Name: הדמיה בקטריאלי bioluminescent In Vivo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-04T23:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: למד הדמיה ביולומינסצנטית לניטור חיידקים בעכברים חיים עם גידולים תת-עוריים. שיטה זו מאפשרת מעקב לא פולשני בזמן אמת ליישומים בטיפול בסרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות תמיכה רלוונטית לכתב היד הזה מהוועדה השביעית מסגרת התכנית האירופית (PIOF-GA-2009-255466) והמועצה למחקר הבריאות האירית (HRA_POR/2010/138). Lux מתויג-E. coli היה מתנה מסוג ד&quot;ר קורמאק Gahan, קורק מכללת האוניברסיטה.

1. אינדוקצית גידול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזירוז גידול שגרתי, המינון המינימאלי של תאים הסרטניים מושעים ב200 μl של התרבות בינונית סרום ללא הוזרק תת עורית (SC) לתוך האגף של זיהום החופשי בשבוע 6-8 עכברי BALB / C או athymic נשיים ישנים MF1-nu/nu n = 6 (הרלן, אוקספורדשייר, בריטניה) (1 x 10 6 תאים 4T1) באמצעות מחט מזרק 21-מד. הכדאיות של תאים המשמשים לחיסון הייתה גבוה מ 95%, כפי שנקבע על ידי ספירה חזותית באמצעות haemocytometer והדרת צבע הכחול Trypan (Gibco). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות הקמת גידול, גידולים הורשו לגדול ולהתפתח והיו במעקב פעמים בשבוע. נפח גידול היה מחושב לפי נוסחת V = (ab 2) Π / 6, שבו הוא הארוך ביותר בקוטר של גידול ואילו b הוא ניצב הקוטר הארוך ביותר לקוטר. </li></ol> 2. הכנת קטריאלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זן החיידקים המשמש בprotoco זהאני היה א coli K-12 MG1655, שאינו החלבון הרעלן-להביע מתח, מחסה luxABCDE קידוד פלסמיד המאפשר לחיידקים להיות מזוהים על ידי BLI. א coli MG1655 המכיל luxABCDE המשולב היה גדל אירובי על 37 מעלות צלזיוס במדיום LB (סיגמה אולדריץ, אירלנד) בתוספת 300 מיקרוגרם / המ&quot;ל אריתרומיצין (EM). הנגזרת של bioluminescent MG1655 נוצרה באמצעות p16S לוקס פלסמיד המכיל את עזרת P המכוננת luxABCDE 1 אופרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכנה לממשל לעכברים, תרבויות הודגרו במדיום LB על 37 מעלות צלזיוס בייקרה ב 200 סל&quot;ד לשלב יומן האמצע-(צפיפות אופטית ב 600 ננומטר). חיידקים נקצרו ידי צנטריפוגה (6,000 × גרם למשך 5 דקות), נשטפו עם PBS (סיגמא), ודילול ב1 × PBS 10 7 יחידות מושבה להרכיב (CFU) / מ&quot;ל עבור IV ממשל, או 1 x 10 10 לgavage. </li></ol> 3. Administra קטריאליtion <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים חולקו באופן אקראי לקבוצות ניסוי, כאשר גידולים הגיעו לכ 100 מ&quot;מ 3 בנפח. עירוי לוריד, עכברים מאופקים כל אחד קבלו 10 6 תאים ב100 μl, מוזרקים ישירות לוריד הזנב לרוחב באמצעות מחט מזרק 28g. ספירת הקיימא של כל בידוד נקבעה על ידי ציפוי רטרוספקטיבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללימודי קולוניזציה גית, 10 9 תאים חיידקיים היו אוראליים ב100 μl לעכבר על ידי gavage, על שלושה ימים רצופים. רמות חיידקים commensal קיים ירדו בלפני ההאכלה על ידי תוספת של סטרפטומיצין 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל במי שתייה בעכבר למשך 7 ימים שקדם לתחילת gavage פי 1. </li></ol> 4. הדמית פליטת אור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2D in vivo BLI ההדמיה בוצע באמצעות IVIS100 (Caliper). בממשל הגדיר נקודתי זמן הודעת חיידקים, עכברים היו מורדמים באמצעות ההרדמה של Caliper XGI-8 הגזמערכת עם Isofluorane 3%, וניתוח תמונה של כל גוף בוצעה ב100 מערכת IVIS עבור 2-5 דקות ברגישות גבוהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדמית 3D, עכברים מורדמים הונחו במעבורת הדמית עכבר הפנימי של מערכת ההדמיה האופטית להדמיה הגבה (IVIS ספקטרום, Caliper). לרכוש תמונות של אות לוציפראז חיידקים לשיקום אופטי 3D, אורכי גל נעים סינון פליטה 500-580 ננומטר שמשו עם 16 פעמי רכישת הסל של 3-4 דקות למסנן למקסם את יחס האות לרעש. כחלק מרצף רכישת התמונה, תמונת אור מובנהית הושגה להגדיר מפת גובה. מפה זה הייתה קלט מפוזרת אור הדמית אלגוריתמי שחזורים ששמשו ליצירת תמונה אופטית 3D באמצעות אופטימיזציה אינה שלילית לפחות ריבועי 2 טומוגרפיה (DLIT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח תמונה: אזורים של עניין זוהה ולכמת באמצעות תוכנת תמונת חיים (Caliper). </li></ol> 5. נציגתוצאות במחקר זה, החיידקים פתוגניים commensal הלא E.coli K-12 MG1655 להביע luxABCDE אופרון היה רביעי ניתן לעכברי נושאי גידולי xenograft 4T1 sc. לוקס אות חיידקים זוהתה באופן ספציפי בגידולים של עכברי הודעת IV-ממשל (איור 2). התאוששות תרבות של חיידקים מעכברי מדגם מאמתת את קיומו של קשר לינארי בין מספרי חיידקי קיימא וכמות האור זוהה (איור 3). בתחום הדמית vivo של חיידקי commensal דרך פה המנוהל ב- Git גם מושג באמצעות 3D BLI. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1.jpg" alt="איור 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1highres.jpg"/> איור 1. פרוטוקול ציר זמן. גידולים תת עורי הם המושרה בעכברים, וחיידקים מנוהלים על התפתחות גידול (100 מ&quot;מ 3). עכברים חיים הם BLI imהבן בממשל שונה בזמן נקודתי הודעת חיידקים (חיצים להציג זמנים טיפוסיים). <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. מנהל של E. MG1655 luxABCDE coli לעכברי נושאים גידולים. גידולים תת עורי 4T1 היה מושרה בMF1 נו / נו עכברים וא MG1655 luxABCDE coli מנוהל על התפתחות גידולים. כל חיה קבלה 10 6 תאים הוזרקו ישירות לוריד הזנב לרוחב. עכברים צלמו בארבע נקודתי זמן במהלך המחקר (נקודות שחורות ציר Z-ותמונות) עם התאוששות מאוחרת של חיידקי קיימא (CFU) מגידולים של עכברים לדוגמה הקריבו (גרף עמודות). גידול במספרי חיידקים וביטוי גני פלסמיד במיוחד בגידולים נצפה לאורך זמן (עכבר נציג מאויר לכל נקודת זמן). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4318/4318fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a><img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. קשר בין מספרים חיידקיים intratumoral ופליטת אור. חיידקי קיימא בגידולים פורטו על ידי תרבות חיידקי vivo לשעבר מהגידולים הבאים לBLI בהודעת זמן נקודות שונים IV ממשל. היכנס ערכים של מספרי חיידקים (CFU) יחסית ליחידות vivo bioluminesce נמצאים בגרף. מתאם חזק בין ספירת חיידקים ואותות פליטת אור חיידקיים הוא ציין R 2 = 0.9717 1. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. תמונת 3D IVIS של מערכת העיכול Murine מאוכלסת על ידי א coli MG1655. Git של עכברים היה קולוניה אוראלית של 10 9 CFU של E. coli במשך שלושה ימים רצופים. דגימת תמונה בודדה מטומוגרפיה 3D של העכבר התנחל מוצגת.תמונות 3D להראות אטלס עכבר דיגיטלי של השלד לספק רישום אנטומי. א MG1655 פליטת אור coli גלויה בירוק בנמוך יותר, וסגולה ברמות גבוהות יותר.

<ol><li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+in+vivo+bioluminescent+imaging+for+the+study+of+bacterial+tumour+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting.</a> PLoS One. 7, e30940(2012).</li>
<li>Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+reconstruction+of+in+vivo+bioluminescent+sources+based+on+multispectral+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging.</a> J. Biomed. Opt. 12, 024007(2007).</li>
<li>Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O'Sullivan, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Postgrad+Med%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for prostate cancer.</a> Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).</li>
<li>Morrissey, D., O'Sullivan, G. C., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+targeting+with+systemically+administered+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumour targeting with systemically administered bacteria.</a> Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).</li>
<li>Collins, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+in+cancer+immunotherapy%3A+which+vector+for+which+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy.</a> Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).</li>
<li>Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+conditions+required+for+tumor+colonization+by+intravenously+delivered+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria.</a> Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).</li>
<li>Baban, C. K., Cronin, M., O'Hanlon, D., O'Sullivan, G. C., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+as+vectors+for+gene+therapy+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bioeng.+Bugs%22%5BJournal%5D)">Bacteria as vectors for gene therapy of cancer.</a> Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).</li>
<li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orally+administered+bifidobacteria+as+vehicles+for+delivery+of+agents+to+systemic+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors.</a> Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).</li>
<li>van Pijkeren, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+Listeria+monocytogenes-based+DNA+delivery+system+for+cancer+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy.</a> Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).</li>
<li>Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+effective+antitumor+response+after+mucosal+bacterial+vector+mediated+DNA+vaccination+with+endogenous+prostate+cancer+specific+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen.</a> J. Urol. 186, 687-693 (2011).</li>
<li>Riedel, C. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+luciferase+tagging+system+for+Listeria+monocytogenes+allows+real-time+monitoring+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro.</a> Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).</li>
<li>Cheng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-targeting+prodrug-activating+bacteria+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy.</a> Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).</li>
<li>Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+intestinal+colonization+by+Escherichia+coli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice.</a> Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).</li>
<li>Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+Imaging+For+Gene+%26+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">PET Imaging For Gene & Cell Therapy.</a> Curr. Gene Ther. , (2012).</li>
<li>Tangney, M., Francis, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Optical+Imaging+in+Gene+%26+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy.</a> Curr. Gene Ther. , (2012).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

בהקשר של ריפוי גנטי, השימוש בחומרים ביולוגיים למסירה של גנים טיפוליים לחולים הוכיח הבטחה גדולה 3-5. כמו וירוסים, התכונות הביולוגיות המולדות של חיידקים מאפשרות אספקה ​​יעילה DNA לתאים או רקמות, בעיקר בהקשר של הסרטן. הוכח שחיידקים באופן טבעי מסוגלים ביות לגידולים, כאשר באופן מערכתי וכתוצאה מרמות גבוהות של שכפול בסביבה, או שאינן קשורות למין (לא פולשני) או בתוך תאים סרטניים (פתוגנים). ספציפי לסרטן שכפול חיידקים בתחילה יוחס לטבע היפוקסי בגידולים מוצקים (2 רמות נמו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> שורת תאים 4T1 </td><td> ATCC </td><td> CRL-2539 </td><td> מודל סרטן השד Syngeneic נובע מגידול הנובע באופן ספונטני BALB / ג חלב </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> D6429 </td><td> הבינוני של Dulbecco השינוי של הנשר </td></tr><tr><td> PBS </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> D8537 </td><td> נאגר מלוח פוספט </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS </td><td> Caliper מדעי חיים </td><td></td><td> IVIS 100 עבור 2D הדמיה; ספקטרום IVIS 3D. </td></tr><tr><td> לוריא מרק מילר (LB) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> L2542 </td><td> מדיום גידול עבור E. coli </td></p&gt; <tr><td> אריתרומיצין </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> E5389 </td><td> אנטיביוטי </td></tr><tr><td> סטרפטומיצין </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> S9137 </td><td> אנטיביוטי </td></tr><tr><td> עכברי MF1nu/nu </td><td> הרלן (בריטניה) </td><td> 069 (נו) / 070 (נו / +) </td><td> HSD: Athymic עירום-Foxn1nu </td></tr><tr><td> עכברי BALB / ג </td><td> הרלן (בריטניה) </td><td> 066 </td><td> Haplotype: H-2 ד </td></tr><tr><td> מחט Gavage </td><td> וטרינר טק פתרונות (בריטניה) </td><td> DE009 </td><td> 22g x 38mm מחט gavage ישר </td></tr><tr><td> מזרק להזרקת IV </td><td> BD Biosciences </td><td> 309309 - 1 מ&quot;ל </td><td> מזרק אינסולין עם 28-G ½ מחט אינץ x מייקרו הקנס הרביעי. </td></tr><tr><td> מזרק לחיסון גידול </td><td> בראון </td><td> 9161376V </td><td> Omnifix 26 x &amp; Gfrac12; מחט אינץ </td></tr></tbody></table>

הדמיה בקטריאלי bioluminescent<em&gt; in vivo</em

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

וידאו זה מתאר את השימוש בגוף כולו bioluminesce ההדמיה (BLI) ללימודי סחר חיידקים בעכברים חיים, עם דגש על השימוש בחיידקים בגן וטיפול בתאי סרטן. חיידקים המצויים ברמה אטרקטיבית של וקטור לטיפול בסרטן, בעל יכולת טבעית לגדל מעדיף בתוך גידולים בעקבות מנהל מערכתי. חיידקים שהונדסו גנטי איתור לוקס קלטת היתר BLI של החיידק סרטניים ואתרים במקביל. המיקום ורמות חיידקים בתוך גידולים לאורך זמן, ניתן לבדוק בקלות, דמיין בשניים או שלושה ממדים. השיטה ישימה למגוון רחב של מינים וסוגי חיידקי xenograft סרטניים. מאמר זה מתאר את הפרוטוקול לניתוח של חיידקים בתוך bioluminescent עכברי נושאים גידולים תת עורי. ויזואליזציה של חיידקי commensal במערכת העיכול (git) על ידי BLI גם תארה. יציג זה חזק, וזול, בזמן אמת הדמית אסטרטגיהts שיטה אידיאלית לחקר חיידקים בחי בהקשר של חקר הסרטן, בטיפול בגן מסוים, ומחלות זיהומיות. סרטון זה מתאר את ההליך ללימוד ה-Lux מתויג coli בעכברים חיים, הוכחת BLI readout מרחב ובזמן להשגת ניצול עם מערכת IVIS.

מאמר זה מתאר את הממשל של<em&gt; מתויג לוקס</em&gt; חיידקים לעכברים ולאחר מכן<em&gt; In vivo</em&gt; ניתוח באמצעות הדמית פליטת אור IVIS.

הדמיה בקטריאלי bioluminescent<em&gt; In Vivo</em

סרטון זה מתאר את השימוש בדימיון ביו-לומנסי (BLI) של הגוף כולו לצורך חקר נדידה של חיידקים בעכברים חיים, תוך דגש על השימוש ב...

סרטון זה מתאר את השימוש בדימות ביולומינסנטי של הגוף כולו למחקר של נדידת חיידקים בעכברים חיים, תוך דגש על זיהוי גדילה חיידקית בתוך קסנוגרפטים של גידולים. חיידקים מהווים מחלקה אטרקטיבית של וקטורים לטיפול בסרטן, שכן הם בעלי יכולת טבעית לגדול באופן מועדף בתוך גידולים לאחר מתן תוך-ורידי, כאשר הגדילה מתרחשת בין אם מחוץ לתאי הגידול ובין אם בתוכם. זני חיידקים שהונדסו לבטא את קסטת הגנים lux מקלים על זיהוי החיידקים ובמקביל על זיהוי הגידולים. הערכה של ניטור אורך (longitudinal) לא פולשני של זני חיידקים in vivo היא מקובלת מאוד, שכן היא מפחיתה את מספר בעלי החיים הנדרשים ומייצרת נתונים רלוונטיים יותר מבחינה סטטיסטית בהשוואה לבדיקות נקודת סיום (endpoint assays).הליך זה כולל השראה של גידולים תת-עוריים בעכברים. הגידולים נתונים להתפתח ומנוטרים לאורך זמן. חיידקים מוחדרים והעכברים עוברים דימוי בביולומינסנציה בנקודות זמן ייעודיות עבור הניסויים המתוארים כאן.גידולים תת-עוריים מושריים בעכברים בעלי מערכת חיסונית תקינה או ברקע של תימוס. בהתאם לבחירת השתל הזנוגרפטי, חיידקים מסוג Lux של המין הרצוי, כגון e coli, גודלים כתרביות לילה. תאי החיידקים נשטפים וסוספנדים מחדש בריכוז הרצוי למתן תוורידי.10⁶. נעשה שימוש שגרתי בתאים בקטריאליים בנפח הזרקה של 100 µL. עכברים עם גידולים תת-עוריים בנפח של 100 mm³ מוכנים לטיפול.באמצעות מחט מזריקה במידה 29 gauge, מזריקים את תרחיף החיידקים לווריד הזנב הצדי. החיידקים משתכפלים באופן מועדף בתוך מסת הגידול עם הזמן. חיידקים בתוך הגידול ממשיכים להשתכפל במשך מספר שבועות וניתן לזיהוי באמצעות הדמיות IVUS בין שלושה לשישה ימים.לאחר המתן (administration), לצורך דימות ביולומינצנטי, מניחים עכברים חיים ומואלחשים בתוך התא בטמפרטורה של 37 מעלות של ה-ivus. במידת הצורך, ניתן לדמות מספר עכברים בו-זמנית. תמונות צילום ותמונות אור לומינצנטי נאספות באמצעות מצלמת CCD מקוררת בהגדרות התוכנה הרצויות.בהתאם למכשיר הדימות, ניתן לבצע ניתוח דו-ממדי או תלת-ממדי. השגת קשר לינארי וחזק בין מספר החיידקים בתוך הגידול לבין רמות האור המופק מאפשרת הערכה מהימנה של מספר החיידקים in vivo. ניתן לגלות חיידקים המבטאים LX גם מעומק הגוף.חיידקי קומנסאלים המקולנזים במעי ומבטאים Lux נצפים למשך מספר שבועות. לאחר מתן בשיטת cavage, מודגמת באופן נוסף התועלת של הדמיה בביולומינצנציה לניתוח של חיידקים המבטאים lux בתוך חיות מעבדה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

שיטות הדמיה של פליטת אור זיהומים חיידקיים בבעלי חיים החיים המתוארים. פתוגנים הם שונה להביע בלוציפראז הדמיה אופטית המאפשרת לגוף שלם של זיהומים בבעלי חיים. במודלים של בעלי חיים יכול להיות נגוע פתוגנים להביע בלוציפראז ואת כמובן כתוצאה של המחלה דמיינו בזמן אמת על ידי הדמיה פליטת אור.

שימוש בלוציפראז לזיהומים חיידקיים תמונה ב עכברים

להלן נתאר את השיטות לבנייה, לדמיין, ולכמת את התגובות של שניהם bioluminescent גחלילית ואנזימי וציפראז renilla לידי ביטוי בתאי סרטן השד גרורתי בעת הצמיחה...

במצע כפולה vivo bioluminescent ההדמיה

מקור: דה וריס, ס. ר. ואח', מודל חיסון מאוחר של זיהום פצע כרוני בפסאודומונס אארוגינוסה . J. Vis. Exp. (2020).הסרטון הזה מדגים טכניקת הדמיה ביולומינצנטית למעקב אחר התקדמות זיהום חיידקי במודל עכבר חי. חיידקים פתוגניים שהונדסו באמצעות מערכת הדיווח luxABCDE פולטים אור באתר הזיהום, ומאפשרים ויזואליזציה של חיידקים פעילים מטבולית. על ידי הדמיית העכבר לאורך זמן, החוקרים יכולים לעקוב באופן לא פולשני אחר דינמיקת הזיהומים ולכמת את עוצמת האות הביולומינצנטי.

הדמיית ביולומינסציה של זיהומים חיידקיים בעכברים

מקור: ולנטיין, מ. א. ואחרים, יצירת מוטנטים למחיקת גנים בתוך המסגרת ב-Pseudomonas aeruginosa ובדיקת החלשת אלימות במודל פשוט של זיהום בעכברים. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את השימוש בגישה של הדמיה מבוססת ביולומינסצנציה לניטור זיהום חיידקי במודל עכבר חי. הדמיה ביולומינצנטית רציפה וצילום רנטגן מאפשרת הדמיה בזמן אמת ומיקום אנטומי של הזיהומים המתפשטים ברחבי המארח.

הדמיה בזמן אמת של זיהום חיידקי במודל עכבר באמצעות ביולומינסציה

מקור: וואנג, י. ואחרים. In Vivo חקירת טיפול באור כחול אנטימיקרוביאלי לזיהומי כוויות עמידים לרב-תרופות Acinetobacter baumannii באמצעות הדמיית ביולומינצנציה. J. Vis. Exp. (2017)הסרטון הזה מדגים את ההליך להדמיית זיהומים מפצעי כוויה בעכברים שחוסנו ב-Acinetobacter baumannii הנושא אופרון ביולומינצנטי. המחקר מדגים כיצד חמצון תת-קרקע מוקץ בלוציפראז מייצר אור פרופורציונלי לעומס חיידקים, ומאפשר ניטור בזמן אמת של התקדמות הזיהום באמצעות מערכת הדמיה ביולומינצנטית.

הדמיית ביולומינסציה של פצעי כוויות נגועים באצינטובקטר באומאני בעכברים

בשילוב הדמיה אופטית וμCT במודל של עכברים של זיהום שתל אורתופדים, ניצול זן מהונדס bioluminescent של Staphylococcus aureus, סיפק את היכולת noninvasively ואורכים כדי לפקח על הדינמיקה של זיהום החיידקים, כמו גם את התגובה הדלקתית המקבילה ושינויים אנטומיים ב עצם.

בשילוב<em&gt; בvivo</em&gt; אופטי וμCT הדמיה למעקב אחר זיהום, דלקת, ועצם אנטומיה בזיהום אורטופדיים שתל בעכברים

זיהומים הנגרמים על ידי זני חיידקים עמידים לתרופות מרובות (MDR) התגלו כאיום רציני על בריאות הציבור, מה שמחייב פיתוח טיפולים אלטרנטיביים. אנו מציגים פרוטוקול להערכת היעילות של טיפול אנטי-מיקרוביאלי באור כחול (aBL) לזיהומי MDR Acinetobacter baumannii בכוויות עכברים באמצעות הדמיה ביולומינסנציונית.

In vivo חקירת טיפול באור כחול אנטימיקרוביים multidrug עמידים baumannii Acinetobacter צרוב דלקות באמצעות הדמיה פליטת אור

פרוטוקול מפורט של דגם העכבר עבור enterohemorrhagic e. coli (EHEC) מושבת באמצעות חיידקים התווית על-ידי ביולומינסנציה מוצג. זיהוי חיידקים זוהרים אלו באמצעות פולשני ויוו מערכת בבעלי חיים הדמיה יכול לקדם את ההבנה הנוכחית שלנו של EHEC קולוניזציה.

זיהוי של כיבוש Escherichia Coli Enterohemorrhagic מאתר מארח על-ידי המערכת לא פולשנית In Vivo ביולומינסנציה

חיידקים זוהרים לווסת ייצור אור באמצעות מגוון רחב של מנגנונים, כגון חישת צפיפות. שיטה חדשנית זו מאפשרת החקירה ב באתרו של ביולומינסנציה הקורלציה של פליטת אור לדחיסות התא. מייצרים אור מלאכותי Escherichia coli מערכת מאפשרת אפיון lux operons, לאקס חלבונים והגומלין שלהם.

בחיי עיר ובחינת המתאם של צפיפות התאים ואת פליטת אור של חיידקים זוהרים

פרוטוקול זה מתאר את הקמתה של המודל הנושא הגידול העכבר כדי לפקח על התקדמות הגידול ואנגיוגנזה בזמן אמת על ידי הדמיה ביולומינציה כפול.

הדמיה ביולומינסנציה כפולה של התקדמות הגידול ואנגיוגנזה

הפרוטוקול המסופק כאן מתאר את השלבים המפורטים לביצוע מחקרי יעילות תרופות במודל ביולומינסנטי של זיהום טריפנוזומה קרוזי , תוך התמקדות ברכישת נתונים, ניתוח ופענוח. נהלי פתרון בעיות ובקרת איכות כדי למזער בעיות טכניות מסופקים גם כן.

הסרת המסתורין ב-Vivo Bioluminescence Imaging של מודל עכבר למחלת Chagas למחקרי יעילות תרופות

למד הדמיה ביולומינסצנטית לניטור חיידקים בעכברים חיים עם גידולים תת-עוריים. שיטה זו מאפשרת מעקב לא פולשני בזמן אמת ליישומים בטיפול בסרטן.

הדמיה בקטריאלי bioluminescent

גלה סרטונים נוספים