Name: הרכבה של nucleosomal מערכים מההיסטונים ליבת רקומביננטי והנוקלאוזום המיקום DNA (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-10T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: למדו להרכיב מערכי נוקלאוזומים מהיסטוני ליבה רקומביננטיים ו-DNA ממקם נוקלאוזומים. השיטה כוללת דיאליזה, כרומטוגרפיית הפרדה בגודל ומיקרוסקופיית כוח אטומי לבדיקת רוויה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענקי GM45916 וGM66834 לJCH ומלגה מהקרן הבינלאומית תסמונת רט לAK עבודה זו נתמכה גם על ידי מענק NIH GM088409 והמכון רפואי הווארד יוז תרומות לKL

<ol><li>Luger, K., Mader, A., Richmond, R., Crystal Sargent, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((structure+of+the+nucleosome+core+particle+at+2.8+A+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">structure of the nucleosome core particle at 2.8 A resolution.</a> Nature. 7, (1997).</li>
<li>Hansen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+dynamics+of+the+chromatin+fiber+in+solution%3A+determinants%2C+mechanisms%2C+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biomolecular+Structure%22%5BJournal%5D)">Conformational dynamics of the chromatin fiber in solution: determinants, mechanisms, and functions.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 31, 361-392 (2002).</li>
<li>McBryant, S., Adams, V., Hansen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+architectural+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Research%22%5BJournal%5D)">Chromatin architectural proteins.</a> Chromosome Research. 14 (1), 39-51 (2006).</li>
<li>Hansen, J. C., Ausio, J., Stanik, V. H., van Holde, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homogeneous+reconstituted+oligonucleosomes%2C+evidence+for+salt-dependent+folding+in+the+absence+of+histone+H1%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Homogeneous reconstituted oligonucleosomes, evidence for salt-dependent folding in the absence of histone H1.</a> Biochemistry. 28 (23), 9129-9136 (1989).</li>
<li>Szerlong, H. J., Prenni, J. E., Nyborg, J. K., Hansen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activator-dependent+p300+acetylation+of+chromatin+in+vitro%3A+enhancement+of+transcription+by+disruption+of+repressive+nucleosome-nucleosome+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Activator-dependent p300 acetylation of chromatin in vitro: enhancement of transcription by disruption of repressive nucleosome-nucleosome interactions.</a> The Journal of Biological Chemistry. 285 (42), 31954-31964 (2010).</li>
<li>Cirillo, L. A., Lin, F. R., Cuesta, I., Friedman, D., Jarnik, M., Zaret, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opening+of+compacted+chromatin+by+early+developmental+transcription+factors+HNF3+%28FoxA%29+and+GATA-4%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cell%22%5BJournal%5D)">Opening of compacted chromatin by early developmental transcription factors HNF3 (FoxA) and GATA-4.</a> Molecular Cell. 9 (2), 279-289 (2002).</li>
<li>Nguyen, C., Gonzales, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((chromatin+structure+associated+with+methylation-induced+gene+silencing+in+cancer+cells%3A+correlation+of+accessibility%2C+methylation%2C+MeCP2+binding+and+acetylation%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">chromatin structure associated with methylation-induced gene silencing in cancer cells: correlation of accessibility, methylation, MeCP2 binding and acetylation.</a> Nucleic Acids Research. 29 (22), 4598-4606 (2001).</li>
<li>Cuesta, I., Zaret, K. S., Santisteban, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+forkhead+factor+FoxE1+binds+to+the+thyroperoxidase+promoter+during+thyroid+cell+differentiation+and+modifies+compacted+chromatin+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">The forkhead factor FoxE1 binds to the thyroperoxidase promoter during thyroid cell differentiation and modifies compacted chromatin structure.</a> Molecular and Cellular Biology. 27 (20), 7302-7314 (2007).</li>
<li>Simpson, R. T., Stafford, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+features+of+a+phased+nucleosome+core+particle%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Structural features of a phased nucleosome core particle.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U S A. 80 (1), 51-55 (1983).</li>
<li>Lowary, P. T., Widom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+DNA+sequence+rules+for+high+affinity+binding+to+histone+octamer+and+sequence-directed+nucleosome+positioning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">New DNA sequence rules for high affinity binding to histone octamer and sequence-directed nucleosome positioning.</a> Journal of Molecular Biology. 276 (1), 19-42 (1998).</li>
<li>Lowary, P., Widlund, H., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+motifs+and+free+energies+of+selected+natural+and+non-natural+nucleosome+positioning+DNA+sequences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Sequence motifs and free energies of selected natural and non-natural nucleosome positioning DNA sequences.</a> Journal of Molecular Biology. 288, 213-229 (1999).</li>
<li>Gordon, F., Luger, K., Hansen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Core+Histone+N-terminal+Tail+Domains+Function+Independently+and+Additively+during+Salt-dependent+Oligomerization+of+Nucleosomal+Arrays+%2A%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The Core Histone N-terminal Tail Domains Function Independently and Additively during Salt-dependent Oligomerization of Nucleosomal Arrays *.</a> The Journal of Biological Chemistry. 280 (40), 33701-33706 (2005).</li>
<li>Luger, K., Rechsteiner, T. J., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+purification+of+recombinant+histones+and+nucleosome+reconstitution%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology+%28Clifton%2C+N.J.%29%22%5BJournal%5D)">Expression and purification of recombinant histones and nucleosome reconstitution.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 119 (4), 1-16 (1999).</li>
<li>McBryant, S. J., Klonoski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+histone+H4+N-terminal+domain+function+during+nucleosomal+array+oligomerization%3A+roles+of+amino+acid+sequence%2C+domain+length%2C+and+charge+density%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Determinants of histone H4 N-terminal domain function during nucleosomal array oligomerization: roles of amino acid sequence, domain length, and charge density.</a> The Journal of Biological Chemistry. 284 (25), 16716-16722 (2009).</li>
<li>Ma Shogren-Knaak,, Fry, C. J., Peterson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+native+peptide+ligation+strategy+for+deciphering+nucleosomal+histone+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A native peptide ligation strategy for deciphering nucleosomal histone modifications.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (18), 15744-158 (2003).</li>
<li>Lu, X., Simon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+H3K79+dimethylation+and+H4K20+trimethylation+on+nucleosome+and+chromatin+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The effect of H3K79 dimethylation and H4K20 trimethylation on nucleosome and chromatin structure.</a> Nat Struct Mol Biol. 15 (10), 1122-1124 (2008).</li>
<li>Ausio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+Ultracentrifugation+for+the+Analysis+of+Chromatin+Structure%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Analytical Ultracentrifugation for the Analysis of Chromatin Structure.</a> Biophysical Chemistry. 86 (2-3), 141-153 (2000).</li>
<li>Hansen, J., Kreider, J., Demeler, B., Fletcher, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+ultracentrifugation+and+agarose+gel+electrophoresis+as+tools+for+studying+chromatin+folding+in+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Analytical ultracentrifugation and agarose gel electrophoresis as tools for studying chromatin folding in solution.</a> Methods. 12 (1), 62-72 (1997).</li>
<li>Montel, F., Menoni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+of+individual+nucleosomes+controls+the+chromatin+condensation+pathway%3A+direct+atomic+force+microscopy+visualization+of+variant+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">The dynamics of individual nucleosomes controls the chromatin condensation pathway: direct atomic force microscopy visualization of variant chromatin.</a> Biophysical Journal. 97 (2), 544-5453 (2009).</li>
<li>Muthurajan, U. M., McBryant, S. J., Lu, X., Hansen, J. C., Luger, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+linker+region+of+macroH2A+promotes+self-association+of+nucleosomal+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The linker region of macroH2A promotes self-association of nucleosomal arrays.</a> The Journal of Biological Chemistry. 286 (27), 23852-23864 (2011).</li>
<li>Shlyakhtenko, L. S., Lushnikov, A. Y., Lyubchenko, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+nucleosomes+revealed+by+time-lapse+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Dynamics of nucleosomes revealed by time-lapse atomic force microscopy.</a> Biochemistry. 48 (33), 7842-7848 (2009).</li>
<li>Lohr, D., Bash, R., Wang, H., Yodh, J., Lindsay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+atomic+force+microscopy+to+study+chromatin+structure+and+nucleosome+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+%28San+Diego%2C+Calif%29%22%5BJournal%5D)">Using atomic force microscopy to study chromatin structure and nucleosome remodeling.</a> Methods (San Diego, Calif). 41 (3), 333-341 (2007).</li>
<li>Dyer, P. N., Edayathumangalam, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+nucleosome+core+particles+from+recombinant+histones+and+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of nucleosome core particles from recombinant histones and DNA.</a> Methods in Enzymology. 375, 23-44 (2004).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+cloning%3A+a+laboratory+manual%22">Molecular cloning: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2001).</li>
<li>Balbo, A., Zhao, H., Brown, P. H., Schuck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly%2C+loading%2C+and+alignment+of+an+analytical+ultracentrifuge+sample+cell%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assembly, loading, and alignment of an analytical ultracentrifuge sample cell.</a> J. Vis. Exp. (33), e1530(2009).</li>
<li>Demeler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UltraScan%3A+a+comprehensive+data+analysis+software+package+for+analytical+ultracentrifugation+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Analytical+Ultracentrifugation%3A+Techniques%22%5BJournal%5D)">UltraScan: a comprehensive data analysis software package for analytical ultracentrifugation experiments.</a> Modern Analytical Ultracentrifugation: Techniques. , 210-230 (2005).</li>
<li>Holde, K. V., Weischet, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boundary+analysis+of+sedimentation+velocity+experiments+with+monodisperse+and+paucidisperse+solutes%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Boundary analysis of sedimentation velocity experiments with monodisperse and paucidisperse solutes.</a> Biopolymers. 17 (6), 1387-1403 (1978).</li>
<li>Demeler, B., van Holde, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sedimentation+velocity+analysis+of+highly+heterogeneous+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Sedimentation velocity analysis of highly heterogeneous systems.</a> Analytical Biochemistry. 335, 279-288 (2004).</li>
<li>Hansen, J., Lohr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+and+structural+properties+of+subsaturated+chromatin+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Assembly and structural properties of subsaturated chromatin arrays.</a> Journal of Biological Chemistry. 8, 5840-5848 (1993).</li>
<li>Routh, A., Sandin, S., Rhodes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleosome+repeat+length+and+linker+histone+stoichiometry+determine+chromatin+fiber+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleosome repeat length and linker histone stoichiometry determine chromatin fiber structure.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the U S A. 105 (26), 8872-8877 (2008).</li>
<li>Zhou, J., Fan, J. Y., Rangasamy, D., Tremethick, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nucleosome+surface+regulates+chromatin+compaction+and+couples+it+with+transcriptional+repression%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Structural+%26+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The nucleosome surface regulates chromatin compaction and couples it with transcriptional repression.</a> Nature Structural & Molecular Biology. 14 (11), 1070-1076 (2007).</li>
<li>Dorigo, B., Schalch, T., Kulangara, A., Duda, S., Schroeder, R. R., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleosome+arrays+reveal+the+two-start+organization+of+the+chromatin+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22%5BJournal%5D)">Nucleosome arrays reveal the two-start organization of the chromatin fiber.</a> Science (New York, N.Y.). 306 (5701), 1571-1573 (2004).</li>
<li>Correll, S. J., Schubert, M. H., Grigoryev, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Short+nucleosome+repeats+impose+rotational+modulations+on+chromatin+fibre+folding%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">a Short nucleosome repeats impose rotational modulations on chromatin fibre folding.</a> The EMBO Journal. 31 (10), 2416-2426 (2012).</li>
<li>Mcbryant, S. J., Krause, C., Woodcock, C. L., Hansen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Silent+Information+Regulator+3+Protein+%2C+SIR3p+%2C+Binds+to+Chromatin+Fibers+and+Assembles+a+Hypercondensed+Chromatin+Architecture+in+the+Presence+of+Salt%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">The Silent Information Regulator 3 Protein , SIR3p , Binds to Chromatin Fibers and Assembles a Hypercondensed Chromatin Architecture in the Presence of Salt.</a> Molecular and Cellular Biology. 28 (11), 3563-3572 (2008).</li>
<li>Schalch, T., Duda, S., Sargent, D. F., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+structure+of+a+tetranucleosome+and+its+implications+for+the+chromatin+fibre%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">X-ray structure of a tetranucleosome and its implications for the chromatin fibre.</a> Nature. 436 (7047), 138-1341 (2005).</li>
<li>Fan, J. Y., Gordon, F., Luger, K., Hansen, J. C., Tremethick, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+essential+histone+variant+H2A.Z+regulates+the+equilibrium+between+different+chromatin+conformational+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">The essential histone variant H2A.Z regulates the equilibrium between different chromatin conformational states.</a> Nature Structural Biology. 9 (3), 172-176 (2002).</li>
<li>Carruthers, L. M., Bednar, J., Woodcock, C. L., Hansen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linker+histones+stabilize+the+intrinsic+salt-dependent+folding+of+nucleosomal+arrays%3A+mechanistic+ramifications+for+higher-order+chromatin+folding%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Linker histones stabilize the intrinsic salt-dependent folding of nucleosomal arrays: mechanistic ramifications for higher-order chromatin folding.</a> Biochemistry. 37 (42), 14776-14787 (1998).</li>
<li>Huynh, V. A. T., Robinson, P. J. J., Rhodes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Method+for+the+In+Vitro+Reconstitution+of+a+Defined+%26%2334%3B30+nm%26%2334%3B+Chromatin+Fibre+Containing+Stoichiometric+Amounts+of+the+Linker+Histone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A Method for the In Vitro Reconstitution of a Defined &#34;30 nm&#34; Chromatin Fibre Containing Stoichiometric Amounts of the Linker Histone.</a> Journal of Molecular Biology. 345 (5), 957-968 (2005).</li>
<li>Dorigo, B., Schalch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+fiber+folding%3A+requirement+for+the+histone+H4+N-terminal+tail%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chromatin fiber folding: requirement for the histone H4 N-terminal tail.</a> J. Mol. Biol. 2836 (03), 85-96 (2003).</li>
<li>Qian, R. L., Liu, Z. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+chromatin+folding+patterns+in+chicken+erythrocytes+by+atomic+force+microscopy+%28AFM%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Visualization of chromatin folding patterns in chicken erythrocytes by atomic force microscopy (AFM.</a> Cell Research. 7 (2), 143-150 (1997).</li>
</ol>

יש המחברים אין ניגודי אינטרסים.

מערכי nucleosomal מודל הם כלי מאוד שימושי עבור המחקר במבחנה של מבנה הכרומטין ותפקוד. לדוגמא, הם היו בשימוש נרחב כדי ללמוד את המנגנון של עיבוי הכרומטין סיבים בפתרון 30-34, ועשו את זה ניתן להשיג מבנה צילום רנטגן של tetranucleosome 35. לאחרונה הם הוכיחו שימושיים בפענוח ההשפעות המבניות של וריאנטים היסטון ליבה הספציפי, מוטציות ושינויי posttranslational 14-16,36. כאן אנו מתארים שיטה כללית להרכבה של מערכי nucleosomal מודל מ-DNA מיצוב הנוקלאוזום ו...

הגנום אוקריוטים לא קיים DNA עירום כ, אלא הם נדחסו ומאורגנים על ידי חלבונים מאוגדים. מתחמים אלה של ה-DNA וחלבונים ידועים כמו הכרומטין. היחידה החוזרת הבסיסית של הכרומטין היא הנוקלאוזום. הנוקלאוזום מורכב מoctamer היסטון ו146 זוגות בסיסים של DNA העטוף סביב octamer היסטון על פי 1.6 1. Octamer היסטון מורכב משני עותקים כל אחד מH2A ההיסטונים ליבה, H2B, H3 ו-H4. octamers היסטון ליבה שהם מרווחים שוב ושוב לאורך מולקולת הדנ&quot;א נקרא מערכי nucleosomal. המבנה המורחב של מערכי nucleosomal כבר מכונה סיבי 10 ננומטר או &quot;חרוזים על חוט&quot; מבנה ונמצא במבחנה בתנאים דלי מלח 2. סיבי 10 ננומטר הוא מסוגלים עיבוי לתוך מבנים מסדר גבוה יותר באמצעות דחיסה תוך מערך ו / או בין המערך oligomerization 2. יכולים להיגרם מבנים מסדר גבוה יותר אלה בנוכחותם של מלחים,או יכול להיות מושפע באמצעות מחייב של חלבונים אדריכליים הכרומטין למערך nucleosomal 3,4. רמות של דחיסת הכרומטין מתואמות באופן הפוך לשיעור של שעתוק ב5,6 vivo. המחקרים אחרונים מדגיש את החשיבות של הארגון המבני של הגנום בתהליכים כגון בידול, התפתחות הסרטן, ואחרים 7,8. השימוש במערכי nucleosomal ללמוד מבנה הכרומטין ותפקוד הפך נפוצים. כאן אנו מתארים שיטה להרכבה של מערכי nucleosomal מההיסטונים ליבת רקומביננטי ו-DNA מיצוב הנוקלאוזום. באמצעות DNA רקומביננטי בחוזר טנדם של רצפי מיצוב הנוקלאוזום מאפשר לכינון מחדש של מערכים המכילים nucleosomes במרווח קבוע. שניים מהרצפים יותר הפופולריים המיצוב הם רצף גן 5S rRNA ו9,10 &quot;601&quot; הרצף. רצף 601 נגזר מהניסויים Selex ומורדואר בחריפות עמדות nucleosomes מאשר רצף 5S 11. כתוצאה מכך, אורך ה-DNA מקשר של 601 המערכים הוא הומוגנית יותר. ה-DNA מיצוב הנוקלאוזום חוזר Tandemly מתקבלת על ידי סינון ג&#39;ל 4,12. ההיסטונים רקומביננטי הם מטוהרים מE. coli בתנאי denaturing 13. השימוש של ההיסטונים רקומביננטי מאפשר לשלוט בזהירות את הרכב היסטון של מערכי nucleosomal. לדוגמא, ליבת ההיסטונים נושאות מוטציות ספציפיות 14 או לאחר translational שינויים 15,16 יכול להיות תחליף ההיסטונים ליבה מסוג בר. ניסויי מהירות שקיעה לפקח על קצב השיקוע של מקרומולקולות בתמיסה תחת כוח הצנטריפוגלי הוחל 17. זה מניב מידע על הגודל וצורה של מקרומולקולות במדגם. ניסויי מהירות שקיעה הם אפוא כלי מתאים לחקר שינויי מדינת פתרון בסיבים הכרומטיןמבנה בשל עיבוי הכרומטין 18. חשוב מכך, יש צורך קודם כל להשתמש בניסויי מהירות שקיעה כצעד בקרת איכות בכינון מחדש מערך nucleosomal. אם ה-DNA וnucleosomes אינם משולבים ביחס טוחנת הראוי, המערכים עשויים להיות מתחת או עם ההיסטונים ליבה מעל הרווי. לפיכך, המידע שנצבר מניסויים מהירות שקיעה משמש כדי להבטיח כי ה-DNA הוא רווי כראוי עם nucleosomes. חשוב להשתמש בשיטות חלופיות כדי להעריך את הרוויה של DNA עם nucleosomes, במיוחד אם עובד עם תבנית ה-DNA uncharacterized בעבר. לכן, אנו גם מתארים שיטה לניתוח של מערכי nucleosomal באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי (AFM). AFM הוא טכניקה רבת עוצמה המאפשרת הדמיה של ההשפעות של מספר הפרמטרים, כגון הרמה של רוויה, השפעה של הנוכחות של וריאנטים היסטון או את ההשפעות של MgCl 2 19,20. AFM כבר גם appliאד ללמוד דינמיקת הנוקלאוזום באמצעות זמן לשגות הדמיה 21. במבחנה התאסף מערכי 12-mer nucleosomal הם נוחים במיוחד למחקרי AFM בטווח הגודל הנכון עבור ההדמיה AFM 22 כי הם שייכים. במחקר הנוכחי השתמשנו AFM של מערכי nucleosomal כמו בקרת איכות, כמו גם כאמצעי המאשר את הנתונים מAUC (&quot;לראות זה להאמין&quot;). בנוסף להדמיה פשוטה, AFM מאפשר מדידה של פרופילי גובה של דגימות כמדד נוסף.

<table><tbody><tr><td>(3-אמינופרופיל) triethoxysilane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3648-100ML</td><td></td></tr><tr><td>6-8 kDa MWCO צינורות דיאליזה</td><td>פישר</td><td>21-152-5</td><td></td></tr><tr><td>HiLoad Superdex 200 16/60 עמודה</td><td>GE</td><td>17-1069-01</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 50 kDa MWCO רכז צנטריפוגלי</td><td>Sartorius</td><td>VS2031</td><td></td></tr><tr><td>12-14 kDa MWCO צינורות דיאליזה</td><td>פישר</td><td>08-667A</td><td></td></tr><tr><td>Illustra Sephacryl S-1000 Superfine</td><td>GE</td><td>17-0476-01</td><td></td></tr><tr><td>XL-A/I אולטרה-צנטריפוגה אנליטית</td><td>בקמן-קולטר</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הרכבה של nucleosomal מערכים מההיסטונים ליבת רקומביננטי והנוקלאוזום המיקום dna

Assembly of Nucleosomal Arrays from Recombinant Core Histones and Nucleosome Positioning DNA

octamers היסטון ליבה שהם מרווחים שוב ושוב לאורך מולקולת הדנ&quot;א נקרא מערכי nucleosomal. מערכי nucleosomal מתקבלים באחת משתי דרכים: טיהור מin vivo מקורות, או הכינון מחדש במבחנה מההיסטונים ליבת רקומביננטי ו-DNA מיצוב הנוקלאוזום חוזר tandemly. השיטה השנייה יש את היתרון של המאפשר הרכבה של מדים compositionally יותר ומערך nucleosomal ממוקם בדיוק. ניסויי מהירות שקיעה במידע תשואת ultracentrifuge אנליטיים בערך בגודל ובצורה של מקרומולקולות על ידי ניתוח בקצב שבו הם נודדים דרך פתרון מתחת לכוח הצנטריפוגלי. טכניקה זו, יחד עם מיקרוסקופ כוח אטומי, יכולה לשמש לבקרת איכות, על מנת להבטיח כי הרוב המכריע של תבניות DNA רווי בnucleosomes לאחר הכינון מחדש. כאן אנו מתארים את הפרוטוקולים הדרושים כדי לשקם את כמויות מיליגרם של אורך וcompositionally דמערכי nucleosomal efined מתאימים למחקרים ביוכימיים וbiophysical של מבנה הכרומטין ותפקוד.

כדי להמחיש את הפרוטוקול אנחנו מחדש מערכי nucleosomal מההיסטונים רקומביננטי Xenopus הליבה וה-DNA המורכב מבד בבד 12 207 חוזרים נ&quot;ב של רצף 601 מיצוב (601 207 x 12). אנחנו התאספנו ראשון octamers יליד מההיסטונים ליבת lyophilized ולאחר מכן מטוהרים octamers ידי FPLC באמצעות עמודת S200 (איור 1 א). מתחמים גדולים elute מוקדם יותר מעמודת S200. ההיסטונים בדרך elute לפי סדר הבא: אגרגטים היסטון שאינם ספציפיים, octamer היסטון, tetramer H3/H4, ודימר H2A/H...

שיטה מוצגת לכינון מחדש של מערכי nucleosomal מודל מההיסטונים ליבת רקומביננטי ו-DNA מיצוב הנוקלאוזום חוזר tandemly. אנו גם מתארים כיצד ניסויי מהירות שקיעה בultracentrifuge האנליטיות, ומיקרוסקופ כוח אטומי (AFM) משמשים לניטור לאחר הכינון מחדש את מידת הרוויה מערך nucleosomal.

הרכבה של nucleosomal מערכים מההיסטונים ליבת רקומביננטי והנוקלאוזום המיקום DNA

Core histone octamers that are repetitively spaced along a DNA molecule  are called nucleosomal arrays. Nucleosomal arrays are obtained in one of two  ...

ניסוי זה נועד להרכיב מערכי נוקלאוזומים המכילים סדרה של רצפי DNA למיקום נוקלאוזומים החוזרים על עצמם בטנדם עם מספר שווה של נוקלאוזומים. ראשית, יש לקפל מחדש קומפלקסים של היסטונים על ידי דיאליזה של ההיסטונים הליבתיים מתוך באפר דנטורציה. לאחר מכן, יש להפריד את ה-histone emer באמצעות עמודת הדירה גודל (size exclusion column). בשלב הבא, יש לשלב את ה-histone ER עם DNA תבנית בטווח של יחסי מולריות שונים ולהשקיע אותם על ה-DNA כנוקלאוזומים באמצעות דיאליזה מדורגת מרמת מלח גבוהה לנמוכה.בשלב הבא, בדקו את הדגימות בשיטת מהירות שיקוע (sedimentation velocity) כדי לקבוע את היחס המולרי המתאים לרמת הרוויה הרצויה. התוצאות יכולות להראות את רמת הרוויה של המערכים הנוקלאוזומליים בהתבסס על נדידתם בתמיסה תחת כוח צנטריפוגלי, או בהתבסס על תמונה שהופקה באמצעות מיקרוסקופיית כוח אטומי (AFM). היתרון המרכזי של מערכים נוקלאוזומליים על פני נוקלאוזומים בודדים הוא שהנוקלאוזומים מחוברים על ידי DNA מקשר (linker DNA), המטיל אילוץ מבני נוסף.אף ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי מבנה הכרומטין, ניתן להחילה אותה גם על מערכות אחרות, כגון מחקר של תמלול in vitro על תבניות כרומטין. ריין ואנה ידגימו כעת את הרכבת מערכי נוקלאוזומים מחלבונים היסטוניים ליבתיים רקומביננטיים ב-DNA למיקום נוקלאוזומים. התחילו עם חלבוני ההיסטונים הליבתיים הרקומביננטיים המופרדים והליופיליזים H2A, H2B, H3 ו-H4; המיסו כ-5 mg מכל אחד מהם ב-3 mL של בופר פריסה (unfolding buffer) והגרירו למשך שעה אחת לפחות בטמפרטורת החדר תוך써 ערבוב.כעת מדדו את הבליעה של כל תמיסת היסטון ב-276 nanometers תוך שימוש בבופר פריסה (unfolding buffer) כרפרנס. לאחר מכן, חשבו את המולריות של כל היסטון באמצעות מקדמי האטינדציה שלהם. השוו את ריכוז ההיסטון שנקבע על פי הבליעה למשקל היבש של האבקה הליופיליזית והעריכו אם רוב החלבון מומס.זהו את דגימת ההיסטון המכילה את מספר המולים הנמוך ביותר, שכן זה יהיה מספר המולים המגביל עבור כל ההיסטונים. לאחר מכן, ערבבו את ההיסטונים בכמויות מולריות שוות. דללו את תערובת ההיסטונים באמצעות בופר פריסה (unfolding buffer) לריכוז סופי של 1 mg/mL.כעת העבירו את הדגימה לתוך שקית דיאליזה. אטמו את השקית והניחו אותה בשני ליטרים של בופר קיפול מחדש (refolding buffer) קר. בצעו דיאליזה לדגימה למשך 18 שעות בטמפרטורה של 4 °C תחת ערבוב.יש לוודא ששרוול הדיאליזה יכול להסתובב בחופשיות ובמרץ כדי למנוע שיקוע של אבנים. יש להחליף את תמיסת הדיאליזה מדי שש שעות; גם אם נוצר משק, אין להשליך את הדגימה, שכן ניתן יהיה להפיק חלק מה-octi, אם כי היבול יפחת. חבר את עמודת ה-S 200 למערכת FPLC תוך כדי וידוא שבועות אוויר אינם חודרים למערכת.נקה את עמודת ה-S 200 למשך לילה באמצעות מים מסוננים ב-0.2 µm בקצב זרימה של 0.3 mL/min ובמגבלת לחץ חוזר של 0.5 MPa, ולאחר מכן שווה את המערכת עם ליטר אחד של תמיסת קיפול (refolding buffer) מסוננת ב-0.2 µm למשך כשעתיים. כמו כן, שווה מרכז צנטריפוגלי עם 1 mL של תמיסת קיפול. כעת, הוצא את הדגימה משרוול הדיאליזה.סבב את הדגימה בצנטריפוגה בטמפרטורה של 4 °C כדי להסיר משקעים. העבר בפיפט את הנוזל העליון (supernatant) של הדגימה למרכז.העבירו את דגימת ה-Optimus המרוכזת למכל חדש. שטפו את המרכז עם 1 ml של תמיסת Refolding. רכזו את מי השטיפה עד ל-500 µl והוסיפו אותם לדגימת ה-ER.סובב את הדגימה במבחנה למיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 milliliter במשך חמש דקות במהירות של 10,000 RPM בטמפרטורה של ארבע degrees Celsius. העבר את הנוזל העליון (supernatant) למבחנה חדשה. כעת טען את הדגימה אל עמודת ה-S 200.בצע אלוציה לדגימה באמצעות 400 מיליליטר של בופר קיפול (refolding buffer) שהוכן טרי, ואסוף פראקציות של שני מיליליטר. נטר את הבליעה באורך גל של 280 ננומטר במהלך האלוציה. אגרגטים של His-tagged חולקים בדרך כלל באלוציה בנפח של כ-45 מיליליטר EMR ובסביבות 65 מיליליטר timer.בסביבות 84 מיליליטר. נתוח את מקטעי האלוציה מהפסגות הרלוונטיות באמצעות הרצת דגימות ב-SDS page בריכוז של 18% עד 20%. מקטעים המכילים emus מטוהרים צריכים להכיל כמויות מולריות שוות של ארבעת חלבוני ההיסטון הליבתיים.כעת, איספו את הפראקציות המכילות OCRs מנוקים ורכזו אותן באמצעות מסנן צנטריפוגלי כדי לקבוע את ריכוז ה-octr הסופי. מדדו את הבליעה ב-280 ננומטר. לאחר מכן, חשבו את הריכוז באמצעות מקדם ההכחדה.שחזרו מערכים נוקלאוזומליים מ-DNA ומה-ERs המומצקים כפי שפורט בטקסט של הפרוטוקול. לאחר מכן, דללו את הדגימה עד לספיגה של 0.5 באורכי גל של 260 nanometers. טענו 400 microliters של הדגימה לתא עם מרכז בעל שני מגזרים, כאשר הדגימה מצד אחד ובפרה 10 בתמיסת הייחוס מהצד השני.למרות שגובה הנוזל בשני המגזרים צריך להיות קרוב זה לזה, יש לשמור על המניסקוס של דגמון הביקורת גבוה יותר מהמניסקוס של הדגימה. הכניסו את התאים לרוטור ויישרו אותם כראוי.תוך שימוש בסימוני השריטות בתחתית התאים על הרוטור, נקו בעדינות את עדשות התאים באמצעות אוויר דחוס. הפעילו את הצנטריפוגה מדגם X-L-A-X-L-I. הכניסו את הרוטור וחברו ואבטחו את האופטיקה כפי שמתואר במדריך.פתחו את תוכנת מעבדת הפרוטאומה ובחרו בקובץ חדש (file new). הגדירו הרצה של סריקה בודדת במהירות של 3000 RPM ובטמפרטורה של 25 °C. עבור כל תא, תנו שם לדגימות, בחרו אורך גל, בחרו בבליעה (absorbance) ובחרו מיקום לשמירת הקובץ במחשב שלכם.תחת אפשרויות (options), בחרו בעצירה (stop). לאחר הסריקה האחרונה והרצת כיול רדיאלי, התחילו בהרצת סריקה בודדת. השתמשו בסריקה הבודדת כדי לקבוע את אורך הסריקה הרדיאלית המתאים.באמצעות לוח הבקרה של ה-X-L-A-X-L-I, הזינו מהירות של אפס ולחצו על כפתור ההפעלה (star) כדי לאזן את התא. באמצעות התוכנה, הגדירו את המהירות הרצויה ואת מספר הסריקות.מהירויות צנטריפוגה גבוהות יותר מגבירות את הרזולוציה של מקדם השקיעה. עם זאת, יש לאסוף לפחות 20 סריקות לפני שכל הדגימה תשקע לתחתית התא. יש לעקוב אחר שתי הסריקות הראשונות כדי לוודא פעולה תקינה.יש להלביש את מספר הסריקות האחרונות כדי לנטר את התקדמות ההרצה ולבדוק בעיות פוטנציאליות כגון דליפה של תאים; ניתוח תוצאות מהירות השקיעה, וכן פרוטוקול לוויזואליזציה של מערכים באמצעות מיקרוסקופיית כוח אטומי, מפורטים בטקסט הפרוטוקול. בניסוי זה.היסטונים של ליבה של Xenopus בליופיליזציה שוחזרו לאוקטמר שטוהר באמצעות FPLC בעמודה מסוג S 200. תחילה הופרש משקע של אגרגטי היסטונים לא ספציפיים, ולאחריו אוקטמרים של היסטונים, טטראמרים של H3 ו-H4, ודימרים של H2A ו-H2B. ניתוח של פראקציות האוקטמר המטוהרות באמצעות SDS-PAGE מעיד על כמויות אקו-מולריות של ארבעת חלבוני ההיסטון. יש לשים לב כי למשקולות המולקולריות של H2A ו-H2B הפרש של כ-200 דלטון בלבד, ועל כן הם מופיעים לעיתים קרובות כפס בודד בג'לי SDS.שברים 64 עד 67 אוחדו ונשמרו לצורך שחזור מערך נוקלאוזומלי. צילום מסך מתוכנת מעבדת פרוטאומיקה של סריקה בודדת שנאספה במהירות של 3000 RPM שימש לקביעת טווח המדידות עבור סריקת תא UC. לאחר מכן, סדרה של סריקות מהירות שיקוע נערכה כדי להפיק סט נתונים; הקווים האדום והירוק מייצגים שתי שיטות שונות לצפייה בהתפלגות של מקדמי השיקוע.ב-UltraScan. הקו האדום מייצג את ההתפלגות האינטגרלית של מקדמי השקיעה בעוד שהקו הירוק מייצג את הנגזרת במחקר של ארגון הכרומטין. מיקרוסקופיית כוח אטומי (AFM) in vitro משלימה את העלטרה-צנטריפוגציה אנליטית כדי לקבוע את מידת הרוויה של התבנית לאחר הרכבה מחדש.כאן, רוב ה-SRAs מתוך 27 ששימשו לדימות הכילו 10 עד 11 נוקלאוזומים. סריקה זו בגודל 500 על 500 ננומטר מראה בבירור מערכים נוקלאוזומליים עם ה-linker.DNA. מוצגים גם עקבת האמפליטודה, עקבת הפאזה, ואותה עקבת גובה עם קו ששורטט ידנית דרך הנוקלאוזומים כדי לקבוע את פרופיל הגובה של הנוקלאוזומים. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בתוך שלושה עד ארבעה ימים אם היא מבוצעת כראוי.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב מאוד לזכור לדייק מאוד במדידת ריכוזי הרכיבים. לאחר ביצוע הפרוצדורה, ניתן לבחון את רמות הרוויה של מערכי נוקלאוזומים באמצעות טכניקות כגון מיקרוסקופיה של כוח אטומי. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום הכרומטין לחקור את מבנה הכרומטין ואת הדחיסות של הכרומטין.

assembly-nucleosomal-arrays-from-recombinant-core-histones-nucleosome

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה, אנו מדגימים מיקרוסקופ כוח אטומי בהילוך מהיר בהילוך מהיר, AFM, טכניקות הדמיה כדי לחקור את הדינמיקה של קומפלקסים נוקלאוזומים. כאשר קצה ה-AFM סורק את פני השטח של הנוקלאוזום, הוא מזהה שינויים בגובה הנוקלאוזומים ורושם את הדנ"א שנחשף לאורך זמן.

מיקרוסקופ כוח אטומי בהילוך מהיר ללכידת דינמיקה של נוקלאוזומים

פרוטוקול זה מתאר את הכינון מחדש של נוקלאוזום המכיל היסטונים אחות איזוטופ שכותרתו דיפרנציאלי. במקביל, סימטרית שלאחר translationally נוקלאוזום שונה יכול להיווצר לאחר שימוש בעותק היסטון premodified. תכשירים אלה יכולים לשמש בקלות ללמוד מנגנוני crosstalk השינוי, בו זמנית משני ההיסטונים אחותו, באמצעות ספקטרוסקופיית NMR ברזולוציה גבוהה.

כינון של נוקלאוזום עם דיפרנציאלי איזוטופ שכותרתו היסטונים אחות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאפיון חלקיקים נוקלאוזום ברמת מולקולה בודדת באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי סטטי ו בצילום מואץ (AFM) טכניקות הדמיה. שיטת functionalization פני השטח המתואר מאפשרת לכידתו של המבנה ואת הדינמיקה של נוקליאוזומים ב ברזולוציה גבוהה ב הננומטרי.

חיטוט את המבנה ואת הדינמיקה של נוקליאוזומים באמצעות הדמיה מיקרוסקופ כוח אטומי

כאן אנו מציגים שיטה לבטא חלבוני histone אצטילאט באמצעות הרחבת קוד גנטי להרכיב נוקלאוזומים מחדש במבחנה.

אתר ספציפי ליסין אצטילציה של היסטונים עבור שחזור Nucleosome באמצעות הרחבת קוד גנטי ב Escherichia קולי

פרוטוקול זה מתאר בפירוט את הכנת קומפלקסים נוקלאוזומליים באמצעות שתי שיטות להכנת דגימה להקפאת רשתות TEM.

הכנת חלקיקי ליבה נוקלאוזומים מורכבים עם גורמי תיקון DNA לקביעת מבנה במיקרוסקופ קריו-אלקטרונים

מאמר זה מציג הליך ניסויי מפורט לבנייה מחדש של קשירי דנ"א המכילים נוקלאוזומים עבור כוח מתאם של מולקולה בודדת ומיקרוסקופ פלואורסצנטי. הוא מתאר גם מספר ניסויים במורד הזרם שניתן לבצע כדי להמחיש את התנהגות הקישור של חלבונים המקיימים אינטראקציה עם כרומטין, ולנתח שינויים בתכונות הפיזיקליות של נוקלאוזומים.

מכלול נוקלאוזומים באתרו עבור כוח מתאם של מולקולה בודדת ומיקרוסקופ פלואורסצנטי

וידאו זה מדגים את טכניקה המשמשת להכנת מארגן מוט explants חיים מעוברים Xenopus laevis, כולל שימוש בסכין גבה - כלי לנתיחה המקצועית עשוי גבה אחת. פרוטוקול להרכבת assay הידבקות ניתנת גם, אשר בדיקות נוכחות של מולקולות הדבקה המפתח הנוכחי על מארגן את פני השטח או מוט חיה התאים הם קריטיים להתפתחות תקינה.

Dissection של ארגונית הקוטב Explants בעלי חיים מעוברים Xenopus laevis והרכבה של Assay הידבקות התא

בידוד של הדנ&quot;א הגנומי של זנבות עכבר

אנו מציגים שילוב רומן רב עוצמה של nanophotonics (QD-סריג) ו מיקרופלואידיקה לחקור את היווצרות polyplexes polyelectrolyte, אשר צפוי לספק שליטה טובה יותר וסינתזה של polyplexes אחיד להתאמה אישית עבור חומצה מבוססי גרעין עתיד הרפוי.

שילוב QD-סריג ו מיקרופלואידיקה לפקח Nanocomplex DNA הרכבה עצמית בזמן אמת

Ultracentrifuge אנליטית (AUC) תא מדגם מחזיקה מדגם חיץ התייחסות במהלך ניסויים חשוף ואקום גבוה ומהירויות הרוטור עד 60,000 סל"ד. וידאו זה יהיה להדגים את תשומת לב קפדנית לכל פרט הכרחי עבור טעינת הרכבה, ויישור של מרכיב זה חשוב מאוד של ניסוי AUC.

העצרת, טוען, ואת המערך של תא ultracentrifuge אנליטית לדוגמא

למדו להרכיב מערכי נוקלאוזומים מהיסטוני ליבה רקומביננטיים ו-DNA ממקם נוקלאוזומים. השיטה כוללת דיאליזה, כרומטוגרפיית הפרדה בגודל ומיקרוסקופיית כוח אטומי לבדיקת רוויה.

הרכבה של nucleosomal מערכים מההיסטונים ליבת רקומביננטי והנוקלאוזום המיקום DNA

גלה סרטונים נוספים