Name: הפרדת אקטודרם עכבר העוברי פן וmesenchyme (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: למד הפרדת אקטודרם ומזנכים פנים עוברי עכבר באמצעות טיפול ב-Dispase II. פרוטוקול זה מאפשר בידוד רקמות לניסויים בביולוגיה התפתחותית וחקר הפרעות מולדות בפנים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות לאיירין צ&#39;וי להמחשת ראשי עובר באיור 1 ושאר חברי המעבדה לעזרה ודיון. עבודה זו נתמכת על ידי מענק NIH DE012728 (TW)

1. הכן Dispase השני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן טרי Hepes שנאגר מלוח (HBS) (50 מ&quot;מ / Hepes KOH pH 7.4, 150 mM NaCl). הוסף 2 המ&quot;ל 0.5 מ &#39;Hepes / KOH pH 7.4 ו -1.2 המ&quot;ל M NaCl 2.5 ל16.8 המ&quot;ל ultrapure H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 10 מ&quot;ג / מיליליטר Dispase שני. שוקל 0.2 גרם Dispase השני (רוש, חתול # 4942078001) ולהתמוסס ב20 המ&quot;ל HBS. הכן 1.0 aliquots מ&quot;ל בצינורות הבודדים Eppendorf ולאחסן ב -20 ° C עבור אחסון לטווח ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל 10 מ&quot;ג / מיליליטר Dispase השני 1:10 ב PBS לפני השימוש. שים Dispase השני המדוללת על קרח. </li></ol> 2. לנתח CD 1-עוברי E10.5 מנקבה בהריון כל הניסויים בבעלי החיים בוצעו בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי אוניברסיטת קולורדו דנבר (UCD) טיפול בבעלי החיים ושימוש בועדה. התקליטור-1 (ICR), התקבלו מעכברי הרלן מעבדות (אינדיאנפוליס, אינדיאנה). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אזור הנתיחה וכלים עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים נשי CD-1 הריון באמצעות approvפרוטוקולי אד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסס את הבטן עם אתנול 70% ואז לפתוח את הבטן. השתמש במערכת אחת של מלקחיים למשוך את הרחם ועוד לקרוע mesometrium מהרחם. להוציא את הרחם מהגוף. חזור לקרן רחם בצד השני של הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה שטיפת הרחם עם הקרח הקר PBS בצלחת פטרי 10-סנטימטר לשטוף את הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הרחם לצלחת פטרי חדשה עם הקרח הקר PBS. נפרד לרסיסים, שעוברים אחד על ידי חיתוך בין אתרי השתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה עוברת אחד לתוך PBS קר כקרח תחת stereomicroscope. השתמש במלקחיים עדינים לקרוע את הדופן השרירי של רחם מתחיל באחד מהאתרים לגזור כדי לחשוף את העובר וצק החלמון. לקלף את צק החלמון וamnion. חזרת עוברים גזורים לצלחת פטרי 6-סנטימטר עם PBS על קרח. המשך עד שכל העוברים שנאספו בדרך זו. </li></ol> 3. Dispase השני טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את כל העוברים בעלי PBS בצלחת פטרי 6-סנטימטר. להחליףPBS עם 10 מ&quot;ל Dispase השני מדוללות ב PBS. מכסה את התבנית ולדגור פטרי על 37 מעלות צלזיוס במשך 25 דקות - חממת חיידקים או חדר חם צריכה להספיק - אנחנו לא השתמשנו CO 2 רקמת תרבות חממה לצעד זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח צלחת פטרי החוצה ולצפות את העובר תחת מיקרוסקופ סטראוסקופי. אקטודרם צריך להיות משוחרר, מאופיין בפער ברור בין שכבה זו רקמה וmesenchyme הבסיסי. אם לא, דגירה במשך 5 דקות נוספות ב 37 ° C. ואז לשים את צלחת פטרי על קרח. </li></ol> 4. לנתח את בליטות פן אינטקט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכוס טפטפה פנוי (VWR, חתול # 14672-380) להעביר את אחד Dispase השני התייחס לעובר PBS קר כקרח בצלחת פטרי 6-סנטימטרים מתחת stereomicroscope. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בזוג אחד של מלקחיים להחזיק את העובר. השתמש בזוג נוסף של מלקחיים עדינים בזהירות לחתוך את גבולות בליטות פנים המצורפים לראש (איור 1 מציג את הגבולותאת בליטות פנים). התחל מצד אחד של MNP, אז MXP, והאחרון FNP. לעשות את אותו הדבר לצד השני כדי לנתח את בליטות פן החוצה ללא פגע (איור 2 א). </li></ol> 5. אקטודרם פן נפרד מmesenchyme <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לבליטות פן תחת stereomicroscope עם מרחק עבודת 3x. השתמש בזכוכית ארוכה פסטר פיפטה עדינות פיפטה מעלה ומטה 5 פעמים את בליטות פן. אחרי זה, אקטודרם קל לקלף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בזוג אחד של מלקחיים להחזיק את בליטות פן. השתמש בזוג השני של מלקחיים להתקלף אקטודרם לאט מאוד. 2B האיור מציג את הגיליונות הנפרדים של אקטודרם פנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בזכוכית ארוכה פסטר פיפטה חדשה להעביר אקטודרם הפנים לתוך 1.5 מ&quot;ל אפנדורף צינור עם PBS על קרח. העברת mesenchyme ל1.5 מ&quot;ל אפנדורף צינור אחר עם PBS על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בקרח הקר PBS החדש לכל נתיחה. לאסוף דגימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף tהוא דוגם עם PBS. צנטריפוגה ב 4 ° C, 500 XG ל3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב PBS באמצעות pipettes ארוך הזכוכית פסטר. אם הדגימות הן לשמש לבדיקת שבבים, המשך לשלב 6.1. להפקת RNA, המשך לשלב 6.2. להפקת חלבון, המשך לשלב 6.3. </li></ol> 6. דוגמאות לתהליך ניסויים נוספים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות לבדיקת שבב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 המ&quot;ל PBS עם פורמלדהיד 1% לcrosslink. הומוגני הדגימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בטמפרטורת חדר למשך 10 דקות ברוטציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 110 μl של 1.25 מ &#39;גליצין לכל מבחנה כדי להרוות פורמלדהיד unreacted. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב ודגירה בטמפרטורת חדר למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין ב 500 XG ב 4 מעלות צלזיוס למשך 3 דקות. הסרת supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 המ&quot;ל PBS הקר כדי לשטוף את הרקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין ב 500 XG ב 4 מעלות צלזיוס למשך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר PBS ולחזור PBS לשטוף פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת supernatant, צמד להקפיא את הרקמות בחנקן נוזלי. אחסן samples ב-80 ° C לאיגום ועיבוד שלאחר מכן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות לרנ&quot;א חילוץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח אקטודרם וmesenchyme הפנים בצינורות המכילים RNAlater (Ambion). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת הדגימות בפתרון בין הלילה ב 4 ° C כדי לאפשר חדיר יסודית של רקמת RNAlater. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות ב -20 ° C לאיגום ועיבוד שלאחר מכן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות למיצוי חלבון </li></ol> הוסף חיץ תמוגה לדוגמא לעיבוד שלאחר מכן. או להישבר להקפיא את הרקמות בחנקן נוזלי. אחסן את הדגימות ב-80 מעלות צלזיוס במשך איגום עוקב ועיבוד. הערות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אילוצי זמן. מתכנן על 4-6 שעות ממועד תחילת הנתיחה דרך לתחילת הסעיף 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשבקיא, זה לוקח ~ 10-15 דקות לעובר לביצוע סעיפים 4 ו 5 (דיסקציה בולטות והפרדת אקטודרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם דגימות לבידוד RNA, כל solution צריך להיות מטופלים עם Diethylpyrocarbonate הראשון. גם לנקות את המלקחיים ואזור עבודה עם RNase Away. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הדגימות על קרח בכל העת, פרט לטיפול וניתוחי Dispase השני. שינוי לקרח הקר PBS החדש לכל נתיחה לוודא PBS משמש לנתיחה הוא קר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים חדים הם קריטיים להשגת נתיחה מדויקת. נקה את המלקחיים לחלוטין כדי למנוע כל זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאיסוף דגימות מבליטות שונות, לנתח את כל גדולה בנפרד לאחר הטיפול השני Dispase. לאחר מכן נפרד אקטודרם וmesenchyme. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הטיפול בDispase השני, אקטודרם פן קל לקלף. שים לב במיוחד לזיהום מאקטודרם האחר. תמחק את כל הרקמות המזוהמות פוטנציאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שתתחיל, לא להפסיק עד שהדגימות תגענה לנקודה המתאימה בסעיף 6. סיום הפרדת אקטודרם פנים וmesenchyme לכל העוברים מהר ככל שאתה יכול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדוארפעילויות nzyme של Dispase השני עשויות להיות שונות בין קבוצות ומותגים. זה הכרחי כדי להתאים את זמן הטיפול למותגים ולקבוצות של Dispase השני שונים. </li></ol>

<ol><li>Wilkie, A. O., Morriss-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+craniofacial+development+and+malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Genetics of craniofacial development and malformation.</a> Nat. Rev. Genet. 2, 458-468 (2001).</li>
<li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+2+-+The+Etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate%3A+usefulness+and+caveats+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Chapter 2 - The Etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37-138 (2008).</li>
<li>Schutte, B. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+many+faces+and+factors+of+orofacial+clefts%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">The many faces and factors of orofacial clefts.</a> Human Molecular Genetics. 8, 1-7 (1999).</li>
<li>Chai, Y., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Recent advances in craniofacial morphogenesis.</a> Dev. Dyn. 235, 2353-2375 (2006).</li>
<li>Jiang, R., Bush, J. O., Lidral, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+upper+lip%3A+Morphogenetic+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Development of the upper lip: Morphogenetic and molecular mechanisms.</a> Dev. Dyn. 235, 1152-1166 (2006).</li>
<li>Reid, B. S., Yang, H., Melvin, V. S., Taketo, M. M., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectodermal+WNT%2F%CE%B2-catenin+signaling+shapes+the+mouse+face%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Ectodermal WNT/β-catenin signaling shapes the mouse face.</a> Developmental Biology. 349, 261-269 (2011).</li>
<li>Feng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+analysis+of+gene+expression+during+growth+and+fusion+of+the+mouse+facial+prominences%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal analysis of gene expression during growth and fusion of the mouse facial prominences.</a> PLoS ONE. 4, e8066(2009).</li>
<li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat. Genet. 37 (11), 1181-1186 (2005).</li>
<li>Nagai, T., Aruga, J., Takada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+the+mouse+Zic1%2C+Zic2%2C+and+Zic3+gene+suggests+an+essential+role+for+Zic+genes+in+body+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The expression of the mouse Zic1, Zic2, and Zic3 gene suggests an essential role for Zic genes in body pattern formation.</a> Developmental Biology. 182, 299-313 (1997).</li>
<li>Britsch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Sox10+is+a+key+regulator+of+peripheral+glial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Sox10 is a key regulator of peripheral glial development.</a> Genes Dev. 15 (1), 66-78 (2001).</li>
</ol>

המחברים אין אינטרסים מתחרים או קונפליקטים אחרים הקשורות לתוכן של מאמר זה.

פרוטוקול זה מספק שיטה פשוטה להפריד אקטודרם העוברי עכבר פנים וmesenchyme מבוסס על צעד טיפול ראשוני Dispase השני. במחקרים קודמים, שבוצענו נתיחה של בליטות פן לפני הטיפול השני Dispase, אבל אנחנו עקביים מצאנו כי mesenchyme הופך להיות &quot;דביק&quot; וקשה יותר לתמרון. הפרוטוקול החדש שלנו מונע את הבעיה הזו. טיפול בכוח פיזי מתון על ידי pipetting למעלה ולמטה שילוב Dispase השני עושה הפרדת אקטודרם וmesenchyme קל יותר. יתר על כן, בפרוטוקול זה גם עובד היטב להפרדת דגימות אחרות עובריות אקטודרם ...

<table><tbody><tr><td>Dispase II (פרוטאז ניטרלי, דרגה II)</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>הכינו תמיסת מלאי של 10 מ"ג/מ"ל Dispase II ב-HBS. Aliquot ואחסן ב-20 מעלות; C . </td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>אמביון</td><td>AM7021</td><td></td></tr></tbody></table>

הפרדת אקטודרם עכבר העוברי פן וmesenchyme

Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme

בתרי Orofacial הם מומי Craniofacial השכיחים ביותר, אשר משפיעים על 1.5 ב1,2 1,000 תינוקות ברחבי העולם. clefting Orofacial נגרם על ידי 3 פיתוח פנים לא נורמלים. באדם ובעכבר צמיחה, ראשונית ודפוסים של הפנייה מסתמך על מספר קטנות של רקמת בלוטות, את בליטות פן 4,5. הפנים נגזרו משש בליטות עיקריות: תהליכי אף קדמיים לזווג (FNP), בליטות לסת עליונות (MXP) ובליטות בלסת תחתונה (MDP). בליטות אלה מורכבות מנפיחויות של mesenchyme שנארזות האפיתל שמעליה. מחקרים במינים רבים הראו כי איתות דיבור בין אקטודרם וmesenchyme פנים היא קריטית לעיצוב פני 6. עם זאת, פרטים הנוגעים מכניסטית של הגנים המעורבים בממסרי איתות אלה חסרים. אחת דרכים להגיע להבנה מקיפה של ביטוי גנים, גורם שעתוק מחייב, וסימנים הקשורים לכרומטין develoאקטודרם וmesenchyme פן פינג הוא לבודד ולאפיין את תאי רקמות המופרדות. כאן אנו מציגים שיטה להפרדת אקטודרם וmesenchyme פן ביום עוברי (E) 10.5, שלב ההתפתחותי קריטי בהיווצרות פן עכבר שמקדימה היתוך של הבליטות. השיטה שלנו מותאמת לגישה ששמשנו בעבר לביתור בליטות פן 7. במחקר מוקדם יותר שהעסקנו C57BL לדה / 6 עכברים כזן זה הפך להיות סטנדרט לגנטיקה, גנומיקה והמורפולוגיה של פנים 8. כאן, לעומת זאת, בשל כמויות המוגבלות יותר של רקמה זמינה, יש לנו מנוצלים מתח outbred תקליטור-1 שהוא זול יותר לרכישה, חזק יותר לגידול בעלי, ונוטים לייצר יותר עוברים (12-18) בכל המלטה מאשר כל לדה עכבר זן 8. בעקבות בידוד עובר, פרוטאז ניטראלי Dispase השני שמש לטיפול בכל העובר. ואז, את בליטות פן היו לנתחאד החוצה, ואקטודרם הפנים הופרדו מmesenchyme. שיטה זו שומרת גם אקטודרם וmesenchyme הפנים ללא פגע. הדגימות שהתקבלו באמצעות מתודולוגיה זו יכולה לשמש לטכניקות כוללים זיהוי חלבון, הכרומטין assay immunoprecipitation (שבב), מחקרי microarray, ו-RNA-seq.

לאחר הטיפול השני Dispase, אקטודרם של העובר נוטה להיות רופף. את בליטות פן צריכות להיות שלמות לאחר נתיחה (איור 2 א). אקטודרם הפנים המבודדים ברור וללא רקמות mesenchyme (איור 2 ב &#39;). כדי לקבוע את היעילות של הפרוטוקול ולזהות זיהום לחצות אנחנו assayed למוח הקדמי הביעו Zic3 9, ectodermal cdh1 5 ספציפיים וsox10 10 ספציפיים mesenchymal באמצעות transcriptase PCR ההפוך. המחקרים שלנו אשרו שגם אקטודרם וmesenchyme פנים הביעו...

פרוטוקול להפרדה של אקטודרם וmesenchyme פן עובר מתואר. אנו משתמשים Dispase השני לטיפול בעוברים שלמים ראשון, לנתח בליטות פן שלמות, ואז להפריד אקטודרם וmesenchyme הפנים.

 Orofacial clefts are the most frequent  craniofacial defects, which affect 1.5 in 1,000 newborns worldwide1,2. Orofacial clefting is caused by abnormal ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להפריד בין עוברי עכבר, אקטודרם פנים ומכין. זה מושג על ידי בידוד ראשון של עוברי CD אחד E 10.5. השלב השני של ההליך הוא לטפל בעוברים השלמים עם דיס.שלב שני. לאחר הטיפול האנזימטי, בולטות הפנים מבודדות והשלב האחרון הוא להפריד בזהירות את עור הפנים מהמזנכימה. עור הפנים המבודד והמזנכימה מוכנים לאחר מכן לניסויים נוספים.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו טיפול בחלל הפנים המנותח, הוא שטיפול בעובר כולו עם חלל DYS שומר על תאונת הפנים ועל שלמותו. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה ההתפתחותית של יונקים, כגון כיצד ביטוי גנים דיפרנציאלי, שינוי אפיגנטי וקשירת גורמי שעתוק יכולים לווסת את הדיבור המולקולרי בין עור הפנים למזנכימה. במהלך האמבריוגנזה תכננו ארבע עד שש שעות מעכשיו ועד לבידוד הרקמות, נקו את אזור הדיסקציה והכלים ל-70% אתנול.ואם הדגימות מיועדות לבידוד RNA, השתמש ב-RNA. זה קריטי שהמלקחיים יהיו חדים. בנוסף, לבידוד RNA, יש לטפל בתמיסה באתיל פרקרבונט.כעת המתת חסד של CD נקבה אחת בהריון באמצעות פרוטוקולים מאושרים לאיסוף עוברי E 10.5. יש לרסס את הבטן באתנול 70%, לפתוח את הבטן. השתמש בסט אחד של מלקחיים כדי למשוך את הרחם ובאחר כדי לקרוע את ה-meso nutrium מהרחם.הוציאו את הרחם מהגוף וחזרו על התהליך על קרן הרחם הנגדית. שטפו בקצרה את הרחם עם P

separation-of-mouse-embryonic-facial-ectoderm-and-mesenchyme

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בידוד של postimplantation בשלב עוברי מאפשר ללמוד דפוסים גן ולנתח התא השושלת תהליכי קבלת ההחלטות במהלך ההתפתחות העוברית, אבל לנתיחה תקין של העובר מוקדם יכול להיות מאתגר. פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד מוקדם פס פרימיטיבי, בשלב עוברי (~ 6.5 ימים הודעה coitum [DPC]).

Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר

מאמר זה מתאר השתלת רקמות טכניקה שנועדה לבדוק את איתות ותכונות של דפוסים האאקטודרם משטח cephalic במהלך הפיתוח craniofacial.

הערכת נכסים איתות של Ectodermal epithelia במהלך פיתוח Craniofacial

Mesenchyme הגולגולת עובר תנועות morphogenic דרמטיות שעשויים מספקת כוח מניע לגובה של הקפלים...

Assay Explant להערכת התנהגות ניידת של mesenchyme הגולגולת

גורלו של תא עוברי אדם יכול להיות מושפע על ידי מולקולות ירושה ו / או על ידי אותות מתאים שכנים. ניצול מפות גורלו של עובר Xenopus שלב המחשוף, לסטומרים בודדים ניתן לזהות לתרבות בבידוד כדי להעריך את התרומה של מולקולות ירושה לעומת אינטראקציות תא סלולרי.

Explants Blastomere לבדיקת מחויבות גורל תא במהלך התפתחות עוברית

נוירונים עובריים נולדים באזור חדרית של הצינור העצבי, אבל להעביר להגיע למטרות מתאימות. נוירונים branchiomotor פנים (FBM) הם מודל שימושי ללמוד נדידת נוירונים. פרוטוקול זה מתאר את wholemount אקס תרבות Vivo של hindbrains עובר עכבר כדי לחקור את המנגנונים המווסתים את נדידת FBM.

עכבר המוח האחורי<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבות לחקר הגירת Branchiomotor Neuron פנים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול הדמיה חיה של היתוך חיך העכבר העכבר באמצעות מיקרוסקופיה confocal. פרוטוקול זה ניתן להשתמש בשילוב עם מגוון רחב של שורות העכבר כתב פלואורסצנטי, עם מעכבי נתיב עבור תובנה מכניסטית. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם עבור הדמיה חיה במערכות התפתחותיות אחרות.

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

פרוטוקול זה מתאר את הניתוח והתרבות של תאי ציצה עצביים הגולגולת מדגמי העכבר, בעיקר למחקר של הגירה תא. אנו מתארים את טכניקות ההדמיה החי בשימוש וניתוח של מהירות וצורה תא שינויים.

חיתוך, תרבות וניתוח של הגולגולת הראשי ציצה עצביים תאים מעכבר לחקר של ציצה של תא העצבים העצבי והגירה

אנו מציגים פרוטוקול לבידוד ותרבות של תאים מזנכימליים הפליאטוניים של עכבר ראשוניים להדמיה של צמיחה דו-ממדית (2D) ובגידות לתיקון פצעים. אנו מספקים גם את המתודולוגיה לניתוח נתוני ההדמיה של זמן לשגות כדי לקבוע היווצרות זרם תאים תנועתיות כיוונית.

בידוד והדמיה בזמן-לשגות של תאי מזנשים הפליאטל העוברי הראשי של העכבר כדי לנתח תכונות תנועה קולקטיבית

פיתחנו פרוטוקול כללי כדי לנתק כמות גדולה של תאים בודדים באיכות גבוהה מן האפיתל ו mesenchyme / רקמת חיבור של לשונות עכבר עובריות ובוגרות.

ניתוק תאים מאפיתל הלשון ומיסנצ'ימה/רקמת החיבור של עכברים בני 12.5 ו-8 שבועות

הפרוטוקול מציג שיטה לבידוד ליזאטים של חלבונים של תאים שלמים מתהליכי פנים של עוברי עכברים שנותחו או מתאי מזנכים עובריים של עכברים שעברו תרבית, וביצוע כתמים מערביים לאחר מכן כדי להעריך את רמות החלבון שעבר זרחן.

בידוד של חלבון של תאים שלמים ליסאטים מתהליכי פנים של עכברים ותאי מזנכיים פאלטליים בתרבית לניתוח פוספופרוטאין לניתוח פוספופרוטאין

כאן, פרוטוקול ממוטב שלב אחר שלב מסופק לקיבוע, חיסון וחתך של עוברים כדי לזהות פילופודיה איתותית מיוחדת הנקראת ציטונמות ברקמות עכבר מתפתחות.

קיבוע רקמת עכבר עוברית לניתוח ציטונמה

למד הפרדת אקטודרם ומזנכים פנים עוברי עכבר באמצעות טיפול ב-Dispase II. פרוטוקול זה מאפשר בידוד רקמות לניסויים בביולוגיה התפתחותית וחקר הפרעות מולדות בפנים.

הפרדת אקטודרם עכבר העוברי פן וmesenchyme

גלה סרטונים נוספים