחית ​​השתן עם מסירת intravesically הפעלת RNA קטן (סרנה) בשנת המודל orthotopic העכבר xenograft שלפוחית ​​השתן הגידול. מודל העכבר הוא הוקם על ידי צנתור השופכה בשאיפה תחת הרדמה מלאה. כוויה כימית הוא הציג אז את רירית שלפוחית ​​השתן באמצעות פתרון השלפוחית ​​כסף חנקתי לשבש את שכבת glycosaminoglycan שלפוחית ​​השתן מאפשר לתאים לצרף. אחרי כמה שטיפות עם מים סטריליים, סרטן שלפוחית ​​השתן האנושית KU-7-luc2-GFP תאים החדירו דרך קטטר לתוך שלפוחית ​​השתן להתעכב במשך 2 שעות. לאחר צמיחה של גידולים בשלפוחית ​​השתן הוא אישר ומפוקחים על ידי אולטרסאונד שלפוחית ​​השתן vivo והדמיה bioluminescent. הגידולים מטופלים אז intravesically עם סרנה נוסח חלקיקים שומנים בדם (LNPs). הגידול מנוטר עם אולטרסאונד ביולומינציה. כל השלבים של התהליך הזה הם הפגינו בסרטון המצורף.

הקמת מודל orthotopic גידול בשלפוחית ​​השתן להעריך את ההשפעות נוגדות הגידולים של סרנה נמסר intravesically וצמיחה ניטור הגידול והדמיה על ידי אולטרסאונד bioluminescent.

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

אנו מציגים שיטה חדשנית לטיפול בסרטן של השלפוחית באמצעות RNA קטן ומפעיל (saRNA) המועבר באופן תוך-שלפוחיתי במודל של השתלה אורטוטופית של קסנוגרפט בשלפוחית של עכבר...

אנו מציגים שיטה להקמת מודל של גידול בשלפוחית השתן במיקום אורתוטופי בעכברים עם מערכת חיסונית לקויה. טיפול בגידולים אלו באמצעות RNA דו-גדילי קטן המועבר תוך-כלי, ומעקב אחר הגידולים באמצעות אולטרסאונד של שלפוחית השתן והדמיית ביולומינסנציה. הרדמה כללית מודעת באמצעות איסופלורן מאודה, ונמרח משחה עינית סטרילית.לאחר מכן מניחים את העכבר בתנוחה גבית (supine), וההרדמה נשמרת באמצעות isof fluorine דרך חרוט אף. בשלב הבא, יש לבצע קטטריזציה לעכבר. אנו משתמשים בקטטר תוורידי במידה 24 ללא המנדרין (needle stylet).הקטטריזציה היא לעיתים קרובות השלב הקשה והבלתי צפוי ביותר בפרוטוקול. שימור נרחב באמצעות KY jelly וטכניקה נכונה הם המפתחות לקטטריזציה מוצלחת. כאן מוצג אזור הפולבה של העכבר.שפך השתן נמצא ממש מתחת לקפלי הפות. לאחר סיכוך, משתמשים במלקחי קטטר כדי לאחוז בעדינות ולייצב את הפות ואת שפך השתן. בתחילה, נעשה שימוש בזווית תלולה יותר של 45 מעלות כדי להחדיר את הקטטר לשפך השתן, אך לאחר הכניסה לשפך השתן, נבחרת זווית רדודה יותר כדי לעבור בצורה חלקה אל שלפוחית השתן.נדגים תהליך זה כאן. שוב, לחץ עדין על האגן ליישור השופכה יכול לעיתים קרובות לסייע, ויש להקפיד להימנע מדחיפה חזקה מדי כנגד התנגדות, שכן הדבר עלול להוביל לנקב בשופכה או בשלפוחית השתן. שתן הנראה כאן בתוך הקטטר מאשר מיקום זה בתוך חלל שלפוחית השתן.לאחר מכן, שתן בתוך הקטטר מוסר באמצעות מחט הסטילט והקטטר נשאר במקומו. כחמישה מילימטרים של הקטטר צריכים להישאר גלויים מחוץ לשופכה, כדי שקצה הקטטר יישאר בתוך חלל השלפוחית ולא יישען על דופן השלפוחית. אם הקטטר מוחדר עמוק מדי, הקצה עלול להינעץ בדופן השלפוחית ולמנוע הזרקות.עבור כל ההזרקות הבאות, מניחים מזרק הטוען את מחט הסטילט דרך הקתטר. פעולה זו מאפשרת הזרקה של נפחים מדויקים על ידי ביטול החלל המת בתוך הקתטר, והופכת את הצורך בביצוע קתטריזציות חוזרות למניעת פגיעת כוויה בדופן השלפוחית למיותר.מזריקים 10 µL של silver nitrate בריכוז 0.5 molar וממתינים 10 שניות. ה-silver nitrate עשוי ליצור משקף לבן עם שאריות שתן בתוך השלפוחית. משקף זה וכל תמיסה שנותרה מסולקים מהקטטר.לאחר מכן נמשיך לשטוף את השלפוחית עם 100 µL של מים סטריליים ארבע פעמים, ובכל פעם נסיר את הנוזל מלומן הקטטר. לאחר השטיפה הראשונה, המשקע הלבן עדיין נראה בתוך הקטטר, אך עם כל שטיפה, הנוזל יהפוך לצלול יותר. קשירת משי 4-0 משמשת לחסימת השופכה, וכעת אנו מוכנים להזריק את תאי הסרטן.מעמיסים את התאים למזרק המחובר למחט הסטילט, ומזריקים את התאים לשלפוחית השתן. מוציאים את הקטטר וקושרים את השופכה כאשר העכבר נמצא תחת הרדמה למשך שעתיים. במרווחי זמן קבועים מראש, מנטרים את התקדמות הגידול.באמצעות דימוי ביו-לומינצנציה in vivo, מזריקים לעכברים תחילה לוציפרז ומצע באמצעות הזרקה תוך-peritoneale. לאחר השראת הרדמה כללית באמצעות isof fluorine מאויד, מניחים את העכברים בתנוחה גבית בתוך מכשיר ה-ivus. הביו-לומינצנציה נמדדת ביחידות של פוטונים לשנייה.נוכחותם של תאי KU seven בתוך שלפוחית השתן של העכבר ניכרת בבירור, וניתן לעקוב אחר עוצמת הביולומינסנציה לאורך זמן. ניתן גם לנטר את נוכחותם ואת התקדמותם של גידולי שלפוחית השתן באמצעות דימות אולטרסאונד. לאחר השראת הרדמה כללית באמצעות isoflurane מאודה, נמרח פומדה עינית סטרילית.העכבר מונח בתנוחה גבית (supine) על שולחן האולטרסאונד. תחזוקת ההרדמה מתבצעת באמצעות isof fluorine דרך חרוט אף. ניתן לקבע את רגליו האחוריות של העכבר לשולחן כדי למנוע תנועה מוגברת של הגוף בזמן התפעול של מתמר האולטרסאונד.בסיום פעולה זו, מורח ג'ל אולטרסאונד על החלק המרכזי של אגן בעל החיים. לאחר מריחת הג'ל, מתביית גשש של 40 megahertz למכשיר ההחזקה ומונמך לאט אל גופו של בעל החיים. שלפוחית השתן נראית בבירור כמבנה היפואקואי (hypoechoic) עגול בקו האמצע.אם בעל החיים לא עבר גירוי משמעותי לפני ההרדמה, השלפוחית בדרך כלל כבר מורחבת, ומצאנו שאין צורך בהחדרת קטטר לעכבר כדי להשיג הרחבת שלפוחית. ניתן להשיג כאן הן תמונות רוחביות והן תמונות אורכיות. גידול נראה בקלות בתוך חלל השלפוחית.במידה ונמצא גידול, ניתן לשמור תמונות לצורך מדידת ממדי הגידול. לאחר ביסוס של גידול בשלפוחית השתן, העכברים מטופלים באופן תוך-שלפוחיתי (intravesical) באמצעות RNA דו-גדילי קצר המנוסח בננו-חלקיקי ליפידים. מבוצע הרדמה כללית ומשחה אופתלמית נמרחת פעם נוספת.לאחר מכן מניחים את העכבר במצב שכיבה על הגב (supine) ומבצעים קטטריזציה של השופכה. כפי שתיארנו בעבר, משתמשים בתפר משי 4-0 כדי לחסום את השופכה מסביב לקטטר. בדרך כלל, קושרים שני קשרים כפי שמוצג כאן.מזרק ריק המחובר למחט סטילט משמש לריקון מלא של שלפוחית השתן. 50 µL של RNA דו-גדילי קצר מוחדרים תוך-שלפוחיתי (intravesical) במינון כולל של 3 mg/kg. לאחר מכן מסירים את המחט ואת הקטטר.העכבר יישאר תחת הרדמה כאשר השופכה חסומה למשך שעתיים בסך הכל. לאחר צפייה בסרטון זה, תגמרו עם הבנה טובה של שיטה ליצירת מודל של גידול בשלפוחית השתן של עכבר באופן אורתוטופי, ניטור הגידול באמצעות דימות בביולומינסנציה ואולטרסאונד, וטיפול בגידול באמצעות RNA קטן המועבר תוך-שלפוחיתי. קיימים מספר דקויות בטכניקה, הדורשות תרגול, במיוחד בכל הנוגע לקטטרליזציה, אך באופן כללי, זהו פרוטוקול שניתן לשחזר בקלות.השגנו הצלחה רבה בהשתלת גידולי שלפוחית השתן בעכברים, והשפעות הטיפול ב-small RNA מבטיחות מאוד. עם זאת, ההיבט המרגש ביותר בפרוטוקול זה הוא שבעוד שטיפלנו בעכברים ב-small RNA, ניתן להשתמש באותה טכניקה כדי לבחון כל טיפול תוך-שלפוחיתי (intravesical) לסרטן שלפוחית השתן.I.

an-orthotopic-bladder-tumor-model-evaluation-intravesical-sarna

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

גידולים בשלפוחית ​​השתן הן הוקמה בשנת נקבות העכברים בצורה פולשנית דרך צנתור, צריבה המקומי, בעקבות הידבקות של תאים קרצינומה לאתרים לשרוף.

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

בסרטון זה אנו מתארים השתלה אורתוטופית של אורגנואידים מגידול בשלפוחית השתן בתרבית לתוך שלפוחית השתן כדי לחקור את תפקידה של סביבת האיברים בהתפתחות גידולים.

מודל אורגנואיד של גידול בשלפוחית השתן: שיטה להשתלה אורתוטופית של אורגנואידים משלפוחית השתן למושתלת שלפוחית השתן

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך התוך-שלפוחית של העברת תאים סרטניים לשלפוחית השתן של מודל עכבר. הליך זה מסייע ליצור מודל גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן שניתן להשתמש בו לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

השתלה של תאים סרטניים לתוך האיבר ממוצא יכולה לשמש מודל פרה שימושי כדי להעריך את הטיפולים חדשניים. ניתן לגדל תאי קרצינומה של שלפוחית ​​השתן MB49 בתוך שלפוחית ​​השתן בעקבות החדרת שלפוחית. פרוטוקול זה מדגים צנתור של שלפוחית ​​השתן בעכבר לצורך השתלת גידול ואספקת adenoviral.

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

הטכניקה המבוססת לחסן xenografts orthotopic פולשנית העיקרית לסרטן שלפוחית ​​השתן דורשת laparotomy והתגייסות של שלפוחית ​​השתן. הליך זה גורם תחלואה משמעותית בעכברים, הוא מאתגר מבחינה טכנית ודורש זמן רב. לפיכך, אנו פיתחנו דיוק גבוה, בגישה מלעורית ניצול הנחיית אולטרסאונד.

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

כאן מתוארת השיטה להקמת מודל עכבר סינגני של גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן כדי להעריך את היעילות האנטי-גידולית של החלבון החיידקי HP-NAP.

הערכת היעילות של<em&gt; H. פילורי</em&gt; חלבון HP-NAP ככלי טיפולי לטיפול בסרטן שלפוחית ​​השתן בדגם Murine Orthotopic

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

גידולים בשלפוחית השתן מאתר הם המושרה עם גורם מסרטן nitrosamine N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). שלפוחית השתן גידול דור הוא. הטרוגניות; לכן, הערכה מדויקת של נטל הגידול יש צורך לפני אקראיות לטיפול ניסיוני. כאן אנו מציגים פרוטוקול MRI מהיר, אמין כדי להעריך את גודל הגידול ועל הבמה.

דימות תהודה מגנטית הערכה של גידולים המושרה מסרטן שלפוחית השתן מאתר

פרוטוקול זה מתאר את הדור של החולה הנגזר הנושא מודלים מבע על ידי פנים-ומבחינה משפטית הקניית תאים קרצינומה של תא ברמה גבוהה urothelial או פנים-rectally הזרקת תאים סרטניים המעי הגס לתוך סוכרת שמנים/חמור משולב כשל חיסוני (הנהון/SCID) עכברים לגידול הגידול הראשוני גרורות מתחת להשפעה של תאים סטרומה בצומת הלימפה, אשר מחקה את ההתקדמות של מחלות גרורתית האדם.

מטופל-נגזר אורתוטופית מודלים של תאים האדם Urothelial קרצינומה של סרטן המעי הגס ואת הגידול גרורות ספונטנית

סקירה מקיפה של טכניקות מעורב ביצירת מודל עכברי של סרטן הפה ניטור כמותי של הפלישה הגידול בתוך הלשון באמצעות מיקרוסקופ רב פוטון של תאים שכותרתו מוצג. מערכת זו יכולה לשמש פלטפורמה שימושי להערכת יעילות התרופה מולקולרית של תרכובות אנטי פולשנית.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

למד ליצור מודל אורתוטופי של גידול בשלפוחית השתן בעכברים אימונו-פגועים. השיטה כוללת מתן RNA דו-גדילי קטן דרך השלפוחית ומעקב אחר הגידול באמצעות אולטרסאונד והדמיה ביולומינסצנטית.

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

גלה סרטונים נוספים

שלפוחית השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית