Name: יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-Dimensional (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: למד ליצור יציקות תלת-ממדיות של וריד שער או מערכת צינור מרת בעכבר באמצעות טכניקת שרף. שיטה זו מאפשרת הדמיה מפורטת של הארכיטקטורה הווסקולרית לחקר ביולוגיה של כלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הלאומי לבריאות (NIH) לSSH (R01-DK078640), מהווארד יוז הרפואי במכון (HHMI) דרך תכנית אישורי אוניברסיטת HHMI / נדרבילט ברפואה המולקולרית לTJW (GRDOT56006779), נדרבילט סוכרת מחקר ומרכז הדרכה (P30-DK020593) ועיכול מחלות מרכז המחקר ונדרבילט (P30-DK058404) מתן שירותי ליבה.

1. הכן קנייה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם עוד סעיף 1-inch של PE10 צינורות בקץ האצבעות ולמתוח אותו כך שהצינורות הופכים דקים. הערה: גודלו של כלי השיט או לצינור cannulated יהיה לקבוע את המידה נדרש מתיחה. הצינורית צריכה להיות מתוחה היטב לצינור המרה מטילה אך עשוי רק תידרש להיות מתוחים למדי כדי להתאים לוריד השער הגדול יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הצינור נמתח באלכסון כדי ליצור קצה קטום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הקצה השני של הצינור כדי ליצור קטע 5-6 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מד 32, ½ סנטימטר מזרק לתוך הקצה שאינו המשופע של הצינורות. </li></ol> 2. הכן את המזרק עם PBS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא מזרק 3 מ&quot;ל עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הברג את המזרק על המזרק עם מצורף משך PE10 צינורות הכינו בעבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק קפיצי ובוכנת מזרק דחיפה כדי להבטיח שPBS מלא את המחט והצינורית ואין בועות אוויר במזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המזרק המוכן עם PBS לתוך מזרק בעל עצב מפלסטלינה. בעל זה יהיה לשמור את המזרק יציב תוך הצינורות מוכנסים לתוך הצינור. </li></ol> 3. אחר הגדרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 0.1 גרם של זרז למכל קטן, לדוגמה, אחד טוב של צלחת 24 היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך שרף 1 מ&quot;ל למזרק 3 מ&quot;ל. הערה: כמויות יחסיות של זרז ושרף יכולה להיות מותאמת לשינוי זמן ריפוי. הקטנת כמות זרז ייתכן, עם זאת, להגדיל להטיל התכווצות ולהוביל לשחקנים פחות רצויים. הערה: בעת טיפול בשרף, לנקוט אמצעי זהירות כדי להימנע ממגע עם שרף או שאיפה של אדי השרף. תמיד ללבוש כפפות ולבצע פעולות הקשורות שרף באזור מאוורר היטב, כגון מנדף כימי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך חתיכה של תפר 5.0 משי של כ 5 סנטימטרים שישמשו כחוט תלייה. </li></ol> 4. הכן עכבר <ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב את העכבר בוגר. הנח את העכבר על הגב שלו ופותח את חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על ביתור פלטפורמת היקף. מקם צינור 15 מיליליטר חרוטי ניצב מתחת לעכבר כדי להגדיל את החשיפה ונגישות לכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרטב מקלון צמר גפן עם PBS ולהשתמש בו כדי להפוך את הכבד כלפי מעלה והרחק ממך לחשוף את הנוף הגבה של הכבד יחד עם וריד שער extrahepatic או צינור מרה משותפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליציקות וריד שער, אתה יכול למנוע את קרישת דם על ידי שטיפת הווריד עם טמפרטורת החדר PBS. צרף מחט למזרק 3 מ&quot;ל מלא PBS ולהכניס מחט לתוך וריד פורטל extrahepatic כרחוק מכבד שאתה יכול. דחף בעדינות דרך PBS לתוך וריד הפורטל. הפוך ניק בוריד הקרדינל המשותף לניקוז דם. השתמש במטלית כותנה רטובה לעיסוי כבד, משפר את ניקוז דם. צעד זה אינו מומלץ לצינור המרה וייתכן שלא יהיה צורך בכל המערכות של כלי הדם. הערה: שלב זה יכול להיות גם performed עם paraformaldehyde 4% במקום PBS. שימוש בparaformaldehyde 4% עלול להגדיל יושרה ותוצאת כלי דם בגבס מדויק יותר, במיוחד של מבנים וסקולריים קטנים יותר. </li></ol> 5. Cannulate וריד פורטל extrahepatic או צינור מרה משותפת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים מעוקלים לעבור קשירת התפר כירורגית מתחת לוריד השער או צינור מרה, כ ¼ אינץ מהכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קושר בחוט לפקעת משותפת רופפת. אל תהדקו את הקשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אתה עובד עם מערכת פתוחה, זה עשוי להיות מועיל כדי לקשור ולהדק את קשירה בקצה השני של המערכה. אם פתחת וריד הקרדינל המשותף כדי לנקז את הדם מוריד השער, לקשור חוט תלייה סביבו כדי להגביר את הלחץ בתוך וריד השער ולמנוע דליפת שרף לתוך וריד הבדיה המרכזית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספריים באביב כדי לעשות חתך קטן בוריד השער או צינור מרה, כ ¼ סנטימטר מתחת לקשר התפר. זה מ&quot;קלא צריך לחדור לא יותר ממחצית קוטרו של וריד השער או צינור מרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש # 5 מלקחיים, להחזיק את וריד השער או צינור מרה באתר של החתך והכנס קצה מעוגל של הצינור לצינור המרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Push קצה צינור עבר הקשירה מראש, אילם וכיוון הכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחן לדיוק cannulation ידי הזרקת PBS דרך הצינורית וצופה כדי לראות אם הוא נכנס לוריד שער או צינור מרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדק את הקשירה להחזיק את הצינורית במקום. </li></ol> 6. שרף יצוק וריד השער או צינור מרת intrahepatic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף שרף מדוד מראש 1 מ&quot;ל לזרז מדוד מראש 0.1 g ומערבב היטב. הימנע מיצירת בועות אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר תערובת שרף זרז בחזרה לתוך מזרק 3 המ&quot;ל. הסר את כל בועות אוויר על ידי מצליף בעדינות את המזרק וגירוש בועות. הערה: ליציקת מבנים קטנים, זה עשוי להיות מועיל כדי להשתמש בתא ואקום כדי להסיר בועות אוויר קטנות מאוד מהשרף הדואר ולשפר את איכות שחקנים. כדי לאפשר לזמן כדי לבצע שלב זה, יהיה צורך להקטין את יחס הזרז / שרף מזה שהוצע לעיל כדי להאט ריפוי שרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות להחליף מזרק המכיל PBS עם מזרק המכיל שרף, ומשאיר את מחט המד 32 המצורפות לצינורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט ובעדינות לדחוף שרף לתוך וריד הפורטל או צינור מרה עד מגדיל את ההתנגדות וכבד מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במטלית כותנה רטובה בעדינות לעסות את הכבד ומעודד גם מילוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת צינורית מהמבנה ובמהירות הדקה מחדש הקשירה כדי למנוע דליפת שרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר עכבר כדי שכב בטמפרטורת חדר למשך 20 דקות ואילו את התרופות של השרף, ולאחר מכן להסיר כבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך בניקוי או קצוץ את הכבד. </li></ol> 7. כבד ברור להדמיה באתר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הכבד בparaformaldehyde הלילה 4% ב 4 ° C, נדנדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הכבדב PBS במשך לפחות 4 שעות, נדנדה. בשלב זה, אתה יכול להפריד את האונה של הכבד אם רוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבש במתנול 50% ולאחר מכן במתנול 100% לפחות 4 שעות כל אחד, מתנדנד בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הכבד ב01:02 פתרון של נזיל אלכוהול ונזיל בנזואט (באב) במשך לפחות 24 שעות, נדנדה. פעמים יותר לשטוף עשויות להיות נחוצות. אם הכבד אינו ברור לחלוטין לאחר 2-3 ימים, לחזור למתנול 100% עבור 24 שעות ולחזור באב סליקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבד להציף באב בצלחת פטרי זכוכית להדמיה באתר. </li></ol> 8. מסמס רקמת כבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כבד מעכבר והכניס לתוך צינור חרוטים 50 מ&quot;ל עם מים. חכה 1 שעה לריפוי מלא שרף. אונה של כבד נפרדת אם תרצה בכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצק את המים ולהעביר את הכבד לבקבוק זכוכית. לצלול ב15% KOH. השאר למשך הלילה בטמפרטורת חדר. לא רוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לשפוך את KOH ולשטוף גבס במים מזוקקים. הערה: הגבס הוא verצריך להיות מטופל y שביר ובקפידה רבים. למנוע שיבוש הגבס כאשר הוספה או סר של נוזל מהצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשגבס שרף הוא נקי, בעדינות שכב על Kimwipe להתייבש, ולאחר מכן להעביר למכל לאחסון. </li></ol> 9. נציג תוצאות צוות שחקנים מוצלח של וריד השער או צינור מרה יציג רשת רציפה של סניפים קטנים יותר בהדרגת ההארכה hilum לפריפרית הכבד. האיור 1 מציג וריד שער לוהק דמיינו באתר לאחר אב סליקה. איור 1 א מציג את השחקנים של אונת הכבד השמאלית וכל צורה והגודל של השחקנים. 1B האיור מציג תצוגה מקרוב של אותו הגוון, הוכחה חדירה של השרף לענפי וריד השער הקטנים בפריפריה בכבד. איור 2 מראה יצוק וריד שער שעבר KOH MAceration 2A. איור מציג את כל האונה השמאלית בכבד ובאיור 2B היא תקריב של סניפי הפריפריה הקטנים. טכניקה זו גם יושמה בהצלחה לצינור מרת intrahepatic ופרסמה באמצעות שני טכניקות אב שריית Koh 1,2,7 והסליקה. בעיות נפוצות כוללות שלמות מילויים, בועות בשרף, וגלישה למערכות או רקמות הסובבות. איור 3 מדגימות כיצד לזהות מילוי שלם (איור 3 א), בועות (איור 3 א), והצפה של שרף מוריד הפורטל הווריד מרכזי (איור 3 ב &#39;). כל התמונות צולמה באמצעות סטריאוסקופ יקה MZ 16 FA וQImaging מצלמת 4000R RETIGA. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig1.jpg" /> איור 1<html> גבס. אב פינה שרף של כבד השאיר וריד שער אונה. יציקת שרף א מראה מבנה היררכי מסתעף מהארכה hilum לפריפרית הכבד. יציקת שרף מופיעה בצבע צהוב בתוך אונת כבד צבוע כחול. ב מקרוב מראה כי מילוי שרף משתרע על סניפים קטנים בפריפריה בכבד. שרף הוא בנבן דרך כבד נוקה. סרגל קנה מידה = 1 מ&quot;מ. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig2.jpg" /> איור 2. גבס רקמות-רוככו שרף של כבד השאיר וריד שער אונה. שרף א יצוק מאונת כבד שלמה מראה לו סניפים רבים בגדלים שונים. ב מקרוב מראה סניפים קטנים בפריפריה של כבד. ריכוך מראה של סניפים קטנים מייצג שרף מילוי חללי סינוסי ועשוי או לא עשוי להיות גלוי על שרף מטיל ויגדיל את צפיפות הסניף לכאורה אם הוא קיים. שרף הוא בצבע לבן. סרגל קנה מידה = 1 מ&quot;מ. fo: לשמור-together.within עמודים = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig3.jpg" /> איור 3. בעיות נפוצות ביציקות שרף. א מילוי חלקי של וריד שער האונה השמאלי הוא לכאורה על ידי חלק או את כל סניפים יצוקים הכושלים להארכה לפריפרית הכבד. גבס זו מציג גם בועות, גלוי כמו הפסקות ביציקה הרציפה (חץ). ב בשל הקרבה של וריד שער וריד מרכזיים וסניפים במקומות מסוימים, שרף וריד השער לעתים קרובות להיכנס ולמלא את הווריד המרכזי. זה יכול להיות מוכר כאשר יש שני ענפים נפרדים hilar (חיצים) ושני מבני הסתעפות כי יש דפוסים וחפיפה שונים. אפליה בין טעויות טכניות ושינויים מורפולוגיים אמיתיים יכולה להתבצע בשתי דרכים. ראשית, המבנה היצוק יש להשוות למבנה הצפוי מבוסס על ניתוח 2-ממדי או בשיטות אחרות. שנית, חשוב לבצע מספר חזרות, וכאשר דבר אפשרי, לכמת את structיור ולבצע ניתוח סטטיסטי כדי לקבוע שחזור ואם יש שינוי מורפולוגי משמעותי מבחינה סטטיסטית בין ובתוך ניסיוניים שונים ובקרת נשק.

<ol><li>Sparks, E. E., Perrien, D. S., Huppert, K. A., Peterson, T. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defects+in+hepatic+Notch+signaling+result+in+disruption+of+the+communicating+intrahepatic+bile+duct+network+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Defects in hepatic Notch signaling result in disruption of the communicating intrahepatic bile duct network in mice.</a> Dis. Model Mech. 4, 359-367 (2011).</li>
<li>Vanderpool, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+interactions+between+hepatocyte+nuclear+factor-6+and+notch+signaling+regulate+mouse+intrahepatic+bile+duct+development+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Genetic interactions between hepatocyte nuclear factor-6 and notch signaling regulate mouse intrahepatic bile duct development in vivo.</a> Hepatology. 55, 233-243 (2012).</li>
<li>Meyer, E. P., Ulmann-Schuler, A., Staufenbiel, M., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+morphology+and+3D+architecture+of+brain+vasculature+in+a+mouse+model+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Altered morphology and 3D architecture of brain vasculature in a mouse model for Alzheimer's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 3587-3592 (2008).</li>
<li>Van Steenkiste, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+corrosion+casting%3A+analyzing+wall+shear+stress+in+the+portal+vein+and+vascular+abnormalities+in+portal+hypertensive+and+cirrhotic+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Vascular corrosion casting: analyzing wall shear stress in the portal vein and vascular abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic rodents.</a> Lab Invest. 90, 1558-1572 (2010).</li>
<li>Dickie, R., Cormack, M., Semmler-Behnke, M., Kreyling, W. G., Tsuda, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+pulmonary+lymphatics+in+immature+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Deep pulmonary lymphatics in immature lungs.</a> Journal of Applied Physiology. 107, 859-863 (2009).</li>
<li>Kelly, D. M., McEntee, G. P., McGeenery, K. F., Fitzpatrick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvasculature+of+the+pancreas%2C+liver%2C+and+kidney+in+cerulein-induced+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Microvasculature of the pancreas, liver, and kidney in cerulein-induced pancreatitis.</a> Archives of Surgery. 128, 293-295 (1993).</li>
<li>Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51, 1391-1400 (2010).</li>
<li>Carlson, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+expression+of+constitutively+active+Notch4+elicits+reversible+arteriovenous+malformations+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Endothelial expression of constitutively active Notch4 elicits reversible arteriovenous malformations in adult mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9884-9889 (2005).</li>
<li>Hemmeryckx, B., Emmerechts, J., Bovill, E. G., Hoylaerts, M. F., Lijnen, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ageing+on+the+murine+venous+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Effect of ageing on the murine venous circulation.</a> Histochem. Cell Biol. , (2012).</li>
<li>Hossler, F. E., Olson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvasculature+of+the+nasal+salt+gland+of+the+duckling%2C+Anas+platyrhynchos%3A+quantitative+responses+to+osmotic+adaptation+and+deadaptation+studied+with+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Microvasculature of the nasal salt gland of the duckling, Anas platyrhynchos: quantitative responses to osmotic adaptation and deadaptation studied with vascular corrosion casting.</a> J. Exp. Zool. 254, 237-247 (1990).</li>
<li>Hossler, F. E., West, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+valve+anatomy+and+morphometry%3A+studies+on+the+duckling+using+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Venous valve anatomy and morphometry: studies on the duckling using vascular corrosion casting.</a> Am. J. Anat. 181, 425-432 (1988).</li>
<li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+blood+supply+of+intrinsic+lymph+nodes+in+the+wall+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+with+light+microscopy%2C+electron+microscopy%2C+and+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Structure and blood supply of intrinsic lymph nodes in the wall of the rabbit urinary bladder--studies with light microscopy, electron microscopy, and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 477-484 (1998).</li>
<li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+a+unique+elastic+sheath+surrounding+the+vesicular+arteries+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+of+the+microvasculature+with+microscopy+and+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Evidence for a unique elastic sheath surrounding the vesicular arteries of the rabbit urinary bladder--studies of the microvasculature with microscopy and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 472-476 (1998).</li>
<li>Hossler, F. E., Kao, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvasculature+of+the+urinary+bladder+of+the+dog%3A+a+study+using+vascular+corrosion+casting%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Microanal%22%5BJournal%5D)">Microvasculature of the urinary bladder of the dog: a study using vascular corrosion casting.</a> Microsc. Microanal. 13, 220-227 (2007).</li>
<li>Wischgoll, T., Choy, J. S., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+of+morphometry+and+branching+angles+of+porcine+coronary+arterial+tree+from+CT+images%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Extraction of morphometry and branching angles of porcine coronary arterial tree from CT images.</a> Am J Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1949-H1955 (2009).</li>
<li>Hossler, F. E., Douglas, J. E., Douglas, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+morphometry+of+myocardial+capillaries+studied+with+vascular+corrosion+casting+and+scanning+electron+microscopy%3A+a+method+for+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Scan+Electron+Microsc%22%5BJournal%5D)">Anatomy and morphometry of myocardial capillaries studied with vascular corrosion casting and scanning electron microscopy: a method for rat heart.</a> Scan Electron Microsc. , 1469-1475 (1986).</li>
<li>Hossler, F. E., Douglas, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Corrosion+Casting%3A+Review+of+Advantages+and+Limitations+in+the+Application+of+Some+Simple+Quantitative+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Microanal%22%5BJournal%5D)">Vascular Corrosion Casting: Review of Advantages and Limitations in the Application of Some Simple Quantitative Methods.</a> Microsc. Microanal. 7, 253-264 (2001).</li>
<li>Mondy, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+of+corrosion+casts+for+use+in+the+computer-aided+design+of+microvasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Micro-CT of corrosion casts for use in the computer-aided design of microvasculature.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 15, 729-738 (2009).</li>
<li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Assessment+of+the+Rat+Intrahepatic+Biliary+System+by+Three-Dimensional+Reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Quantitative Assessment of the Rat Intrahepatic Biliary System by Three-Dimensional Reconstruction.</a> The American Journal of Pathology. 158, 2079-2088 (2001).</li>
<li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+Artery+and+Portal+Vein+Remodeling+in+Rat+Liver%3A+Vascular+Response+to+Selective+Cholangiocyte+Proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Hepatic Artery and Portal Vein Remodeling in Rat Liver: Vascular Response to Selective Cholangiocyte Proliferation.</a> The American Journal of Pathology. 162, 1175-1182 (2003).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

כבר תארנו דוגמאות ספציפיות לאיך וריד שער ומערכות צינור מרת intrahepatic של הכבד יכולים להיות יצוקים, אך טכניקה זו יכולה להיות מיושמת על כמעט כל מערכת ductal או כלי דם אחרת בעיבודים קלים. עבודה קודמת הוכיחה את ההיתכנות של טכניקה זו במינים רבים, כולל עכבר 1,2,7-9, הברווזון 10,11, 12,13 ארנב, כלב 14, ו 15, וחזיר באיברים רבים, כולל בלוטת אף 14, לב 16, 12,13 שלפוחית ​​שתן, כבד ו1,2,7,8. יציקות אלו יכולים לשמש ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> צינורות פוליאתילן PE10 </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 1417012P </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 משי שחור קלוע כירורגית </td><td> Roboz כירורגים </td><td> SUT-15-1 </td><td></td></tr><tr><td> 32 מחט Steriject G x 13 מ&quot;מ </td><td> אוויר-Tite </td><td> TSK3213 </td><td></td></tr><tr><td> מספרי האביב </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 15000-08 </td><td></td></tr><tr><td> מספר 5 מלקחיים </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> Mercox השני ערכה </td><td> אד מחקר </td><td> 21247 </td><td></td></tr><tr><td> בנזיל אלכוהול </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 1816-04 </td><td> Only נדרש לאב סליקה </td></tr><tr><td> בנזיל בנזואט </td><td> חבר הפרלמנט Biomedicals, LLC </td><td> 154839 </td><td> נדרש רק לאב סליקה </td></tr><tr><td> פוספט נאגר מלוח (PBS) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> פלסטלינה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> סולם </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> מספרי מעבדה </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 צינורות פוליפרופילן כובע מ&quot;ל </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4% paraformaldahyde </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15% אשלגן (KOH) </td><td></td><td></td><td> נדרש רק לשרייה </td></tr><tr><td> סכין גילוח </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 100% מתנול </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 מ&quot;ל luer מנעול מזרק </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-dimensional

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

באיברים, הארכיטקטורה הנכונה של מבנים וסקולריים וductal היא הכרחית לתפקוד פיסיולוגי תקין, ואת ההיווצרות והתחזוקה של מבנים אלה היא תהליך מוסדר מאוד. הניתוח של מבנים אלה מורכבים, 3-ממדיים שתלוי במידה רבה בשתי הבדיקות 2-הממדיות בסעיף או על מחקרי הזרקת צבע. טכניקות אלה, עם זאת, אינן מסוגלות לספק ייצוג מלא וכימות של מבני ductal או כלי דם שנועדו להבהיר. לחלופין, את הטבע של יציקות שרף פלסטיק 3-ממדיות יוצר תמונת מצב קבועה של המערכת והוא רומן וטכניקה שימושית נרחב המאפשרים הדמיה וכימות מבנים 3-ממדיים ורשתות. יתרון מכריע של מערכת יציקת השרף הוא היכולת לקבוע, המבנה השלם ומחובר, או תקשורת של כלי דם או דביקה. המבנה של כלי דם ודוקרשתות טל הן חיוניות לתפקוד איברים, וטכניקה זו יש את הפוטנציאל לסייע למחקר של רשתות כלי דם וductal בכמה דרכים. ליהוק שרף יכול לשמש כדי לנתח מורפולוגיה נורמלית ואדריכלות פונקציונלית של מבנה luminal, לזהות שינויים התפתחותיים המוךפו&quot;גנטי, ולחשוף הבדלים מורפולוגיים באדריכלות רקמות בין מדינות נורמליות ומחלה. עבודה קודמת ניצלה שרף ליהוק ללמוד, למשל, פגמים ארכיטקטוניים ופונקציונליים במערכת עכבר מרת intrahepatic הדביקה שלא באים לידי ביטוי בניתוח 2-ממדי של 1,2 המבנה, שינויים בכלי דם במוח של עכבר מודל מחלת אלצהיימר 3 , מומי וריד שער בעכברים עם יתר לחץ דם ופורטל צירוטיים 4, שלבים התפתחותיים בהתבגרות הלימפה עכברוש בין ריאות לא בשלות ובוגרים 5, שינויים מיידיים כלי דם בכבד החולדה, הלבלב והכליות בתגובה לפגיעה בחומר כימי6. כאן אנו מציגים שיטה ליצירת גבס שרף 3-ממדי של עכבר רשת כלי דם או ductal, מתמקד במיוחד בוריד השער וצינור מרת intrahepatic. יציקות אלו ניתן דמיינו ידי ניקוי או קצוץ את הרקמה ולאחר מכן ניתן לנתח אותו. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת כמעט בכל מערכת כלי דם או ductal ויהיה ישים ישירות לכל מחקר אל התפתחות, תפקוד, תחזוקה, או פגיעתו של מבנה ductal או כלי דם 3-ממדי.

שיטה של ​​הדמיה וכימות המבנה 3-הממדי של וריד עכבר כבד פורטל או צינור מרת intrahepatic מתוארת. טכניקת יציקת שרף זה יכול להיות מיושם גם למערכות ductal או כלי דם אחרות ומאפשרת<em&gt; באתר</em&gt; הדמיה או כימות של ארכיטקטורת התקשורת התקינה של מערכת.

יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-Dimensional

באיברים, הארכיטקטורה הנכונה של מבנים כלי דם ותעלות היא חיונית לתפקוד פיזיולוגי תקין, וההיווצרות וה...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ליצור יציקה תלת-ממדית של רקמה וסקולרית או תעלתית. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנה וקנולציה של המבנה המטרה, כגון הווריד הפורטלי, וקשירת הקנולה במקומה. לאחר מכן, מכינים שרף, מזריקים אותו לווריד הפורטלי ומניחים לו להתקשות.לאחר מכן מוציאים את הכבד ואת הרקמה מקבעים או מרכיים. לבסוף, מבצעים הבהרה לכבד ומדמיים את מבנה היציקה. בסופו של דבר, ניתן לקבל את התוצאות.דבר זה מראה שינויים במבנה של הארכיטקטורה הווסקולרית או הניתיבית באמצעות ניתוח ויזואלי או כימות באמצעות micro ct. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי ארכיטקטורת הכבד, ניתן להחיל אותה גם על המערכות הווסקולריות או הניתיביות של כל איבר, כולל המוח, הריאה, הלבלב והכליות.כדי להכין את הקנולה, חממו בעזרת קצות האצבעות מקטע באורך של one inch של צינור PE 10 ומשכו אותו בעדינות עד שיהיה דק. חתכו את הצינור המתוח באלכסון. כדי ליצור קצה משופע, חתכו את הקצה השני של הצינור כך שייווצר מקטע באורך של five to six inch.החדירו מחט היפודרמית במידה 32 ובאורך חצי אינץ' לקצה הצינור שאינו משופע. הכינו מזרק של 3 ml על ידי מילויו תחילה ב-PBS, והבריגו עליו את המחט עם הצינור. ודאו שאין בועות אוויר במזרק ושהמחט מלאה ב-PBS על ידי נקישה על המזרק ולחיצה על הבוכנה.שקלו 0.1 גרם של זרז לתוך מיכל קטן. לאחר מכן, שאבו מיליליטר אחד של שרף למזרק של שלושה מיליליטר. לבסוף, גזרו חתיכה של חמישה אינץ' של תפר משי לשימוש כליגטורה.לאחר הקרבת עכבר בוגר, השכיבו על גבו ופתחו את חלל הבטן. הניחו את העכבר על משטח של מיקרוסקופ דיסקציה ומקמו מבחנה קונית בנפח 15 milliliter באופן מאונך מתחת לעכבר כדי להגביר את הנראות ואת הנגישות לכבד. הרטיבו מקל צמר גפן ב-PBS והשתמשו בו כדי להפוך את הכבד כלפי מעלה והחוצה, כדי לחשוף את המבט הדורסלי של הכבד יחד עם הווריד השערתי外-כבדי (extra hepatic portal vein) או תעלת המרה המשותפת.עבור יציקות של הווריד הפורטלי, יש למנוע קרישת דם על ידי שטיפת הווריד ב-PBS בטמפרטורת החדר. חברו מחט למזרק של 3 mL מלא ב-PBS ובמרחק הגדול ככל האפשר מהכבד. הכניסו אותה אל תוך הווריד הפורטלי החוץ-כבדי (extra hepatic portal vein).בשלב הבא, דחפו בעדינות PBS אל תוך הווריד הפורטלי. לאחר מכן, בצעו חתך קטן בווריד הקרדינלי המשותף כדי לנקז דם במידת הצורך כדי לשפר את ניקוז הדם, והשתמשו במקלון צמר גפן רטוב כדי לעסות את הכבד. אם עובדים עם מערכת פתוחה, עשוי להיות מועיל לקשור ולהדק ליגטורה בקצה השני של המערכת.אם פתחו את הווריד הקרדינלי המשותף (common cardinal vein) כדי לנקז דם מווריד הפורטה, יש לקשור סביבו ליגטורה כדי להגביר את הלחץ בתוך וריד הפורטה ולמנוע דליפת שרף אל הווריד הכבדי המרכזי. השתמשו בפינצטה קמורה כדי להעביר את ליגטורת התפר הכירורגי מתחת לאחד המבנים, במרחק של כרבע אינץ' מהכבד. קשרו את התפר לקשר רגיל רפוי מבלי להדק אותו.בשלב הבא, השתמש במספרי קפיץ כדי לבצע חתך קטן בווריד השער או בתעלת המרה, כרבע אינץ' מתחת לקשר התפר. חתך זה לא יעבור ביותר ממחצית קוטר המבנה. לאחר מכן, בעזרת פינצטה מספר 5, החזק את וריד השער או את תעלת המרה באתר החתך והכנס את הקצה המשופע של הצינורית.דחפו את קצה הפיתול מעבר לליגטורה המהודקת לכיוון הכבד. בדקו את דיוק הקניולציה על ידי הזרקת PBS דרך הקניולה ובדיקה האם היא נכנסת לווריד הפורטלי או לצינור המרה. הדקו את הליגטורה כדי לקבע את הקניולה במקומה.הוסיפו מיליליטר אחד של שרף שנמדד מראש ל-0.1 גרם של זרז שנמדדו מראש, וערבבו היטב תוך הימנעות מיצירת בועות אוויר. שאבו את תערובת השרף והזרז חזרה למזרק של שלושה מילליטר. הסירו בועות אוויר על ידי נקישה עדינה על המזרק ודחיפת הבועות החוצה.החליפו בזהירות את המזרק המכיל PBS במזרק המכיל שרף, תוך השארת המחט בכילור (gauge) 32 מחוברת לקנולה. דחפו את השרף באיטיות ובעדינות אל תוך הווריד הפורטלי או צינור המרה עד להגברת ההתנגדות ומילוי הכבד. כדי לעודד מילוי אחיד.השתמש במקלון צמר גפן רטוב כדי לעסות בעדינות את הכבד, הסר את הקנולה והדק במהירות את הליגטורה כדי למנוע דליפה של שרף. השאר את העכבר שכיב בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות בזמן שהשרף מתקשה, לפני הוצאת הכבד כדי לאפשר ויזואליזציה פנימית של הכבד; קבע אותו ב-4% Paraform aldehyde למשך לילה בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס. למחרת, שפוך החוצה את הנוזל והוסף PBS.שטפו את הכבד ב-PBS למשך ארבע שעות לפחות. ניתן להפריד את אונוני הכבד בשלב זה במידת הצורך.בצעו דהידרטציה לרקמה ב-50%methanol ולאחר מכן ב-100%methanol למשך ארבע שעות לפחות בכל שלב.ערבוב במצב נדנוד (Rocking) בטמפרטורת החדר. בצעו שקיפות של הכבד בתמיסה של 1:2 של בנזואיל אלכוהול ובנזואיל בנזואט למשך 24 שעות לפחות. ייתכן שיהיה צורך בזמני שטיפה נוספים לצורך דימוי in situ.כשיטה חלופית למעיכה של הרקמה, טבול את הכבד ב-BABB בתוך צלחת פטרי מזכוכית. לאחר הוצאת הכבד מהחיה, העמדו אותו בתוך מבחנה קונית בנפח 50 milliliter עם מים. המתן שעה אחת להשלמת פולימריזציית השרף.שפכו את המים והעבירו את הכבד לבקבוק זכוכית. השקיעו אותו ב-15% potassium hydroxide, והשאירו אותו למשך לילה בטמפרטורת החדר ללא ניעור זהיר. שפכו את ה-potassium hydroxide ושטפו את היציקה במים מזוקקים.הימנעו מהפרעת היציקה בעת הוספה או הוצאה של נוזלים מהמבחנה. כאשר יציקת השרף נקייה, הניחו אותה בעדינות על נייר ניגוב מסוג Kimwipe לייבוש, ולאחר מכן העבירו אותה למכל לצורך אחסון. איור זה מציג יציקה של הווריד הפורטלי כפי שהיא נראית in situ לאחר הבהרה ב-BABB.מוצגת כאן יציקה של כל האונה השמאלית של הכבד, וכן צורתה וגודלה של היציקה. זוהי תצוגה מקרוב של אותה יציקה המדגימה את חדירות השרף אל הענפים הקטנים ביותר של הווריד השער בהיקף הכבד. כאן, יציקה של הווריד השער עברה תהליך מאסרציה באמצעות פוטסיום הידרוקסיד, כאשר כל האונה השמאלית מוצגת כאן, ותצוגה מקרוב של הענפים ההיקפיים הקטנים מוצגת כאן.בעיות נפוצות כוללות מילויים חלקיים, בועות בשרף ונזילה למערכות או רקמות סובבות. איור זה מדגים כיצד לזהות מילוי חלקי, בועות ונזילת שרף מהוריד השער (portal vein) אל הווריד המרכזי. זכרו שעבודה עם שרף עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט באמצעי זהירות, כגון הרכבת כפפות באופן קבוע ועבודה באזור מאוורר היטב, בעת ביצוע הליך זה.

3-dimensional-resin-casting-imaging-mouse-portal-vein-or-intrahepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

במאמר זה, אנו מציגים טכניקה פשוטה, מעשית ליציקת כלי דם במוח כי הוא קל לביצוע, יכול להיות מנוצל על התמונה עץ כלי דם של המוח עכבר מבוגר.

יציקה של כלי דם במוח העכבר למבוגרים הדמיה 3D ו ניתוח מורפולוגי

סרטון זה מתאר את הליך יציקת שרף מערכת המרה, להבנת ארכיטקטורת מרה תלת ממדית. טכניקה זו מספקת תובנות לגבי הקוטר הפנימי וקישוריות הרשת של מערכת המרה, אשר יכולה לשמש לניתוח התחדשות הכבד.

יציקת שרף מערכת המרה: טכניקה לניתוח ארכיטקטורה תלת ממדית של מערכת המרה במודל מורין באמצעות הזרקת שרף רדיופאק

כלים המשמשים להמחשת התחדשות כלי הדם דורשים שיטות לניגוד עצי כלי הדם. סרט זה הדגים טכניקת הזרקה עדינה המשמשת להשגת ניגודיות אופטימלית של עצי כלי הדם וממחיש את היתרונות הפוטנציאליים הנובעים מניתוח מפורט של הדגימה המתקבלת באמצעות μCT וחתכים סדרתיים היסטולוגיים.

ויזואליזציה של התחדשות כלי דם Parenchymal לאחר 70% חלקיות כריתה בעכברים נורמליים

פותח הליך כירורגי להעברת תאי גידול חלב לכבד העכברים באמצעות הזרקת וריד פורטלי. מודל זה מאפשר לחקור שלבים מאוחרים של גרורות בכבד במארח בעל יכולת חיסונית מלאה, כולל אקסטרוואזציה של תאי גידול, זריעה, הישרדות וצמיחה גרורתית בכבד.

מודל הזרקת Portal Vein לחקר גרור בכבד של סרטן השד

המטרה של טכניקה זו היא הדמיה ex vivo של רשתות עורקים ריאתיים של עכברים פוסט לידתיים ומבוגרים מוקדם באמצעות אינפלציה ריאות והזרקה של תרכובת פולימר אטומה רדיו באמצעות עורק הריאה. יישומים פוטנציאליים עבור רקמות יצוקות נדונים גם.

יציקת כלי דם של ריאות עכבר מבוגר ומוקדם לאחר הלידה עבור הדמיית מיקרו-CT

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים מסרטן המעי הגס (CRC) יוצרת גרורות כבד עשירות בסטרומה. מודל עכבר זה של גרורות כבד CRC מייצג כלי שימושי לחקר אינטראקציות בין גידול לסטרומה ולפיתוח טיפולים חדשניים המכוונים לסטרומה כגון טיפולים גנטיים בתיווך וירוסים הקשורים לאדנו.

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים לסרטן המעי הגס לחקר סטרומה גרורות בכבד

טומגוגרפיה מיקרו-ממוחשבת עם שרף כפול מאפשרת הדמיה, דיגיטציה וסגמנטציה של שתי מערכות צינוריות בו זמנית כדי להקל על ניתוח תלת-ממדי של ארכיטקטורת איברים. DUCT משלב הזרקת ex vivo של שני שרפים radiopaque ואחריו סריקת טומוגרפיה מיקרו ממוחשבת פילוח של הנתונים טומוגרפיים.

צינור: יציקת שרף כפול ואחריו טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת לניתוח כבד תלת-ממדי

הפרוטוקול הנוכחי מייעל את שיטות זילוח / דה-צלולריזציה באתרו של הכבד ושיטות מיקרוסקופיה של שני פוטונים כדי ליצור פלטפורמה אמינה להמחשת הדינמיקה של עיצוב מחדש של מטריצה חוץ-תאית (ECM) במהלך סטאטוהפטיטיס לא אלכוהולית (NASH).

הדמיה תלת מימדית של המטריצה החוץ תאית של הכבד במודל עכבר של דלקת כבד לא אלכוהולית

הקמנו מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד, המספק מודל חייתי מתאים למחקר המכניסטי של אפיברוזיס כבד המושרה על ידי וירוסים של אטרזיה מרה (BA) ופלטפורמה לטיפולי BA עתידיים.

מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד לחקר אטרזיה של המרה

בפרוטוקול זה נדון ביישום מודל של השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת (OLT) בעכברים. בנוסף, נדונים גם אדג'ובנטים לניתוח נוסף של פטנטיות אלוגרפט לאחר OLT מוצלח בעכבר, במיוחד באמצעות סריקות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (microCT).

השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת אנגיוגרפיה

פרוטוקול זה מציג כלי הדמיה כבדי רב-פעמי מתקדם (RHIT) למיקרוסקופיה תוך-חיונית (IVM) של עכברים חיים, המשפר את יציבות הרקמות בניסויים מהירים וחריפים. העיצוב המודפס בתלת-ממד של ה-RHIT מציע ייצור, יכולת הרחבה ורב-שימושיות חסכונית, ומאפשר תצפית ממושכת על תהליכים מטבוליים בעכברים בגדלים שונים.

כלי הדמיה כבדית רב-פעמי: כלי רב-פעמי מודפס בתלת-ממד למיקרוסקופיה תוך-חיונית בכבד

למד ליצור יציקות תלת-ממדיות של וריד שער או מערכת צינור מרת בעכבר באמצעות טכניקת שרף. שיטה זו מאפשרת הדמיה מפורטת של הארכיטקטורה הווסקולרית לחקר ביולוגיה של כלי דם.

יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-Dimensional

גלה סרטונים נוספים