High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

Jessica M. Baker; Frederick M. Boyce

doi:10.3791/50282

הקרנה פונקציונלית תפוקה גבוהה באמצעות assay בלוציפראז Dual-זוהר תוצרת בית

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

הקרנה פונקציונלית תפוקה גבוהה באמצעות assay בלוציפראז Dual-זוהר תוצרת בית

Full Text

24,510 Views

12:55 min

June 1, 2014

DOI: 10.3791/50282-v

Jessica M. Baker¹, Frederick M. Boyce¹

¹Department of Neurology,Massachusetts General Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

אנו מציגים שיטת סינון מהירה וזולה לזיהוי רגולטורים תעתיק באמצעות transfections רובוטית תפוקה גבוהה וassay בלוציפראז כפול זוהר תוצרת בית. פרוטוקול זה במהירות מייצר נתונים פונקציונליים Side-by-צד ישיר לאלפי גנים והוא שינוי בקלות למקד כל גן של עניין.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לזהות מווסתי שעתוק של כל גן מעניין באמצעות פרוטוקול טרנספקציה פשוט בתפוקה גבוהה ובדיקת לוציפראז זוהר כפול תוצרת בית. זה מושג על ידי תכנון ושיבוט ראשון של קבוצה ייחודית של פלסמידים מדווחים כפולים של לוציפראז. פלסמידים אלה מועברים ל-2 9 3 תאי T במיקרו-פלייט עם פלסמידים מספריית ביטוי DNA, כך שכל באר מועברת עם פלסמיד ספרייה יחיד.

לאחר 48 שעות, נבדקת פעילות לוציפראז גחלילית, ואחריה נבדקת פעילות לוציפראז וניל. השלב האחרון הוא חישוב יחסי הפעילות של גחלילית ללוציפראז וניל. בסופו של דבר, האינדוקציה היחסית של הגן המעניין בתגובה לכל ספרייה.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos