דגם של עירוי מזין כרוני בחולדה

פרוטוקול לחליטות כרוניות של גלוקוז וIntralipid בחולדות מתואר. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעה של עודף חומרי מזון על תפקוד איברים ופרמטרים פיסיולוגיים.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לצנתר את ורידי הצוואר ועורקי הצוואר של חולדות כדי להחדיר גלוקוז ושומנים כמודל לעודף חומרים מזינים כרוני. זה מושג על ידי צנתור ראשון, וריד הצוואר ועורק הצוואר בהרדמה כללית. לאחר ההליך, נותנים לחולדה להתאושש במשך שישה ימים.

לאחר מכן הצנתרים מחוברים למשאבות עירוי דרך קשירה ומסתובב המותקנים על החלק העליון של הכלוב. לבסוף, החולדה מוזרקת בתמיסות גלוקוז ושומנים. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות את ההשפעות של עודף חומרים מזינים כרוני על הומאוסטזיס גלוקוז.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני מודלים אחרים, כמו מודלים גנטיים, למשל, הוא שניתן לבחון את השינויים המוקדמים בתפקוד תאי הבטא בתגובה לעודף נוטריינטים. היתרון הנוסף הוא שניתן לווסת באופן ספציפי את רמות הגלוקוז והתוך ליפידים או השומנים במחזור הדם. כעת, אנו משתמשים בטכניקה זו כדי לבחון שינויים בתפקוד תאי בטא, אך כמובן, ניתן להשתמש בה כדי להסתכל על פרמטרים פיזיולוגיים אחרים כגון תנגודת לאינסולין.

לדוגמה, תדגים את ההליך גרייס פרגוסון, טכנאית בריאות בעלי חיים במעבדה שלי, לפני שתתחיל, תעקר את כל המכשירים הכירורגיים על ידי חיטוי לפחות 16 עד 24 שעות לפני ההליך. הנח את צינור הקנולציה לתוך 2.6% גלוטה אלדהיד לעיקור. באמצעות ארבע חולדות לכל מצב עירוי, שקלו כל חולדה ולאחר מכן חישבו את המינונים עבור משככי כאבים ותרופות אנטיכולינרגיות.

לאחר הרדמת החולדה עם 2 עד 3% איזו, פלואור וחמצן, בדוק את רמת ההרגעה לפי הבוהן. צבטו והניחו את החולדה על בטנה. לגלח את האזור שמאחורי האוזניים עד לבסיס הכתפיים, ואז להפוך את החיה על גבה, ולגלח את האזור שמתחת לצוואר לכפות הקדמיות.

לאחר מכן, יש לחטא את מקום הניתוח שלוש פעמים באלכוהול כלורהקסידין ויוד, ולאחר מכן לתת קרפרופן וגליקופירולאט. העבירו את החולדה לאזור הניתוח, ולאחר מכן בטכניקה אספטית. באמצעות צינורית PE 50 המחוברת למזרק מיליליטר אחד מלא בחמש יחידות של מי מלח הפריניזציה, קנול את וריד הצוואר הימני ועורק הצוואר השמאלי כדי למנוע קרישה במהלך תקופת ההחלמה, שטוף את הצינוריות ב-50 יחידות של מי מלח הפריניים דרך מחט קהה בגודל 23, ולאחר מכן השתמש בסיכת מד נוספת של 23 כדי לסגור כל צינורית לאחר הניתוח, חתוך כ -2.5 מילימטרים מתחתית החותכות, והניח את החולדה במעיל עירוי כדי למנוע את אכילת הצינוריות.

כדי לסייע בפינוי ה-ISO פלואור, יש לתת חמצן בקצב של ליטר אחד לדקה. הניחו את החולדה בכלוב מחומם עד שהיא ערה לחלוטין. ביום הראשון והשני, לאחר הניתוח.

שקלו את החולדות, תנו גליקופירולאט, תת עורי פעמיים ביום הראשון ופעם אחת ביום השני, וספקו טיפולים נוספים במידת הצורך בהתאם לפרוטוקול הטקסט ביום השביעי לאחר הניתוח. לאחר שקילת כל חולדה כדי לחשב את קצב הזרימה לעירוי, חבר את הצינורית של וריד הצוואר על ידי הארכת צינור בתוך הקפיץ לסיבוב הכחול. שטפו את הצינוריות בחמש יחידות של מלח הפריני וחברו אותן לקשירה.

לאחר מכן חבר את החולדה למערכת העירוי באמצעות הקשירה והסיבוב. כעת שטפו את הצינוריות פעם נוספת בחמש יחידות של מי מלח שעברו הפרין כדי למנוע קרישה. אפשר לחולדות להתאקלם לקשירה ולהסתובב לפחות 24 שעות לפני תחילת העירוי לביצוע העירוי.

התחל בשאיבת 0.15 מיליליטר דם מהצוואר של כל חולדה ומדוד גליקמיה. שטפו את צינוריות הצוואר והשתמשו ב-50 יחידות של מי מלח שעברו הפרין כדי למנוע קרישה של שתי הצינוריות. העבירו את דגימת הדם לצינור איסוף של 0.5 מיליליטר המכיל 2% EDTA, ואז צנטריפוגה ב-10,000 RBM למשך שתי דקות, והקפיאו את הפלזמה במינוס 20 מעלות צלזיוס.

מלאו שני מזרקים של 60 מיליליטר לכל אחד מתנאי העירוי המפורטים כאן. השתמש במחברי y ובצינורות coex T 22 מעוקרים כדי לחבר כל זוג פתרונות יחד. לאחר מכן הנח את המזרקים על משאבת Harbor 33 למזרק, הנח את המזרק הראשון במיקום הקדמי של המשאבה והמזרק השני במצב האחורי.

לאחר מכן, החלף את תחתית הכלוב והסר את כל המזון מהחלק העליון של גריל הכלוב לפני החלפתו ב-150 גרם צ'או רגיל. לאחר מכן חבר את המזרקים למסתובב על גריל הכלוב ושטוף את המזרקים כראוי. כדי להסיר אוויר כלוא מהקווים באמצעות משקל הגוף שנקבע לאחרונה, חשב את קצב זרימת העירוי באמצעות קובץ אקסל הממיר את קצב עירוי הגלוקוז או GIR למיליליטר לשעה על סמך רמות הגלוקוז שנקבעו מראש שרצוי לשמור לאורך כל הניסוי.

הגדר את המשאבה לניהול קצבי זרימה עבור 60 מזרקים בהתאם להגדרות היצרן, והזן את הקצב עבור מזרק אחד ומזרק שני. ואז הפעל את המשאבה. לאחר הפעלת המשאבה, ודא כי אין דליפה מהמסתובב או מהקנולות וכי צינור העירוי אינו מעוות.

כמו כן, ודא שאין בועות אוויר בצינור. לאחר שלוש שעות של עירוי, קח דגימת דם קטנה והשתמש במוניטור גלוקוז נייד כדי למדוד ציור גליקמיה. נפחים קטנים ימנעו שינוי בנפח הדם ו/או המטוקריט.

קח דגימות דם נוספות באמצעות לוח זמנים זה. בהתבסס על ערכי הגליקמיה הנמדדים, שנה את קצב המזרק הראשון כדי לשמור על רמת הגלוקוז בדם ב-220 עד 250 מיליגרם לדציליטר. קצב המזרק השני נשאר קבוע כדי לשמור על חומצות שומן חופשיות במילי-מול אחד לליטר.

לאחר 24 שעות של עירוי, החלף את תחתית הכלוב ושקול את המזון שנותר בגריל הכלוב. החזירו את חלק ה-UNE לכלוב, גרלו ומלאו מזרקים לפי הצורך לאורך 72 השעות. התבונן בחולדה לאיתור סימנים של דלקת או אי נוחות והעניק טיפול מתאים לפי הצורך.

בתום העירוי, חולדות יכולות לעבור מחקרי מהדק היפראינסולינמי היפרגליקמי או u גליקמי, ולאחר מכן להמתת חסד או המתת חסד כדי לאסוף את הלבלב לצורך היסטולוגיה או בידוד לולאות. נתון זה מציג את רמות הדם, הגלוקוז וחומצות השומן במהלך תקופת העירוי של 72 שעות. כפי שמוצג כאן בתכנון, רמות הגלוקוז נשמרות בסביבות 220 עד 250 מיליגרם לדציליטר לאורך כל העירוי.

למכרסמים יכולת חזקה לפצות על עירוי הגלוקוז על ידי הגברת הפרשת האינסולין האנדוגנית. לכן, יש להגדיל את ה-GIR במהלך העירוי כדי לשמור על רמות הגלוקוז בדם במצב יציב יחסית. עם זאת, רמות הגלוקוז בדם נוטות לרדת לקראת סוף העירוי.

בנוסף, בהתבסס על מדידות משקל של צ'או, מכיוון שבעלי החיים המושרים בגלוקוז ותוך שומנים מקבלים חומרים מזינים קלוריים, הם מפחיתים באופן ספונטני את צריכת המזון שלהם. בניגוד לחולדות הביקורת המוחדרות במי מלח לאחר ששולטים בהן, טכניקה זו יכולה להתבצע תוך 30 עד 40 דקות לכל חולדה אם היא נעשית כראוי. אז בעקבות הליך זה, אנו בדרך כלל מבצעים מהדקים אנמיים היפר-אינסולין היפרגליקמיים או U גליקמיים כדי למדוד הפרשת אינסולין או רגישות לאינסולין בהתאמה.