15 במאי 2013
הפרוטוקול הנוכחי מספק תיאור מפורט צעד אחר צעד של הנהלים הנדרשים לביצוע מדידות של מכניקה של מערכת נשימה, כמו גם ההערכה של היענות נשימה לשאיפת מטכולין בעכברים באמצעות טכניקת התנודה נאלצה (flexiVent; SCIREQ Inc, מונטריאול, QC , קנדה).
המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים מדידות תנודה מאולצת של מכניקת נשימה בעכברים באמצעות אירוע הגמיש, מאוורר בוכנה מסחרי הנשלט על ידי מחשב. זה ייעשה באמצעות הערכת תגובת דרכי הנשימה למתילכולין בשאיפה. השלב הראשון הוא הכנת הריאגנטים הנדרשים, הציוד והנושא.
ואז הנבדק מחובר למכונת ההנשמה לצורך מדידות אוורור מכני ומכניקת נשימה. באמצעות סקריפט מוגדר מראש, אוסף של מדידות אוטומטיות מבוקרות ביותר נעשה בבסיס ובעקבות אתגר מתילכולין. ניתוח התוצאות יכול להראות תגובתיות יתר של דרכי הנשימה כפי שצוין על ידי התגובות המקסימליות הגדולות יותר של עמידות ואלסטין בעכברים שנחשפו לכלור בהשוואה לנבדקי הביקורת.
היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות הוא שהיא מספקת כלי מדויק שבאמצעותו ניתן למדוד את תפקוד הריאות בצורה מקיפה, מפורטת ותרגומית. זה מושג באמצעות ניתוח אותות לחץ ונפח שנרכשו בתגובה לצורות גל זרימת אוויר תנודתיות מוגדרות מראש המופעלות בפתח דרכי הנשימה של הנבדק. בנוסף, ניתן לשלוט ולתקנן גורמים רבים המשפיעים על התגובה הפיזיולוגית.
בשיטה זו, הפעל את מערכת FX לאירועים Flex והפעל את התוכנה. הפרוטוקול הנוכחי חל על כל אחד משני דורות האירועים הגמישים הנתמכים על ידי flexi. ללבוש שבע תוכנות במפגש הניסוי הראשון או בכל זמן לפניו פתח את מודול הגדרת המחקר והתכנון כדי להגדיר מראש את מבנה המחקר.
לחץ על כפתור צור מחקר חדש ועקוב אחר האשף כדי ליצור מחקר. תאר את הפרוטוקול והגדר את קבוצות הניסוי והנושאים שיילמדו. התחל מפגש ניסוי על ידי פתיחת מודול מפגש הניסוי ומעקב אחר רצף האתחול.
ללימוד ובחירת תבניות. הקצה נושא לאתר המדידה ואשר את משקלו. המשך בכיול המערכת על ידי ביצוע השלבים המתוארים בתוכנת ההפעלה.
מגיעה הנחיה לחבר את הצינורית שתשמש לצינור Y לצורך כיול. המשך בכיול הצינורית על ידי ביצוע השלבים באשף הכיול וודא שערכי הכיול המתקבלים נמצאים בטווח שצוין. במידת הצורך, חזור על תהליך הכיול אלא אם כן מוכן, בטל את ההנחיות להתחיל באוורור ובהקלטת נתונים.
ניתן להתחיל אותם בשלב מאוחר יותר. להרדים את הנבדק באמצעות מינונים מתאימים של חומרי הרדמה. ודא שהנבדק הגיע לרמת הרדמה כירורגית.
הנבדק לא צריך להראות תגובה לצביטה בבוהן והנשימה שלו צריכה להיות סדירה ולא מאומצת. מקם את בעל החיים בשכיבה עם מקור חום כדי לשמור על טמפרטורת גוף תקינה. נורה של 60 וואט הממוקמת 45 סנטימטרים מהעכבר מספקת.
לאחר מכן נקו את אזור הגרון באלכוהול כדי לחשוף את קנה הנשימה. בצע חתך והפרד בעדינות את הבלוטה התת-מקסילרית ושכבת השריר המכסה אותה. הרם בעדינות את קנה הנשימה באמצעות זוג מיקרו מלקחיים.
ואז העבירו תפר מתחתיו. חותכים בין שתי טבעות הסחוס הקרובות ביותר לגרון. זה עושה חתך קטן בקנה הנשימה מבלי לחתוך אותו.
הכנס את הצינורית המכוילת לחתך וקדם אותה בעדינות דרך חמש טבעות קנה הנשימה. בדוגמה זו, צינורית מתכת בגודל 1.2 סנטימטר 18 פועלת. זה קריטי לאבטח את הצינורית באמצעות התפר.
הקובץ המצורף צריך ליצור אטימה אטומה סביב הצינורית. קרבו את החיה המשופרת למכונת ההנשמה. התחל את האוורור המכני על ידי בחירת פרופיל אוורור מוגדר מראש או מותאם אישית בתחנת האוורור.
כעת חבר את החיה למכונת ההנשמה באמצעות צינור Y. יישר בזהירות את החיה למכונת ההנשמה וודא שצינורית קנה הנשימה נמצאת באותה רמה כמו המאוורר. זה מונע צינורית, חסימה או פיתול קנה הנשימה בתוכנה.
בצע הפרעת ניפוח עמוקה על ידי לחיצה כפולה על שם ההפרעה כדי לאמת את הכנסת הצינורית והצמדתה. אלא אם כן יש נזילה, המערכת תחזיק לחץ של 30 סנטימטרים של מים לאורך תקופה של שלוש שניות ללא תזוזה מוגזמת של נפח. עקבות הנפח והלחץ המתועדים צריכים להיות חלקים ללא סימני קיזוז או עיוות.
אחרת, תיתכן צינורית, חסימה או מיקום לא נכון בשלב זה. ניתן לחבר מתמרי סימנים חיוניים לניטור דופק וטמפרטורת גוף במידת הצורך. ניתן להתחיל הקלטת נתונים של אותות אלה בכל עת, באופן ידני או אוטומטי באמצעות סקריפט.
מדידות או פקודות להפעלת נבולייזר, סמני אירועים וכן הלאה ניתנות לאוטומציה באמצעות סקריפטים מוגדרים מראש או מותאמים אישית לתהליך ניסיוני מבוקר וניתן לחזרה. ניתן להשתמש בשש משפחות של הפרעות המולידים מספר פרמטרים כדי לתאר את הנושא מכניקת מערכת הנשימה בנקודת ההתחלה ובעקבות אתגר נתון. כאשר מוכנים להתחיל לבצע מדידות, חשוב להפעיל תחילה את הפרעת האינפלציה העמוקה כדי לגייס אזורי ריאה סגורים ולתקנן את היסטוריית נפח הריאות.
לאחר מכן, ודא את היעדר מאמצי השראה ספונטניים על ידי הפעלת מדידת בדיקה. שים לב לעקבות אות הלחץ בתצוגת מערך הנתונים שנבחרה. עם עקומות PV מדורגות.
רמות לחץ צריכות להיות מוגדרות היטב ללא סטיות כלפי מטה. תנודה כלפי מטה בלחץ תצביע על מאמץ שאיפה מהחיה. כעת התחל את התסריט להערכת תגובת דרכי הנשימה למתילכולין בשאיפה על ידי לחיצה כפולה על הכותרת שלו.
בדוגמה זו, הסקריפט יוצר רצף של מדידות בסיסיות בשלוש עותקים. ואז יש הנחיה להעמיס את הנבולייזר במי מלח. או בדוגמה זו, תמיסה של מתילכולין מעמיסה כ -100 מיקרוליטר תמיסה לתוך הנבולייזר.
הערפול יתחיל אוטומטית ברגע שהמידע יוזן בתוכנה. זמן קצר לאחר סיום הערפול, מתחיל רצף של מדידות במרווחים קרובים למשך כשלוש דקות. לאחר מכן, הנחיה לביצוע.
אתגר נוסף מסופק וניתן לחזור על רצף המדידות בין האתגרים. ייבוש החלק הפנימי של תושבת הנבולייזר עם ספוגית יכול לסייע במניעת הצטברות טיפות או עיבוי בקו הנשימה. כאשר הנתונים נאספים, התוכנה מחשבת פרמטרים הקשורים להפרעה ומספקת מקדם קביעה על סמך התאמת הנתונים למודל.
מאוחר יותר, ניתן לגשת לניסוי באמצעות מודול הסקירה והדיווח של התוכנה כדי לייצא או לנתח נתונים נוספים. בסיום הניסוי יש לעצור את האוורור ולנתק את הנבדק. לאחר הניתוק במהירות המתת חסד של החיה עם מנת יתר של נתרן פנטוברביטל, ואז ניתן לבצע שטיפת סימפונות או לבודד את הריאות להמשך ניתוח.
לפני המעבר לנושא הבא, יש לשטוף ולייבש את מתאם הנבולייזר y צינורות וצינורית עבור לנושא הבא בתוכנת ההפעלה ואשר את משקלו. לאחר מכן המשך עם שלבי הכיול המוצעים לפני שתמשיך בניסוי.
בסוף היום יש לשטוף ולייבש את הציוד. זכור, לפני סגירת מפגש הניסוי לנקות גם את שסתום הנשיפה של המערכת בהתאם להוראות היצרן על מנת לשמור על ביצועי המערכת שלך. הדוגמאות הבאות מייצגות מבחר של תוצאות טיפוסיות מניסויי עכברים נאיביים וחשופים לכלור, תוצאות שוות ערך מ-aj נאיבי.
עכברים הושגו בנקודת ההתחלה ובעקבות התכווצות סימפונות המושרה על ידי מתילכולין באמצעות אחד משני דורות אירועי הגמישות הנתמכים על ידי לבוש גמיש שבע. מכיוון שמדידות FOT בפס רחב מאפשרות חלוקה של תגובת הריאות לפרמטרים של דרכי הנשימה ורקמות פרנכימליות, הן מספקות אמצעי לזיהוי אזורי ריאות מושפעים. לדוגמה, עכברי AJ נאיביים הראו עלייה בהתנגדות הבסיסית כאשר לחץ הנשיפה הסופי הוגדל משלושה לתשעה סנטימטרים של מים.
השינוי בלחץ הנשיפה הסופי הביא לירידה בהתנגדות דרכי הנשימה התואמת את ההשפעות מרחיבות הסימפונות של נפח ריאות גבוה יותר ולחץ ניפוח גדול יותר, ועלייה בשיכוך הרקמות, פרמטר הקשור קשר הדוק להתנגדות הרקמות המשקף את צמיגות הרקמות ואולי את ההתנגדות של דרכי הנשימה הקטנות. האחרון ידוע כגדל עם הגדלת נפח הריאות. פרוטוקול זה משמש לעתים קרובות להערכת תגובת דרכי הנשימה למתילכולין בשאיפה לאחר חשיפה לגז כלור.
עכברי B.SEA הפגינו תגובתיות יתר של דרכי הנשימה בהשוואה לבקרות שנחשפו לאוויר. בדוגמה הנוכחית, עכברים שנחשפו לגז כלור הראו תגובות מקסימליות גדולות יותר בכל הפרמטרים של FOT. עכברים אלה הראו גם תזוזה מובהקת סטטיסטית שמאלה של עקומת תגובת הריכוז או רגישות יתר למתילכולין בשאיפה, אשר מודגמת על ידי הפחתה של ריכוז המתיל כולין הנדרש כדי לגרום להכפלת העמידות והאלסטין.
בנוסף ל-FOT, מערכת אירועי הגמישות יכולה להקליט מדידות אחרות כגון עקומות נפח לחץ. החלק העליון של איבר הדפלציה מתאים למשוואת סלזאר נולס, והפרמטרים המשויכים מחושבים על ידי התוכנה. על מנת להצליח בטכניקה זו, חשוב לשים לב לכל שלב בעל חשיבות מיוחדת הוא כיול המערכת, התנגדות הצינורית האנדוטרכאלית, מיקום החיה וסטנדרטיזציה של נפחי הריאות.
אם מבצעים את השלבים הללו במדויק, שיטה זו תספק לך אפיון מדויק של התכונות המכניות של ריאת העכבר.
פרוטוקול זה מפרט את ההליכים למדידת מכניקה של מערכת הנשימה ולהערכת תגובתיות דרכי הנשימה למתכולין שאיף בעכברים, באמצעות טכניקת תנודות כפויות (flexiVent). שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות ומבוקרות של תפקודי ריאה.
טכניקת התנודה הכפויה (FOT) מספקת כלי תרגומי להערכת תפקודי ריאה במודלים פרה-קליניים, המאפשרת הפחתת סיכונים מכניסטית של יעדי טיפול נשימתיים. על ידי אספקת מדידות כמותיות וניתנות לשחזור של מכניקת מערכת הנשימה, FOT תומכת בתיקוף יעדים ובביטחון ניבוי בשלבי הגילוי המוקדמים. גישה זו מסייעת באפיון מודלים של מחלות ובסריקת תרכובות להערכת תגובתיות יתר של דרכי הנשימה, ובכך מספקת בסיס לקבלת החלטות לגבי המשך הפיתוח (go/no-go) של תרפיה נשימתית.
FOT משתלב ברצף הגילוי, החל מתיקוף מטרות מוקדם, דרך זיהוי מובילים ועד לבדיקת יעילות פרה-קלינית, ובמיוחד עבור התוויות נשימתיות שבהן מכניקת הריאות מהווה סמן ביולוגי מרכזי.