Name: ניקוז ידני של חדרי המוח העוברי דג הזברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: למד את שיטת ניקוז הנוזל המוחי השדרתי העוברי מחדרי המוח של דג הזברה. טכניקה זו מאפשרת ניתוח הרכב הנוזל ותפקידו בהתפתחות המוח וביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות נפש, והקרן הלאומית למדע. תודה מיוחדת לד&quot;ר ג&#39;ן Gutzman, ד&quot;ר אמנדה דיקינסון וחברי מעבדת סייב אחרות לדיונים שימושיים רבים וביקורת בונה, ואוליבייה Paugois לגידול בעלי דגי מומחה.

1. הכנת מחטי microinjection וחשמלי ניידים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא מנגנון אפנדורף CellTram שמן microinjector עם שמן מינרלים על פי הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מחטי microinjection ידי משייכת צינורות נימים באמצעות חולץ מחט מכשירי סאטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר מחט על micromanipulator מחובר לאפנדורף CellTram. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לשבור את קצה המחט. לגודל קצה אחיד, למדוד עם מיקרומטר, או להשוות למחט הפניה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את אורך המחט עם שמן, שימוש CellTram לדחוף שמן לאורך, להיות זהיר, כדי למנוע בועות. </li></ol> 2. הכנת העוברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חורים ב1% מנה מצופית agarose עם קצה פיפטה 1-200 μl, ולהסיר תקעי agarose. מלא צלחת עם תקשורת עובר (נעשה על פי 25 Westerfield). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחי עוברים, dechorionate תחת stereomicroscope. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת עוברי dechorionatedלמנה מצופית agarose. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עוברים, להוסיף Tricaine (0.1 מ&quot;ג / מ&quot;ל) למנת agarose עד עוברים מפסיקים לנוע (שנעשה על פי 25 Westerfield). </li></ol> 3. ניקוז eCSF <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוריינט את העוברים בעלי הזנבות באת החורים של agarose והצדדים האחוריים שלהם הקרובים לmicromanipulator, ומאפשר הדמיה של הצד הגבי של המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את המחט בrhombomere 0/1 ציר נקודה או נקודה הרחבה ביותר של מוח אחורי חדר לב (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות צלחת גג לנקב של חלל המוח האחורי להיות בטוח שלא לעבור את העומק של המוח לחלמון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסנן את eCSF באמצעות CellTram ולאסוף נוזלים במחט microinjection. להיות זהיר, כדי למנוע את כל תאים. </li></ol> 4. איסוף eCSF לניתוח רכב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע eCSF נאסף במחט, להפסיק יניקה מCellTram זהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוve הצלחת מתחת למחט ולמקם את המחט בזהירות לתוך מבחנה המכילה את המאגר הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש CellTram, לנקז eCSF מתוך המחט לחיץ מנסה להימנע מלזהם את הפתרון בשמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להסיר את התאים שיש לך ונשאף יחד עם eCSF, ספין eCSF ב -10,000 x גרם. איסוף מזוהם eCSF (supernatant) ולאחסן ב -80 ° C עד מוכן לניתוח נוסף. </li></ol> 5. חידוש של גורמים נבחרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסנן את eCSF כל 2 שעות בפרק זמן רצוי, שכן הנוזל מתחדש בתוך תקופת זמן זו. בין ניקוז בזמן נקודות, הסר את המחט ולאחסן את העוברים ב28.5 מעלות צלזיוס או רצוי טמפרטורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען מחט micropipette שנייה עם גורם מבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחט למקום micromanipulator מצורפת microinjector. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיוון עוצמת זריקה עד 1 nl על ידי מדידת גודל הטיפה בזמן שמן והכוון הזרקה ו-pressure. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 1-2 nl לחדרים במוח כפי שתוארו קודם לכן 26. </li></ol>

<ol><li>Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choroid+plexus%3A+target+for+polypeptides+and+site+of+their+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Choroid plexus: target for polypeptides and site of their synthesis.</a> Microsc. Res. Tech. 52, 65-82 (2001).</li>
<li>Redzic, Z. B., Preston, J. E., Duncan, J. A., Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+choroid+plexus-cerebrospinal+fluid+system%3A+from+development+to+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The choroid plexus-cerebrospinal fluid system: from development to aging.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 71, 1-52 (2005).</li>
<li>Brown, P. D., Davies, S. L., Speake, T., Millar, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cerebrospinal+fluid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cerebrospinal fluid production.</a> Neuroscience. 129, 957-970 (2004).</li>
<li>Praetorius, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+and+solute+secretion+by+the+choroid+plexus%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Water and solute secretion by the choroid plexus.</a> Pflugers Arch. 454, 1-18 (2007).</li>
<li>Speake, T., Whitwell, C., Kajita, H., Majid, A., Brown, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+CSF+secretion+by+the+choroid+plexus%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of CSF secretion by the choroid plexus.</a> Microsc. Res. Tech. 52, 49-59 (2001).</li>
<li>Garcia-Lecea, M., Kondrychyn, I., Fong, S. H., Ye, Z. R., Korzh, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+choroid+plexus+morphogenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of choroid plexus morphogenesis in zebrafish.</a> PLoS One. 3, e3090(2008).</li>
<li>Welss, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretory+activity+of+the+inner+layer+of+the+embryonic+mid-brain+of+the+chick%2C+as+revealed+by+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Secretory activity of the inner layer of the embryonic mid-brain of the chick, as revealed by tissue culture.</a> The Anatomical Record. 58, 299-302 (1934).</li>
<li>Saunders, N. R., Habgood, M. D., Dziegielewska, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barrier+mechanisms+in+the+brain%2C+II.+Immature+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Pharmacol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Barrier mechanisms in the brain, II. Immature brain.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 26, 85-91 (1999).</li>
<li>Zheng, W., Chodobski, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZheng%2C+W+%22The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier%22">The blood-cerebrospinal fluid barrier</a>. , Taylor and Francis. Boca Raton, Fl. (2005).</li>
<li>Salehi, Z., Mashayekhi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+survival+in+the+developing+chick+cerebral+cortex%3A+an+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">The role of cerebrospinal fluid on neural cell survival in the developing chick cerebral cortex: an in vivo study.</a> Eur. J. Neurol. 13, 760-764 (2006).</li>
<li>Parada, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+cerebrospinal+fluid+collaborates+with+the+isthmic+organizer+to+regulate+mesencephalic+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Embryonic cerebrospinal fluid collaborates with the isthmic organizer to regulate mesencephalic gene expression.</a> J. Neurosci. Res. 82, 333-345 (2005).</li>
<li>Mashayekhi, F., Salehi, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+proliferation+in+developing+chick+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">The importance of cerebrospinal fluid on neural cell proliferation in developing chick cerebral cortex.</a> Eur. J. Neurol. 13, 266-272 (2006).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF2+plays+a+key+role+in+embryonic+cerebrospinal+fluid+trophic+properties+over+chick+embryo+neuroepithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">FGF2 plays a key role in embryonic cerebrospinal fluid trophic properties over chick embryo neuroepithelial stem cells.</a> Dev. Biol. 297, 402-416 (2006).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 27, 733-740 (2009).</li>
<li>Gato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival%2C+proliferation%2C+and+neurogenesis+in+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+A+Discov.+Mol.+Cell+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 284, 475-484 (2005).</li>
<li>Desmond, M. E., Levitan, M. L., Haas, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+luminal+pressure+during+early+chick+embryonic+brain+growth%3A+descriptive+and+empirical+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+A+Discov.+Mol.+Cell+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Internal luminal pressure during early chick embryonic brain growth: descriptive and empirical observations.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 285, 737-747 (2005).</li>
<li>Alonso, M. I., Martin, C., Carnicero, E., Bueno, D., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+control+of+neurogenesis+induced+by+retinoic+acid+during+early+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid control of neurogenesis induced by retinoic acid during early brain development.</a> Dev. Dyn. 240, 1650-1659 (2011).</li>
<li>Miyan, J. A., Zendah, M., Mashayekhi, F., Owen-Lynch, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+supports+viability+and+proliferation+of+cortical+cells+in+vitro%2C+mirroring+in+vivo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrospinal+Fluid+Res%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid supports viability and proliferation of cortical cells in vitro, mirroring in vivo development.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 3, 2(2006).</li>
<li>Mashayekhi, F., Bannister, C. M., Miyan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+in+cell+proliferation+in+the+germinal+epithelium+of+the+HTx+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Failure in cell proliferation in the germinal epithelium of the HTx rats.</a> Eur. J. Pediatr. Surg. 11, Suppl 1. S57-S59 (2001).</li>
<li>Lehtinen, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69, 893-905 (2011).</li>
<li>Zappaterra, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome.+Res%22%5BJournal%5D)">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> J. Proteome. Res. 6, 3537-3548 (2007).</li>
<li>Parvas, M., Parada, C., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-CSF+barrier+function+controls+embryonic+CSF+protein+composition+and+homeostasis+during+early+CNS+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A blood-CSF barrier function controls embryonic CSF protein composition and homeostasis during early CNS development.</a> Dev. Biol. 321, 51-63 (2008).</li>
<li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+embryonic+cerebrospinal+fluid+proteome+has+greater+apolipoprotein+and+enzyme+pattern+complexity+than+the+avian+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mammalian embryonic cerebrospinal fluid proteome has greater apolipoprotein and enzyme pattern complexity than the avian proteome.</a> J. Proteome Res. 4, 2420-2428 (2005).</li>
<li>Gato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cerebro-spinal+fluid+protein+composition+in+early+developmental+stages+in+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+A+Comp.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of cerebro-spinal fluid protein composition in early developmental stages in chick embryos.</a> J. Exp. Zool. A Comp. Exp. Biol. 301, 280-289 (2004).</li>
<li>Westerfield, M., Sprague, J., Doerry, E., Douglas, S., Grp, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Zebrafish+Information+Network+%28ZFIN%29%3A+a+resource+for+genetic%2C+genomic+and+developmental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The Zebrafish Information Network (ZFIN): a resource for genetic, genomic and developmental research.</a> Nucleic Acids Res. 29, 87-90 (2001).</li>
<li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218(2009).</li>
<li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All-trans+retinol+and+retinol-binding+protein+from+embryonic+cerebrospinal+fluid+exhibit+dynamic+behaviour+during+early+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">All-trans retinol and retinol-binding protein from embryonic cerebrospinal fluid exhibit dynamic behaviour during early central nervous system development.</a> Neuroreport. 19, 945-950 (2008).</li>
<li>Parada, C., Escola-Gil, J. C., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoproteins+from+embryonic+cerebrospinal+fluid+are+required+for+neural+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoproteins from embryonic cerebrospinal fluid are required for neural differentiation.</a> J. Neurosci. Res. 86, 2674-2684 (2008).</li>
<li>Kramer-Zucker, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cilia-driven+fluid+flow+in+the+zebrafish+pronephros%2C+brain+and+Kupffer%27s+vesicle+is+required+for+normal+organogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cilia-driven fluid flow in the zebrafish pronephros, brain and Kupffer's vesicle is required for normal organogenesis.</a> Development. 132, 1907-1921 (2005).</li>
<li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead%2Fatp1a1a.1+gene+products%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li>
<li>Lowery, L. A., De Rienzo, G., Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+classification+of+zebrafish+brain+morphology+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Characterization and classification of zebrafish brain morphology mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

השימוש בטכניקה זו באופן ידני לניקוז eCSF מחדרים במוח דג זברה יהיה שימושי לקביעת הדרישה לeCSF במהלך פיתוח. בנוסף, טכניקה זו תאפשר תיאור של פרופיל חלבון eCSF במהלך התפתחות עוברית. זיהוי של חלבונים שונים בתקופה זו יאפשר חקירה נוספת לפונקציה של CSF והתפקיד הפוטנציאלי שלה במהלך התפתחות מוח. בamniotes, כמה גורמים שזוהו בeCSF (IGF2, FGF2, חומצה רטינואית, וapolipoproteins) יש תפקיד הפגין בהישרדות תא, התפשטות neuroepithelial וneurogenesis 13,17,20,23,27,28. עם זאת, נראה שיש מאה ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> אפנדורף CellTram שמן </td><td> אפנדורף </td><td> 516 000.025 </td></tr><tr><td> שמן מינרלים </td><td> סיגמא </td><td> M8410 </td></tr><tr><td> Tricaine אבקה </td><td> סיגמא </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> צינורות נימים </td><td> Fhc בע&quot;מ </td><td> 30-30-1 </td></tr></tbody></table>

ניקוז ידני של חדרי המוח העוברי דג הזברה

Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles

נוזל השדרתי (CSF) הוא נוזל עשיר חלבון מכיל בתוך החדרים במוח. היא נמצאת במהלך ההתפתחות העוברית המוקדמת חוליות ונמשכת לאורך כל חיים. מבוגרי CSF הוא חשב לרפד את המוח, להסיר פסולת, ולשאת 1,2 מולקולות מופרשות. במבוגרים ומבוגרים העובר, רוב CSF נעשה על ידי דמה עין המקלעת, סדרה של אזורי הפרשת כלי דם מאוד ממוקמים סמוך למוח החללים 3-5. בדג הזברה, דמה עין המקלעת נוצרה במלואו בשעות שלאחר ההפריה 144 (hpf) 6. לפני זה, בעוברי החולייתנים הוא דג זברה ואחרים, כוללים עכבר, כמות משמעותית של עוברי CSF (eCSF) הוא הווה. נתונים אלה ומחקרים מראים כי בחומוס neuroepithelium היא הפרשה מוקדם בפיתוח ועלולה להיות המקור העיקרי של eCSF לפני דמה עין המקלעת 7 פיתוח. eCSF מכיל בערך פי שלושה לא יותר חלבוןהאן המבוגר CSF, המצביע על כך שזה יכול להיות תפקיד חשוב במהלך הפיתוח 8,9. מחקרים באפרוח ועכבר להוכיח כי גורמים מופרשים בeCSF, לחץ נוזל, או שילוב של אלה, הם חשובים לנוירוגנזה, ביטוי גנים, שגשוג תאים, ותא ההישרדות בneuroepithelium 10-20. מנתח proteomic של, עכברוש אדם, עכבר, ואפרוח eCSF זיהה חלבונים רבים שעשויה להיות נחוץ לתפקוד CSF. אלה כוללים מרכיבים תאיים מטריצה, apolipoproteins, חלבוני ויסות לחץ האוסמוטי, וחלבונים מעורבים במוות של תאים והתרבות 21-24. עם זאת, הפונקציות המורכבות של eCSF אינן ידועות. אנחנו פתחנו שיטה להסרת eCSF מחדרים במוח דג זברה, ובכך מאפשרים לזיהוי של רכיבי eCSF ולניתוח של דרישת eCSF במהלך פיתוח. למרות שיותר eCSF ניתן לאסוף מחוליות w מערכות האחרותעוברי ith גדולים, eCSF ניתן לאסוף מהשלבים המוקדמים של פיתוח דג זברה, ובתנאים גנטיים או סביבתיים המובילים למוח נורמלי נפח חלל או במורפולוגיה. הסרה ואוסף של eCSF מאפשרות ניתוח, חקירה המונית spectrometric תפקוד eCSF, וחידוש של גורמים נבחרים לתוך חדרי הלב לבדיקת תפקודם. לכן הנגישות של עובר דג הזברה מוקדם מאפשרת ניתוח מפורט של פונקצית eCSF במהלך פיתוח.

דוגמה לחדר לב מוח מרוקן מוצגת באיור 1 ב-C. חדרים במוח הם התמוטטו כהם חסרים eCSF (האיור 1B לעומת C). כפי שניתן לראות בתמונות גב (איור 1B-C, ואיור 2A-D) neuroepithelium המוח האחורי עושה לשמור מורפולוגיה האופיינית ונראה שהוא פתוח למרות חוסר eCSF הנראה בשל נקודתי צירים חזקות. עם זאת, נופים רוחביים (איור 2A&#39;-D &#39;) מראים כי את חדר המוח האחורי כבר סחוטים, עולים בקנה אחד עם הנוכחות של אפיתל דק וגמיש גג צלחת שקורסת ...

אנו מציגים שיטה לאיסוף נוזל שדרה (CSF) וליצור מערכת שאין בה CSF בתוך מערכת חדרית מוח דג הזברה העוברית. זה מאפשר לבדיקה נוספת של רכב CSF והדרישה שלה במהלך התפתחות מוח העוברית.

נוזל חוט השדרה (CSF) הוא נוזל עשיר בחלבונים המצוי בתוך חללי המוח. הוא נוכח במהלך ההתפתחות העוברית המוקדמת של חולייתים ו...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ליצור מערכת נטולת נוזל מוחי-שדרתי (CSF) בתוך מערכת הפרוזדורות של המוח העוברי. דבר זה מושג תחילה על ידי ניקוז ידני של נוזל מוחי-שדרתי עוברי (ECSF) מתוך פרוזדורות המוח של דג הזברה. לאחר מכן, ה-ECSF נאסף לצורך ניתוח נוסף של תכניו.לאחר מכן, מחדירים מחדש גורמים פוטנציאליים לתוך חדרי המוח שרוקנו. לבסוף, מנתחים את ההסרה היעילה של ECSF ואת השפעת החדרת הגורמים מחדש על התפתחות המוח. בסופו של דבר, ניתן להדגים את תפקוד ה-ECSF של דגי הזברה באמצעות ניטור היבטים של התפתחות המוח, כגון חלוקת תאים, מוות תאי ונוירוגנזה.בנוסף, ניתן לקבוע את הרכב ה-ECSF באמצעות ספקטרומטריית מסות. באמצעות טכניקה זו, נוכל להתחיל לחקור את התפקוד של נוזל המוח והשדרה העוברי במהלך ההתפתחות. ניתן להחיל אותה גם על מערכות אחרות כדי להעמיק את ההבנה של מחלות המשנות את הרכב ונפחי ה-CSF, כגון הידרוצפלוס.בתחילה, מלאו מכשיר להזרקת שמן בשמן מינרלי בהתאם להוראות היצרן. לאחר משיכת מחטי מיקרו-הזרקה, התקינו מחט על המיקרו-מניפולטור המחובר למזרק השמן. שברו בזהירות את קצה המחט כדי להגיע לגודל אחיד.מדוד באמצעות מיקרומטר או השווה למחט ייחוס. מלא את המחט בשמן באמצעות מזרק שמן כדי לדחוף את השמן לאורך המחט. השתמש בקצה פיפטה של 200 microliter כדי ליצור חורים בצלחת מצופה agros בריכוז 1%, והסר את פקקי ה-agros.מלאו את

manual-drainage-of-the-zebrafish-embryonic-brain-ventricles

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה שבאמצעותה לנתח את המוח חוליות עוברי דג הזברה מתפתח לחיות ברזולוציה של תא בודד על ידי מיקרוסקופיה confocal. זה כולל את השיטה שבאמצעותה אנו מזריקים את העובר מתא בודד דג הזברה ולאחר מכן הר התמונה במוח המתפתח.

חיים הדמיה של המוח על ידי עוברי דג הזברה מיקרוסקופיה confocal

לאחר היווצרות בצינור העצבי, neuroepithelium מכווץ קפלי תוך הצינור מתמלא הנוזל השדרתי עובריים (eCSF) כדי ליצור את החדרים במוח העוברי. פיתחנו טכניקה זו זריקה החדר כדי להמחיש טוב יותר את החלל מילא נוזל לעומת הצורה neuroepithelial בעובר חי.

החדר דג הזברה המוח Injection

אנו מתארים מדידת חיה כל חיה כמוני לחדירות של מוח דג הזברה העוברי. הטכניקה מנתחת את היכולת לשמור על נוזל השדרתי ומולקולות של משקולות מולקולריות שונות בתוך חלל הצינור העצבי, והוא מכמת את תנועתם מחוץ לחדרי לב. שיטה זו יעילה לקביעת הבדלים בחדירות וההתבגרות אפיתל במהלך פיתוח ומחלה.

Assay לחדירות של Neuroepithelium עוברי דג הזברה

סרטון זה מתאר את הטכניקה של מיקרודיסקציה של המוח מדג זברה בוגר. שיטה זו מסייעת בהשגת נויאורוספירות שמקורן במוח שלם שניתן ללמוד עוד יותר.

דיסקציה מוחית של דגי זברה: טכניקה של נוירוביולוגיה של דגים

סרטון זה מדגים את היצירה וההתמיינות של נוירוספרות ראשוניות. תאי גזע עצביים מדגי זברה, בנוכחות גורמי גדילה, מתרבים לנוירוספרות צפות בחופשיות בעלות יכולת התחדשות עצמית, אשר מאוחר יותר מתמיינות לתאי גלייה ולנוירונים.

יצירה והתמיינות של נוירוספרות ראשוניות מתאי גזע עצביים של דגי זברה

מקור: Schramm, P. et al. הדמיה in vivo של רקמת מוח פעילה לחלוטין בזחלים וצעירים של דג זברה ער על ידי הסרת גולגולת ועור. J. Vis. Exp. (2021)סרטון זה מדגים את ההדמיה in vivo של נוירונים במוח הקטן בזחלי דג זברה טרנסגניים, המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים בנוירונים של פורקיניה. התהליך כולל הרדמת הזחלים, שיתוקם באגרוז והסרה זהירה של העור הפיגמנטי כדי לשפר את חדירת האור ועוצמת הקרינה. לבסוף, הדגימות המוכנות מצולמות תחת מיקרוסקופ קונפוקלי כדי לדמיין את הנוירונים המסומנים בבירור.

הדמיה in vivo של מוח זחל דג הזברה להדמיית נוירונים במוח הקטן

הדמיה של כלי דם במוח בפיתוח דג הזברה זחל הוא תאר. טכניקות כדי להקל על ההדמיה 3D ולשנות התפתחות כלי דם במוח באמצעות טיפולים כימיים גם מסופקות.

הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

תהליכים התפתחותיים כגון התפשטות, דפוסים, בידול, והדרכה האקסון יכולים להיות מודל בקלות בחוט השדרה דג הזברה. במאמר זה, אנו מתארים הליך הרכבה לעוברי דג הזברה, אשר מייעל את ההדמיה של אירועים אלה.

נתיחה והרכבה לרוחב של עוברי דג הזברה: ניתוח התפתחות חוט השדרה

כאן אנו מספקים שיטה לשחזור לבחון neurogenesis למבוגרים באמצעות assay neurosphere נגזר מתוך הכלל המוח או מאחד את telencephalic, tectal או אזורים של המוח הקטן של המוח דג הזברה מבוגר. בנוסף, אנו מתארים את ההליך כדי לתפעל ביטוי גני neurospheres דג הזברה.

בידוד והתרבות של דג זברה למבוגרי מוח נגזר Neurospheres

כתב יד זה מתאר שיטות הקלטות אלקטרו מן הנוירונים השדרה של עוברי דג הזברה הזחלים. הכנת שומרת נוירונים באתרו ולעיתים קרובות כרוך דיסקציה מינימום. שיטות אלה מאפשרות לחקר אלקטרו מגוון של נוירונים שדרה, מרכישת רגישויות חשמל הראשונית דרך שלבי זחל מוקדם.

זברה<em&gt; באתרו</em&gt; הכנת בחוט השדרה עבור הקלטות אלקטרו מתוך השדרה חושית הנוירונים המוטוריים

ב vivo הדמיה היא כלי רב עוצמה שניתן להשתמש בו כדי לחקור את המנגנונים הסלולריים בבסיס פיתוח מערכת העצבים. כאן אנו מתארים טכניקה לשימוש מיקרוסקופיה מיקוד הזמן כדי להמחיש מספר גדול של המוח ססגוניות באמצעות התווית בזמן אמת בתוך מערכת העצבים דג זברה המתפתח.

מדמיין את המוח המתפתח בחיים דגים באמצעות הברקשת וזמן-הדמיה קונמיקוד

למד את שיטת ניקוז הנוזל המוחי השדרתי העוברי מחדרי המוח של דג הזברה. טכניקה זו מאפשרת ניתוח הרכב הנוזל ותפקידו בהתפתחות המוח וביולוגיה התפתחותית.

ניקוז ידני של חדרי המוח העוברי דג הזברה

גלה סרטונים נוספים