Name: איתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 6 s
Description: למד שיטה חדשה לאיתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי באמצעות קולטן TVA. טכניקה זו מאפשרת ניתוח בקצב גבוה של מעגלים עצביים במערכת העצבים המרכזית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות שון וילן לסיוע בהצלת ריאנטים VSV רקומביננטי, וDidem גוז וריאן Chrenek לסיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי HHMI (CLC), ו# NS068012-01 (KTB).

<ol><li>Wickersham, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single%2C+genetically+targeted+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53, 639-647 (2007).</li>
<li>Marshel, J. H., Mori, T., Nielsen, K. J., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+single+neuronal+networks+for+gene+expression+and+cell+labeling+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeting single neuronal networks for gene expression and cell labeling in vivo.</a> Neuron. 67, 562-574 (2010).</li>
<li>Wall, N. R., Wickersham, I. R., Cetin, A., De La Parra, M., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+circuit+tracing+in+vivo+through+Cre-dependent+targeting+and+complementation+of+modified+rabies+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic circuit tracing in vivo through Cre-dependent targeting and complementation of modified rabies virus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21848-21853 (2010).</li>
<li>Wickersham, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single%2C+genetically+targeted+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53, 639-647 (2007).</li>
<li>Yonehara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+asymmetric+reorganization+of+inhibition+establishes+a+motion-sensitive+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatially asymmetric reorganization of inhibition establishes a motion-sensitive circuit.</a> Nature. 469, 407-410 (2011).</li>
<li>Stepien, A. E., Tripodi, M., Arber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+rabies+virus+reveals+premotor+network+organization+and+synaptic+specificity+of+cholinergic+partition+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic rabies virus reveals premotor network organization and synaptic specificity of cholinergic partition cells.</a> Neuron. 68, 456-472 (2010).</li>
<li>Beier, K. T., Samson, M. E. S., Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+expression+of+the+TVA+receptor+allows+clonal+analysis+of+descendents+from+Cre-expressing+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Conditional expression of the TVA receptor allows clonal analysis of descendents from Cre-expressing progenitor cells.</a> Dev. Biol. 353, 309-320 (2011).</li>
<li>Seidler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Cre-loxP-based+mouse+model+for+conditional+somatic+gene+expression+and+knockdown+in+vivo+by+using+avian+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A Cre-loxP-based mouse model for conditional somatic gene expression and knockdown in vivo by using avian retroviral vectors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 10137-10142 (2008).</li>
<li>Beier, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+or+retrograde+transsynaptic+labeling+of+CNS+neurons+with+vesicular+stomatitis+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Anterograde or retrograde transsynaptic labeling of CNS neurons with vesicular stomatitis virus vectors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15414-15419 (2011).</li>
<li>Whelan, S. P., Ball, L. A., Barr, J. N., Wertz, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+recovery+of+infectious+vesicular+stomatitis+virus+entirely+from+cDNA+clones%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Efficient recovery of infectious vesicular stomatitis virus entirely from cDNA clones.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 8388-8392 (1995).</li>
<li>Fuerst, T. R., Niles, E. G., Studier, F. W., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+Transient-Expression+System+Based+on+Recombinant+Vaccinia+Virus+That+Synthesizes+Bacteriophage+T7+RNA+Polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic Transient-Expression System Based on Recombinant Vaccinia Virus That Synthesizes Bacteriophage T7 RNA Polymerase.</a> PNAS. 83, 8122-8126 (1986).</li>
<li>Young, J. A., Bates, P., Varmus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+chicken+gene+that+confers+susceptibility+to+infection+by+subgroup+A+avian+leukosis+and+sarcoma+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a chicken gene that confers susceptibility to infection by subgroup A avian leukosis and sarcoma viruses.</a> J. Virol. 67, 1811-1816 (1993).</li>
<li>Madisen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nat Neurosci. 13, 133-140 (2010).</li>
<li>Franklin, K., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+K+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1997).</li>
<li>van den Pol, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+strategies+for+studying+the+brain%2C+including+a+replication-restricted+self-amplifying+delta-G+vesicular+stomatis+virus+that+rapidly+expresses+transgenes+in+brain+and+can+generate+a+multicolor+golgi-like+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Viral strategies for studying the brain, including a replication-restricted self-amplifying delta-G vesicular stomatis virus that rapidly expresses transgenes in brain and can generate a multicolor golgi-like expression.</a> J. Comp. Neurol. 516, 456-481 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

שימוש בוירוסים כדי ללמוד מעגלים עצביים הוא שיטת תפוקה גבוהה יחסית של ניתוח נוירונים מקושרים. עם זאת, שהניב גם virions RABV VSV ואינו טריוויאלי. למרות שהפרוטוקול מפורט לעיל להצלת וירוס מcDNA מסופק, זה עדיין אירוע הסתברות נמוכה. הרמות של כל אחד מN, P, ופלסמידים L צריכות להיות מותאמות היטב, וניסויים רבים ומשכפל צריכים לעשות כדי להבטיח הצלה נגיפית. היווצרותו של חלקיק ribonucleotide שילוב VSV גנום הרנ&quot;א מלא היא אירוע הסתברות נמוכה, ולכן עלול לקחת כמה ניסיונות. טכניקה זו עשויה לדרו...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;תרבית רקמות&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>תאי כליה של חולדה צעירה (BSRT7)</td><td>זמין על פי בקשה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>vaccinia (vTF7-3)</td><td>זמין על פי בקשה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פלסמידים pN, pP, pl</td><td>זמין על פי בקשה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סידום כלורי</td><td>Sigma</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלורי</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>תאי HEK 293T</td><td>Open Biosystems</td><td>HCL4517</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית בטיפול TC, 60 mm</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק תרבית תאים מלבני עם צוואר נטוי ופק עם פתח אוורור, 75 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>Corning</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>מצע: DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)</td><td>Invitrogen</td><td>12491-015</td><td></td></tr><tr><td>1 M HEPES pH 7.4</td><td>Gibo</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>FBS: סרום עגל עוברי</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>PKS</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr><tr><td>סוכן טרנספקציה Lipofectamine 2,000</td><td>Invitrogen</td><td>11668-019</td><td></td></tr><tr><td>מזרק: מזרק Luer-Lock בנפח 5 ml</td><td>Sigma</td><td>Z248010-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>מסנני מזרק</td><td>Nalgene</td><td>190-2520</td><td></td></tr><tr><td>PEI: PEI לינארי בעוצמה גבוהה</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;צנטריפוגה ויראלית&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>מערכת סינון ואקום עליונה למבחנה של 150 ml, נקבוביות 0.45 &amp;mu;m, של Corning</td><td>Corning</td><td>430314</td><td></td></tr><tr><td>מבחנות אולטרצנטריפוגה דופן דקה, שקיפות גבוהה, 38.5 ml, 25 x 89 mm</td><td>Beckman-Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>אולטרצנטריפוגה</td><td>Beckman-Coulter</td><td>optima XL-80K</td><td></td></tr><tr><td>רוטור אולטרצנטריפוגה SW28</td><td>Beckman-Coulter</td><td>342207</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;הזרקה לעכבר&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>מיקרופיפטות קפילריות</td><td>Drummond</td><td>5-000-2005</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקסי</td><td>Narishige</td><td>SR-5M</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור</td><td>Narishige</td><td>SM-15</td><td></td></tr><tr><td>מזרק Ump</td><td>World Precision Instruments</td><td>Sys-Micro4</td><td></td></tr><tr><td>בקר מיקרו של ארבעה ערוצים</td><td>World Precision Instruments</td><td>UMP3</td><td></td></tr><tr><td>מנוע שולחן M.TXB עם בקר חוגה C.EMX-1, 115 וולט</td><td>Foredom</td><td>M.TXB-EM</td><td></td></tr><tr><td>ידית H.10, החלפה מהירה</td><td>Foredom</td><td>H.10</td><td></td></tr><tr><td>מקדח מדורג, 0.5 mm</td><td>Foredom</td><td>A-58005P</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מיקרו&amp;#8211;אלקטרודה</td><td>World Precision Instruments</td><td>MEH2S</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>Henry Schein</td><td>995-2949</td><td></td></tr><tr><td>קסילאזין</td><td>Henry Schein</td><td>4015809TV</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>Henry Schein</td><td>1118217</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 ml</td><td>Becton-Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>מחט הזרקה 30 gauge</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>משחה עינית מגנה</td><td>Doctors Foster and Smith</td><td>9N-014748</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Sigma</td><td>493511</td><td></td></tr><tr><td>יוד</td><td>Sigma</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;כלי ניתוח ודיסקציה&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>91402-12</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה סטנדרטית</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה עדינה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ של ואנאס</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>ידית סקאלפל</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>להבי סקאלפל</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>חוטי תפירה</td><td>Robbins Instruments</td><td>20.SK640</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;דיסקציה וצביעת נוגדנים&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>פראפורמלהיד</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>סליין פוספט (PBS)</td><td>Sigma</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>סרום חמור</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;נוגדנים&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>נוגדנים</td><td>millipore</td><td>AB144P</td><td></td></tr><tr><td>Anti-gfp</td><td>Abcam</td><td>ab13970</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-chicken Dylight 488</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>703-545-155</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-chicken Alexa Fluor 647</td><td>Jackson immunoresearch</td><td>705-605-147</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;קיבוע רקמות&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>לשוניות מיקרוסקופ Superfrost plus</td><td>Fisher</td><td>12-550-100</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית כיסוי 22 x 22, עובי 0</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72198-10</td><td></td></tr><tr><td>אלסטומר סיליקון</td><td>Rogers Corp</td><td>HT-6220</td><td></td></tr><tr><td>לק שקוף לציפורניים</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>סוכן למניעת דהייה Prolong Gold</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_content"> &lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

איתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי

Viral Tracing of Genetically Defined Neural Circuitry

שיטות קלסיות לחקר מעגלים עצביים הן תפוקה נמוכה למדי. וירוסי Transsynaptic, במיוחד pseudorabies (PRV) ונגיף כלבת (RABV), ולאחרונה שלפוחי וירוס stomatitis (VSV), ללימוד מעגלים, יותר ויותר פופולריים. שיטות תפוקה גבוהות אלה להשתמש וירוסים שמשדרים בין הנוירונים בשני כיווני אנטרוגרדית או מדרדר. לאחרונה, RABV שונה לאיתור מדרדר monosynaptic פותח. (איור 1 א). בשיטה זו, גליקופרוטאין הגן (G) נמחק מהגנום הנגיפי, והצטייד במצרכים רק בנוירונים ממוקדים. הספציפיות זיהום מושגת על ידי החלפת G chimeric, מורכב מהתחום התאי של ASLV-גליקופרוטאין ותחום cytoplasmic של RABV-G (/ RG), לנורמלי 1 RABV-G. G chimeric זה במיוחד מדביק תאים המבטאים את הקולטן TVA 1. גן קידוד TVA יכול היה דelivered על ידי שיטות שונות 2-8. בעקבות זיהום RABV-G של נוירון TVA מבטא, RABV יכול לשדר לנוירונים אחרים, הקשורות בsynaptically כיוון מדרדר ידי הטבע של G שלו אשר היה השותף נמסר-עם קולט TVA. טכניקה זו מתייגת מספר רב יחסי של תשומות (5-10%) 2 על סוג תא מוגדר, מתן דגימה של כל תשומות על סוג תא תנע מוגדר. אנחנו שונים לאחרונה בטכניקה זו כדי להשתמש VSV כ9 נותב transsynaptic. VSV יש מספר יתרונות, כולל המהירות של ביטוי גנים. כאן אנחנו פירוט מערכת איתור נגיפית חדשה באמצעות VSV השימושי לחקור microcircuitry עם רזולוציה מוגברת. בעוד אסטרטגיות המקוריות שפורסמו על ידי Wickersham et al. 4 ו אייר et al. תיוג 9 היתר של כל הנוירונים שמשליכים על נגוע, תחילה TVA-להביע תאים, כאן VSV תוכנן לשידור רק לטלביזיהתאים המבטאים-(האיור 1B). וירוס pseudotyped הראשון עם RABV-G להתיר זיהום של מורד הנוירונים של נוירונים המבטאים TVA-. לאחר הדבקת האוכלוסייה ראשונה זה של תאים, הווירוס יכול להדביק תאים שוחרר TVA מבטא בלבד. בגלל ההתפשטות הנגיפית transsynaptic מוגבלת לתאים המבטאים TVA-, נוכחות של העדר קישוריות מסוגי תאים מוגדרים ניתן לחקור ברזולוציה גבוהה. תרשים זרימה ניסיונית של ניסויים אלה מוצג באיור 2. כאן אנו מציגים מודל מעגל, שכיוון של-הסלקטיביות ברשתית העכבר. אנו בודקים את הקישוריות של תאי התפרצות כוכבי amacrine (צקים) לתאי הגנגליון ברשתית (RGCs).

שיטה של ​​התחקות נוירונים הקשורים synaptically מתוארת. אנו משתמשים סגוליים TVA של תא במעלה זרם כדי לבחון אם אוכלוסיית תא של עניין מקבלת קלט סינפטי מסוגי תאים מוגדרים מבחינה גנטית.

שיטות קלאסיות לחקר מעגלים עצביים הן בעלות תפוקה נמוכה למדי. נגיפים טרנס-סינפטיים, ובמיוחד נגיף הפסאודורביס (PRV) ונגיף הכלבת...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לפתח טכניקה חדשה לניתוח של מעגלים זעירים (microcircuitry) במערכת העצבים המרכזית. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הגדרת אוכלוסיית נוירונים להדבקה באמצעות ביטוי של קולטן TVA. כשלב שני, מוזרק נגיף טרנס-סינפטי למערכת העצבים המרכזית, המדביק את הנוירונים הראשוניים הנבחרים.בשלב הבא, הנגיף יתפשט באופן טרנס-סינפטי רק לנוירונים מחוברים המבטאים את רספטור ה-TVA. כדי לבחון האם נוירונים אלו מחוברים, הושגו תוצאות המראות כי ניתן להשתמש בטכניקה זו לניתוח מיקרו-מעגלים, בהסתמכות על תיקוף של סימון מיקרו-מעגלים ידועים כמחוברים. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון אלקטרופיזיולוגיה ומיקרוסקופיה, הוא היותה שיטה בעלת תפוקה גבוהה לניתוח מעגלים נוירונליים.הרעיון לשיטה זו עלה לנו לראשונה כאשר קראנו את המחקר הראשון על מעקב ויראלי מוגבל לסינפסה אחת (mono synaptically restricted viral tracing) על ידי wickersham ועמתו. הרגשנו שניתן להנדס וירוסים באופן מעמיק יותר כדי לחקור נוירונים מחוברים בדרכים חדשניות. אנא עיינו בפרוטוקול הכתוב לפרטים על השגתו של VSV מ-CD NA באמצעות מערכת VACCINIA T seven כדי לייצר תאים למעבר (passaging).ראשית, שאבו את המצע מארבעה צלחות בן 10 סנטימטר של תאי TV-H800 שהגיעו ל-80% התמסרות (confluency) ונשתלו ביום הקודם, והחליפו אותו ב-5 mL של DMEM ללא תוס

viral-tracing-of-genetically-defined-neural-circuitry

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אנו מספקים מדריך מעשי קליעים נותבים...

חשיפת טופוגרפיה מעגלים עצביים Multi-Color

מעקב טרנס-סינפטי הפך לכלי רב עוצמה לניתוח זרמים מרכזיים המווסתים מטרות היקפיות באמצעות מעגלים רב-סינפטיים. כאן אנו מציגים פרוטוקול המנצל את נגיף הפסאודו-כלבת הטרנס-סינפטי כדי לזהות ולמקם מעגל מוחי פונקציונלי, ואחריו טכניקות מעקב דרכי קלאסיות כדי לאמת קשרים ספציפיים במעגל בין קבוצות מזוהות של נוירונים.

Transsynaptic איתור ממטרות היקפית עם וירוס Pseudorabies אחריו רעלן כולרה ותיוג Biotinylated Dextran אמינים זוגי

תוך ניצול אסטרטגיה גנטית בינארית אנו מספקים פרוטוקול מפורט למעקב אחר מעגלים עצביים בעכברים המבטאים עוקבים טרנס-סינפטיים משלימים לאחר רקומבינציה בתיווך Cre. מכיוון שייצור עוקבים ספציפיים לתא מקודד גנטית, הגישה הניסיונית שלנו מתאימה לחקור את היווצרותם והתבגרותם של מעגלים עצביים במהלך התפתחות המוח העוברי של עכברים ברזולוציית תא בודד.

מותנה הגנטי Transsynaptic איתור במוח העכבר עוברי

כאן אנו מתארים הליך המבוסס על שימוש בחלקיקים לנטי-ויראלים לשינוי גנטי ארוך טווח של תאי גזע עצביים ו/או תאי אפנדימליים סמוכים להם בנישה הנוירוגנית הגחנית-תת-חדרית הבוגרת המאפשרת ניתוח נפרד של השפעות אוטונומיות ולא אוטונומיות של תאים, תלויות נישה על תאי גזע עצביים.

הנדסה גנטית יציבה ויעילה של תאי V-SVZ העכבר למבוגרים עבור הניתוח של הגזע עצבי נייד אוטונומי והשפעות חד אוטונומיות

אנו מתארים טכניקה לתייג נוירונים והתהליכים שלהם באמצעות זריקות אנטרוגרדית או נותב מדרדר לגרעיני מוח באמצעות הכנה במבחנה. אנחנו שונה בשיטה הקיימת שלי n המבחנה electroporation נותב על ידי ניצול של שכותרתו fluorescently מוטציות עכבר וציוד אופטי בסיסי כדי להגדיל את דיוק תיוג.

Explants מוח מונחי לייזר עצבי איתור ב

פרוטוקול זה מתאר שחזורים בקנה מידה גדולה של אוכלוסיות נוירונים סלקטיבית, שכותרתו בעקבות זיהום מדרדר עם וירוס כלבת מהונדס להביע סמני ניאון, ואשכול עצמאי, ללא דעות מוקדמות מנתח המאפשר אפיון מקיף של מדדים מורפולוגיים בין subclasses העצבית ברורה.

שחזור בקנה מידה גדול ועצמאי, Clustering משוחדת בהתבסס על מדדי מורפולוגי לסווג נוירונים באוכלוסיות סלקטיבי

בהתבסס על הנדסת חוץ גופית ויראלי של מראש עצבי, שיתוף ההשתלה שלהם למוח פראי סוג ולזווג הערכה מורמטרית של "מבחן" ו "שליטה" נגזרים, שיטה זו מאפשרת דוגמנות מדויקת של בקרת vivo gene של הנאוקורטילית עצב מורפולוגיה בדרך פשוטה ובמחיר סביר.

השתלת השתלות מהונדסים של הנדסה עצבית בVivo לימודי נוירוארכיטקטורה

פרוטוקול זה מתכוון לייצר האינטרנוירונים מתוכנת באופן ישיר ב-vivo, באמצעות מערכת ויראלי מבוססי AAV במוח וכתבת ה-GFP FLEX סינפסין, המאפשרת זיהוי תאים וניתוח נוסף בvivo.

בתוך Vivo ישיר של תאים Glial תושב לתוך Interneurons על ידי הזרקת גרם של וקטורים ויראלי

הפרוטוקול הנוכחי מדגים שיטה פשוטה להתחקות אחר תחזיות גלוטמט אזור טגמנטלי גחוני (VTA) להיפוקמפוס. פוטוטימולציה של נוירונים גלוטמט VTA שולב עם הקלטת CA1 כדי להדגים כיצד מסופי גלוטמט VTA לווסת CA1 קצב ירי פירמידלי putative ב vivo.

מעקב אנטומי ותפקודי משולב של מסופי גלוטמט באזור הגונטם הגחמני בהיפוקמפוס

כאן אנו מציגים פרוטוקול המתאר התמרה ויראלית של אזורי מוח בדידים עם מבנים אופטוגנטיים כדי לאפשר אפיון אלקטרופיזיולוגי ספציפי לסינפסה בפרוסות מוח של מכרסמים חריפים.

אקס ויוו חקירה אופטוגנטית של העברה סינפטית ארוכת טווח ופלסטיות מקליפת המוח הקדם-מצחית האמצעית ועד קליפת המוח האנטורינלית הלטרלית

במהלך התפתחות קליפת המוח, נוירונים ותאי גלייה מקורם באזור החדר המצפה את החדר ונודדים לעבר פני המוח. גנים רבים מעורבים בתהליך זה. פרוטוקול זה מציג את הטכניקה לדימות בהילוך מהיר של נוירונים נודדים ואבות גלייה.

דימות בהילוך מהיר של נוירונים נודדים ואבות גלייה בפרוסות מוח עובריות של עכבר

למד שיטה חדשה לאיתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי באמצעות קולטן TVA. טכניקה זו מאפשרת ניתוח בקצב גבוה של מעגלים עצביים במערכת העצבים המרכזית.

איתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי

גלה סרטונים נוספים