Name: טכניקת חלון קליפת מוח, גולגולת דקה יותר עבור In Vivo טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית הדמיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: למד טכניקת חלון קליפת מוח דקה יותר בעכברים לצילום OCT in vivo. שיטה זו פחות פולשנית מקרניוטומיה ושומרת על שלמות ביולוגית וחיות המוח לחקר מבנה ותפקוד מוחי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הוכחת UC גילוי הענקת קונספט ועל ידי NIH (R00 EB007241). המחברים רוצים גם להודות לז&#39;קלין האברד על סיועה בניסוי זה.

1. הכנת כירורגים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 CD עכברים ממין נקבה בגילים שבין 6-8 שבועות שמשו בניסויים שלנו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם עכבר עם זריקת intraperitoneal של שילוב קטמין וxylazine (80 מ&quot;ג / קילו ketamine/10 מ&quot;ג / קילו xylazine). הנח את העכבר על משטח homeothermic כדי להבטיח טמפרטורת גוף אופטימלית ב~ 37 ° C. ברציפות לפקח רמה של הרדמה על ידי בדק את הרפלקסים של בעלי החיים (למשל, צובט רגל עם מלקחיים בוטים) ולהזריק יותר הרדמה בעת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוך שתי העיניים עם משחת דמעה מלאכותית. הסרת שיער על הקרקפת בעזרת סכין גילוח והסרת שיער באמצעות רפידות השיורית prep אלכוהול 70%. למרוח שכבה דקה של קרם להסרת שיער יאיר על הקרקפת ולחכות 2 דקות כדי שזה ייכנס לתוקף. לנגב בעדינות את השיער שנותר ויאיר באמצעות מי מלח הטבול ספוגיות כותנה ורפידות מכינים אלכוהול. קרקפת צריכה להיות עכשיו קרחת לגמרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את הקרקפת בעזרת מקל צמר גפן ולנקות עם פולידין 7רפידות prep אתנול 0%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף בזהירות בחית וילאות כירורגיות כדי להבטיח טמפרטורת גוף אופטימלית של ~ 37 מעלות צלזיוס ולצאת לחיים למסגרת stereotaxic כדי לשתק את הגולגולת. קל לנצל את הגולגולת כדי להבטיח את יציבותו. רשימה של חומרים המשמשים מסופקת בטבלת 1. </li></ol> 2. הכנת חלון קליפת מוח, גולגולת דללה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל את החתך בנקודת קו האמצע בין העיניים. המשך caudally לנקודת קו האמצע בין האוזניים. חלק העור עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את האזור לדילול תחת מיקרוסקופ לנתח ולהסיר בעדינות fascia באמצעות פינצטה. ייבש את הגולגולת עם מטליות כותנה סטריליים לפני יצירת חלון קליפת המוח הדק יותר. בניסויים שלנו, יצרו 4 × 4 מ&quot;מ דלל חלון גולגולתי ~ 1 מ&quot;מ אחורי וצדדי לגבחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין דילול הגולגולת באמצעות סיבוב קרביד ספחת עם גודל מקדח 0.75 מ&quot;מ במקדחת יד כירורגית באמצעות onl תנועה גורף אורy. אל תפעיל לחץ על ישיר בגולגולת. עצור קידוח כל 20-30 שניות כדי להסיר אבק עצם באמצעות מלוח סטרילית וצמר גפן וכדי להימנע מהתחממות יתר של הגולגולת. המלוח גם יסייע במתפוגג החום לאורך הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהשכבה החיצונית של העצם הקומפקטי נמחקה לחלוטין שכבת העצם הספוגית האמצע עכשיו צריכה להיות גלויה. אולי יש איזה דימום קל ככלי דם הם יותר נראים לעין בשכבת העצם הספוגית. לעבור לספחת אבן ירוקה וימשיך קידוח באמצעות זהירות כשכבה הספוגית היא עדינה יותר. ספחת האבן הירוקה תסיר פחות חומר עצם תוך יצירת אחידות בכל החלון גולגולתי. עצור קידוח לעתים כדי להסיר אבק עצם וכדי לקרר את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, כאשר הגולגולת הפכה שקופה יותר ומערכת כלי דם במוח נראה כעת, מתחיל ליטוש הגולגולת באמצעות ספחת ליטוש. זה יאפשר מדויק יותר דליל בזמן החליק את הגולגולת. בדקו רזון של מקll על ידי קשה על זה בעדינות עם מלקחיים. עצור ליטוש כאשר הגולגולת נעשית מעט גמישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלון גולגולתי הדליל עכשיו צריך להיות חלק לגמרי, ומהורהר ומוכן להדמיה (איור 1). בשל האופי של רקמות מאוד פיזור של המוח, הגולגולת צריכה להיות דלילה ללפחות 55 מיקרומטר לחדירים לעומק אופטימלי. רשימה של חומרים המשמשים מסופקת בטבלת 1. </li></ol> 3. טומוגרפיה אופטית קוהרנטיות הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הניתוח הושלם, לבדוק את השיעור ורפלקסים הנשימה של בעל חיים כדי להבטיח רמה נאותה של הרדמה ולנהל הרדמה נוספת במידת צורך. הסר חיה ממסגרת stereotaxic, לשמור על בעלי החיים עטופים בוילאות כירורגיות, ובעלי חי תחבורה לתחנת ההדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההדמיה לבדוק סימנים לרפלקסים ולהחיל דמעה מלאכותית נוספת במידת צורך. הר חיה על מסגרת stereotaxic כדי לאבטח את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חית מקום תחתמצלמת אוקטובר ועמדת TSCW תחת הקורה האופטית (איור 2). נוף חתך של הגולגולת והמוח כעת ניתן דמיין (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכישת נתונים יכולה להתחיל מייד בתחום העניין שלו הוא נמצא. לצורך ההדמיה, אנו משתמשים במראות galvo להשיג חלון הדמיה, ברוחב של 4.0 מ&quot;מ. עומק הדמיה של 2 מ&quot;מ שהושג עם 6 מגה ואט של כוח האירוע ומוקד 1 מ&quot;מ מתחת לגולגולת הדקה יותר. כל שטח חתך כלל 2,048 סריקות ציריות עם שיעור רכישה של 0.14 שניות לכל תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סריקות נפחיות של המוח יכולות גם להיות מושגת על ידי איסוף סדרה של תמונות 2D חתך באמצעות שתי קבוצות של מראות galvo לxy סריקה עם המראה הראשונה galvo סריקת האלומה בכיוון sagittal ומראה galvo 2 סריקה בעטרה כיוון. </li></ol>

<ol><li>Bizheva, K., Unterhuber, A., Hermann, B., Povazay, B., Sattmann, H., Drexler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+ex+vivo+and+in+vitro+brain+morphology+in+animal+models+with+ultrahigh+resolution+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Imaging ex vivo and in vitro brain morphology in animal models with ultrahigh resolution optical coherence tomography.</a> Journal of Biomedical Optics. 9, 719-724 (2004).</li>
<li>Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+for+ultrahigh+resolution+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography for ultrahigh resolution in vivo imaging.</a> Nature Biotechnology. 21, 1361-1367 (2003).</li>
<li>Wantanabe, H., Rajagopalan, U. M., Nakamichi, Y., Igarashi, K. M., Kadono, H., Tanifuji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swept+source+optical+coherence+tomography+as+a+tool+for+real+time+visualization+and+localization+of+electrodes+used+in+electrophysiological+studies+of+brain+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Swept source optical coherence tomography as a tool for real time visualization and localization of electrodes used in electrophysiological studies of brain in vivo.</a> Biomedical Optics Express. 2, 3129-3134 (2011).</li>
<li>Huang, D., Swanson, E. A., Lin, C. P., Schuman, J. S., Stinson, W. G., Chang, W., Hee, M. R., Flottee, T., Gregory, K., Puliafito, C. A., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Science. 254, 1178-1181 (1991).</li>
<li>Mitsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+range+of+optical+reflectometry+with+spectral+interferometry%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Dynamic range of optical reflectometry with spectral interferometry.</a> Japanese Journal of Applied Physics. 38, 6133-6137 (1999).</li>
<li>de Boer, J. F., Cense, B., Park, B. H., Pierce, M. C., Tearney, G. J., Bouma, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+signal-to-noise+ratio+in+spectral-domain+compared+with+time-domain+optical+coherence+tomograhy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Improved signal-to-noise ratio in spectral-domain compared with time-domain optical coherence tomograhy.</a> Optics Letters. 28, 2067-2069 (2003).</li>
<li>de Boer, J. F. Ch. 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3ade+Boer%2C+JF+%22Optical+Coherence+Tomography%3A+Technology+and+Applications%22">Optical Coherence Tomography: Technology and Applications</a>. , Springer. (2008).</li>
<li>Choma, M. A., Sarunic, M. V., Yang, C., Izatt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+advantage+of+swept+source+and+fourier+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Sensitivity advantage of swept source and fourier domain optical coherence tomography.</a> Optics Express. 11, 2183-2189 (2003).</li>
<li>Leitgeb, R. A., Drexler, W., Unterhuber, A., Hermann, B., Bajraszewski, T., Le, T., Stingl, A., Fercher, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrahigh+resolution+fourier+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Ultrahigh resolution fourier domain optical coherence tomography.</a> Optics Express. 12, 2156-2165 (2004).</li>
<li>Drew, P. J., Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Knutsen, P. M., Blinder, P., Davalos, D., Akassoglou, K., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nature Methods. 7, 981-984 (2010).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Polished+and+Reinforced+Thinned-skull+Window+for+Long-term+Imaging+of+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse.</a> J. Vis. Exp. 61, e3742(2012).</li>
<li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nature Protocols. 5, (2010).</li>
<li>Lu, M., Majewska, S., K, A., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Thin-skull+Window+Technique+for+Chronic+Two-photon+In+vivo+Imaging+of+Murine+Microglia+in+Models+of+Neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation.</a> J. Vis. Exp. (43), e2059(2010).</li>
<li>Wang, Y., Oh, C. M., Oliveira, M. C., Islam, M. S., Ortega, A., Park, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPU+accelerated+real-time+multi-functional+spectral-domain+optical+coherence+tomography+system+at+1300nm%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">GPU accelerated real-time multi-functional spectral-domain optical coherence tomography system at 1300nm.</a> Optics Express. 20, 14797-14813 (2012).</li>
<li>Aguirre, A. D., Chen, Y., Fujimoto, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depth-resolved+imaging+of+functional+activation+in+the+rat+cerebral+cortex+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Depth-resolved imaging of functional activation in the rat cerebral cortex using optical coherence tomography.</a> Opt. Lett. 31, 3459-3461 (2006).</li>
<li>Chen, Y., Aguirre, A. D., Ruvinskaya, L., Devor, A., Boas, D. A., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+%28OCT%29+reveals+depth-resolved+dynamics+during+functional+brain+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography (OCT) reveals depth-resolved dynamics during functional brain activation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 178, 162-173 (2009).</li>
<li>Liang, C., Wierwille, J., Moreira, T., Schwartzbauer, G., Jafri, M. S., Tang, C., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+forward-imaging+needle-type+OCT+probe+for+image+guided+stereotactic+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">A forward-imaging needle-type OCT probe for image guided stereotactic procedures.</a> Opt Express. 19, 26283-26294 (2011).</li>
<li>Srinivasan, V. J., Sakadzic, S., Gorczynska, I., Ruvinskaya, S., Wu, W., Fugimoto, J. G., Boas, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+cerebral+blood+flow+with+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Quantitative cerebral blood flow with optical coherence tomography.</a> Optics Express. 18, 2477-2494 (2010).</li>
<li>Galetta, K. M., Calabresi, P. A., Frohman, E. M., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Coherence+Tomography+%28OCT%29%3A+imaging+the+visual+pathway+as+a+model+for+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Society+for+Experimental+NeuroTherapeutics%22%5BJournal%5D)">Optical Coherence Tomography (OCT): imaging the visual pathway as a model for neurodegeneration.</a> The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 8, 117-132 (2011).</li>
<li>Seigo, M. A., Sotirchos, E. S., Newsome, S., Babiarz, A., Eckstein, C., Ford, E., Oakley, J. D., Syc, S. B., Frohman, T. C., Ratchford, J. N., Balcer, L. J., Frohman, E. M., Calabresi, P. A., Saidha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+retinal+neuronal+layers+in+multiple+sclerosis+with+maual+and+automated+optical+coherence+tomography+segementation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of retinal neuronal layers in multiple sclerosis with maual and automated optical coherence tomography segementation techniques.</a> J. Neurol. , (2012).</li>
<li>Frohman, E. M., Fujimoto, J. G., Frohman, T. C., Calabresi, P. A., Cutter, G., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%3A+a+window+into+the+mechanisms+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography: a window into the mechanisms of multiple sclerosis.</a> Nature Clinical Practice. 4, 664-675 (2008).</li>
<li>Gill, A. S., Rajneesh, K. F., Owen, C. M., Yeh, J., Hsu, M., Binder, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+optical+detection+of+cerebral+edema+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Early optical detection of cerebral edema in vivo.</a> J. Neurosurg. 114, 470-477 (2011).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

הדמיה עם אוקטובר ו- גולגולת דלילה היא טכניקת נוירו הדמיה חדשנית שרק נחקרה 15, 16 לאחרונה. בניסויים שלנו, אנחנו הוכחנו את הכדאיות של SD-אוקטובר הדמיה באמצעות TSCW במודל של עכברים בגוף חי. מהתוצאות שלנו, הגולגולת דקה יותר בכ 55 מיקרומטר ועומק החדירה מתקבל בכ 1 מ&quot;מ עם רזולוציית תמונה של 8 מיקרומטר ו 20 מיקרומטר בכיוון הצירי ורוחבי, בהתאמה. בפרופיל עוצמת האות, אוקטובר הדמיה באמצעות TSCW מגבירה את עוצמת אות והחדירה לעומק בהשוואה לגולגולת רגילה (איור 4)....

מאז השקתו בשנת 1990 מוקדמים, אוקטובר כבר נעשה שימוש נרחב להדמיה ביולוגית של מבנה רקמות ותפקוד 2. אוקטובר מייצר תמונות חתך על ידי מדידת עיכוב זמן הד של אור 4 backscattered ידי יישום מקור אור קוהרנטיות נמוך עם interferometer סיבים אופטיים מייקלסון 2,4. SD-אוקטובר, הידוע גם בתחום הפורה אוקטובר (FD-OCT), הוצג לראשונה בשנת 1995 5, ומציע שיטת הדמיה טובה יותר בהשוואה עם הזמן מסורתי תחום אוקטובר (TD-אוקטובר). ב SD-אוקטובר, זרוע ההתייחסות נשמרה נייחת וכתוצאה מכך במהירות גבוהה ורכישה גבוהה במיוחד רזולוציית תמונת 6-9. כיום, מודלי TSCW היו בשימוש בעיקר ליישומים בהדמיה מוחית vivo של מיקרוסקופיה שני פוטונים במקום craniotomy מסורתי. TSCW אלה שמש במקביל ללוחית גולגולת מותאמת אישית או תלוש כיסוי זכוכית 10-13 לספק ima נוסףגינג יציבות. במחקרים שלנו, יש לנו ציינו כי אבזרים כגון אלה אינם הכרחיים לאוקטובר הדמיה כאשר TSCW משמש. לכן, חוסר צלחת גולגולת או תלושי כיסוי זכוכית מאפשר למגוון רחב יותר של גודל חלון הדמיה כפי שהם עלולים להפריע לקרן האופטית ולשנות תמונות אוקטובר הכנה-גולגולת דללה הוכיחה להיות יתרון בבדיקות הדמיה של המוח באמצעות מיקרוסקופ שני פוטונים 10-13. בניסויים שלנו, אנו מנצלים מערכת SD-אוקטובר לתמונת קליפת in vivo דרך TSCW. התקנת SD-אוקטובר ההדמיה המותאמת אישית שלנו מכילה פס רחב מקור, נמוך קוהרנטיות אור המורכב משתי דיודות superluminescent (SLD) המרוכזים ב1295 ננומטר ברוחב פס של 97 ננומטר וכתוצאה מכך רזולוציה צירית ורוחבית של 8 מיקרומטר ו 20 מיקרומטר, בהתאמה 14 . עם מכשיר ההדמיה האופטית שלנו, אנו צופים כי באמצעות הדמיה TSCW יש פוטנציאל גדול בזיהוי והדמיית מבנים ופונקציות בoרקמת המוח ptically צפופה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> חומרים </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> קטמין </td><td> תרופות פניקס </td><td> 57319-542-02 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Akorn, Inc </td><td> 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> משחת דמעות מלאכותית </td><td> רוגבי </td><td> 0536-6550-91 </td><td></td></tr><tr><td> תאיר </td><td> הכנסייה &amp; דווייט ושות, Inc </td><td> 4010130 </td><td></td></tr><tr><td> האלכוהול סטרילי Prep Pad </td><td> קנדל בריאות </td><td> 6818 </td><td></td></tr><tr><td> כותנת כטיפ Applicators </td><td> Fisherbrand </td><td> 23-400-115 </td><td></td></tr><tr><td> Swabstick התמיסה פולידין </td><td> מוצרי פרדו &lt;/ Td&gt; <td> 67618-153-01 </td><td></td></tr><tr><td> תמיסת מלח, .9% </td><td> תרופות פניקס </td><td> 57319-555-08 </td><td></td></tr><tr><td> מסגרת Stereotactic </td><td> Stoelting </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מקדחת יד כירורגים במהירות גבוהה </td><td> Foredom </td><td></td><td> 38000 סל&quot;ד </td></tr><tr><td> קרביד הסיבוב Bur </td><td> Stoelting </td><td></td><td> 0.75 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> אבני דורא ירוק </td><td> Shofu </td><td></td><td> שאנק: HP צורה: BA1 </td></tr><tr><td> CompoMaster גס וCompoMaster לטש </td><td> Shofu </td><td></td><td> צורה: מיני Pt. </td></tr><tr><td> SpaceDrapes </td><td> Braintree Scientific, Inc </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקת חלון קליפת מוח, גולגולת דקה יותר עבור<em&gt; in vivo</em&gt; טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית הדמיה

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית (אוקטובר) היא טכניקת הדמיה ביו עם רזולוציה גבוהה של מרחב וזמן. עם גישתה פולשנית אוקטובר כבר נעשה שימוש נרחב ברפואת עיניים, רפואת עור, וגסטרואנטרולוגיה 1-3. שימוש בחלון גולגולת דללה קליפת מוח (TSCW), אנו מעסיקים אפנות אוקטובר רפאים-תחום (SD-אוקטובר) ככלי לדימוי לקליפת המוח בגוף חי. בדרך כלל, פתחה את גולגולת שמשה במשך נוירו הדמיה כפי שהוא מספק יותר צדדי, לעומת זאת, גישת TSCW היא פחות פולשנית והוא אומר יעיל להדמיה לטווח ארוכה במחקרי נוירופתולוגיה. כאן, אנו מציגים שיטה ליצירת TSCW במודל עכבר לin vivo אוקטובר הדמיה של קליפת המוח.

לאחר יצירת חלון דליל מעל קליפת מוח vasculature עכשיו צריך להיות יותר חזותי בולט (איור 1) ויאפשר לעומק הדמיה עמוקה יותר (עד 1 מ&quot;מ). קליפת מוח הימין התמעטה כ 55 מיקרומטר לעומת גולגולת רגילה נמדדה ב 140 מיקרומטר (איור 1) ומספקת בהירות אופטית גדולה יותר. בהמשך לדילול 10-15 מיקרומטר הוא אפשרי אך לא הכרחי 11 כמו השימוש בתלושי כיסוי זכוכית וצלחות גולגולת אינן מיושם בניסויים שלנו (איור 1, 2). שיטה מסוימת זו אפשרה לנו לזהות...

אנו מציגים שיטה ליצירת חלון גולגולת דללה קליפת מוח (TSCW) במודל של עכברים ל<em&gt; In vivo</em&gt; אוקטובר הדמיה של קליפת המוח.

טכניקת חלון קליפת מוח, גולגולת דקה יותר עבור<em&gt; In Vivo</em&gt; טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית הדמיה

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליצור חלון גולגולת דק במודל עכבר להדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית in vivo של המוח. זה מושג על ידי הרדמה ראשונה של בעל החיים והכנתו לניתוח. לאחר מכן, דק את הגולגולת באמצעות קוצים דנטליים שונים.השלב האחרון הוא להשיג תמונות OCT של המוח in vivo דרך חלון הגולגולת הדק. בסופו של דבר, ניתן לקבל מידע מבני ותפקודי במוח מתמונות ה-OCT המתקבלות. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון כריתת קרניקטומיה או חלונות החלקה לכיסוי, הוא שהחלון הסופי הוא פחות פולשני וסביר יותר לשמור על השלמות הביולוגית והכדאיות של המוח.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על אבחון הפרעות נוירולוגיות מכיוון ש-OCT מספק רזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה ומספק חדירת עומק מעולה בהשוואה למיקרוסקופיה קונפוקלית ושני פוטונים. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו ליצור משטח גולגולת דק באופן אחיד מבלי להכניס שברים בגולגולת או דימום תת-דוראלי. כדי להתחיל בהליך זה, יש להרדים עכבר CD אחד בין הגילאים שישה עד שמונה שבועות עם הזרקה תוך-צפקית של שילוב קטמין וקסילזין.לאחר מכן הנח את העכבר על כרית או שמיכה הומאו כדי להבטיח את טמפרטורת הגוף האופטימלית בכ-37 מעלות צלזיוס במהלך ההכנה הכירורגית, עקוב באופן רציף אחר רמת ההרדמה על ידי בדיקת הרפלקסים של החיה והזריק הרדמה נוספת בעת הצורך. לאחר מכן, יש לשמן את שתי העיניים במשחת הדמעות המלאכותית. הסר את השיער על הקרקפת בעזרת הקוצץ.לאחר מכן הסר את שאריות השיער הקצוץ בעזרת כרית או ספוגית נשואה. לאחר מכן, מרחו שכבה דקה של קרם אפילציה על הקרקפת. לאחר שתי דקות, נגב בעדינות את הקרם ואת שאריות השיער באמצעות מי מלח, צמר גפן לח ופדים להכנת אלכוהול.כעת יש לחטא את הקרקפת באמצעות מקל ספוגית בטדין ולנקות בעזרת רפידות הכנה של 70% אתנול. לאחר מכן הרכיב את החיה על מסגרת סטריאוטקסית כדי לשתק את הגולגולת. הקש קלות על הגולגולת כדי להבטיח את יציבותה.בהליך זה, התחל את חתך הקרקפת בנקודת קו האמצע בין העיניים. המשיכו בקלילות לנקודת קו האמצע בין חלק האוזניים, העור מתנפנף במלקחיים. לאחר מכן, אתר את האזור שיש לדלל תחת מיקרוסקופ מנתח.השתמש במלקחיים כדי לגרד את הגולגולת כדי להסיר שאריות פאשיה. לאחר מכן יבש את הגולגולת עם צמר גפן סטרילי לפני יצירת חלון קליפת המוח דק של ארבעה על ארבעה מילימטר בערך מילימטר אחד אחורי וטורמה לרוחב. השתמש במקדחה ידנית כירורגית עם קוץ קרביד עגול בתנועה גורפת קלה כדי לדלל את הגולגולת.אין להפעיל לחץ ישיר על הגולגולת. הפסק לקדוח כל 20 עד 30 שניות כדי להסיר אבק עצם באמצעות תמיסת מלח סטרילית וצמר גפן, וכדי למנוע התחממות יתר של הגולגולת. מי המלח יסייעו גם בפיזור החום בכל הגולגולת.לאחר הסרת השכבה החיצונית של העצם הקומפקטית לחלוטין, שכבת העצם הספוגית האמצעית צריכה להיות גלויה. ייתכנו דימומים קלים מכיוון שכלי הדם ניכרים יותר בשכבת העצם הספוגית. עברו לבור אבן ירוק והמשיכו לקדוח בזהירות יתרה.מכיוון שהשכבה הספוגית עדינה יותר, בור האבן הירוק יסיר פחות חומר עצם תוך הבטחת אחידות בכל חלון הגולגולת. הפסק לקדוח מדי פעם כדי להסיר אבק עצם ולקרר את הגולגולת. לבסוף, כאשר הגולגולת הפכה שקופה יותר וכלי הדם במוח נראים לעין, התחל ללטש את הגולגולת באמצעות בור ליטוש בדוק את עובי הגולגולת על ידי טפיחה עדינה עליה עם מלקחיים להפסיק ליטוש.כאשר הגולגולת הופכת גמישה מעט, חלון הגולגולת הדק אמור להיות חלק לחלוטין ומחזיר אור ומוכן להדמיה. בשל אופיין של רקמות מפוזרות מאוד במוח, יש לדלל את הגולגולת ל-55 מיקרון לפחות לחדירת עומק אופטימלית. לאחר השלמת הניתוח, בדוק את קצב הנשימה של בעל החיים באמצעות בדיקה ויזואלית ורפלקסים כדי להבטיח רמת הרדמה נאותה ומתן הרדמה נוספת במידת הצורך, הנח את החיה מתחת למצלמת ה-OCT, ולאחר מכן מקם את חלון הגולגולת הדק מתחת לקרן האופטית.כעת ניתן לדמיין מבט חתך של הגולגולת והמוח. איסוף נתונים יכול להתחיל. לאחר איתור אזור העניין למטרות הדמיה, סרקנו את קרן ה-OCT מעל חלון קליפת המוח ברוחב של 4.0 מילימטרים וקיבלנו עומק הדמיה של שני מילימטרים עם שישה מילי-וואט של הספק תקרית ומוקד של 0.1 מילימטר מתחת לגולגולת הדקה.כל שטח חתך כלל 2048 סריקות ציריות עם קצב רכישה של 0.14 שניות לתמונה. שיטה מסוימת זו אפשרה לנו לזהות מבנים ספציפיים בתמונות חתך ה-OCT שלנו. איור זה מציג תמונת OCT פארא-סגיטלית של קליפת המוח מתחת לגולגולת רגילה, וכאן מראה תמונת OCT פארא-סגיטלית מתחת לגולגולת דקה.מבני המוח נראים יותר מבחינה ויזואלית מתחת לחלון גולגולת דק בניגוד לגולגולת רגילה. בנוסף, מתקבלת גם תמונת OCT חתך עטרה כדי להקל על זיהוי מבני קו האמצע. ניתן להשיג סריקות נפח של המוח גם על ידי איסוף סדרה של תמונות חתך דו-ממדיות על ידי שימוש בשתי קבוצות של מראות גל O לסריקת XY, כאשר מראת ה-gal O הראשונה סורקת את האלומה בכיוון הסגיטלי, ומראת ה-gal השנייה סורקת את הכיוון העטרתי.לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 10 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעוד שניסיון הליך זה חשוב לדלל את הגולגולת באופן אחיד כדי להבטיח חדירת אות נאותה במהלך הדמיית OCT, לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להכין חלון קליפת המוח הדק של הגולגולת למטרות הדמיית OCT.

thinned-skull-cortical-window-technique-for-vivo-optical-coherence

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אנו מתארים שיטה שוב ושוב לדמיין microglia Murine והפצת...

הגולגולת דק חלון טכניקה כרונית דו פוטון ב-vivo הדמיה של microglia Murine של מודלים של Neuroinflammation

בחומר וידאו משלים זה, אנו מראים פרוטוקול עבור...

הדמיה כרונית של עכבר-Visual Cortex שימוש ההכנה סחוט הגולגולת

אנו מציגים שיטה ליצירת חלון הדמיה בגולגולת העכבר החובקת מילימטרים והוא יציב במשך חודשים ללא דלקת של המוח. שיטה זו גם מתאים מחקרים ארוכי טווח של זרימת דם, דינמיקה סלולריים, ותא / מבנה כלי הדם באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ.

מלוטשת מחוזק דליל, הגולגולת חלון הדמיה לטווח ארוך של מוח עכבר

על ידי שילוב של-גולגולת דקה מלוטשת ומחוזקת (יציאות) גולגולתי חלון והזרקת גליובלסטומה (GBM) תא, אנו יכולים לצפות בייזום וצמיחה מתאים מוזרקים GBM במוח של עכבר חי longitudinally גליומה.

הדמית Glioma ייזום<em&gt; In Vivo</em&gt; דרך חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק-גולגולת דקה

הדמיית זמן-lapse בבעל חיים חי מספקת מידע רב ערך על ארגון מחדש מבני במוח השלם. כאן, אנו מציגים תכשיר גולגולת דק המאפשר הדמיה טרנס-גולגולתית של מבנים סינפטיים בעלי תווית פלואורסצנטית בקליפת העכבר החי על ידי מיקרוסקופ דו-פוטוני.

שני פוטונים<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של קוצים הדנדריטים בCortex העכבר באמצעות דלילה, גולגולת הכנה

כאן, אנו מתארים גישת מיקרוסקופיה אופטית חצי פולשנית לאינדוקציה של קריש פוטו-טרומבוטי של רוז בנגל בקליפת המוח הסומטוסנסורית של עכבר in vivo.  ההיבטים הטכניים של הליך ההדמיה מתוארים מאינדוקציה של אירוע פוטוטרומבוטי ועד ליישום ואיסוף נתונים.

רוז בנגל Photothrombosis ידי דימות אופטי Confocal<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של שבץ כלי אחד

כתב יד זה מתאר הליך לעקוב אחר השיפוץ של cerebrovasculature במהלך הצטברות פלאק עמילואיד in vivo באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ אורך. הכנה הגולגולת דליל מאפשר הדמיה של צבעי ניאון כדי להעריך את התקדמות הנזק כלי דם במוח במודל של עכברים של מחלת אלצהיימר.

אֹרכִּי<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של Cerebrovasculature: רלוונטיות למחלות של מערכת העצבים המרכזית

אנו מתארים תהליך ניסוי למדידת פעילות. עצבית מבעד לחלונות אופטי כפול מעל הדו-צדדיים העיקרי המגע corticies (S1) ב- Thy1-GCaMP6s העכברים הטרנסגניים באמצעות 2-פוטון (2p) מיקרוסקופיה ויוו.

הדמיה פעילות עצבית בתוך קליפת המגע הראשי באמצעות Thy1-העכברים הטרנסגניים GCaMP6s

מוצג כאן פרוטוקול להשתלת חלון גולגולתי כרוני להדמיה אורכית של תאי מוח בעכברים ערים ומרוסנים ראש.

השתלת חלון גולגולת להדמיה חוזרת ונשנית In Vivo בעכברים ערים

הצגנו טכניקת הדמיה חדשנית בשם Optical Multilayer Interference Tomography (OMLIT), המאפשרת הדמיה ללא הטיה של כל התאים בדגימות מוח בקנה מידה מדום וניתן לשלבה בצורה חלקה בזרימת הדמיה של מיקרוסקופ אלקטרונים סרטורי מבוסס סרט על אותה דגימה.

שיטת הדמיה אופטית התואמת למיקרוסקופיית אלקטרונים סורקת למיפוי מוח תאי מזוסקופי

למד טכניקת חלון קליפת מוח דקה יותר בעכברים לצילום OCT in vivo. שיטה זו פחות פולשנית מקרניוטומיה ושומרת על שלמות ביולוגית וחיות המוח לחקר מבנה ותפקוד מוחי.

טכניקת חלון קליפת מוח, גולגולת דקה יותר עבור

גלה סרטונים נוספים