Name: שיטת תפוקה גבוהה למדידה של קצב סינון הגלומרולרי בעכברים בהכרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למד שיטה לא פולשנית למדידת קצב סינון גלומרולרי בעכברים בהכרה באמצעות הזרקת FITC-inulin ומודל דעיכה מעריכית דו-שלבי. הטכניקה מאפשרת זיהוי שינויים בפונקציית הכליות ללא ניתוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אני מודה לד&quot;ר ג&#39;סיקה דומינגז Rieg לקריאה ביקורתית של כתב היד הזה. עבודה זו נתמכה על ידי איגוד לב האמריקאי (מדען פיתוח גרנט 10SDG2610034), קרל וו גוטשלק מענק מחקר של האגודה האמריקנית לנפרולוגיה, המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות או &#39;בריין למרכז אקוטי פגיעה מחקר בכליות ( P30DK079337), והמחלקה לענייני יוצאי צבא.

1. פתרונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.85% NaCl: 8.5 גרם NaCl / 1 ליטר DDH 2 O (8.5 גר &#39;/ ל&#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.5 HEPES mol / L-pH 7.4 (לפזר 59.6 גרם של HEPES ב0.5 ליטר של DDH 2 0 ולהתאים את pH 7.4 באמצעות 10 N NaOH). </li></ol> 2. הכנה של פתרון הזרקת FITC-אינולין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל FITC-אינולין להכין 5% פתרון ולהתמוסס ב0.85% NaCl (בדרך כלל 100 מ&quot;ג / 2 מ&quot;ל 0.85% NaCl) על ידי חימום עד 90 מעלות צלזיוס עד שהיא נמסה לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל פתרון FITC-אינולין מומס ומשקל פתק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי חתיכה 20 ס&quot;מ של קרום דיאליזה (משקל מולקולרי חתך: 1,000) ולשים בDDH 2 O למשך 30 דקות כדי להסיר NaN שיורי 3 מהקרום ולשטוף כמה פעמים לאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא מומס FITC-אינולין לתוך קרום דיאליזה וחותם כראוי עם סגרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל קרום דיאליזה כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את קרום הדיאליזה ב0.85% פתרון 1 L NaCl ומערבבים לאט אור מוגן למשך 24 שעות בroטמפרטורת אום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל קרום דיאליזה כולו שוב ולחשב את הריכוז החדש (מים אוסמוטי יעברו לתוך הקרום וFITC מאוגד, או מחויבים FITC-אינולין &lt;1,000 משקל מולקולרי יהיה לעזוב את הקרום, ולכן הריכוז של FITC-אינולין יקטן באופן משמעותי) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוז FITC-אינולין החדש (ג) מחושב באמצעות נוסחה הבאה: C = n / V, כאשר n = סכום FITC-אינולין ראשוני, V = נפח חדש (הבדל במשקלים של צינורות דיאליזה לפני ואחרי הדיאליזה בתוספת נפח ראשוני פתרון FITC-אינולין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני השימוש לעקר פתרון FITC-אינולין dialyzed על ידי סינון דרך פילטר 0.22 מיקרומטר מזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממשיך FITC-אינולין מוגן מפני אור (רדיד אלומיניום) ב 4 ° C. Dialyzed ומעוקר FITC-אינולין יכול לשמש לתקופה של עד 2 שבועות. השתתף יכול להיות מומס FITC-אינולין מחדש על ידי חימום על 90 מעלות צלזיוס במשך כמה דקות. </li></ol> הערה: אם באמצעותFITC-sinistrin 16-18, אשר אינה דורש דיאליזה, ניתן לדלג את כל הצעדים הנדרשים לדיאליזה. 3. הזרקה ודם אוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את משקל גוף (BW) של העכברים לפני הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים עם isoflurane בקצרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפוקה גבוהה של 6 עכברים בצעו פרוטוקול בלבד באיור 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 2 BW μl / גרם של dialyzed FITC-אינולין למקלעת retroorbital 24 באמצעות ½ G30 במחט (להסיר בועות אוויר ממזרק המילטון 100 μl באמצעות ראשון ½ G26 במחט ולאחר מכן לעבור ל½ ה-G30 במחט ל הזרקה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך 1 מ&quot;מ של זנב עכבר עם מספריים אחת ולאסוף דם בבית 3, 5, 7, 10, 15, 35, 56 ו -75 דקות לאחר ההזרקה בNa-הפרין minicapillaries. חותם minicapillaries לאחר איסוף דם עם צ&#39;ה חותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור דגימות מוגנות מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים האטום minicapillaries בתוך המטומכה קריטית נימים וצנטריפוגות במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשבור minicapillaries באמצעות חותך יהלומים וכל פלזמה העברה על ידי pipetting לתוך צינור 0.2 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך דילול 1:10 באמצעות 2 μl של פלזמה ו18 0.5 HEPES mol / L μl (pH 7.4) בצינור מ&quot;ל 0.2 החדש (דוגמאות יכולה להיות מאוחסנות הלילה ב 4 מעלות צלזיוס במשך מדידות הקרינה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד 2 μl של דגימה מדוללת עם NanoDrop 3300 בכפילויות. התיאור והשימוש של המכשיר מתואר כאן 5. </li></ol> 4. הכנת התקנים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף דם מעכברים מאותו הזן ברקע הפרין מצופה המטוקריט נימים, ספין למטה ולדלל 1:10 עם 0.5 HEPES mol / L (pH 7.4), בדרך כלל 80 פלזמה μl + 720 HEPES μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל פתרון הזרקת FITC-אינולין עם פלזמה עכבר מדוללת כדי לקבל את דילולים הסטנדרטיים הבאים: 01:10: 10 פתרון FITC-אינולין חי μl + 90 פלזמה עכבר מדוללת μl 1:100: 10 ומו; פתרון L (1:10) + 90 פלזמה עכבר מדוללת μl 1:1,000: 90 פלזמה עכבר מדוללת μl פתרון μl 10 (1:100) + 1:2,000: 30 μl (1:1) פתרון + 30 פלזמה עכבר מדוללת μl 1:10,000: 40 פלזמה עכבר מדוללת μl פתרון μl 10 (1:5) + 1:20,000: 20 μl (1:1) פתרון + 20 פלזמה עכבר מדוללת μl 1:100,000: 40 פלזמה עכבר מדוללת μl פתרון μl 10 (1:5) + הריכוז של הסטנדרטים יהיה תלוי בדיאליזה ותמיד יהיה שונה עבור כל הכנת FITC-אינולין. זה הכרחי כדי להיכנס לריכוז לעקומה החדשה הסטנדרטית בכל פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח נתונים כדי לחשב GFR עם תוכנה מתאימה (פריזמה GraphPad למשל) באמצעות פונקצית דעיכה מעריכית שני שלבים כפי שתואר כאן ב15, 20 ומוצג בסעיף נציג תוצאות. </li></ol>

<ol><li>Bauer, J. H., Brooks, C. S., Burch, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+appraisal+of+creatinine+clearance+as+a+measurement+of+glomerular+filtration+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Kidney+Dis%22%5BJournal%5D)">Clinical appraisal of creatinine clearance as a measurement of glomerular filtration rate.</a> Am. J. Kidney Dis. 2 (3), 337-346 (1982).</li>
<li>Carrie, B. J., Golbetz, H. V., Michaels, A. S., Myers, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creatinine%3A+an+inadequate+filtration+marker+in+glomerular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Creatinine: an inadequate filtration marker in glomerular diseases.</a> Am. J. Med. 69 (2), 177-182 (1980).</li>
<li>Chasis, H., Ranges, H. A., Goldring, W., Smith, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Control+of+Renal+Blood+Flow+and+Glomerular+Filtration+in+Normal+Man%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The Control of Renal Blood Flow and Glomerular Filtration in Normal Man.</a> J. Clin. Invest. 17 (5), 683-697 (1938).</li>
<li>Darling, I. M., Morris, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+%22true%22+creatinine+clearance+in+rats+reveals+extensive+renal+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion.</a> Pharm. Res. 8 (10), 1318-1322 (1991).</li>
<li>NanoDrop 3300 Fluorospectrometer - www.nanodrop.com [Internet]. , Thermo Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.nanodrop.com/Productnd3300overview.aspx">http://www.nanodrop.com/Productnd3300overview.aspx</a> (2013).</li>
<li>Dunn, S. R., Qi, Z., Bottinger, E. P., Breyer, M. D., Sharma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+endogenous+creatinine+clearance+as+a+measure+of+renal+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Utility of endogenous creatinine clearance as a measure of renal function in mice.</a> Kidney Int. 65 (5), 1959-1967 (2004).</li>
<li>Eisner, C., Faulhaber-Walter, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+contribution+of+tubular+secretion+to+creatinine+clearance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice.</a> Kidney Int. 77 (6), 519-526 (2010).</li>
<li>Faulhaber-Walter, R., Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+A1+adenosine+receptors+augments+diabetic+hyperfiltration+and+glomerular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Lack of A1 adenosine receptors augments diabetic hyperfiltration and glomerular injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 19 (4), 722-730 (2008).</li>
<li>FINGL, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubular+excretion+of+creatinine+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tubular excretion of creatinine in the rat.</a> Am. J. Physiol. 169 (2), 357-362 (1952).</li>
<li>Keppler, A., Gretz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats%3A+an+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Plasma creatinine determination in mice and rats: an enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71 (1), 74-78 (2007).</li>
<li>Levey, A. S., Perrone, R. D., Madias, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+creatinine+and+renal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Serum creatinine and renal function.</a> Annu. Rev. Med. 39, 465-490 (1988).</li>
<li>Lorenz, J. N., Gruenstein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+nonradioactive+method+for+evaluating+single-nephron+filtration+rate+using+FITC-inulin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin.</a> Am. J. Physiol. 276, 172-177 (1999).</li>
<li>Meyer, M. H., Meyer, R. A., Gray, R. W., Irwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picric+acid+methods+greatly+overestimate+serum+creatinine+in+mice%3A+more+accurate+results+with+high-performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Picric acid methods greatly overestimate serum creatinine in mice: more accurate results with high-performance liquid chromatography.</a> Anal. Biochem. 144 (1), 285-290 (1985).</li>
<li>Qi, Z., Breyer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measurement of glomerular filtration rate in conscious mice.</a> Methods Mol. Biol. 466, 61-72 (2009).</li>
<li>Qi, Z., Whitt, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+determination+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice+using+FITC-inulin+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 286 (3), F590-F596 (2004).</li>
<li>Schock-Kusch, D., Sadick, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcutaneous+measurement+of+glomerular+filtration+rate+using+FITC-sinistrin+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol.+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Transcutaneous measurement of glomerular filtration rate using FITC-sinistrin in rats.</a> Nephrol. Dial Transplant. 24 (10), 2997-3001 (2009).</li>
<li>Schock-Kusch, D., Xie, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcutaneous+assessment+of+renal+function+in+conscious+rats+with+a+device+for+measuring+FITC-sinistrin+disappearance+curves%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Transcutaneous assessment of renal function in conscious rats with a device for measuring FITC-sinistrin disappearance curves.</a> Kidney Int. 79 (11), 1254-1258 (2011).</li>
<li>Schreiber, A., Shulhevich, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcutaneous+measurement+of+renal+function+in+conscious+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transcutaneous measurement of renal function in conscious mice.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 303 (5), F783-F788 (2012).</li>
<li>Shemesh, O., Golbetz, H., Kriss, J. P., Myers, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+creatinine+as+a+filtration+marker+in+glomerulopathic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Limitations of creatinine as a filtration marker in glomerulopathic patients.</a> Kidney Int. 28 (5), 830-838 (1985).</li>
<li>Sturgeon, C., Sam, A. D., Law, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+glomerular+filtration+rate+by+single-bolus+inulin%3A+a+comparison+of+estimation+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of glomerular filtration rate by single-bolus inulin: a comparison of estimation analyses.</a> J. Appl. Physiol. 84 (6), 2154-2162 (1998).</li>
<li>Vallon, V., Blantz, R. C., Thomson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+hyperfiltration+and+the+salt+paradox+in+early+%5Bcorrected%5D+type+1+diabetes+mellitus%3A+a+tubulo-centric+view%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Glomerular hyperfiltration and the salt paradox in early [corrected] type 1 diabetes mellitus: a tubulo-centric view.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 14 (2), 530-537 (2003).</li>
<li>Vallon, V., Eraly, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+the+organic+anion+transporter+OAT3+in+renal+creatinine+secretion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">A role for the organic anion transporter OAT3 in renal creatinine secretion in mice.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 302 (10), F1293-F1299 (2012).</li>
<li>Vallon, V., Schroth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A%281%29+receptors+determine+glomerular+hyperfiltration+and+the+salt+paradox+in+early+streptozotocin+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adenosine A(1) receptors determine glomerular hyperfiltration and the salt paradox in early streptozotocin diabetes mellitus.</a> Nephron. Physiol. 111 (1), 30-38 (2009).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim.+%28NY%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Anim. (NY. 40 (5), 155-160 (2011).</li>
</ol>

המחבר קיבל מימון כדי לכסות את העלויות של פרסום זה על ידי תרמו פישר סיינטיפיק.

המחקר הנוכחי מתאר טכניקה לקביעת GFR בעכברים בהכרה בזריקה חד בולוס וניתוח של הקרינה ב8 דגימות דם על ידי דעיכה מעריכית שני שלבים. מדידת GFR בעכבר 1 לוקחת 75 דקות. באמצעות תרשים זרימה מיוחד, ניתן למדוד את GFR של 6 עכברים ב -130 דקות. זה ריאלי לחזור על פרוטוקול זרימת תרשים זה עד 4 פעמים ביום ולמדוד GFR ב24 עכברים. אנחנו שונה בשיטה זו, כך שניתן לאסוף את הדם מחיתוך זנב קטן ולא לנקב וריד זנב, שהוא מהיר וקל יותר לחוקרים לבצע השוואה לנקב וריד זנב. באמצעות 10 μl המטוקריט נימים ודילול 1:10, ניתן להפחית את הסכום הכולל של דם לצורך &lt;100 μl. לבסוף, הקרינה נמדדת באמצעות 3300 fluorospectrometer NanoDrop, המאפשר קביעת הקרינה ב1-2 μl של מדגם בדילול מלא. שיטה זו תיתן לי investigato מעונייןערך GFR האמיתי RA. בניגוד לכך, יש לי מדידות קריאטינין בעכברים כמה חולשות, כולל &quot;מגוון עיוור קריאטינין&quot; וקשיים הקשורים לקביעה ספציפית ורגישה. &quot;מגוון העיוור קריאטינין&quot; מגביל את תפקודו כסמן לGFR משום הסרום קראטינין נשאר בטווח הנורמלי עד 50% מתפקוד כלייתי הוא איבד 19. מאז כמה חוקרים להשתמש בעכברים מהונדסים גנטי במחקר שלהם ללימוד פיזיולוגיה והפתופיזיולוגיה כליות, זה נושא את הבעיה הבאה: בהנחת שעכבר בנוקאאוט של X גנים תצטרך GFR נמוך באופן משמעותי (ב -40%) בהשוואה לעכבר פראי סוג, הקרנה על ידי השוואה פשוטה הפלזמה קריאטינין לא לזהות את ההבדל הזה. הצורך בשיטה מדויקת טובה של נחישות GFR הופך להיות קריטי יותר קטן יותר את ההבדלים בGFR להיות. יש עכברי ריכוזים גבוהים של chromagens הלא קריאטינין בפלזמה ובשתן שלהם שמפריעים מסחרימבחני קריאטינין זמינים. כתוצאה מכך, מבחני המבוססים על ריכוז אלקליין picrate יפה תגובת אומדן היתר קריאטינין בפלזמה בהשוואה לביצועים גבוהה כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) 6 נחישות, 13. מגבלה נוספת היא שקריאטינין הוא מתחת מגבלות זיהוי של כמה מבחני זמינים מסחרי בהשוואה לנחישות HPLC. עם זאת, על ידי שימוש בחוקרי תגובות אנזימטיות הצליחו לקבוע הפלזמה קריאטינין ב10 עכברים, 22. GFR בטווח דומה נמצאו בעכברים בהכרה בשיטה דומה חד בולוס הזרקה, כמו גם אישור FITC-אינולין 14 שתן. בניגוד לפרוטוקול שלהם, הפרוטוקול שלנו באמצעות חיתוך זנב אינו דורש אמצעי זהירות מיוחד כדי לשמור על שלמות הכלי בהשוואה לוריד זנב או לנקב וריד saphenous. לאישור שתן / פלזמה מבוססת FITC-אינולין יש צורך להשתיל שני ק&quot;מ האוסמוטי בניתוחnipumps. שתי משאבות הן הכרחיים כדי להשיג ריכוזים גבוהים מספיק מצב יציב פלזמה FITC-אינולין שהם בבירור להבחין מהרקע. הדבר מחייב גם את השימוש בכלובים מטבוליים לאיסוף שתן מלא ומתוזמן. הכלובים צריכים להיות שטף לחשבון להפסד של 25-37% מFITC-אינולין, אשר אחרת מתרחש ללא שטיפה. את החסרונות של שימוש בשיטת FITC-אינולין זה מוגבלים. חוקרים צריכים להיות מודעים את הדברים הבאים: (i) להבטיח כי אין בועות אוויר במזרק המשמש להזרקה של FITC הפתרון, חייבת להיות מושגת (ii) הזרקת retrobulbar מלאה משום שהכמות המוזרקת קובעת GFR מחושב, ו( iii) עכברים להשתין הסביר ביותר במהלך ניסוי 75 דקות GFR, כך למנוע זיהום דגימות דם עם שתן, שיש לי ריכוז FITC-אינולין גבוה מאוד כתוצאה של יכולת ריכוז הכליות. o יתרונות כללייםF-שיטת FITC אינולין זה כוללת את הפעולות הבאות: (א) היא טכניקה לא רדיואקטיבי, (ii) ניתן לחזור על מדידות מספר פעמים באותו העכבר, (iii) assay יכול להתבצע בעכברים בהכרה, ( ד) אין צורך באיסוף שתן, ו( V) יכולה להיות מנוצל אפשרות תפוקה גבוהה. חסרונות להזרקת בולוס אחת כוללים את הצורך בדיאליזה של FITC-אינולין, שניתן להתגבר על ידי שימוש בFITC-סמן טוב יותר, FITC-sinistrin, שזמין כעת וניתן למדוד transcutaneously באמצעות מכשיר מיוחד 18 מיניאטורי. למרות GFR נמדד, לא ניתן למדוד את ההפרשות חלקיות של נוזל או יונים בשיטה זו. יחדיו, בשיטה זו מספקת את הכדאיות של שיטת תפוקה גבוהה למדידת GFR בעכברים בהכרה. לכן, טכניקה זו עשויה להיות עניין לחוקרים אחרים המתעניייינים בקביעת תפקוד כליה בעכברים.

קצב היווצרות של הפלזמה ultrafiltrate בglomerulus הפך בסיס להערכת תפקוד כליה (קצב סינון גלומרולרי, GFR). הסמן האידיאלי כדי לקבוע GFR צריך להיות מסונן באופן חופשי, לא מופרש או נספג מחדש ולא עובר מטבוליזם. כגון התנהגות נמצאה להיות אמיתי לאינולין, ואישור אינולין הפך סטנדרט זהב לקביעת GFR 3. ואילו אישור של קריאטינין נעשה שימוש נרחב כאמצעי של GFR בבני אדם ובעלי חיים, קריאטינין לא למלא את הדרישות של סמן GFR אידיאלי. בסביבות 10 - 40% מפינוי קריאטינין בבני האדם הוא התוצאה של הפרשה טובולרית פעילה 1, 11, ואת הפרשת כליות של קריאטינין היא גם בולטת בעכברים וחולדות 4, 7, 9, 22. פגיעת כלייתית ידועה להגדיל את הפרשת צינורי של קריאטינין אשר מגבילה את הערך שלו כסמן של 1 GFR, 2. אנחנו הראינו כי איזופורם טרנספורטר אניון האורגני בעבר3 (OAT3) תורם להפרשת קריאטינין כליות עכברית 22. עם זאת, בדרך כלל דורש אישור אינולין השימוש באינולין שכותרתו רדיואקטיבית (3 H או 14 ג). נחישות רדיואקטיבית של אינולין יכולה לשמש גם בעכברים מורדמים ומודעים, אבל מטפחת את החסרונות של תקנות בטיחות רבות וסוגיות טיפול מחמירות הגלומות בשימוש באיזוטופים רדיואקטיביים. לאורך שורות אלה, הכנות לפינוי כירורגיות קביעת GFR הן זמן רב, כמו גם מסוף בטבע. בשנת 1999 לורנץ ואח&#39;. הציג 12 FITC-אינולין כסמן של אחת נפרון GFR בעכברים מורדמים. חמש שנים לאחר מכן צ&#39;י et al. נקבע 15 כל הכליה GFR בעכברים מודעים באמצעות FITC-אינולין. פרוטוקולים אלטרנטיביים כיום באמצעות FITC-אינולין כסמן אקסוגני למדוד GFR בעכברים מודעים ומורדמים. פרוטוקולים אלה לשמר את הרגישות של אינולין רדיואקטיבי באמצעות הקרינה detectiובעקיפה על החסרונות של עבודה עם סמן מסומן רדיואקטיבית. Assay FITC-אינולין שונה על ידי אחרים 7, 8 ו 22, 23 לנצל את היכולת של microvolume 3300 fluorospectrometer NanoDrop. זה מאפשר להקטין את נפח הדגימה הכולל דרוש ל&lt; דם μl 100 לGFR מדידה. עם השיטה ופרוטוקול העברת נתונים גבוה סיפק בפרסום זה, אנחנו מדגימים את היתכנות המדידה GFR בעד 24 עכברים מודעים ליום. טכניקה זו יכולה להיות שימושית לחוקרים אחרים הלומדים GFR העכברי ואנו מקווים שהוא יחליף את שיטות פחות מדויקות ככל מדדים לתפקוד כליות, כגון קריאטינין וחנקן אוריאה בדם.

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>FITC-inulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3272</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7706</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td> Webster ממברנת דיאליזה <td>וטרינרית</td><td>78366551</td><td></td></tr><tr><td>(MWCO 1000)</td><td>Spectrum Laboratories</td><td>132636</td><td></td></tr><tr>ספקטרום<td>סגירת ממברנה</td><td> מעבדות</td><td>132736</td><td></td></tr><tr><td>80 &mu; l נימי המטוקריט</td><td>Drummond Scientific</td><td>22362566</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגת המטוקריט</td><td>IEC</td><td>Micro-MB</td><td></td></tr><tr><td>10 &mu; l Na+-Heparin minicaps</td><td>Hirschmann</td><td>9000210</td><td></td></tr><tr><td>מזרק (100 &mu; l)</td> <td>המילטון</td><td>80601</td><td></td></tr><tr><td>פלואורוספקטרומטר</td><td>Thermo-Fisher Scientific</td><td>NanoDrop 3300</td><td></td></tr><tr><td>מסנן (0.22 &mu; m)</td> <td>מעבדות ספקטרום</td><td>880-26464-UE</td><td></td></tr><tr><td>איטום</td><td>Ch&#226;-אטום</td><td>510</td><td></td></tr><tr><td>מחטים (G26 &frac12; ו-G30 &frac12;)</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>305111 & 305106</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטת תפוקה גבוהה למדידה של קצב סינון הגלומרולרי בעכברים בהכרה

A High-throughput Method for Measurement of Glomerular Filtration Rate in Conscious Mice

המדידה של קצב סינון גלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד כליות. נכון לעכשיו, חוקרים לקבוע GFR על ידי מדידת רמת קריאטינין הסמן הביולוגי אנדוגני או יישומי רדיואקטיבי אינולין שכותרת exogenously (3 H או 14 ג). יש קריאטינין חסרון המשמעותי שהחשבונות טובולרית הפרוקסימלי ל~ 50% מהפרשת קריאטינין כליה מוחלטת ולכן קריאטינין לא GFR סמן אמין. בהתאם לניסוי שבוצע, ניתן לקבוע אישור אינולין ידי הזרקה תוך ורידית או בולוס יחידה עירוי מתמשך (minipump תוך ורידית או האוסמוטי). שתי הגישות דורשות אוסף של פלזמה או פלזמה ושתן, בהתאמה. חסרונות אחרים של אינולין שכותרתו רדיואקטיבית כוללים שימוש באיזוטופים, זמן רב הכנה כירורגית של בעלי החיים, ואת הדרישה של ניסוי מסוף. כאן אנו מתארים שיטה שבה משתמשת בזריקת בולוס בודדת שלisothiocyanate-(FITC) אינולין שכותרת והמדידה של הקרינה שלה ב1-2 μl של פלזמה דילול והעמסת. על ידי יישום מודל דו תא, עם 8 אוספי דם לכל עכבר, ניתן למדוד GFR בעד 24 עכברים ליום באמצעות פרוטוקול זרימת עבודה מיוחד. שיטה זו דורשת הרדמה isoflurane קצרה עם כל דגימות הדם שנאספו בעכבר הלא מרוסן וער בלבד. יתרון נוסף הוא שאפשר לעקוב אחרי עכברים על פני תקופה של מספר חודשים וטיפולים (כלומר עושה ניסויים לזווג עם שינויים תזונתיים או יישומי סמים). אנו מקווים כי טכניקה זו של המדידה GFR היא שימושית לחוקרים אחרים הלומדים בתפקוד כליות עכבר ותחליף שיטות פחות מדויקות של הערכת תפקוד כליות, כמו פלזמה וחנקן האוריאה קריאטינין בדם.

GFR יחושב באמצעות נוסחה הבאה: GFR = n / (A/K1 + B/K2), שבו n = כמות מוזרקת (n = C C = ריכוז FITC-אינולין, V = נפח מוזרק • V, שם) = Span1, חיתוך-y של אלימינציה K1 = ריקבון מתמיד לחיסול B = Span2, Y-ליירט הפצה ריקבון = K2 מתמיד להפצה הערה:, K1, B ו-K2 הם קיצורים שניתנו על ידי פריזמה GraphPad, כל תוכנה מסוגלת לנתח דעיכה מעריכית שני שלבים יכול להיות בשימוש, לעומת זאת, תוכנות מדעיות אחרות עלולות להשתמש בקיצורים שונים. על ידי שימוש בהתאמת שני שלבי מעריכי ריקבון עקום, שמבוססת על ריכוזי FITC-אינולין פלזמה, יש לקבל את עקומה דומה לזה שמוצג באיור 1. חישוב GFR על ידי נוסחה שהוצגה לעיל (וכפי שמתואר בכאן &lt;sup&gt; 20) מאפשר לזהות ירידת ערך של תפקוד כליות 15 או hyperfiltration גלומרולרי 8, 23 כפי שנמצא בעכברים עם סוכרת מסוג 1 סוכרת (איור 2). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50330/50330fig1.jpg" /> איור 1. כדי למדוד GFR בעכברים מודעים, קינטיקה הפלזמה של FITC-אינולין לאחר הזרקה תוך ורידית אחת במינון משמשת. לחישוב GFR, מודל דו תא הוא מועסק. במודל דו התא, שלב הדעיכה המהיר הראשוני מייצג חלוקה מחדש של FITC-אינולין מתא intravascular לנוזל חוץ התאי. השלב מאוחר יותר, עם דעיכה איטית בריכוז FITC-אינולין, בעיקר משקף אישור מערכתי מהפלזמה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/50330/50330fig2.jpg" /> איור 2. Detection של hyperfiltration סוכרת בעכברים מסוג פראי. סוג אני סוכרת הייתה מושרה על ידי יישום intraperitoneal של streptozotocin (STZ, 50 מ&quot;ג / ק&quot;ג במשך 5 ימים רצופים). GFR נקבע לפני (בסיס) ו 5 שבועות לאחר הגיוס של סוכרת. בשל משוב tubuloglomerular, גידול עיקרי בספיגה חוזרת הפרוקסימלי גורם hyperfiltration הסוכרתי המוקדם 21 ממצא שניתן לשחזור בwild-type עכברים (n = 10, p &lt;0.01 בהשוואה לאותו בסיס עכבר). <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/50330/50330fig3.jpg"/> איור 3. תרשים זרימה למדידת GFR בסט של 6 עכברים. כדי למדוד כל הכליה GFR בשיטת הזרקת בולוס הבית, 8 דגימות דם חייב להיות שנאספו בבית 3, 5, 7, 10 דקות, 15, 35, 56 ו -75 לאחר הזרקת FITC-אינולין. מספרים מצביעים על נקודות זמן. מספרים בסוגריים מציינים את מספר מדגם. נקודות זמן שנותרו מהקו האדום האנכי מעידות הזרקהנקודות זמן (ב 0, 11, 22, 33, 44 ו -55 דקות). כל עכבר מסומן בצבע שונה. כדי לקבל אוספי דם רציפים בצע את החצים. גריי תיבות לציין מתי חייב להיות מוכן העכבר הבא להרדמת isoflurane לפני הזריקה. באמצעות פרוטוקול זה הזמן המינימאלי בין 2 אוספי דם מעכברים שונים הוא 1 דקות.

מדידה של קצב סינון גלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד כליות. כאן אנו מתארים שיטת תפוקה גבוהה המאפשרת קביעת GFR בעכברים מודעים באמצעות זריקה אחת בולוס, קביעת isothiocyanate ההעמסה (FITC)-אינולין בפלזמה וחישוב GFR ידי מודל דעיכה מעריכית שני שלבים.

The measurement of  glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function  assessment. Currently, investigators determine GFR by ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להדגים לחוקרים אחרים כיצד לקבוע את תפקודי הכליות בעכברים ערים. דבר זה מושג תחילה על ידי דיאליזה של fluorescein isothiocyanate, או FSE inulin למשך 24 שעות וקביעת ריכוזו להזרקה. השלב השני כולל שקילת העכבר, הכנת נפחים מדויקים של fitzy inulin להזרקה רטרובולברית (retrobulbar injection), והרדמת העכבר.בשלב הבא, מתבצעת הזרקת Fitz Nulin רטרובולברית ונלקחות שמונה דגימות דם לאורך תקופה של 75 דקות. השלב הסופי הוא מדידת Fitz Nulin באמצעות פלואורו-ספקטרומטר למיקרו-נפחים וחישוב תפקוד הכליות באמצעות מודל דעיכה מעריכית דו-פאזי. השילוב הסופי בין הרגישות של שיטת הזרקת הבולוס הבודד של Fiti Nulin לבין יכולת המיקרו-נפח של הפלואורו-ספקטרומטר מאפשר זיהוי הבדלים בתפקוד הכליות הנגרמים על ידי שינויים גנטיים בעכברים, שינויים תזונתיים או יישומים תרופתיים.היתרונות העיקריים של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון עירוי רציף ותנאי הרדמה, השתלת מיני-משאבות אוסמוטיות או שימוש באינולין רדיואקטיבי, הם שאין צורך בניתוח. זהו אינו ניסוי טרמינלי. אין צורך באיסוף שתן, וניתן למדוד עד 24 M ליום.אדגים הליך זה יחד עם מריה אזימו, עמיתה למחקר מהמעבדה שלי, להכנת תמיסת ההזרקה של Fitzy Nulin. שקלו כמות מספקת של ZI inulin לשני מיליליטרים של תמיסה בריכוז 5%, המיסו את ה-inulin המסומן בתמיסת sodium chloride בריכוז 0.85% על ידי חימום ל-90 °C עד להמסה מלאה. השריגו פיסת ממברנת דיאליזה באורך 20 סנטימטרים במים מזוקקים פעמיים למשך 30 דקות כדי להסיר שאריות של sodium acid מהממברנה, שטפו את הממברנה מספר פעמים לאחר מכן, מלאו את ממברנת הדיאליזה ב-fitzy inulin מומס, אטמו כראוי באמצעות סוגרים, ולאחר מכן שקלו את הממברנה כולה.יש לאפשר ל-fitzy inulin המומס לעבור דיאליזה בליטר אחד של תמיסת sodium chloride בריכוז 0.85%, תוך ערבוב איטי והגנה מאור למשך 24 שעות בטמפרטורת החדר. לאחר הדיאליזה, שקול שוב את ממברנת הדיאליזה כולה וחשב את הריכוז החדש. מים יעברו באופן אוסמוטי אל תוך הממברנה ו-FSI שאינו קשור יעבור החוצה ממנה. לפיכך, ריכוז ה-FSI inulin יפחת באופן משמעותי.חשבו את ריכוז ה-fit e inulin החדש באמצעות נוסחה זו, כאשר C הוא הריכוז החדש, N היא כמות ה-fit E inulin ההתחלתית, ו-V הוא הנפח החדש, המהווה את הפרש המשקל של צינור הדיאליזה לפני ואחרי הדיאליזה, בתוספת נפח תמיסת ה-fitzy inulin ההתחלתית. לאחר מכן, סטריליזו את התמיסה שעברה דיאליזה באמצעות סינון דרך מסנן מזרק של 0.22 micron.זכרו להגן תמיד על ה-fitzy inulin מפני אור כדי למנוע פוטובליצ'ינג (photobleaching) לפני הניסוי. שקלו את העכברים לאחר הרדמה קצרה באמצעות 4% עד 5% ISO fluorine. בדקו את עומק ההרדמה באמצעות רפלקס בהונות. שאבו 2 µL לגרם ממשקל הגוף של fitzy nulin דיאליזד באמצעות מזרק Hamilton של 100 µL עם מחט gauge 26 באורך חצי אינץ' כדי להוציא בועות אוויר, ולאחר מכן עברו למחט gauge 30 באורך חצי אינץ' לצורך ההזרקה.המשיכו להזרקת ה-fitzy inulin שעבר דיאליזה אל הפלקסוס הרטרו-אורביטלי (retroorbital plexus). אפשרו לעכברים להתאושש באופן ספונטני בכלוב הבית שלהם. גזרו פעם אחת עם מספריים מקטע של מילימטר אחד מזנב העכבר ואספו דם בנקודות זמן מרובות לאחר ההזרקה לתוך קפילריות מיני עם נתרן הפרין.אטמו את המיני-קפילריות לאחר איסוף הדם באמצעות cha seal ושמרו את הדגימות מוגנות מאור. הכניסו את המיני-קפילריות האטומות לתוך קפילריות המטוקריט וסובבו בצנטריפוגה למשך חמש דקות לאחר הצנטריפוגה. שברו את המיני-קפילריות באמצעות חותך יהלום והעבירו את כל הפלזמה באמצעות פיפטה לשפופרת של 0.2 milliliter.בצעו דילול של 1:10 באמצעות שני µL של פלזמה ו-18 µL של HEPES בריכוז 0.5 moles per liter במבחנה חדשה של 0.2 milliliter. לאחר מכן, מדדו שני µL של הדגימה המדוללת באמצעות NanoDrop 3, 300 בשתי חזרות עבור תפוקה גבוהה של שישה עכברים. אנא עקבו אחר פרוטוקול תרשים הזרימה המופיע בפרוטוקול הטקסט כדי למדוד GFR של כליה שלמה בשיטת הזרקת בולוס בודד; יש לאסוף שמונה דגימות דם ב-3, 5, 7, 10, 15, 35, 56 ו-75 דקות לאחר הזרקת FSE inulin.בתרשים זרימה זה, המספרים מציינים את נקודות הזמן של האיסוף, בעוד שהמספרים בסוגריים מציינים את מספר הדגימה; נקודות הזמן משמאל לקו האדום האנכי מציינות את נקודות הזמן של ההזרקה. כל עכבר מסומן בצבע שונה. כדי לבצע איסופי דם רצופים, עקבו אחר החצים.תיבות אפורות מציינות מתי יש להכין את העכבר הבא להרדמה ב-isof fluorine לפני ההזרקה לפי פרוטוקול זה. הזמן המינימלי בין שתי דגימות דם מעכברים שונים הוא דקה אחת. יש לדלל את תמיסת ההזרקה של fitzy nulin עם פלזמה של עכבר מדוללת כדי לקבל את הדילולות הסטנדרטיות המפורטות בפרוטוקול הכתוב. ריכוז הסטנדרטים יהיה תלוי בדיאליזה וישתנה תמיד עבור כל הכנה של FSI nulin.לפיכך, יש להזין את הריכוז עבור עקומת התקן בכל פעם. נתחו את הנתונים כדי לחשב את קצב הסינון הגלומרולרי (GFR) באמצעות תוכנה מתאימה, תוך שימוש בפונקציית דעיכה אקספוננציאלית דו-פאזית, כפי שמתואר בפירוט בפרוטוקול הטקסט למדידת GFR בעכברים בהרהוריות. לצורך חישוב ה-GFR נעשה שימוש בקינטיקה של פלזמת ZI inulin לאחר הזרקה תוורידית של מנה אחת, ובמסגרת זאת מיושם מודל של שני תאים.שלב הדעיסה המהירה הראשוני מייצג את התפלגות ה-fitzy inulin מהמדור התוך-כלי אל הנוזל החוץ-תאי. השלב המאוחר, המתאפיין בדעיסה איטית יותר של ריכוז ה-fitzy inulin, משקף בעיקר פינוי מערכתי מהפלזמה. סוכרת מסוג 1 הושרה באמצעות הזרקה תוך-פריטונית של streptozotocin.קצב הסינון הגלומרי (GFR) נקבע לפני וחמישה שבועות לאחר השראת סוכרת; בעוותים עם סוכרת מסוג 1 נצפתה בבירור היפר-פילטרציה גלומרית. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן מדידת GFR בעכברים בוגרים באמצעות טכניקת הזרקת בולוס בודד ויישום מודל DK אקספוננציאלי דו-פאזי.

a-high-throughput-method-for-measurement-glomerular-filtration-rate

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מציג שאיפת נוזלים מגלומרולי עכבר באמצעות טכניקת מיקרו-ניקוב בתיווך שני פוטונים. הטכניקה מספקת גישה לגלומרולי של העכבר החי ובכך מסייעת לקבל תובנות על הפיזיולוגיה של הכליה.

שאיפת נוזל מגלומרולי עכבר: שיטה לשאיפת נוזל גלומרולרי מעכבר באמצעות מיקרופונקטורה בתיווך שני פוטונים

טכניקת ניצול הרזולוציה הגבוהה intavital מיקרוסקופיה 2 פוטונים ישירות לדמיין ולכמת סינון gloemrular במשטח glomeruli. שיטה זו מאפשרת קביעה ישירה של מאפייני חדירות של מולקולות במצבים נורמלים ובחולים.

כימות חדירות גלומרולרי של מקרומולקולות פלורסנט באמצעות מיקרוסקופ 2-פוטון בחולדות Wistar מינכן

מטרת פרוטוקול זה היא להדגים את העקרונות והטכניקות למדידה וחישוב קצב הסינון הגלומרולרי, קצב זרימת השתן והפרשת נתרן ואשלגן בחולדה. ניתן להשתמש בהדגמה זו כדי לספק לתלמידים הבנה מושגית כוללת כיצד למדוד תפקוד כליות.

הפגנת מעבדה לפיזיולוגיה: גלומרולרי סינון שיעור בחולדה

קביעת קצב הסינון הגלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד הכליות הכללי. עם זאת, הליכים מסורתיים למדידת פרמטר זה הם מסורבלים ודורשים השקעה גדולה של זמן. כאן אנו מתארים שיטה מהירה וזעיר פולשנית לקביעת GFR דרך העור.

הערכת Transcutaneous של תפקוד כלייתי במכרסמי Conscious

פרוטוקול זה מתאר של הכליה מלא עבודה מעלה כי צריך להתבצע במודלים של העכבר של מחלת glomerular. השיטות מאפשרים ניתוח פונקציונלי, מבניים מכניסטית מפורט של הפונקציה glomerular, אשר ניתן להחיל על כל הדגמים העכבר של המחלה glomerular.

הערכה של תפקוד כליות במודלים של העכבר של מחלת Glomerular

אנו מציגים את השימוש פוטון 2 מיקרוסקופ כדי למקם את micropipette במרחב השתן של באומן בעכברים, שילוב טכניקות היסוד 2 של פיזיולוגיה של הכליה. השימוש מיקרוסקופ פוטון 2 גוברת על מגבלות קריטי של מיקרוסקופ רגיל ללימודי micropuncture פיזיולוגיה של הכליה.

Micropuncture של השטח של באומן בעכברים בהנחייתם של מיקרוסקופיית פוטון 2

כאן נתאר פרוטוקול כדי למדוד את קצב הסינון glomerular (GFR), בהכרה, לנוע בחופשיות עכברים באמצעות צג GFR דרך העור.

Transdermal מדידה של קצב הסינון Glomerular בעכברים

בעכברים המשתמשים במעקב. רגיש ולא רדיואקטיבי שיטה זו מאפשרת ניתוחי שתן חוזרים ונשנים עם כמויות שתן קטנות.

מדידה רגישה מאוד של חדירות הפקאוליות בעכברים עם פלואורואסעין איזוטיקריאט-פוליסוכרוז 70

כאן אנו מציגים פרוטוקול המשתמש במיקרוסקופיה של 2 פוטונים בחולדות Wistar Fromter במינכן עם גלומרולי פני השטח כדי לכמת את ההשפעות של חסימת שופכה ממושכת על הדינמיקה והתפקוד של גלומרולרי.

שימוש במיקרוסקופיה של 2-פוטונים כדי לכמת את ההשפעות של חסימת שופכה חד-צדדית כרונית על תהליכים גלומרולריים

קצב סינון גלומרולרי (GFR) הוא הסמן האידיאלי להערכת תפקוד הכליות. עם זאת, שיטת המדידה הסטנדרטית באמצעות הזרקת אינולין עם ניתוח דם ושתן סדרתי אינה מעשית. מאמר זה מתאר שיטה מעשית למדידת GFR באופן טרנסדרמלי בחזירונים.

מדידה טרנסדרמלית של קצב סינון גלומרולרי בחזירונים מאווררים מכנית

מחקר זה מציג מערך קל לשימוש, שלם ופשוט של שיטות לתייג ולנתח גלומרולי מכליות עכבר שעברו ניקוי מעוקב. נתונים כגון מספר גלומרולוס ונפח ניתן להשיג בקלות ובאמינות באמצעות fluorescein isothiocyanate (FITC)-Dextran, מיקרוסקופ פלואורסצנטי גיליון אור (LSFM), או מיקרוסקופ קונפוקלי נפוץ ותוכנה כגון Imaris.

שיטה יעילה ומהירה לתיוג וניתוח גלומרולי עכבר

למד שיטה לא פולשנית למדידת קצב סינון גלומרולרי בעכברים בהכרה באמצעות הזרקת FITC-inulin ומודל דעיכה מעריכית דו-שלבי. הטכניקה מאפשרת זיהוי שינויים בפונקציית הכליות ללא ניתוח.

שיטת תפוקה גבוהה למדידה של קצב סינון הגלומרולרי בעכברים בהכרה

גלה סרטונים נוספים