Name: מודלים עכבר לטרשת עורקים שתל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: למד את פרוטוקול השתלת כלי דם בעכברים לחקר טרשת עורקים שתל. השיטה מאפשרת הערכת השפעת שינויים גנטיים על מחלת העורקים ומסייעת בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענקי R01 HL109420 לWM וAHA 9320033N לLY.

שתל עכבר ומודל השתלת שתל syngeneic כל המחקרים בבעלי החיים אושרו על ידי הטיפול בבעלי החיים המוסדיים וועדות שימוש באוניברסיטת ייל. עבור דגם שתל, קטעים של אב העורקים החזי מזכר, 4-5 הישן WT שבוע (C57BL/6J) או עכברי IFN-γR ק.ו. היו התערב לאב העורקים בבטן של נמען נשי, WT 8-12 השבוע הישן באמצעות קצה ל סוף טכניקת microsurgical anastomotic (ראה הבא לפרטים נוספים). עבור דגם שתל syngeneic, קטעים של aortae בית החזה מעכברי זכרים, 4-5 בשבוע ישן WT היו התערב לaortae הבטן של זכר, 8-12 בשבוע ישן IFN-γR1-KO באמצעות טכניקת anastomotic microsurgical מקצה לקצה. בשבוע שלאחר ניתוח 1, החיות היו מחוסנת IV עם Ad5.CMV עכבר IFN-γ או Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) בשעה 10 9 PFU x 1. סרום עכבר IFN-γ הרמות נמדדו על ידי ELISA (eBioscience) בשעה 1 ו5 שבועות לאחר מתן אדנווירוס. חיות מסוימות קיבל BrdU(סיגמא אולדריץ &#39;) ב 100 מ&quot;ג / ק&quot;ג SC עבור 2 שבועות לפני הקרבה. מקצה לקצה טכניקת anastomotic microsurgical (וידאו יילקח לחלק זה): 1. נוהל תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי את העכברים התורמים עם זריקות intraperitoneal של קטמין (50 מ&quot;ג / ק&quot;ג) וxylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שווידאת הרדמה נאותה, הנח את העכברים התורמים תחת מיקרוסקופ בהגדלה של X8-30 על מגש במצב שכיבה, ולהשתמש בפד Prep יוד והאלכוהול Prep פד להכנת קיר חזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את קיר החזה הקדמי דרך הצלעות והסרעפת כדי לחשוף את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפתוח את העלייה הימנית, להזריק 10 מ&quot;ל של heparinized (100 U / מ&quot;ל) תמיסת מלח לתוך החדר השמאלי כדי לשטוף את העכברים באמצעות מזרק 10 מ&quot;ל עם מחט 25 מד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכרות את הלב וריאות על מנת לחשוף את כל אורכו של אב העורקים החזי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את אב העורקים החזי בזהירות כדי למזער את הטראומה הישירה, whilהדואר לזהות, לקשור ולחלק את ענפי העץ באמצעות 11-0 תפר בסמוך לאב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהאב העורקים החזי הוא חופשי מרקמות, אב העורקים החזי כל הבלו להשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הקצוות של אב העורקים התורם עם תמיסת מלח heparinized (100 U / מ&quot;ל), ולאחסן אותו באותו פתרון על קרח (HR עד 6) עד להשתלה. </li></ol> 2. נוהל נמען <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק את עכברי הנמען עם ketoprofen IP (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) לשיכוך כאבים, וthenanesthetize העכברים עם קטמין IP (50 מ&quot;ג / ק&quot;ג) וxylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג). את עכברי הנמען הם הרדמה עמוקה בתוך 10 דקות למשך תקופה של 60-90 דקות. במהלך ניתוח, ברמה של הרדמה נבחנת בכל 15 דקות על ידי צובט את קיר הבטן הקדמי או רגל באמצעות מלקחיים. אם בעל החיים מגיבים לגירויים המזיקים בכל עת במהלך ניתוח, מנה נוספת של קטמין ו xylazine (1/4 או מינון מקורי 1/3) תנוהל על ידי SC או im </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שווידאת הרדמה נאותה, לגלח את הפרווה בדופן הבטן הקדמי באמצעות מכונת גילוח חשמלי, לנקות את העור באמצעות יוד Prep פד ופד Prep אלכוהול, לכסות את העיניים בשימוש במשחת עיניים. במהלך ניתוח, בטכניקות אספטיים הבאות תשמש לפעילות, כולל ניקוי שולחן ניתוחים עם 10% אקונומיקה, לובש כפפות סטריליות ושימוש במכשירי microsurgery מעוקרים (מכשירי קיטור מעוקרים לתחילת המבצע, זכוכית חמה אז חרוז מעוקר מכשירים בין פעולות מרובות, וכו &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את עכברי הנמען תחת מיקרוסקופ בהגדלה של X8-30 על מגש במצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את דופן הבטן בקו האמצע מxyphoid לחיק, ולהפיץ את דופן הבטן בנפרד באמצעות מיקרו-מפשק כדי לחשוף את חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור בו את המעיים superiorly ולעטוף עם גזה טבולה בתמיסת מלח. את עכברי הנמען להיות מקוררים על ידי אובדן של חימוםלא דרך מעיים המוחצנים. זה חשוב כדי לשמור על חום של בעלי חיים. עם זאת, לוח החימום לא נעשה שימוש במהלך הניתוח כהיפותרמיה צנועה היא תועלת במניעת פגיעה בעמוד השדרה בעת החסימה של זרימת דם אב העורקים וכן יש העברת חום יעילה עם זרימת דם נעדר למחצית התחתונה של גוף העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזיז את איברי הרבייה inferiorly, לעטוף את אזורי הבטן של עכברי נמען עם מי מלח-פתרון טבולה גזה, ולהשתמש בו כדי לחזור לפי הטבעת בצד ימין של הבטן. הרקמות החשופות מושקות מעת לעת עם תמיסת מלח במהלך ההשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח בוטות קטע של אב העורקים infrarenal בין כלי כליות proximally והסתעפות אב העורקים distally ולהיפרד מנחות וריד נבובה (IVC) בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות ולקשור את כל הענפים הקטנים שמקורם בקטע זה של אב העורקים בבטן באמצעות 11-0 התפר monofilament פוליאמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצות מהדק הקטע הבודד שלאב העורקים bdominal באמצעות שני חבקי כלי דם סמיכות 5 מ&quot;מ זה מזה, אחד בכל קצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect אב העורקים בבטן בין מלחציים באמצעות מיקרו מספריים חדים כדי ליצור את אתרי anastomotic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכרות קטע קטן של אב העורקים בבטן (עד 0.4 מ&quot;מ באורך) מקצה אחד של חתך אב העורקים נמען transected כדי להכיל את השתל של אב העורקים התורם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף מגזרי אבי העורקים בין מלחציים באמצעות תמיסת מלח heparinized כדי להסיר את הדם שיורית. מגזרי אבי העורקים בין מלחציים ושתלו אב העורקים התורם מושקים מעת לעת עם פתרון heparinized (100 U / ml) מלוח (מ&quot;ל / ק&quot;ג עד 40) בזמן ההשקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect שני הצדדים של אב העורקים תורם עם מיקרו מספריים חדים כדי ליצור שתל קטע של 2.5 מ&quot;מ באורך להשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השתל של אב העורקים התורם בעמדת orthotopic, anastomose הקצה הפרוקסימלי והדיסטלי של שתל מתורם לסוף חתך פרוקסימלי ודיסטלי של הנמען של אב העורקים בבטן, בהתאמה, עם תום-Tדפוס O-end באמצעות 11-0 התפר monofilament פוליאמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפרים הרציפים, למקם את התפרים להישאר ב3 ו09:00 עמדות ראשית. בין שני תפרים להישאר בכל צד של שתל, anastomose שני קצוות לחתוך בתפרים 3-4 תוך שימוש בתפרים בריצה, ולקשור את התפרים פועלים כדי להישאר עם תפרי קשר כפול. מאחר ששתי השכבות של סגירה הן רציפה, את הסיכון של בקיעה הוא גדל. השתל של אב העורקים התורם צריך להיות באורך המתאים כדי להתחבר סוף חתך פרוקסימלי ודיסטלי של הנמען של אב העורקים בבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפרים, לבנות ארבע השקה ב 3 ו09:00 עמדות בשני הצדדים של שתל ראשית, וanastomose שני הקצוות לחתוך בתפרי 3-4 בין שני תפרים להישאר בכל צד של שתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את מהדק דיסטלי כדי לאפשר את הזרימה מדרדר לתוך שתל, לזהות את האתרים המדממים ולעשות תפרים נוספים תוך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר בירור hemostasis משביע רצון, לשחרר את המהדק הפרוקסימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר את patency השתל על ידי נוכחות של פעימה נמרצת בשתל ובמגזר הצמוד הפרוקסימלי של אב העורקים בבטן האם, בפרט במגזר הצמוד הדיסטלי של אב העורקים בבטן ועורק mesenteric נחות. שקול פקקת באתרי anastomotic אם הפעימה לצמצם תוך כמה לאחר השיקום של זרימת דם דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את המעיים לתוך חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר לסגור את דופן הבטן באמצעות תפר ניילון 5-0 בשכבת שריר ושכבת עור, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את עכברי הנמען לכלוב נקי בחלק העליון של כרית חימום, ולהמתין 1-2 שעות לעכברים להחזיר לעצמו את ההכרה ולהתאושש מהרדמה. זה חשוב כדי לשמור על חום מתאים בעלי החיים במהלך התאוששות. שמור על העכברים בכלוב החם ויבש לפני שבעקבות בעלי החיים מן ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את התפקוד המוטורי של גפיים אחוריות אחרי עכברי התאוששות, ושוב ביום השני. ניתוח השתלה מוצלחת יאושרF לא חוסר תפקוד של גפיים אחוריות נצפה בעכברי נמען ביום השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את עכברי נמען עם Ketoprofen במי שתייה (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג / ד = 27 UG / מ&quot;ל ​​במי שתייה) עבור 48 שעות. אם כל עכברי נמען סובלים מכאבים בלתי פוסקים במשככי כאבים לאחר הניתוח על ידי כפי שמעידים על ידי אובדן של ניידות, אי חתן, נורמלי התכווץ יציבה, וכו &#39;, הם יהיו מורדמים. בעלי החיים יהיו בסופו של דבר מורדמים נקודות מוגדרות מראש לאחר 1-60 ימים. </li></ol> ניתוח שתל שתלי עורק בשתל שהשיגו ב 4 שבועות ושתלים במודל שתל syngeneic היו 6 שבועות לאחר הניתוח (5 שבועות לאחר זיהום ויראלי) ונותחו על ידי טכניקות היסטולוגית סטנדרטיות עבור מכתים Elastica ואן Gieson (EVG), hematoxylin ו eosin (HE) מכתים ומכתים immunofluorescence. תמונות צולמו באמצעות מיקרוסקופ מערכת immunofluorescence (Zeiss). ספירת תאים של גרעינים מוקפות immunostaining החיובי הייתה לבצעאד בהגדלה גבוהה ועמדו בממוצע בין 5 חתכים לכל שתל. את המדידות באזור השתל של לומן (בתוך האנדותל), אינטימה (בין lamina אלסטי האנדותל והפנימי, IEL), התקשורת (בין IEL וlamina אלסטי החיצוני, צלופח), עובי קיר (בין lamina אלסטי האנדותל והחיצוני) וכל כלי (בתוך את הצלופח) חושבו מתוך 5 חתכים סדרתיים, 150 מיקרומטר בנפרד עבור כל שתל, תוך שימוש בניתוח תמונה ממוחשב וNIH תמונה 1.60 <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">(http://rsbweb.nih.gov/nih-image).</a> ניתוח סטטיסטי כל הנתונים מבוטאים כממוצע ± SEM. שני זנב-, בדיקות t מזווגות וניתוח ANOVA דו כיוונית בוצעו באמצעות תוכנת פריזמה (תוכנת GraphPad). חילוקי דעות עם P &lt;0.05 נחשבו למצביעות על מובהקות סטטיסטיות.

<ol><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men%3A+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li>
<li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li>
<li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li>
<li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li>
<li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li>
<li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allograft+arteriopathy%3A+pathogenesis+update%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li>
<li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+vascular+disease%3A+immune+response+meets+the+vessel+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li>
<li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts%3A+role+of+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li>
<li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li>
<li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li>
<li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+some+females+reject+males%3F+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li>
<li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li>
<li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li>
<li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li>
<li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li>
<li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li>
<li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li>
<li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+vascular+rejection%3A+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li>
<li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li>
<li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-%CE%B3-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Cir.+Res%22%5BJournal%5D)">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-γ-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li>
</ol>

יש לנו מה למסור.

הפרוטוקולים שתוארו מתמקדים בדגמי GA עכבר. ניתן ליישם את הנהלים לדגמי השתלת שתל אחרים. מודלים אלה כוללים xenograft האנושי (מקטעי עורקים הכליליים כלומר אדם התערב לaortae אינפרא הכליה של עכברי immunodeficient), ודגם GA עכבר דחייה חריף (כלומר אב העורקים עכבר מזן גנטי אחד לנמען אחר זן גנטי). המודלים העכבר שתוארו שלנו הם יותר כדי לסגור נגעי GA אדם. המודל הראשון כולל חציצה של קטע כלי מעכבר זכר לנקבת נמען של אותו הזן המולד (C57BL/6J). דחיית שתל במקרה זה מופנה רק נגד אנטי...

arteriosclerois שתל (GA), המכונה גם vasculopathy שתל, הוא נגע פתולוגי שמתפתח במשך חודשים עד שנים באיברים מושתלים המתאפיינים בהיצרות מפוזרת, היקפית של עץ כלי דם השתל כל 7. בשלבים מוקדמים עלולים לגרום להיצרויות אקסצנטרית ומוקדים כי הם ברורים יותר בעורקים, ובכך דומה יותר מקרוב היצרויות ראתה בטרשת עורקת קונבנציונלית. אובדן לומן של התוצאות מהתרחבות כלי שתל intimal עקב חדירה של תאי T ומקרופגים מארחים ובמיוחד להצטברות של מטריקס ודמוי תאי שריר חלק שמקורו משתל, מארח או שניהם 5, 13, 19, כי הוא יפוצה כראוי על ידי שיפוץ כלי החוצה. בallografts לב, הנגעים המשמעותיים ביותר מהבחינה קלינית הם אלה בעורקים הכליליים וepicardial intramyocardial. סופו של דבר, GA של העורקים הכליליים יגרום אי ספיקת לב איסכמית. GA הוא הגורם העיקרי לגר לב מאוחרהפסד מאחור. ביצרויות של GA לעצור בקווי התפר, חזק להפליל את תגובת המארח לalloantigens שתל בפתוגנזה שלה ומוביל אותנו לסווג GA כסוג של דחייה כרונית 3. עם זאת, צורות אחרות של פגיעה בעורקים עלולות להגביר את הסיכון של GA, בין אם באמצעות הגדלת נטל הנקי של פציעה או על ידי העמקת ו / או ויסות תגובת alloimmune. התא רירית (EC) האנדותל של עורקי שתל נשמר בGA האנושי והאזורים השטחיים ביותר של אינטימה בסמוך לרירית EC הוא האתר הסתנן ביותר בכבדות על ידי מארח נגזר IFN-γ-ייצור תאי T ומקרופגים 11; ב חלק מהחולים GA קשור עם ההתפתחות של alloantibodies תורם ספציפי אשר נקלטות על ידי EC שתל 16 אך הכלים להראות מעט עדויות של נמק fibrinoid שאופייני לדחיית נוגדן בתיווך 11 חריפה. המרכיב הקריטי ביותר של פתוגנזה GA הואהתפשטות של תאים דמויי שריר חלק בתוך אינטימה, אם ניתן לעצור את התהליך הזה, GA סביר להתקדם. עבודות קודמת מהקבוצה שלנו הראו כי intimas של מגזרי עורקים הכליליים אדם התערב לaortae אינפרא הכליה של עכברי immunodeficient להרחיב בתגובה שהועברו adoptively תאי T אנושי אלוגניות לתורם העורק ושתהליך זה יכול להיות מעוכב על ידי נטרול האנושי IFN- γ 18. IFN-γ האנושי יתר אקסוגני עלול לגרום intimal (והמדיאלי) תא שריר חלק (VSMC) ריבוי כלי דם בשתלים עורקיים אלה בהיעדר תאי T האנושי 15, 17. (חשוב לציין כי אדם ועכבר IFN-γ לא חוצה מינים, פוסלי השפעות עקיפות על מארח העכבר במערכת הניסיונית הזה.) יש מודלים עכבריים אלו טובת משחזר תא T / אינטראקציות תא כלי דם אנושיים וintimal נגעים מורכבים במידה רבה של תאי אדם (כלומר שתל המופק),כפי שכבר ציין בדגימות קליניות, אבל הם לא לסכם את המצב הקליני באופן מלא משום שהם מתעלמים מתפקידו של מקרופאגים המארחים ואולי גם סוגי תאים אחרים מעורבים בנגעי השתלות קליניים. מודל עכבר רגיל של תהליך זה באופן תיאורטי יכול לטפל בבעיה זו, המשלימה את המגבלות של המודל האנושי על ידי מעורב מערכת חיסונית מארח שלמה ומתן יתרון נוסף המאפשר את כוחו של עכבר גנטי גישות שיחולו על GA. שני המודלים העכבר הנפוץ ביותר כרוכים בהשתלת לב ועורקי heterotopic orthotopic 1 השתלה. הנגעים המתפתחים בעורקים של לב heterotopic שתלים עשויים במידה רבה של תאים מארחים, העשויים ממוצא מח עצם, ואילו תאי intimal של העורקים בלב אדם שתלי הם בעיקר ממוצא שתל 5, 13, 19. זוהי הבחנה משמעותית שהובילה אותנו לפתח מודלים עכבר חלופיים. התערבותם שלאב העורקים עכבר מזן אחד לנמען זן עכבר אחר הוא עוד יותר מוגבל כמודל לדחייה כרונית בבני אדם, כי תגובת דחייה חריפה תא בתיווך במודל עכבר זה מבטל לחלוטין את כל תאי כלי הדם תורם הנגזרים מאת השתל בתוך שניים השלוש שבועות 19. כתוצאה מכך, השינויים שלאחר מכן ראו במגזר הכלי התערב הם אך ורק תגובה של תאי מארח שאכלסו מחדש את decellularized כלי הפיגום, יוצרת מצב artifactual ביותר של שייכות מוגבלת כמודל לשינויים בכלי שתל המתרחשים במרפאת. לאחרונה פיתחנו שני מודלים עכבר חדשים כדי לעקוף את הבעיות האלה 21. המודל הראשון כולל חציצה של קטע כלי מעכבר זכר לנקבת נמען של אותו הזן המולד (C57BL/6J). המודל השני כולל חציצת קטע עורק מתורם עכבר C57BL/6J סוג בר לעכבר שורה של אותו הזן ומין שחסר את receptor לIFN-γ (IFN-γR-KO) ואחריו ממשל של עכבר IFN-γ (מועבר באמצעות זיהום של כבד העכבר עם וקטור adenoviral. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים מפורטים ואת היתרונות של דגמי GA העכבר שלנו.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>מעבדות ג'קסון (בר הרבור, מיין)</td><td>000664</td><td>תורם (5 שבועות) מקבל (8-12 שבועות)</td></tr><tr><td>הזרקת קטמין הידרוכלוריד </td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td>פתרון אחסון (50 מ"ג / מ"ל) פתרון עבודה (5 מ"ג / מ"ל)</td></tr><tr><td> פתרון סטרילי קסילזין</td><td>לויד בע"מ</td><td>NADA# 139-236</td><td>פתרון אחסון (100 מ"ג/מ"ל) פתרון עבודה (1 מ"ג/מ"ל)</td></tr><tr><td>קטופרופן</td><td>פורט דודג' בריאות בעלי חיים</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td>פתרון אחסון (100 מ"ג/מ"ל) פתרון עבודה-דרך הפה (0.027 מ"ג/מ"ל)</td></tr><tr><td>Heparin נתרן</td><td>Sagent Pharmaceticals</td><td>NDC 25021-400</td><td>פתרון אחסון (1000 U/ml) פתרון עבודה (100 U/ml)</td></tr><tr><td>תמיסת מלח (סטרילי 0.9% נתרן כלורי)</td><td>CareFusion</td><td>AL4109</td><td></td></tr><tr><td>0.9% הזרקת נתרן כלורי</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td>להכנת חומר ההרדמה </td></tr><tr><td>Petrolatum Ophthalmic Ophthalmic מוצרים </td><td>וטרינריים Dechra NDC</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה ליוד </td><td>Triad Disposables, Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>MZ95</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו מספריים</td><td>Roboz מכשיר כירורגי ושות'</td><td>RS-5693</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיצים</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td>כדי לחצות את אבי העורקים של התורם או הנמען </td></tr><tr><td>מספריים צרים במיוחד</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט/מלקחיים</td><td>MICRINS</td><td>MI1542</td><td>להחזיק את המחט</td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>FST</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים דפוס סטנדרטי</td><td>FST</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>FST</td><td>13011-12</td><td></td></tr><tr><td>LANCASTER Eye Speculum</td><td>Zepf Medical Instruments</td><td>42-1209-07</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו כלי דם</td><td>קליפ Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-6472</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו קליפ מריחת מלקחיים עם Lock</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>תפר מונופילמנט פוליאמיד שחור</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>Cat #T4A10Q07</td><td>10-0 תפר, מחט = 70 מיקרון</td></tr><tr><td>שחור מונופילמנט ניילון תפר</td><td>סינטורה (Covidien)</td><td>SN-1956</td><td>6-0 תפר</td></tr><tr><td>שירים לא ארוגים</td><td>McKesson Corp.</td><td>הזמנה חוזרת מס' 94442000</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>REF 309657</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>18G 1 1/2, מחט היפודרמית</td><td></td><td>BD REF 305196</td><td></td></tr><tr><td>25G 7/8, מחט היפודרמית</td><td></td><td>BD REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27G 1/2, מחט היפודרמית</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td></td></tr><tr><td>30G 1/2, מחט היפודרמית</td><td>BD</td><td>REF 305106</td><td></td></tr><tr><td>כרית לב</td><td>Sunbeam</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>גוזם</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>טבלה 2. ריאגנטים וציוד ספציפיים.</חזק></td></tr></tbody></table>

מודלים עכבר לטרשת עורקים שתל

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

arteriosclerois שתל (GA), המכונה גם vasculopathy שתל, הוא נגע פתולוגי שמתפתח במשך חודשים עד שנים באיברים מושתלים המתאפיינים בהיצרות מפוזרת, היקפית של כלי דם שתל העץ כולו. המרכיב הקריטי ביותר של פתוגנזה GA הוא ההתפשטות של תאים דמויי שריר חלק בתוך אינטימה. כאשר קטע עורק הכלילי אנושי התערב לaortae אינפרא הכליה של עכברי immunodeficient, את intimas אפשר היה להרחיב בתגובה שהועברו adoptively תאי T האנושיים אלוגנאית לתורם העורק או אקסוגני אנושי IFN-γ בהיעדר תאי T אנושיים. התערבותם של אב העורקים עכבר מזן אחד לנמען זן עכבר אחר היא מוגבלת כמודל לדחייה כרונית בבני אדם, כי תגובת הדחייה חריפה תא בתיווך במודל עכבר זה מבטלת לחלוטין את כל תורמים שמקורם בתאי הדם מהשתל בתוך שניים השלוש שבועות. לאחרונה פיתחנו שניים מ &#39;חדשouse דגמים לעקוף את הבעיות הללו. המודל הראשון כולל חציצה של קטע כלי מעכבר זכר לנקבת נמען של אותו הזן המולד (C57BL/6J). דחיית שתל במקרה זה מופנה רק נגד אנטיגנים histocompatibility קלים המקודדים על ידי כרומוזום Y (בהווה בזכר אך לא נקבה) ותגובת הדחייה שמתפתחת הוא עצל במידה מספקת כדי לשמר הנגזרות תורמות תאי שריר חלק למשך מספר שבועות. המודל השני כולל חציצת קטע עורק מתורם עכבר C57BL/6J סוג בר לעכבר שורה של אותו הזן ומין שחסר את הקולטן לIFN-γ ואחריו ממשל של עכבר IFN-γ (מועבר באמצעות זיהום של העכבר כבד עם וקטור adenoviral. אין דחייה במקרה זה כמו גם תורם ועכברי נמען הם מאותו הזן והמין, אך תאי שריר חלק תורם להתרבות בתגובה לציטוקינים ואילו מארח שמקורם בתאים, חסרי קולטן לציטוקין זה, לא מגיב. על ידי backcrossing שינויים גנטיים נוספים לתורם הכלי, ניתן להשתמש בשני המודלים כדי להעריך את ההשפעה של גנים ספציפיים על התקדמות GA. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים מפורטים לדגמי GA העכבר שלנו.

מודל טרשת עורקים שתל עכבר (GA): במודל זה, אב העורקים תורם גברי הושתלו נשי נמען, כך שהמארח גורם לתגובות alloimmune מתווכות תאי T alloreactive נגד האנטיגן Y קטין (HY אנטיגן histocompatibility קטין זכר הספציפי) הביע על 12 שתל, והוא בתור תא T-IFN-γ מיוצר כונני VSMC התפשטות 20 כפי שנצפה במודלים של השתלת שתל אחרים 2, 6, 8-10, 14. קטע של אב העורקים החזי מזכר תורם התערב בניתוח לתוך אב העורקים בבטן של נמען נשי, וaortas נקצרו ב4 שבועות לאחר ...

אנו מתארים פרוטוקולים לarteriosclerois שוחדנו העכבר (GA) דגמים אשר כרוך חציצה של מגזר כלי עכבר לנמען של אותו הזן המולד. על ידי backcrossing שינויים גנטיים נוספים לתורם הכלי, המודל יכול להעריך את ההשפעה של גנים ספציפיים על GA.

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להשתיל כלי דם מתורם לתוך האבי העורקים הבטני של מקבל. השלב הראשון הוא לנתח את אבי העורקים החזי של העכבר התורם. לאחר מכן, נוצרים אתרי אנסטומוזיס באבי העורקים הבטני של העכבר המקבל.לאחר מכן, כלי הדם התורם מושתל לאורטה הבטנית של המקבל. בסופו של דבר, ניתן להעריך השתלה מוצלחת על ידי תפקוד מוטורי תקין של הגפה האחורית בעכבר המקבל. לפיכך, מודל זה יסייע לנו להבין את הפתוגנזה של טרשת עורקים בשתל.מדובר באתגר טכני, הדורש תרגול רב וסבלנות כדי להגיע לתוצאה מושלמת. את הפרוצדורה ידגים ד"ר Chen בסיוע של Louanne. ראשית, יש לוודא שהעכבר התורם נמצא בעומק הרדמה מתאים.לאחר ההרדמה, הנח את העכבר בתנוחת גב על מגש תחת מיקרוסקופ ניתוח. נקה את בית החזה באמצעות קרצוף חוזר של יוד ואלכוהול לאחר חשיפת הלב ושטיפתו במי מלח (saline), הסר את הלב והריאות כדי לחשוף את כל אורכה של האורטה החזיתית (thoracic aorta). לאחר שהיא נראית לעין, התחל להסיר בזהירות את האורטה החזיתית מהרקמה שסביבה.כאשר מגיעים לענפים הלומבליים (מותניים), יש לקשור אותם בקרבת האורטה באמצעות תפר משי לפני חיתוכם. לאחר השחרור מהרקמה הסובבת, יש להוציא את כל האורטה החזיתית. לאחר הבידוד, יש לשטוף את אורטת התורם בתמיסת סלין עם הפארין ולאחסנה בתמיסה זו על קרח עד להשתלה.לאחר וידוא הרדמה נאותה של העכבר המקבל, גלחו את הפרווה מאזור הבטן הקדמי. כסו את העיניים במשחה פתלוגית ונקו את האזור כפי שהודגם קודם לכן. כאשר העכבר מוכן, הניחו אותו בתנוחה גבנית על מגש תחת מיקרוסקופ ניתוחי.בצעו חתך בדופן הבטן בקו האמצע, מהתהליך (xiphoid) ועד לעצם הפובס, ולאחר מכן השתמשו במרחיב (retractor) כדי להרחיב את הדופן ולחשוף את חלל הבטן. לאחר החשיפה, עטפו את המעיים בגזה לחה במי מלח, ודחפו אותם למעלה והרחק מחלל הבטן. השתמשו בגזה נוספת לחה במי מלח כדי לעטוף את אזורי הבטן הנותרים, והשתמשו בה כדי להסיט את הרקטום לצד ימין של הבטן. לאחר מכן, העבירו את איברי הרבייה לכיוון תחתון (inferiorly).זכרו לשמור על הרקמות החשופות לחות על ידי מריחת תמיסת סלין. זהו באופן שוטף את האורטה התת-כלייתית (infrarenal aorta) הממוקמת פרוקסימלית לכלי הדם הכלייתי ודיסטלית לפיצול האורטלי. בצעו דיסקציה בזהירות כדי להפריד אותה מהוריד הנבוב התחתון (inferior vena cava).זהו, קשרו וחתכו את כל הענפים הקטנים שיוצאים ממקטע זה של האורטה. לאחר בידוד מקטע האורטה, מקמו תסמיך כלי דם (vascular clamp) בכל קצה, במרחק של כחמישה מילימטרים זה מזה. לאחר מכן, צרו את אתרי האנסטומוזה על ידי חיתוך של האורטה הבטנית בין התסמיכים.השתמש במספרי מיקרו חדים כדי להסיר מקטע קטן מהאאורטה מקצה חתך אחד, על מנת להכניס את השתל האאורטלי התורם. שטוף את מקטעי האאורטה שבין התסמיכים באמצעות סליין עם הפרין כדי להסיר את שאריות הדם. זכור להשקות מעת לעת את שתי דגימות האאורטה בתמיסת סליין עם הפרין לאורך כל הפרוצדורה.בשלב הבא, בצעו חיתוך רוחבי בשני צדי האורטה של התור כדי ליצור גרפט מקטע באורך 2.5 millimeters להשתלה. מקמו את גרפט האורטה של התור באופן שבו הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים מיושרים לצורך תפרים רציפים. מקמו תחילה תפרי קיבוע (stay sutures) במיקומי השעות שלוש ותשע בשני הקצוות.בשלב הבא, חברו את הקצוות החתוכים באמצעות שלוש עד ארבע תפרים רצים, וקשרו את התפרים הרצים לתפרי הקיבוע (stay sutures) באמצעות קשר כפול עבור תפרים מקוטעים. צרו ארבעה אתרי אנסטומוזה במיקומי השעות שלוש ותשע משני צדי השטופים. ראשית. לאחר מכן, חברו את הקצוות החתוכים באמצעות שלוש עד ארבע תפרים שימוקמו בין כל אחד מהאתרים הללו.לאחר שהתפרים במקומם, שחררו את התסבוב הדיסטלי כדי לאפשר זרימה רטרוגרדית לתוך השתל. זהו את כל נקודות הדימום ובצעו תפרים נוספים בתוך שלוש דקות. כאשר הושגה המוסטזיס מספקת, שחררו את התסבוב הפרוקסימלי.ניתן לאשר את פתוחות השתלים על ידי נוכחות דופק חזק. אם הדופק נחלש, יש להזריק heparin לכלי הדם כדי למנוע thrombose. כאשר השלב מושלם, החזירו את המעיים לחלל הבטן ותפרו את שכבות השריר והעור לסגירה.העבירו את העכבר המקבל לכלוב נקי וחם ועקבו אחריו במשך שעה עד שעתיים עד להשבת ההכרה. העריכו את התפקוד המוטורי של העכבר לאחר ההתאוששות ושוב, ביום השני; ניתוח השתלה נחשב למוצלח אם לא נצפתה הפרעה תפקודית בגפיים האחוריות. ניתוח היסטולוגי של השתלי העורקים שנלקחו ארבעה שבועות לאחר הניתוח גילה עובי מוגבר בדופן כלי הדם בקרב נקבות שקיבלו תרומה מזכר.עם זאת, לא נצפתה טרשילובות (arteriosclerosis) של הש transplanted בעכבר קבוצת הזכר לזכר. בדוגמה זו, עורק החזה מתורם זכר הועבר לעכבר עם נוק-אאוט (knockout) לאינטרפרון גמא, ולאחר מכן הושרה ביטוי של אינטרפרון גמא בעכבר המקבל, לפני לקיחת הדגימות.כמה שבועות מאוחר יותר, ניתוח היסטולוגי של השתלי העורקים מראה כי לא נצפתה עטרקרולוזיס (טרשת עורקים) בהשתלים בקבוצת הטיפול. כעת אתם יודעים כיצד לבצע ניתוח זה. המשיכו לתרגל.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

אנחנו מדגימים את מודל רומן עורקי קשירה בשריר spinotrapezius עכברי, לרבות הליך צעד אחר צעד ותיאור של מכשור הנדרש. אנו מתארים את הניתוח ומדידות תוצאה רלוונטיות הנוגעות לשיפוץ כלי דם והרחבת כלי דם ברשת פונקציונלית באמצעות מיקרוסקופ intravital וconfocal.

דגם Spinotrapezius Murine כדי להעריך את ההשפעה של קשירת arteriolar על תפקוד כלי דם וRemodeling

ניתוח Ex vivo של נגעים עורקיים ממודלים של בעלי חיים של מחלות לב וכלי דם מסתמך באופן קלאסי על טכניקות היסטולוגיות ואימונוהיסטוכימיות. אלה מספקים מדידות דו-ממדיות בנגעים תלת מימדיים. כתב יד זה מתאר יצירת נגעים עורקיים לניתוח כמותי בתלת מימד באמצעות טומוגרפיה של הקרנה אופטית.

דור וQuantitation 3 ממדים של עורקי פצעים בעכברים באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

מודלים של בעלי החיים הוכיחו להיות כלי רב ערך בהגדרת מנגנונים ספציפיים מארח ופתוגן שתורמים להתפתחות של דלקת כרונית. כאן אנו מתארים מודל עכבר של זיהום אוראלי עם הפתוגן האנושי Porphyromonas gingivalis ומתודולוגיות פרט כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת באתרים מקומיים ומערכתיים.

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכברים. מטרת הפרוטוקול היא לספק מודל שבאמצעותו ניתן לחקור תהליכים פתולוגיים ואסטרטגיות טיפוליות הרלוונטיות לתגובות אלואימוניות בעורקים ולשינויים העורקיים הנובעים מכך התורמים לכישלון השתלת איברים.

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

אנו מציגים מודל השתלת אבי העורקים orthotopic בטכניקה שרוול בעכברים. זו שיטה השקה מהירה מאוד, אשר יכול להיות מועסק במחקרים של מחלת כלי דם.

בטכניקה שרוול במודל של עכברים של אבי העורקים השתלת - סרט הדרכה

מודלים murine של טרשת עורקים הם כלים שימושיים כדי לחקור מסלולים פתוגניים ברמה מולקולרית, אבל דורשים קוונפיקציה סטנדרטית של פיתוח נגעים. פרוטוקול זה מתאר שיטה ממוטבת כדי לקבוע את גודל הנגעים בכלי העורקים העיקריים, כולל שורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים, ועורק ברככתית.

קוונפיקציה של טרשת עורקים בעכברים

מאמר זה מדגים גישה כירורגית יעילה ליצירת איסכמיה חריפה בעכברים עם חתך קטן. גישה זו יכולה להיות מיושמת על ידי רוב קבוצות המחקר ללא כל שדרוגי מעבדה.

מודל כירורגי מותאם של איסכמיה בגפיים אחוריות ב- ApoE-/- עכברים באמצעות חתך מיניאטורי

אנו מדגימים התרחבות כימית של כלי דם גדולים בעכברים כמודל לחקר תפקוד לקוי של כלי הדם במוח, אשר יכול לשמש עבור מודלים של דמנציה וסקולרית ואלצהיימר. אנו גם מדגימים הדמיה של כלי הדם על ידי הזרקת תרכובת גומי סיליקון ומתן הדרכה חזותית ברורה למדידת שינויים בגודל כלי הדם.

גישה חזותית לגרימת דוליכואקטזיה בעכברים כדי למדל תפקוד לקוי של כלי דם גדולים בתיווך כלי דם במוח

שיטת המחט של היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדית הא-סימטרית מוצעת ליצירת מודל עכבר לפגיעה קוגניטיבית בכלי הדם ודמנציה. זה מביא לתוצאות ארוכות טווח בהשוואה למודלים שנקבעו בעבר ותואם ל-MRI חי. ייצוג חזותי המדגים את ההליך מספק הנחיות לשליטה בניתוח.

מודל עכבר לליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה המבוסס על היצרות עורק צוואר משותף דו-צדדי אסימטרי מונחה מחט

כאן, מוצג פרוטוקול להשתלת שתל כלי דם מהונדס רקמות בעורק הצוואר של העכבר בטכניקת השרוול, המספק מודל בעל חיים מתאים לחקירת מנגנוני התחדשות רקמות כלי הדם.

השתלת שתל כלי דם מהונדס רקמות בעורק הצוואר של העכבר בטכניקת שרוול

למד את פרוטוקול השתלת כלי דם בעכברים לחקר טרשת עורקים שתל. השיטה מאפשרת הערכת השפעת שינויים גנטיים על מחלת העורקים ומסייעת בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

מודלים עכבר לטרשת עורקים שתל

גלה סרטונים נוספים