Name: סימולטני טרום והקלטת אלקטרו פוסט סינפטי מ Xenopus עצבי שרירי Co-תרבויות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-11T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: למדו לבודד תרביות ראשוניות של נוירונים ותאי שריר מעוברי Xenopus. השיטה מאפשרת הקלטות פאץ' קלאמפ סימולטניות לחקר פיזיולוגיה סינפטית ומנגנוני שחרור נוירוטרנסמיטרים בחיבורים נוירו-שריריים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ממומן על ידי NSF (0854551).

1. הכנה שלפני הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרונים הבאים (ראה טבלה 1 ליצירות): (א) NFR 1 ליטר (רינגר צפרדע הרגיל), (ב) מי מלח 100 מ&quot;ל, 10% (ג) 100 המ&quot;ל CMF (Ca 2 + / Mg 2 פתרון +-חופשי ), (ד) 1 המ&quot;ל שלו (אינסולין transferrin-סלניום, I1884 סיגמא), (ה) 100 מיליליטר מדיום L-15 תרבות, (ו) 10 מיליליטר HCG (גונדוטרופין כוריוני האנושי סיגמא CG-10), (ז) 100 מיליליטר K פתרון +-פנימי, (ח) 100 המ&quot;ל K +-פתרון הפנימי לAmphotericin B. הכח האוסמוטי של פתרון 1 צריך להיבדק כדי לוודא שהוא כ 260 mOsM באמצעות osmometer לחץ אדים (למשל מודל Wescor # 5100C שברשות) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן לעקר פתרונות (ב) ו (ג). פתרונות (א) (ב) ו (ג) ניתן לאחסן עד שלושה חודשים ב 4 ° C. להכין תמיסה (ד) על ידי הוספת 1 ​​מיליליטר H 2 O deionized לבקבוקון המכיל אבקת lyophilized באמצעות מחט 25 מד מזרק ומסנן מזרק. זה פתרון סופי גניתן לאחסן ב 4 ° C למשך 30 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין תמיסה (ה) במכסת מנוע זרימה למינרית על ידי שילוב של כל הרכיבים בכוס או בקבוק. סנן לעקר את הפתרון הסופי ולהעביר 10 aliquots מ&quot;ל לתוך צינורות צנטריפוגות סטריליים. חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן (הפתרון (ו)) HCG ידי הוספת 10 מ&quot;ל deionized H 2 0 לבקבוקון המכיל אבקת lyophilized באמצעות מחט 25 מד מזרק ומסנן מזרק. פתרון סופי זה ניתן לאחסן ב 4 ° C למשך 30 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפברק לפחות שני כלי microdissection ידי הדבקת סיכת Minutien (26002-10, כלי מדע פיין) לסוף הכוס פסטר פיפטה עם דבק cyanoacrylate. לאפשר את הקצה החד של הסיכה להאריך מעבר לקצה פיפטה כ 0.5 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ימים לפני הכנת תרבויות, לגרום לגידול בהליך הבא. זהה את זוג הורים מוכן של Xenopus ידי התבוננות ביב בולט, אדמדם בפיגמנטציה כהה והנקבה בsu מישורייםrface מכפותיו הקדמיות של הזכר. אחד ובזמן, בניכוי כל צפרדע להחזיק אותו צד גחון על כיור ברשת, כך שהוא לא יכול לברוח. מזריק 1 מ&quot;ל של פתרון (ו) דרך הרשת ומתחת לעור לתוך אחד מצקי הלימפה הגב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את זוג ההורים יחד בטנק גלון מכוסה 10 של מים. כדי להבטיח שבעלי החיים לא ירמסו את הביצים שמטילות חדשה ומופרות, התקנת רצפה מרושתת עם גודל רשת של כ ½ &quot;כ 1-2 סנטימטרים מצוידים מעל תחתית המכל (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר צפרדעים באין מפריעים במשך 12-48 שעות עד שבעלי החיים הם בamplexus וביצים מופרות הם נצפו על הרצפה מתחת למסך (1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את בעלי החיים מהטנק, אבל משאיר את הביצים באין מפריעות במשך לפחות 24 שעות ארוכות יותר. זה זוג צפרדעים ניתן מחדש התרבה ​​לאחר שישה שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את העוברים מתחתית המכל ולהעבירם לפולחן ארבעה או חמישה מ&quot;מ 60x15מאכלים המכילים יור מלוח 10% (פתרון ב). מיין את העוברים בשלב בהתאם לתכנית של Niewkoop ופייבר (אסמכתא 20). עוברים שימושיים יהיו אלה בשלב 22-24. 2A האיור מראה עובר בשלב 22 תוך כ 2B האיור מראה עובר כי הוא רחוק מדי יחד בפיתוח כדי להיות שימושי (כ שלב 28). חשוב לבחור עוברים שאינם בריאים: אלה שהם חלקים במראה בגוון החום בהירים ומנומר לבנים הם אידיאליים. עוברים שכתמים שחורים או לבנים גדולים הם בדרך כלל לא בריאים ולא תקינים. </li></ol> 2. Microdissection של עוברי Xenopus <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך מינרית זרימת מכסה מנוע, תווית ולמלא כשלוש 60x15 אמצע מנות מ&quot;מ סטריליים תרבות עם תמיסת מלח 10%, ואחת עם CMF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש, העברת סטרילי זכוכית פיפטה פסטר 09:55 שלב 22-24 עוברים לאחד המאכלים המכילים תמיסת מלח 10%. בעזרת זום סטריאו לנתחמיקרוסקופ ing בתוך מכסה המנוע (0.6-5x עם 10 עיניים x), להסיר את מעייל הריבה וקרום vitelline מכל עובר באמצעות שני זוגות מלקחיים סטריליים # 5 (11251-30, כלי מדע פיין). (ראה 3A ו 3 מספרים.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את העוברים החשופים על ידי עובר אותם, אחד בכל פעם, באמצעות שתי המנות הנותרות של תמיסת מלח 10% ולבסוף לתוך הקערה ובי CMF. השתמש פיפטה חדשה, סטרילית עבור כל העברה ולמזער את עוצמת הקול של פתרון הועבר ממנה למנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתורו, החזק כל עובר בעדינות אך בתקיפות עם זוג מלקחיים ו, ​​באמצעות כלי microdissection עצב בשלב 1.5, להסיר את הצינור העצבי וmyotomes קשורים אשר ממוקם בהיבט הגבי ביותר של בעלי החיים. עשה זאת על ידי ביצוע שלוש פרוסות, אחד בכל צד של המיקום של הצינור העצבי ושליש רק גחון אליו (איור 4 א). העבר כל צינור עצבי גזור / myotome לחלק נקי של המנה מהחלמון granules ופסולת אחרת (איור 4 ב). הציר הגבה-הגחון, ואת המיקומים של הצינור העצבי וmyotomes מסומנים באיור 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כ 15 דקות בפתרון זה (CMF) מלקחי שימוש כדי להרים את העור ללא פיגמנט הרקמה הגזורה וזורקים. לאחר 30-60 דקות נוספות, התאים יהוו &quot;ערימת חול&quot; כפי שהם היינו מנותקים אחד מהשני (4C איור). </li></ol> 3. הכנת עצבי שרירי Co-תרבויות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשר שפופרת 10 מ&quot;ל של מדיום התרבות והסביבה נקיה מחיידקים להוסיף 70 μl ו35 ng / ml-BDNF (סיגמא B3795). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית ולמלא 35 מנות מ&quot;מ סטריליים תרבות (FD35-100 מכשירי Precision העולם) בערך באמצע עם מדיום L-15 תרבות (פתרון (ה)), אחד עבור כל עובר הגזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפברק פיפטה ציפוי ידי אחיזה כל קצה של זכוכית פיפטה פסטר תוך החזקת החלק המחודד מעל להבה. לפרק את הקצוות לכ 10 סנטימטר ואז לשבור את הקצה להניב קצה של כ -0.2 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פיפטה הציפוי להתחנף &quot;ערימת החול&quot; שעובר אחד מהפחתת כמות הפתרון נמשכת. לגרש את התאים על תחתית צלחת תרבות. פלייט את התאים לכמה שורות. שים לב לא עברו התמיינות תאים מצופים (האיור 5A ו5B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשאיר את הכלים של תאי ציפוי ללא הפרעה במשך לפחות 15 דקות כדי לאפשר זמן התאים לצרף לתבשיל. </li></ol> 4. סינפסות clamping תיקון עצבי שרירים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 12-24 שעות בתרבות, תאי ציפוי לקחת על מאפיינים מורפולוגיים שונים: תאי שריר הופכים דמויים כישור והנוירונים שדרה להרחיב את תהליכים ארוכים (איור 6). קשר הסינפטי תפקודי בין varicosities neurite ותאי שריר יכול להיות מאושר עם הקלטות אלקטרו סימולטניים לזווג. &quot;ז&quot;, &quot;S&quot; ו &quot;V&quot; מתייחסים בהתאמה לתאי השריר, תאי עצבהסומא וvaricosity סינפטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שתי אלקטרודות תיקון להקלטה: אחד עבור varicosity presynaptic ואחד לתא השריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על האלקטרודה presynaptic, להכין פתרון amphotericin המכיל כדלקמן: הוסף DMSO μl 100 לצינור microcentrifuge 1.5 מ&quot;ל המכיל 5 מ&quot;ג amphotericin B (סיגמה A4888). מערבולת פתרון זה עבור 10 שניות. לאחר מכן, להוסיף 10 μl של פתרון זה לצינור microcentrifuge שני המכיל 625 K +-μl פתרון הפנימי לAmphotericin B (פתרון (ח)). מערבולת כאמורה לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את האלקטרודה מראש הסינפטית עם K amphotericin המכיל פתרון +-פנימי שהוכן בשלב 4.3 והאלקטרודה פוסט סינפטי עם פתרון K +-פנימי (פתרון (ז)). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף תקשורת במנת התרבות עם NFR ולהעביר אותו למיקרוסקופ ההפוך מצוידים באופטיקה לעומת השלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את שתי האלקטרודות בדיוק מעל היעדים שלהם. השג את השיתוף כל התאnfiguration עם אלקטרודה תא השריר לפני תצורת התיקון המחוררת עם אלקטרודה varicosity. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאשר את הפונקציונליות של סינפסה, depolarize varicosity עם מגבר מהדק תיקון (למשל Axopatch 200B, התקנים מולקולריים) תחת שליטת תוכנה (למשל על ידי 9 pCLAMP, התקנים מולקולריים) ולבחון את זרמי presynaptic וpostsynaptic בו זמנית. איור 7 מציג את הזרמים ראו בתגובה לצעדי depolarizing של מתח הניתנים לvaricosity presynaptic בהפרשים קבועים של 10 MV מ-30 mV ל40 mV. הזרמים פנימה ראו בתא presynaptic מתבצעים על ידי Na + ו Ca 2 + והזרמים החיצוניים על ידי + K. זרמים שנרשמו בתא postsynaptic הם תגובות לנוירוטרנסמיטר שוחרר מvaricosity ומתבצעים בעיקר על ידי + Na בערוצי הקולטן אצטילכולין ניאציניות. </li></ol>

<ol><li>Augustine, G. J., Eckert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Divalent+cations+differentially+support+transmitter+release+at+the+squid+giant+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Divalent cations differentially support transmitter release at the squid giant synapse.</a> J. Physiol. 346, 257-271 (1984).</li>
<li>Spitzer, N. C., Lamborghini, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+the+action+potential+mechanism+of+amphibian+neurons+isolated+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The development of the action potential mechanism of amphibian neurons isolated in culture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 73, 1641(1976).</li>
<li>Weldon, P. R., Cohen, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+synaptic+ultrastructure+at+neuromuscular+contacts+in+an+amphibian+cell+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Development of synaptic ultrastructure at neuromuscular contacts in an amphibian cell culture system.</a> J. Neurocytol. 8, 239-259 (1979).</li>
<li>Tabti, N., Poo, M. -M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTabti%2C+N+%22Culturing+Nerve+Cells%22">Culturing Nerve Cells</a>. Banker, G., Goslin, K. , MIT Press. Cambridge, Massachusetts. 137-153 (1991).</li>
<li>Yazejian, B., DiGregorio, D. A., Vergara, J. L., Poage, R. E., Meriney, S. D., Grinnell, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurements+of+presynaptic+calcium+and+calcium-activated+potassium+currents+regulating+neurotransmitter+release+at+cultured+Xenopus+nerve-muscle+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Direct measurements of presynaptic calcium and calcium-activated potassium currents regulating neurotransmitter release at cultured Xenopus nerve-muscle synapses.</a> J. Neurosci. 17, 2990(1997).</li>
<li>DiGregorio, D. A., Peskoff, A., Vergara, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+action+potential-induced+presynaptic+calcium+domains+at+a+cultured+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Measurement of action potential-induced presynaptic calcium domains at a cultured neuromuscular junction.</a> J. Neurosci. 19, 7846(1999).</li>
<li>Yazejian, B., Sun, X. P., Grinnell, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+presynaptic+Ca2%2B+dynamics+during+neurotransmitter+release+with+Ca2%2B-activated+K%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tracking presynaptic Ca2+ dynamics during neurotransmitter release with Ca2+-activated K+ channels.</a> Nat. Neurosci. 3, 566(2000).</li>
<li>Sun, X. P., Chen, B. M., Sand, O., Kidokoro, Y., Grinnell, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depolarization-induced+Ca2%2B+entry+preferentially+evokes+release+of+large+quanta+in+the+developing+Xenopus+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Depolarization-induced Ca2+ entry preferentially evokes release of large quanta in the developing Xenopus neuromuscular junction.</a> J. Neurophysiol. 104 (5), 2730-2740 (2010).</li>
<li>Xie, S. P., Poo, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+events+in+the+formation+of+neuromuscular+synapse%3A+rapid+induction+of+acetylcholine+release+from+embryonic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Initial events in the formation of neuromuscular synapse: rapid induction of acetylcholine release from embryonic neurons.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 7069(1986).</li>
<li>Li, P. P., Chen, C., Lee, C. W., Madhavan, R., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+filopodial+asymmetry+induced+by+synaptic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Axonal filopodial asymmetry induced by synaptic target.</a> Mol. Biol Cell. 22 (14), 2480-2490 (2011).</li>
<li>Feng, Z., Ko, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schwann+cells+promote+synaptogenesis+at+the+neuromuscular+junction+via+transforming+growth+factor-beta1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Schwann cells promote synaptogenesis at the neuromuscular junction via transforming growth factor-beta1.</a> J. Neurosci. 28 (39), 9599-9609 (2008).</li>
<li>Song, H. J., Ming, G. L., Poo, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cAMP-induced+switching+in+turning+direction+of+nerve+growth+cones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">cAMP-induced switching in turning direction of nerve growth cones.</a> Nature. 17 (6639), 275-279 (1997).</li>
<li>Morimoto, T., Wang, X. H., Poo, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+synaptotagmin+modulates+short-term+synaptic+plasticity+at+developing+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Overexpression of synaptotagmin modulates short-term synaptic plasticity at developing neuromuscular junctions.</a> Neuroscience. 82 (4), 969-978 (1998).</li>
<li>Lu, B., Czernik, A. J., Popov, S., Wang, T., Poo, M. M., Greengard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+synapsin+I+correlates+with+maturation+of+the+neuromuscular+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Expression of synapsin I correlates with maturation of the neuromuscular synapse.</a> Neuroscience. 74 (4), 1087-1097 (1996).</li>
<li>Schaeffer, E., Alder, J., Greengard, P., Poo, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapsin+IIa+accelerates+functional+development+of+neuromuscular+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Synapsin IIa accelerates functional development of neuromuscular synapses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 26 (9), 3882-3886 (1994).</li>
<li>Liou, J. C., Tsai, F. Z., Ho, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiation+of+quantal+secretion+by+insulin-like+growth+factor-1+at+developing+motoneurons+in+Xenopus+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Potentiation of quantal secretion by insulin-like growth factor-1 at developing motoneurons in Xenopus cell culture.</a> J. Physiol. 553 (Pt. 3), 719-7128 (2003).</li>
<li>Peng, H. B., Yang, J. F., Dai, Z., Lee, C. W., Hung, H. W., Feng, Z. H., Ko, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+neurotrophins+and+schwann+cell-derived+signals+on+neuronal+survival%2Fgrowth+and+synaptogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Differential effects of neurotrophins and schwann cell-derived signals on neuronal survival/growth and synaptogenesis.</a> J. Neurosci. 23 (12), 5050-5060 (2003).</li>
<li>Dan, Y., Poo, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hebbian+depression+of+isolated+neuromuscular+synapses+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hebbian depression of isolated neuromuscular synapses in vitro.</a> Science. 12 (5063), 1570-1573 (1992).</li>
<li>Xiao, Q., Xu, L., Spitzer, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-dependent+regulation+of+neurotransmitter+specification+and+embryonic+neuronal+calcium+spike+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Target-dependent regulation of neurotransmitter specification and embryonic neuronal calcium spike activity.</a> J. Neurosci. 30 (16), 5792-5801 (2010).</li>
<li>Niewkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNiewkoop%2C+PD+%22Normal+table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29%22">Normal table of Xenopus laevis (Daudin)</a>. , North-Holland, Amsterdam. (1967).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

שלבים עיקריים בשיתוף culturing המוצלח של תאי עצב אחראים ותאי שריר הנם שימוש במבוים עוברים נוצרים מהגידול המושרה של צפרדעי Xenopus כראוי, ונתיחה האספטי המדוקדקת של נוירונים בעמוד השדרה עברו התמיינות וmyoblasts. ביצים מופרות יש להשאירו כפי שעד שהם יגיעו לכ לביים 10 או כדי להעביר אותם במוקדם לעתים קרובות עוצר את התפתחותם. עוברים בריאים מזוהים במראה חלק וחום וצביעה מנומרת לבנה. 22-24 עוברי שלב הם שימושיים ביותר, כי זו היא הנקודה במהלך פיתוח רק לאחר סגירת הצינור העצבית ולפני myocytes שהבדיל באופן משמעותי. בנוסף, תאים מעוברים מבוגרים לא מצליחין לנתק גם בCMF. יש להקפיד בעת הסרת קרום vitelline כפי שהוא שומר מאוד לעובר. הקרום צריך לקרוע באמצעות מלקחיים חדים כך שהעובר יוצא ללא פגע. נוסף precautio החשובn הוא למקם את התאים בזהירות על תחתית צלחת התרבות (ולא לתת להם להתיישב שם). זוהי השיטה מועדפת כמו זה מגדיל את הסיכוי שהתאים ידבקו במנת התרבות. עצבי תפקודית בין העצב ושריר ניתן לקבוע עם הקלטה פשוט postsynaptic ולעתים קרובות ניתן לקביעה על ידי התצפית של התכווצות שרירים ספונטנית לאחר עצבוב. תאי שריר בלתי innervated לא מפרפרים בתרבות. הקלטת postsynaptic לבד שימושית עבור הקלטת זרמים זעירים endplate או פוטנציאלים, אך מדידות של שחרור עורר דורשות גירוי סינפטי, ומתאם של זרמים לפני וpostsynaptic דורש תיקון-מהדק כפול. מלבד שיטת ההקלטה לזווג-תיקון המתואר כאן, ההכנה הזאת מציעה את ההזדמנות להציג את פיפטה שלישית בסומה העצבית 5 זה מאפשר את הדור של פוטנציאל פעולה thaלא יכול להפיץ לvaricosity presynaptic ולהוביל לשחרור של נוירוטרנסמיטר. בנוסף, סוכנים משוערים, כי הם חשבו שיתווכו או לווסת את ההעברה הסינפטית יכולים להיות הציגו את שני צדי סינפסה: באמצעות פיפטה תא השריר או באמצעות דיפוזיה מפיפטה 3 הוצבה בסומה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ציוד / ספקים </td><td> מוכר </td><td> קטלוג / מספר דגם </td><td></td></tr><tr><td> אינסולין transferrin-סלניום </td><td> סיגמא </td><td> I1884 </td><td></td></tr><tr><td> גונדוטרופין כוריוני האנושי </td><td> סיגמא </td><td> CG-10 </td><td></td></tr><tr><td> Osmometer לחץ האדים </td><td> Wescor </td><td> 5100C שברשות </td><td></td></tr><tr><td> סיכות Minutien </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 26002-10 </td><td></td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> סיגמא </td><td> A4888 </td><td></td></tr><tr><td> מצבטים </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 11251-30 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם פתרון </td><td> מתכון </td></tr><tr><td> (א) (רינגר צפרדע הרגיל NFR (במ&quot;מ) </td><td> 116 NaCl, 2 KCl, 1.8 CaCl 2, 5 Na +-HEPES, pH 7.35. </td></tr><tr><td> (ב) 10% מלוחים </td><td> 10 מ&quot;ל 90 מיליליטר NFR deionized H 2 O </td></tr><tr><td> (ג) CMF (Ca 2 + / Mg 2 פתרון +-חינם) </td><td> 125 NaCl, 2 KCl, 1.2 EDTA, 5 Na +-HEPES, 7.35 PH. </td></tr><tr><td> (ה) מדיה L-15 תרבות </td><td> 50 מיליליטר L-15 מדיה (סיגמא L1518) + 50 המ&quot;ל NFR. </td></tr><tr><td> (ז) K +-פתרון פנימי (במ&quot;מ) </td><td> 116 KCl, 1 NaCl, 1 MgCl 2, 10 EGTA, 5 HEPES, 7.3 pH </td></tr><tr><td> (ח) K +-פתרון הפנימי לAmphotericin B (במ&quot;מ) </td><td> 52 K 2 SO 4, 38 KCl, 1 EGTA, 5 HEPES, pH 7.3 </td></tr></tbody></table></td></tr></tbody></table> Tablדואר 1.

סימולטני טרום והקלטת אלקטרו פוסט סינפטי מ<em&gt; xenopus</em&gt; עצבי שרירי co-תרבויות

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

מידע רב על הצימוד של זרמים יוניים presynaptic עם שחרורו של הנוירוטרנסמיטר הושג מהכנות חסרות חוליות, בעיקר התמנון הענקי 1 סינפסה. עם זאת, מלבד ההכנה שתוארה כאן, כמה הכנות חוליות קיימות בו ניתן לבצע מדידות בו זמניות של שחרור הנוירוטרנסמיטר וזרמים יוניים presynaptic. תאי עצב אחראים עובריים Xenopus ותאי שריר ניתן לגדל ביחד במדיום התרבות פשוט בטמפרטורת חדר, הם יהוו סינפסות פונקציונליות בתוך 12-24 שעות, והוא יכולים לשמש כדי לחקור עצב ופיתוח תאי שריר ואינטראקציות הסינפטי במשך כמה ימים (עד יתר מתרחש). יתרונות מסוימים של עמיתים לתרבויות אלה סביב הכנות חוליות אחרות כוללים את הפשטות של הכנה, את היכולת לשמור על התרבויות והעבודה בטמפרטורת חדר, ונגישות המוכנה של הסינפסות נוצרת 2-4. ההכנה כבר בשימוש נרחב כדי ללמוד את מאפייני biophysical של תעלות יונים presynaptic והרגולציה של שחרור משדר 5-8. בנוסף, ההכנה הלוותה עצמו לשימושים אחרים, כולל מחקר של התולדה וsynaptogenesis neurite 9-12, מנגנונים מולקולריים של הנוירוטרנסמיטר שחרור 13-15, התפקיד של שליחי diffusible בneuromodulation 16,17, ובפלסטיות הסינפטית מבחנה 18 - 19.

האיור 4B מראה נוף הגבי של חוט שדרה / myotome מבודד מייד לאחר הסרתו משלב 22 Xenopus העובר 4C. איור מראה כי, לאחר הסרת עור ודגירה בCa 2 +-Mg 2 +-פתרון חופשי (CMF, פתרון ( ג)), תאי לנתק ל&quot; ערימת חול &quot;והם מוכנים לציפוי. מייד לאחר ציפוי לתאים בינוניים התרבות יפגין שונות מורפולוגית קטנות (איור 5 ב), אבל קח בצורות שונות לאחר עשרים וארבעה שעות בתרבות. תאי שריר הופכים בצורת הציר זמן שנוירונים יישארו כדוריים תוך neurites הארכה שvaricosites המשוכלל בסינפסות עם תאי שריר (איור 6). הקלטת סימולטני לזווג תיקון מvaricosity סינפטי ותא השריר סינפטי (איור 7) חושפת את הזרמים פנימה והחוצה presynaptic קשורים בשחרור של נוירוטרנסמיטר וresultant מעורר זרמי postsynaptic. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig1.jpg" alt="איור 1"/> איור 1:.. זוג רבייה של צפרדעים בדלי הזדווגות על גבי מסך ב &#39;: צפרדעים בamplexus עם ביצים מופרות. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2:.. שלב &quot;מתאים&quot; 22 עובר B: שלב &quot;לא מתאים&quot; 28 עובר. סרגל קנה מידה מייצג 1 מ&quot;מ. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3: 22. עובר שלב לפני הסרת vitelline הקרום ומעייל ריבה. החץ מצביע על הקצה החיצוני של מעייל הריבה. קרום vitelline שומר באופן הדוק לembrיו והוא כמעט בלתי נראה ב &#39;:. עובר חשוף. סרגל קנה מידה מייצג 1 מ&quot;מ. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4: 22 עובר במה עם קו מקווקו מציין לביתור חלק ב &#39;:.. חלק הגבה מבודד חריפות של עובר; &quot;ד&quot; ו &quot;V&quot; מתייחסים להיבטי הגב וגחון של העוברים, ואילו &quot;מ&quot; ו&quot; n &quot;מציין את המיקום המשוער של mytomes והצינור עצבי C:.&quot; ערימת חול &quot;של תאים לאחר 60 דקות בCMF. סרגל קנה מידה מייצג 1 מ&quot;מ ול0.5 מ&quot;מ לB ו-C. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig5.jpg" alt="איור 5"/> איור 5:. נוף 5x כוח של תאים בתרבית מייד לאחר ציפוי. ב &#39;: את התרבות ב40X. סולםבר מייצג 40 מיקרומטר ול5 מיקרומטר לB. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig6.jpg" alt="איור 6"/> איור 6. צומת Neuromuscular בתרבות עם זיהוי של סומה העצבית (S), varicosity presynaptic (V), ותא השריר postsynaptic (M). סרגל קנה מידה: 5 מיקרומטר. <img src="/files/ftp_upload/50253/50253fig7.jpg" alt="איור 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50253/50253fig7highres.jpg"/> איור 7. זרמי presynaptic (למעלה) וpostsynaptic (תחתון) ראו בתגובה לבקשה של מתח 10 mV מצטבר צעדים שהוצגו לvaricosity presynaptic מ-30 mV ל40 mV. צעדי מתח מופיעים לצד כמה מעקבות presynaptic. הפוטנציאל מחזיק עבור שני התאים היה -70 mV.

סרטון זה מדגים את הנהלים משמשים לגידול תרביות ראשוניות של עוברי<em&gt; Xenopus</em&gt; עצב ותאי שריר והתועלת של תכשיר זה לביצוע הקלטות מהדקות סימולטניים לפני ואחרי-הסינפטי תיקון.

סימולטני טרום והקלטת אלקטרו פוסט סינפטי מ<em&gt; Xenopus</em&gt; עצבי שרירי Co-תרבויות

Much information about the coupling of  presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained  from invertebrate preparations, ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להוציא תרביות ראשוניות של נוירוניםC של העמוד השדרה המחוברים סינפטית ותאי שריר מעוברי xenopus. זאת מושגים תחילה על ידי השראת רבייה ב-xenopus באמצעות הזרקה של human chorionic gonadotropin לצפרדעים זכרים ונקבות ואיסוף ביצים מופרות. השלב השני הוא הסרת מעטפת הג'לי, העובר והקרומים מעוברי שלב 22.בשלב הבא, מבודדים נוירונים של עמוד השדרה ושרירים מהעובריים, ומסירים את העור ומשליכים אותו. השלב האחרון הוא זריעה של התאים המבודדים לצלוחי תרבית ומתן אפשרות להיווצרות של צמתים עצביים-שריריים (neuromuscular junctions) תפקודיים. לבסוף, ניתן להוכיח קיומן של קשרי סינפסה תפקודיים באמצעות הקלטות patch clamp זוגיות סימולטניות מנוירונים ומתאי שריר בתרבית.היתרון של טכניקה זו הוא שהיא מניבה תכשיר סינפטי של חולית הנגיש בקלות. ניתן להשתמש בה כדי לנטר שחרור של מוליכים עצביים באמצעות רישומים אלקטרופיזיולוגיים פוסט-סינפטיים, תוך מדידה סימולטנית של הופעת יונים פרה-סינפטיים. יתרה מכך, השיטות ברורות ופשוטות, ואינן דורשות ציוד מיוחד מעבר למיקרוסקופ דיסקציה, ולאחר מכן ניתן לאחסן את התרביות בטמפרטורת החדר בתוך תוצר תרבית פשוט.הכנה זו עשויה להועיל במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הפיזיולוגיה הסינפטית, כולל האופן שבו אירועים פרה-סינפטיים, ביוכימיים וביופיזיקליים מצומדים לשחרור מוליכים עצביים. בנוסף, היא שימושית גם לחקר נוירומודולציה, סינפטוגנזה ופלסטיות סינפטית. כדי להתחיל בהליך זה, הכין את התמיסות הנדרשות בהתאם למאמר המצורף. לאחר מכן, הכן לפחות שני כלי מיקרו-דיסקציה על ידי הדבקת סיכת מינוצ'ין (minuchin pin) לקצה של פיפטת זכוכית מסוג פסטייר.בעזרת דבק אקרילי מסוג Sano, אפשרו לקצה החד של הסיכה לבלוט מעבר לקצה הפ pipette בכ-0.5 סנטימטרים. יומיים לפני הכנת התרביות, זהו זוג XUS שמוכן להרבייה על ידי התבוננות ב-aika אדום בולט בטופר של הנקבה ובפיגמנטציה כהה על המשטח המישורי של כפות הרגליים הקדמיות של הזכר. לאחר מכן, דגו כל צפרדע בעזרת רשת והחזיקו אותה כשהצד הבטני פונה כלפי מטה בכיור עם הרשת, כך שהיא תוכל להימלט.הזריקו מיליליטר אחד של HCG דרך הרשת ובאופן תת-עורי לאחד משקי הלימפה הגביים כדי להבטיח שהחיות לא ידרסו את הביצים שהוטלו וההופרה לאחרונה. התקינו רצפה מסוננת עם גודל רשת של half inch, המותאמת לגובה של one to two inches בתחתית המיכל. לאחר מכן, הניחו את זוג הרביה יחד במיכל מים מכוסה בנפח של 10 gallon.השאירו את הצפרדעים ללא הפרעה למשך 12 עד 48 שעות, עד שניתן יהיה להבחין בביצים מופרות על הרצפה מתחת לרשת. לאחר מכן, הוציאו את בעלי החיים מהמיכל, אך השאירו את הביצים ללא הפרעה למשך 24 שעות נוספות לפחות. ניתן להזרבית זוג צפרדעים זה שוב לאחר שש שבועות.בשלב הבא, שחררו את העוברים מהתחתית של המיכל והעבירו אותם לארבעה או חמישה צלחות תרבית של 60 על 15 מילימטר המכילות 10%saline. מיינו את העוברים לפי שלב ההתפתחות בהתאם לסכמה של new coupe and Faber; עוברים בעלי מראה חלק עם גוונים בהירים של חום ולבן, כפי שמוצג משמאל, הם אידיאליים. לעומת זאת, עוברים בעלי כתמים שחורים או לבנים גדולים, כפי שמוצג מימין, הם בדרך כלל אינם בריאים ואינם ניתנים לשימוש.בתוך מ supported-laminar flow hood, סמנו ומלאו עד למחציתם בערך צלחות תרבית סטריליות בקוטר 360 ומסוג 15 מילימטר עם 10% saline, וצלחת אחת עם CMF. בעזרת פיפט פסטור מזכוכית סטרילית, העבירו חמישה עד 10 עוברים בשלבים 22 עד 24 לאחת הצלחות המכילות 10% saline. תחת מיקרוסקופ סטריאו-זום בתוך המכסה, הסירו את מעטפת הג'לי ואת קרום הווללה (viel membrane) מכל עובר באמצעות שני זוגות פינצטות סטריליות. שטפו את העוברים החשופים על ידי העברתם אחד אחד דרך שתי הצלחות הנותרות של 10% saline, ולבסוף אל הצלחת המכילה CMF.בשלב הבא, החזיקו כל עובר בעדינות אך בבטחון באמצעות פינצטה והשתמשו בכלי למיקרו-דיסקציה כדי להסיר את צינור העצבים ואת המיוטומים הנלווים, הנמצאים בחלק הגבי (dorsal) ביותר של בעל החיים. בצעו זאת על ידי ביצוע שלושה חתכים: אחד בכל קצה של מיקומו של צינור העצבים, וחתך שלישי ממש בוונטרלי (ventral) לו. לאחר מכן, העבירו כל מקטע של צינור עצבים ומיוטומים שבודדו לחלק נקי של הצלחת, הרחק מגבשושי החלמון ומפסולת אחרת.לאחר כ-15 דקות ב-CMF, השתמש בפינצטה כדי להסיר את העור הפיגמנטרי מהרקמה שהודחקה והשלך את העור. לאחר 30 עד 60 דקות נוספות, התאים יצרו ערימה דמוית חול ככל שיתנתקו זה מזה. בהליך זה, הפשר מבחנה של 10 milliliter של תווך תרבית, לאחר מכן הוסף 70 microliters של ITS בריכוז 35 nanograms per milliliter, BDNF label ומלא את צלחות התרבית הסטריליות בנפח 35 millimeter בערך עד מחציתן בתווך תרבית L 15.השתמשו בצלחת תרבית אחת עבור כל עובר ש dissection שלו בוצע. כדי להכין פיפט לזריעה, החזיקו את שני קצותיה של פיפט פסטורי מזכוכית והניחו את החלק המצר במגע עם להבה. לאחר מכן, משכו את הקצוות זה מהזה למרחק של כ-10 סנטימטרים.לאחר מכן, שברו את הקצה כדי לקבל חוד של כ-0.2 מילימטרים. לאחר מכן, השתמשו בפיפטת הזריעה כדי לשאוב את ערימת החול מעל עובר אחד. הקפידו למזער את כמות התמיסה הנשאבת.בשלב הבא, פלט את התאים לתחתית של צלחת תרבית ופזר אותם במספר שורות. לאחר מכן, השאר את הצלחות עם התאים המפוזרים ללא הפרעה למשך 15 דקות לפחות, כדי לאפשר לתאים זמן להיצמד לצלחת. לאחר 12 עד 24 שעות בתרבית, התאים המפוזרים יפתחו מאפיינים מורפולוגיים מובחנים.לדוגמה, תאי שריר מקבלים צורה של כישור ונוירונים של חוט השדרה מפתחים שלוחות ארוכות. ניתן לאשש קשר סינפטי תפקודי בין הווריקוסיטיות לבין תאי השריר באמצעות רישומי אלקטרופיזיולוגיה בזוגיות בו-זמנית. לשם כך, הכינו שתי אלקטרודות patch לרישום, אחת עבור הווריקוסיטיות הפרה-סינפטית ואחת עבור תא השריר.לאחר מכן, מלא את האלקטרודה הפרה-סינפטית בתמיסה המכילה info terin ואת האלקטרודה הפוסט-סינפטית בתמיסה פנימית של אשלגן. לאחר מכן, החלף את המצע בצלחת התרבית ב-NFR. העבר את הצלחת למיקרוסקופ הפוך המצויד באופטיקה של ניגודיות פאזה (phase contrast), בצע patch של הבלט (varicosity) הפרה-סינפטי באמצעות האלקטרודה המכילה amphotericin ושל תא השריר הפוסט-סינפטי באמצעות האלקטרודה השנייה כדי לאשר את תפקוד הסינפסה, גרם לדפולריזציה של הבלט באמצעות מגבר patch clamp, וצפה בזרמים הפרה-סינפטיים והפוסט-סינפטיים הסימולטניים.איור זה מציג תצוגה בהגדלה של 5x של תאים ותרבית מיד לאחר הזריעה, וזוהי אותה תרבית בהגדלה של 40x. כאן מוצג המפגש העצבי-שרירי (neuromuscular junction) בתרבית, המראה את גוף התא העצבי (neuronal soma), את הבליטה הפרה-סינפטית (presynaptic varicosity) ואת תא השריר הפוסט-סינפטי. כאן מוצגים הזרמים הפרה-סינפטיים והפוסט-סינפטיים.בתגובה למדרגות מתח של 10 millivolt שהופעלו על הvaricosity הפרהסינפטי, ממינוס 30 millivolts ועד פלוס 40 millivolts, פוטנציאל ההחזקה עבור שני התאים היה מינוס 70 millivolts. ברגע שהטכניקה נשלטת, ניתן להשלימה תוך כשעתיים. לאחר מכן ניתן לקבל תרביות תאים חיות תוך 24 שעות, וניתן לתחזק אותן במשך מספר ימים. תכשיר זה נמצא בשימוש כבר מספר שנים, ומסייע בהסברת חלק מהתכונות הבסיסיות של התמסורת הנוירו-שרירית.תקוותנו היא שסרטון זה יאפשר את המשך הגילויים על ידי סיוע לחוקרים להכיר טוב יותר טכניקה רבת עוצמה ופשוטה זו.

simultaneous-pre-post-synaptic-electrophysiological-recording-from

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן אנו מתארים שיטות אלקטרו למדידת בשידור סינפטי בצומת neuromuscular של הזחל תסיסנית. שחרור עורר היא יזמה באופן מלאכותי על ידי המרצת הנוירונים אקסונים מוטוריים, והעברת דרך NMJ ניתן למדוד התגובה postsynaptic עורר בשריר.

שיטות אלקטרו עבור הקלטה פוטנציאלים Synaptic מן NMJ של הזחלים תסיסנית

יישום electrophysiology כדי סינפסות נגיש מספק מדד לכימות הפעילות הסינפטית, שימושי בניתוח מוטנטים הסינפטי. מאמר זה מתאר שיטה לנתיחה נהג לחשוף את בצמתים neuromuscular (NMJ)...

הביתור, הקלטה מ צומת C. elegans Neuromuscular

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

השריר פותחן של הרגל סרטנים מוצג חשיבותו ההיסטורית צדדיות ניסיוני פנוטיפ שרירים, פיזיולוגיה ואת הפלסטיות הסינפטית.

צפה היסטורי הפגנה לפיזיולוגיה NMJ של השריר פותחן סרטן הנהרות

מאמר זה מדגים כיצד לנהל הקלטות אלקטרו התגובות הסינפטי על השרירים extensor ברגל הליכה של סרטן וכיצד מסופי העצב הם דמיינו כדי להראות את ההבדלים המורפולוגיים ברוטו גבוהה ונמוכה פלט מסופים עצב.

הקלטות פיזיולוגיים של NMJs פלט גבוה ונמוך על שרירים ברגליים סרטן הנהרות extensor

שיטה חדשה זו מאפשרת הקלטה התאית סימולטני של motoneuron אחת מבוגר עכבר והמדידה של הכח הנוצר על ידי סיבי השריר שלה. החקירה בשילוב של תכונות החשמליות ומכאניות של יחידות מוטוריות בבעלי חיים רגילים ועבר שינוי הגנטי היא פריצת דרך בחקר מערכת התוקפת.

הקלטה תאית סימולטני של Motoneuron מותנה והחיל הופק על ידי יחידת המנוע שלה בעכבר למבוגרים<em&gt; בחי</em

סרטון זה מציג הקלטות אלקטרופיזיולוגיות מתרביות אורגנוטיפיות של פרוסות חוט השדרה, שצולמו באמצעות מערך מרובה אלקטרודות או מכשיר MEA. הקלטות אלה מעריכות התחדשות עצבית בין הפרוסות. הפעילות החשמלית המסונכרנת שנצפתה מאשרת רגנרציה עצבית מוצלחת.

רישומים אלקטרופיזיולוגיים להערכת התחדשות עצבית בפרוסות חוט שדרה בתרבית משותפת

סרטון זה מדגים את הליך השימוש במערך רב-אלקטרודות (MEA) למדידת פיזיולוגיה סינפטית בספירות קוקולטורה תלת-ממדיות. שיטה זו מאפשרת להבין את הדינמיקה של הרשת העצבית ואת פעילות פרץ הרשת הסינפטית בתוך הספירות התלת-ממדיות.

שימוש במערכים מרובי אלקטרודות למדידת פיזיולוגיה סינפטית בספירות קוקולטורה תלת-ממדית

בבעלי חיים עם נוירונים שזוהו גדולים...

Extracellularly זיהוי תאי עצב מוטורי לשריר בברכת מוטור<em&gt; Aplysia californica</em

ניתן להקליט זרמים סינפטית focally מ עם העיתון ons סינפטית מטמיעים בצומת דרוזופילה השלישי לחלל הזחלים עצב-שריר. טכניקה זו מאפשרת פיקוח על הפעילות של בוטון סינפטית יחיד.

מוקד Macropatch הקלטות של זרמי סינפטית מצומת דרוזופילה Neuromuscular זחל

בנייר זה, נדון שלושה תכשירים המוח משמש עבור כל תיקון קלאמפ הקלטה ללמוד את המעגל retinotectal של ראשנים של צפרדע רפואית זריזה . כל הכנה, עם יתרונות ספציפיים משלה, תורמת ללקוחות שלנו ניסיוני של הראשן צפרדע רפואית כמודל ללמוד תפקוד מעגלים עצביים.

ההכנות ופרוטוקולים עבור כל תא, תיקון קלאמפ הקלטה של נוירונים Tectal צפרדע רפואית זריזה

למדו לבודד תרביות ראשוניות של נוירונים ותאי שריר מעוברי Xenopus. השיטה מאפשרת הקלטות פאץ' קלאמפ סימולטניות לחקר פיזיולוגיה סינפטית ומנגנוני שחרור נוירוטרנסמיטרים בחיבורים נוירו-שריריים.

סימולטני טרום והקלטת אלקטרו פוסט סינפטי מ

גלה סרטונים נוספים