Name: Transfection החלבון של ריאות מאוס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: למדו פרוטוקול חדשני להחדרת חלבון לריאות עכברים באמצעות מיקרו-מפריז אולטרה-דק וחומר שומני. השיטה מגבירה ביטוי חלבון תוך הפחתת אפקטים לוואי ומספקת חלופה יעילה למחקר ביולוגיה ריאתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומי לבריאות (7R01HL098528-03) ופרס הממציא הקליני של FAMRI.

1. הכנה של מגיב Transfection חלבון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את מגיב Pro-JECT על ידי הוספת 250 μl של מתנול או כלורופורם לצינור המכיל את הסרט היבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> וורטקס עבור 10-20 שניות במהירות שיא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה μl 20 של מגיב Pro-JECT לתוך צינורות microcentrifuge נפרדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאדות הממס על ידי הנחת הצינורות המכילים microcentrifuge מגיב Pro-JECT מתחת למכסת מנוע זרימה למינרית למינימום של 6 שעות בטמפרטורת חדר. זה חייב להיות יבש לחלוטין. לחלופין, לייבש את מגיב Pro-JECT באמצעות ייבוש ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את הצינורות ב -20 ° C. הם טובים לשנה אחת בטמפרטורה זו. </li></ol> 2. הוספת חלבון למגיב Pro-JECT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה μl 50 של PBS, המכיל 2.0 מיקרוגרם של החלבון של עניין, לתוך צינור המכיל 20 μl של מגיב transfection Pro-JECT מיובש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הוספת החלבון, מערבב את הפתרון על ידי F vortexing במהירות הנמוךאו 3-5 שניות ואחריו דוגרים למשך 30 דקות בטמפרטורת חדר. </li></ol> 3. מנהל intratracheal של חלבון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים על ידי הזרקת intraperitoneal של קטמין / xylazine (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג ו 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ההרגעה מושגת, עכברים הושעו מהחותכות העליונות שלהם באמצעות פלטפורמה שתוכננה במיוחד (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים ומהדק נייר כראי גרון, הלוע התחתון נפתחים, כך שיכול להיות הציג את הקטטר (איור 2). מיתרי הקול הם דמיינו ידי הצבת מקור אור נגד קנה הנשימה של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התערובת מגיב חלבון / פרויקט (50 μl) מוזרקת דרך קנה הנשימה באמצעות Microsprayer המאה פן. </li></ol>

<ol><li>Glasser, S. W., Korfhagen, T. R., Wert, S. E., Whitsett, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+models+for+study+of+pulmonary+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic models for study of pulmonary development and disease.</a> Am. J. Physiol. 267, 489-497 (1994).</li>
<li>D'Armiento, J., Dalal, S. S., Okada, Y., Berg, R. A., Chada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+expression+in+the+lungs+of+transgenic+mice+causes+pulmonary+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Collagenase expression in the lungs of transgenic mice causes pulmonary emphysema.</a> Cell. 71, 955-961 (1992).</li>
<li>Foronjy, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superoxide+dismutase+expression+attenuates+cigarette+smoke-+or+elastase-generated+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Superoxide dismutase expression attenuates cigarette smoke- or elastase-generated emphysema in mice.</a> Am. J. Respir Crit. Care Med. 173, 623-631 (2006).</li>
<li>Foronjy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+divergent+roles+of+secreted+frizzled+related+protein-1+%28SFRP1%29+in+lung+morphogenesis+and+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">The divergent roles of secreted frizzled related protein-1 (SFRP1) in lung morphogenesis and emphysema.</a> Am. J. Pathol. 177, 598-607 (2010).</li>
<li>Costa, R. H., Kalinichenko, V. V., Lim, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+factors+in+mouse+lung+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transcription factors in mouse lung development and function.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 280, 823-838 (2001).</li>
<li>Perl, A. K., Tichelaar, J. W., Whitsett, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+gene+expression+in+the+respiratory+epithelium+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Research%22%5BJournal%5D)">Conditional gene expression in the respiratory epithelium of the mouse.</a> Transgenic Research. 11, 21-29 (2002).</li>
<li>Morimoto, M., Kopan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((rtTA+toxicity+limits+the+usefulness+of+the+SP-C-rtTA+transgenic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">rtTA toxicity limits the usefulness of the SP-C-rtTA transgenic mouse.</a> Dev. Biol. 325, 171-178 (2009).</li>
<li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nature reviews. Genetics. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Crystal, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+an+adenovirus+containing+the+human+CFTR+cDNA+to+the+respiratory+tract+of+individuals+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Administration of an adenovirus containing the human CFTR cDNA to the respiratory tract of individuals with cystic fibrosis.</a> Nat. Genet. 8, 42-51 (1994).</li>
<li>Merkel, O. M., Zheng, M., Debus, H., Kissel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+gene+delivery+using+polymeric+nonviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pulmonary gene delivery using polymeric nonviral vectors.</a> Bioconjugate Chemistry. 23, 3-20 (2012).</li>
<li>Yang, Y., Li, Q., Ertl, H. C., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+humoral+immune+responses+to+viral+antigens+create+barriers+to+lung-directed+gene+therapy+with+recombinant+adenoviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Cellular and humoral immune responses to viral antigens create barriers to lung-directed gene therapy with recombinant adenoviruses.</a> J. Virol. 69, 2004-2015 (1995).</li>
<li>Liu, Q., Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+the+inflammatory+response+to+adenovirus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of the inflammatory response to adenovirus vectors.</a> Gene Ther. 10, 935-940 (2003).</li>
<li>Pfeifer, C., Aneja, M. K., Hasenpusch, G., Rudolph, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus+serotype+9-mediated+pulmonary+transgene+expression%3A+effect+of+mouse+strain%2C+animal+gender+and+lung+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus serotype 9-mediated pulmonary transgene expression: effect of mouse strain, animal gender and lung inflammation.</a> Gene Ther. 18, 1034-1042 (2011).</li>
<li>Wallace, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+phosphatase+2A+regulates+innate+immune+and+proteolytic+responses+to+cigarette+smoke+exposure+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Protein phosphatase 2A regulates innate immune and proteolytic responses to cigarette smoke exposure in the lung.</a> Toxicol. Sci. 126, 589-599 (2012).</li>
<li>Wallace, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Phosphatase+2a+%28Pp2a%29+Regulates+Innate+Immune+and+Proteolytic+Responses+to+Cigarette+Smoke+Exposure+in+the+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Protein Phosphatase 2a (Pp2a) Regulates Innate Immune and Proteolytic Responses to Cigarette Smoke Exposure in the Lung.</a> Toxicol. Sci. , (2012).</li>
<li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J. Appl. Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li>
</ol>

יש החוקרים אין ניגודי האינטרסים לחשוף.

היתרון של שיטה זו על פני שיטות אחרות הוא שזה מייצר עליות ברמות חלבון ופעילות בתוך רקמת הריאה עצמה. יתר על כן, זה חודר לאזורים המרוחקים ביותר של הריאות בניגוד להישאר רק בתוך את דרכי הנשימה. יש לנו למדוד פעילות מוגברת של חלבון injectate גם לאחר lavaging איירווייס עם 15 מלוחים. ניתוחי פעילות רקמה מצביעים על כך שהחלבון הוא להיכנס לתאים ולא רק להישאר בחללי האוויר של העכבר. זה היה עוד יותר מאושר על ידי אימונוהיסטוכימיה מדגימה מכתים מפוזר של החלבון המוזרק שלנו בתוך alveoli ודר...

<table><tbody><tr><td>Pro-Ject</td><td>Pierce Bio</td><td>89850</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מרסס</td><td>Penn Century</td><td>FMJ-250</td><td></td></tr><tr><td>בטא-גלקטוזידאז</td><td>פירס ביו</td><td>89850</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן בטא-גלקטוזידאז</td><td>סנטה קרוז ביו</td><td>SC-19119</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום עכבר</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>A3139</td><td></td></tr><tr><td>קטמין/קסילזין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>K113</td><td></td></tr></tbody></table>

transfection החלבון של ריאות מאוס

Protein Transfection of Mouse Lung

הגדלת ביטוי חלבון מאפשרת לחוקרים להבין טובים יותר את התפקיד הפונקציונלי של חלבון זה בויסות תהליכים ביולוגיים מרכזיים 1. בסרטן הריאות, זה הושג בדרך כלל באמצעות גישות גנטיות המנצלות עכברים הטרנסגניים 2,3 או וקטורים ויראליים או לא ויראלי שמעלים רמות חלבון דרך ביטוי גנים מוגבר 4. עכברים מהונדסים הם יקרים וגוזלים זמן ליצירה וההחדרה של ביטוי transgene או כרוני גנטי האקראית יכולה לשנות את התפתחות ריאות נורמלית ובכך להגביל את התועלת של מודל 5. בעוד transgenics המותנה למנוע בעיות הקשורות לביטוי כרוני גן 6, את transactivator (rtTA) עכברי טטרציקלין שהשליטה ההפוכים, שמשמשים ליצירת ביטוי תנאי, לפתח הגדלת מרחב אווירי ספונטנית 7. כמו עם transgenics, השימוש בוקטורים ויראליים ולא ויראלי הוא יקר 8 ויכול לעורר מינון-Dתגובות דלקתיות ependent הרודפות את התוצאות 9 ולעכב את הביטוי 10. יתר על כן, היעילות של מינונים חוזרים ונשנים הן מוגבלת על ידי תגובה חיסונית משופרת לווקטור 11,12. חוקרים מפתחים adeno הקשורים וקטורים (AAV) יראליות שיעוררו פחות דלקות ולהיות ביטוי ארוך יותר בתוך הריאות 13. באמצעות β-גלקטוזידאז, אנו מציגים שיטה לביטוי חלבון גדל במהירות וביעילות בתוך הריאות באמצעות טכניקת transfection חלבון ישירה. פרוטוקול זה מערבב כמות קבועה של חלבון מטוהר עם 20 μl של מגיב transfection מבוסס שומנים (Pro-JECT, פירס ביו) כדי לאפשר חדירה לתוך רקמת הריאה עצמה. תערובת חלבוני liposomal לאחר מכן הוזרקה לריאות של העכברים באמצעות קנה הנשימה באמצעות microsprayer (פן המאה, פילדלפיה, פנסילבניה). Microsprayer יוצר פלומה דקה של תרסיס נוזלי לאורך הריאות. באמצעות הטכניקהאנו הוכחנו בתצהיר אחיד של החלבון המוזרק לאורך כל דרכי הנשימה ואת alveoli של עכברים 14. טכניקת transfection השומנים מאפשרת שימוש בכמות קטנה של חלבון כדי להשיג את האפקט. זה מגביל את התגובה הדלקתית שאחרת היה עוררה על ידי ממשל חלבון גבוה. ואכן, שימוש בטכניקה זו שפרסמנו כי הצלחנו להגדיל את הפעילות בPP2A הריאות באופן משמעותי מבלי להשפיע על ריאות תאיות שטיפת 15. cellularity שטיפת הריאות נלקחו 24 שעות לאחר האתגר היה דומה לקבוצת ביקורת (27 ± 4 שליטה לעומת 31 ± 5 transfected אלבומין, n = 6 לכל קבוצה). יתר על כן, הוא מגביר את רמות חלבון ללא גרימת שינויים התפתחותיים ריאה או שינויים ארכיטקטוניים שיכול להתרחש במודלים מהונדסים. עם זאת, את הצורך בממשלים חוזרים ונשנים עלול להפוך טכניקה זו פחות נוחה למחקרים הבוחנים את ההשפעות של עלייה ארוכת טווח בביטוי חלבון. זה יהיה בעיקר Truדואר לחלבונים עם זמן מחצית חיים קצרים.

<html> כדי להדגים את היעילות של הטכניקה שלנו השתמשתי microsprayer (המאה פן) להזריק את קנה הנשימה של עכברים עם 2 מיקרוגרם של עכבר אלבומין (Sigma) מומס 50 μl של PBS שהכיל 20 μl של מגיב transfection Pro-JECT. העכברים שטופלו אלבומין הושוו לעכברים שטופלו באופן זהה עם 2 מיקרוגרם חלבון בטא גלקטוזידאז של (פירס ביו). לאחר עשרים וארבע שעות, העכברים היו מורדמים והריאות עובדו לניתוח היסטולוגית. אימונוהיסטוכימיה לבטא גלקטוזידאז נערכה על סעיפי רקמות ריאה קבועים פורמלין מהעכברים שטופלו אלבומין וב...

עכברים מהונדסים או וקטורים נגיפיים היו בשימוש כדי להגדיל את ביטוי חלבון בתוך הריאה. עם זאת, הטכניקות האלה הן זמן רב, מאתגרים מבחינה טכנית ויש השפעות מחוץ היעד שיכול לבלבל את התוצאות. פרוטוקול transfection שלנו משתמש בחלבון מגיב transfection מבוסס שומנים וmicrosprayer ultrafine כדי לספק חלבון פעיל באופן אחיד לתאי ריאה.

Transfection החלבון של ריאות מאוס

Increasing protein expression enables researchers to  better understand the functional role of that protein in regulating key  biological processes1. In ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להעביר חלבון לתוך ריאות של עכבר. פעולה זו מתבצעת תחילה על ידי תליה של החלבון הרלוונטי בריאגנט טרנספקציה של הפרויקט. לאחר מכן, העכבר מושן ומונח על פלטפורמה מיוחדת להזרקה.מקור אור משמש לסיוע בהחדרת המרסס המיקרוסקופי לקנה הנשימה. לבסוף, מוזרקים 50 µL של נוזל המכיל את החלבון הנחקר. בסופו של דבר, טכניקה זו לטרנספקציה של חלבונים משמשת להדגמת עלייה ברמות החלבון בריאותיהם של עכברים.למרות ששיטה זו תוכננה לשימוש במחלה ריאתית חסימתית כרונית, ניתן להשתמש בה גם במצבים מחלתיים אחרים כגון אסתמה או פיברוזיס ריאתי. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית. מכיוון ששלבי ההזרקה תוך-קנה הנשימה הם קשים ללמידה, הם דורשים מיקום נכון של דרכי הנשימה של העכבר ותאורה נגדית של מיתרי הקול.התחילו בהכנת ריאגנט הטרנספקציה של החלבון. הוסיפו 250 µL של methanol או chloroform למבחנה המכילה את ה-dry project.Film. לאחר מכן, ערבבו את המבחנה ב-vortex למשך 10 עד 20 שניות במהירות מקסימלית.לאחר ההמסה, העבירו בפיפט 20 µL מהריאגנט של הפרויקט למבחנות מיקרו-צנטריפוגה נפרדות. הניחו מבחנות אלו תחת מנדף זרימה למינרית להבחת הממס למשך שש שעות לפחות. בטמפרטורת החדר, המבחנות חייבות להיות יבשות לחלוטין.יש לאחסן את המבחנות בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס, שם הן יישמרו למשך שנה אחת. ביום הטרנספקציה, יש להוציא מנה של ריאגנט טרנספקציה ולהוסיף 50 µL של PBS המכיל 2 µg של החלבון הנחקר. ערבבו את התמיסה באמצעות וורטקס במהירות נמוכה למשך שלוש עד חמש שניות, ולאחר מכן הדגירו בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות לפני השימוש.כאשר החלבון מוכן, הרדימו עכבר כדי להתכונן למתן תוך-קנה נשימה (intratracheal). להזרקה תוך-קנה נשימה משתמשים בפלטפורמה שתוכננה במיוחד. היא כוללת רמפה בזווית של 45 מעלות מהבסיס שלה וחוט מתכת התלוי משני ווים בחלק העליון.לאחר ההרדמה, משתמשים בחוט זה כדי לתלות את העכבר מהשיניים החותכות העליונות שלו. לאחר קיבוע העכבר, מקמי מקור אור אל מול הקנה כדי לסייע בויזואליזציה של מיתרי הקול באמצעות פינצטה ואטב נייר. כשהם משמשים כלרינגוסקופ, פתחי את הפה והלוע והחדירי את הקטטר.בעת שימוש במרסס Micros, חשוב להפעיל כוח מספיק בזמן הלחיצה על הבוכנה. אחרת, במקום להיווצרות ערפל דק, ייווצרו טיפות שעלולות לחסום את דרכי הנשימה של העכבר. לאחר שהכל מוכן, הזרק 50 µL של תערובת החלבון דרך הקנה באמצעות מרסס Micro של Pen Century.בדוגמה זו, עכברים קיבלו הזרקה תוך-קנה נשימה (intratracheally) של אלבומין עכברים או beta galacto, 24 שעות לאחר טרנספקציית חלבון. צביעת beta galacto אינטנסיבית, המסומנת כאן על ידי החיצים הגדולים, זוהתה בדרכי הנשימה של העכברים שטופלו ב-beta galacto, אך לא בעכברים שטופלו באלבומין. ברגע שהטכניקה מבוצעת כראוי, ניתן לבצע אותה תוך 10 או 15 דקות. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן ביצוע הזרקה תוך-קנה נשימה בעכברים לצורך טרנספקציית חלבון.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל עכבר של הפצה פלאורלית על ידי הזרקת תרחיף תאי סרטן ריאות לחלל החזה של עכבר מדוכא חיסוני.

הקמת מודל עכברי של סרטן ריאות מפושט פלאורלי

קשה להמיר תאי אפיתל ראשוניים של הסימפונות האנושיים. פרוטוקול זה מתאר את ייצור הלנטי-וירוסים וריכוזם, כמו גם את תנאי התרבית האופטימליים הדרושים להשגת טרנסדוקציות יעילות ביותר בתאים אלה לאורך התמיינות לאפיתל פסאודוסטטי.

אופטימלית Lentivirus ייצור תרבית תאי תנאים הכרחיים בהצלחת transduce האדם הראשי תאי אפיתל סימפונות

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוסקופיה מולטיפוטונית לביצוע הדמיה ארוכת טווח ברזולוציה גבוהה של תא בודד של הריאה השלמה בזמן אמת באמצעות חלון הדמיה מיוצב ואקום.

לטווח ארוך ברזולוציה גבוהה מיקרוסקופית Intravital בריאה עם חלון הדמיה מיוצב אבק

כתב יד זה מספק תיאור של המתודולוגיה המשמשת להקמת מודלים של עכברי התמרה-השתלה. ניתן תיאור מפורט של טעויות טכניות שיש להימנע מהן בעת ביצוע השתלות מח עצם. יש להשיג הבנה ברורה של החשיבות של טיטר ויראלי גבוה, טרנספקציה/התמרה והקרנה.

התמר-השתלה במודל עכבר של מחלה מיילופרוליפרטיבית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקדם אינטגרציה transgene וייצור של מייסד העכברים הטרנסגניים עם יעילות גבוהה על ידי זריקה פשוטה של וקטור במרחב perivitelline של oocyte מופרית lentiviral.

Lentiviral מתווכת הייצור של העכברים הטרנסגניים: שיטה פשוטה ויעילה מאוד עבור לימוד ישיר של המייסדים

כאן נתאר מודל השתלת orthotopic syngeneic פולשנית של תאים אדנוקרצינומה של הריאה העכבר כמודל זמן - ו בהפחתת עלויות ללמוד סרטן ריאות שאינם קטנים התא.

Orthotopic השתלת ריאות Syngeneic תאים אדנוקרצינומה ללמוד ביטוי PD-L1

פרוטוקול זה מתאר את השלבים שננקטו כדי לגרום לגידולים קראס ריאות בעכברים, כמו גם כימות של גידולים שנוצרו על ידי הדמיה אולטרסאונד. גידולים קטנים הם דמיינו בזמן מוקדם נקודות כמו B-קווים. בנקודות זמן מאוחרות יותר, המידות היחסיות של נפח הגידול מושגת על ידי כלי המדידה בתוכנת האולטרסאונד.

זיהוי של התקדמות הגידול ריאה בעכברים על ידי הדמיה אולטרסאונד

אנו מדגימים פרוטוקול שלב אחר שלב לחקר תפקוד גנים במקרופאגים שוכנים ברקמת הצפק in vivo, באמצעות וקטורים לנטי-ויראליים.

הכנה וקטורית לנטיויראלית לאפנון יעיל של גנים ומיקרו-רנ"א של מקרופאגים שוכנים ברקמת חלל הצפק in vivo בעכברים

כאן מוצג פרוטוקול ייצור AAV מבוסס תאי HEK293 מתלה, וכתוצאה מכך זמן ועבודה מופחתים הדרושים לייצור וקטורי באמצעות רכיבים הזמינים למטרות מחקר מספקים מסחריים.

ייצור אצוות וקטוריות משויכות אדנו בעלות תפוקה גבוהה באמצעות תאי תרחיף HEK293

פרוטוקול זה מתאר גישת סקר CRISPR תוך-צינורית ניתנת להרחבה, המאפשרת מחקרים מקבילים של הכיבוי וההפעלה של הגנים בחיים בבלוטת השד של העכבר.

סקר מקביל ב-vivo של השמדת גנים והפעלה בבלוטת השד של העכברים

למדו פרוטוקול חדשני להחדרת חלבון לריאות עכברים באמצעות מיקרו-מפריז אולטרה-דק וחומר שומני. השיטה מגבירה ביטוי חלבון תוך הפחתת אפקטים לוואי ומספקת חלופה יעילה למחקר ביולוגיה ריאתית.

Transfection החלבון של ריאות מאוס

גלה סרטונים נוספים