Name: הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-22T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: למד שיטות הדמיה ושחזור תלת-ממדי של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה. טכניקת מיקרוסקופיית קונפוקל מאפשרת חקר התפתחות מערכת העורקים והשפעת טיפולים כימיים על ענפות כלי הדם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לחברים בעבר ובהווה של המעבדות שלנו שעזרו לפתח את הטכניקות הללו. מימון חלקי שנמסר לי DE על ידי מענק ממכון קליפורניה לרפואת רגנרטיבית / CIRM (RN1-00538).

1. דג הזברה בעלי, דור עובר, וטיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל פרוטוקולי דג הזברה הבאים תחת הדרכתו של ועדה מוסדית טיפול בבעלי החיים ושימוש (IACUC) ובמסגרת הנחיות טיפול בבעלי חיים של NIH או גופים / הנחיות רגולטוריות אחרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זני דג הזברה שמבטאים חלבוני ניאון ברקמות ספציפיות, תאים או איברים זמינים ממרכז המשאבים הבינלאומי דג הזברה (Zirc). לדוגמא, Tg (KDR: EGPF) s843 להביע EGFP בתאי אנדותל כלי דם 6, אשר יכול לשמש לייצור מבני כלי דם 3D מלאים כפי שמוצג בפרוטוקול זה. קווים אחרים של דג הזברה מהונדס זמינים Zirc. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דג הזברה מבוגר בית במערכת חקלאות ימית מתאימה המנטרת את רמת חומציות, מליחות, טמפרטורה, חמצן מומס, אור, וגורמים סביבתיים אחרים 7. דג הזברה מוצגת כאן שוכנו במערכת Aquaneering Inc (סן דייגו, קליפורניה) בשעה 28.5 ° C עם lig 14 שעהמחזור כהה ht/10 שעה. להאכיל את דג הזברה מבוגר דיאטה מאוזנת של ארטמיה ומזון NRD 4/6 דגים (ארטמיה ישירה, אוגדן, יוטה.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זכר בוגר ודג זברת נקבה בגיל פוריות צריך להיות שוכנו בנפרד כדי להגדיל מוצלח הזדווגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעורר הטלת ביצים והפריה על ידי הצבת נקבות (2-4) וגברים (4-6) יחד במכל הזדווגות שיש לו תחתית רשת עם חורים גדולים מספיק לביצים ליפול דרך, אבל קטן מדי עבור המבוגרים דג הזברה לעבור . הגדרת הזדווגויות הערב לפני; ביצים מוטלות ליד שחר, בדרך כלל בזמן מחזור שעות היום האור מגביר לאט בעצימות (שחר). בדוק עבור ביצים בחלק התחתון של מיכל ההזדווגות כל 15-30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף ביצים באמצעות מסננת רשת ונקיה עם חיץ E3 (5 mM NaCl, 0.17 מ&quot;מ KCl, 0.33 מ&quot;מ CaCl 2, 0.33 מ&quot;מ MgSO 4). מעביר את הביצים ל100 תרבות צלחות מ&quot;מ מלא בחיץ E3 וחנות בחממה 28 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללמוד כימיקלים שמשנים CERebrovascular הסתעפות להוסיף ריכוזים כימיים הרצויים. לדוגמא הסתעפות neovasular יכולה להיגרם עם מעכבי γ-secretase (GSI IX/DAPT/N- [N-(3,5-Difluorophenacetyl-L-alanyl)] אסתר-S-phenylglycinet-בוטיל) solubilized ב4 DMSO, החל 24 שעות שלאחר הפריה (hpf). באותו הזמן עובר נקודה הם עדיין בתוך סיסי, וכימיקלים רבים יכולים לעבור את זה 8. אם מצב טיפול יש השפעות עצביות או מנוע שעלול לפגוע ביכולתם של עוברים להשתחרר מסיסי, ולאחר מכן עובר צריך להיות דה chorionated בין 24 ו48 hpf, אשר יכול להיעשות גם עם מלקחיים של pronase 2. עוברים שמוצגים בתמונות שסופקו היו dechorionated בעדינות על ידי תופס סיסית עם שני מלקחיים מחודדים וקורע אותה פתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש צורך / רצוי, היווצרות פיגמנט יכולה להיות מעוכבת על ידי הוספת 0.003% N-Phenylthiourea (PTU) למאגר שE3 ב24 hpf. </li></ol> 2. Confocal הדמיה של כלי הדם במוח Structures בעוברי דג הזברה קבוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב את העוברים ב250 methanesulfonate Tricaine מ&quot;ג / ליטר, ולאחר מכן לתקן אותם על ידי טבילה ב2 - paraformaldehyde 4% בין לילה ב 4 ° C. מכולות עם עוברי ניאון צריכה להיות עטופות בנייר כסף. קבוע פעם אחת, צריכים להיות מאוחסנים עוברי PBS ב 4 מעלות צלזיוס עד צילמו - עוצמת הקרינה EGFP הופכת פחות נפתרה לאחר כשבוע, אבל מורפולוגיה (כפי שנצפו בשדה בהיר) נשמרה הרבה זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן לעלות את העובר על ידי הסרת עין אחת הראשון באמצעות מחט טונגסטן חידדה. לחתוך סביב רקמת חיבור העין ראשונה ולאחר מכן לחתוך את השרירים ולבסוף חתך את עצב הראייה כדי לעקור את העין. (הערה: להסיר אם ההדמיה שני הצדדים הוא רצוי בשתי העיניים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע העין מוסרת, הר העובר על coverglass באמצעות ירידה של methylcellulose 3%. לכוון את העובר כך שהצד עם העין שהוסרה עומד בפני coverglass וקרוב לזכוכית ככל האפשר. לכסות את כל העובר עם methylcellulose כדי למנוע התייבשות במהלך הדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונת העובר רכוב באמצעות מיקרוסקופ confocal הפוך מצויד מטרת 20x תכנית Apo באיכות גבוהה (צמצם מספרי = 0.75 או יותר) באופן מיידי. תצורה זו עדיפה על מיקרוסקופ שאינו הפוך שיחייב הרבדה העובר בין שני מטוסי זכוכית, ולחיצה על העובר על הזכוכית העליונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף פרוסות אופטיות במרווחים של 1 מיקרומטר באמצעות הגדרת צמצם בינונית או גדולה. גם צעדים גדולים יותר של 2.5 מיקרומטר ניתן להשתמש בם, אבל זה עלול להיות קשה יותר כדי לקבוע את הסדר המרחבי של אובייקטים קטנים יותר. פתחים קטנים לייצר פירוט חדים יותר, אך הסריקות נדרשות עוד יכולות להלבין EGFP וגם להגביל את העומק של הדמיה לעובר שניתן להשיג. מיקרוסקופ confocal מאפשר הדמיה על חצי דרך עובר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הדמיה של כל הדגים היא רצויה, להסיר את שני העיניים בתחילת הדרך (ראה הערה בשלב 3.2), לסובב את העובר לאחר לדמייןצד אחד גרם וחזור על השלבים 2.3-2.5 לצד הנגדי. </li></ol> 3. 3D שחזור עוברי דג הזברה Cerebrovasculature <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בהפצת פיג&#39;י 3 של ImageJ קוד פתוח (http://fiji.sc), אשר מותאמת במיוחד עבור הדמיות 3D, ללא תשלום, ותואמת עם מחשבי PC, Mac ו-Linux. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ערימות יבוא confocal לפיג&#39;י ידי הולך BioFormats לוקוסים&gt; יבואן 9 לאחר מכן בחר תוספים&gt; קובץ confocal, למשל name.ids לערימות של ניקון (איור 2 א). בחר צפו במחסנית עם מצב hyperstack, צבע: גווני אפור, בדוק autoscale, לבדוק ערוצים לפצל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחירות אלה יפתחו ארבעה פנלי ערוץ נפרדים; לEGFP רק אחד יהיה צורך, בדרך כלל אחד למטה השלישי. סגור שלושה לוחות האחרים (אדום, כחול ואלפא) והשאיר את התמונה 16 סיביות עם שם ארוך ואחריו (איור 2 א) C = 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם סף על ידי סריקה אם כי את התמונה באמצעות הגלילה taב בחלק התחתון כדי למצוא הפרוסה שיש לו את האזור או מבנה של עניין, ואז ללכת לתמונה&gt; התאם&gt; סף (איור 2 ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בפנל שעולה, חלק את הסרגל העליון (רמה שחורה) משמאל, כך שהמבנה ניתן לראות היטב על רקע, ולהשאיר את השקופית התחתונה (ברמה לבנה) שבו הוא (איור 2 ד). בחר B &amp; W, בחר רקע כהה. אל תבחר סף לחשב עבור כל תמונה, אלא אם כן התאמות שונות הנדרשות לכל פרוסה, בחרו רקע שחור. תהליך זה יוצר תמונה של 8 ביט חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזהרה: סף לא ניתן לבטל או נשמר בImageJ, אז ערימת confocal תצטרך להיות מחדש בכל פעם שיש צורך בשינוי. רשום את המספרים ולנסות הגדרות שונות עד לתוצאה הרצויה מושגת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור לתוספים&gt; 3D Viewer&gt; סף 0, דגימה מחדש של גורם 1 (הטוב ביותר) או 2 (טוב), בטל את התיבות בצבע אדום והכחולים כדי להפוך את פלט 3D ירוק - אחר זה will לייצר לבן טיוח - בחר החל (לא אוטומטי) (2E איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסובב, ספין וזום תמונת 3D באמצעות העכבר ומקשי מקלדת (איור 2F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמירת תמונות סטילס בכל נקודה על ידי שימוש באפשרות ללכוד בתפריט. גודל תיבת התמונה על המסך מכתיב ממדי פיקסל של התמונה מיוצרים על כך שאם תמונה ברזולוציה גבוהה היא רצויה להפוך את התיבה גדולה יותר על ידי גרירת הפינה ימנית התחתונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור סרט 3D ספינינג על ידי בחירת סיבוב תצוגה&gt; שיא 360 מעלות (איור 2G). ברירות המחדל של סיבוב עד 2 מעלות לכל צעד, אבל זה יכול להיות שונה עד 5 מעלות לדוגמא, אשר ייצרו גדלי קובץ קטנים בהרבה, אבל עשוי להוסיף עצבנות לאנימציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הקובץ באחד מכמה פורמטים זמינים לשימוש מאוחר יותר צפייה עם נגני מדיה, העלאה לאינטרנט, או באמצעות במצגות PowerPoint. נגן המדיה בקוד הפתוח, VLC <a href="http://www.videolan.org/vlc/index.html">(ht</a>TP :/ / www.videolan.org / vlc / index.html), הנו ללא תשלום ומטפל בסרטונים האלה טובים מאוד. </li></ol>

<ol><li>Staudt, D., Stainier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncovering+the+molecular+and+cellular+mechanisms+of+heart+development+using+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Uncovering the molecular and cellular mechanisms of heart development using the zebrafish.</a> Annu Rev Genet. 46, 397-418 (2012).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%22">The Zebrafish Book</a>. , University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Cameron, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s-related+peptide+amyloid-%CE%B2+plays+a+conserved+role+in+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's-related peptide amyloid-β plays a conserved role in angiogenesis.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li>
<li>Cunvong, K., Huffmire, D., Ethell, D. W., Cameron, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-%CE%B2+increases+capillary+bed+density+in+the+adult+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Amyloid-β increases capillary bed density in the adult zebrafish retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54, 1516-1521 (2013).</li>
<li>Jin, S. W., Beis, D., Mitchell, T., Chen, J. N., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+analyses+of+vascular+tube+and+lumen+formation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular analyses of vascular tube and lumen formation in zebrafish.</a> Development. 132, 5199-5209 (2005).</li>
<li>Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+husbandry+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">The husbandry of zebrafish (Danio rerio): a review.</a> Aquaculture. 269, 1-20 (2007).</li>
<li>Hagedorn, M., Kleinhans, F. W., Artemov, D., Pilatus, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+major+permeability+barrier+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Characterization of a major permeability barrier in the zebrafish embryo.</a> Biol Reprod. 59, 1240-1250 (1998).</li>
<li>Schmid, B., Schindelin, J., Cardona, A., Longair, M., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-level+3D+visualization+API+for+Java+and+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">A high-level 3D visualization API for Java and ImageJ.</a> BMC Bioinformatics. 11, 274(2010).</li>
<li>Opitz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+zebrafish+illuminate+the+dynamics+of+thyroid+morphogenesis+and+its+relationship+to+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgenic zebrafish illuminate the dynamics of thyroid morphogenesis and its relationship to cardiovascular development.</a> Dev Biol. 372, 203-216 (2012).</li>
<li>Gleave, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroanatomical+phenotyping+of+the+mouse+brain+with+three-dimensional+autofluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Neuroanatomical phenotyping of the mouse brain with three-dimensional autofluorescence imaging.</a> Physiol Genomics. 44, 778-785 (2012).</li>
<li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497, 332-337 (2013).</li>
<li>Markaki, Y., Smeets, D., Cremer, M., Schermelleh, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+in+situ+hybridization+applications+for+super-resolution+3D+structured+illumination+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence in situ hybridization applications for super-resolution 3D structured illumination microscopy.</a> Methods Mol Biol. 950, 43-64 (2013).</li>
<li>Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-dimensional+resin+casting+and+imaging+of+mouse+portal+vein+or+intrahepatic+bile+duct+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">3-dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system.</a> J Vis Exp. 68, e4272(2012).</li>
</ol>

אין מה לחשוף.

השיטות שתוארו כאן לספק בסיס ללימודים חזותיים של מערכת כלי הדם בפיתוח דג הזברה. דגימות בשידור חי ניתן להשתמש כדי להעריך את פרמטרים פיסיולוגיים, כגון קצב לב ונפח פעימת לב, ואילו דגימות קבועות יכולות לשמש לconfocal הדמיה ברזולוציה גבוהה. דרוזופילה וג elegans לאפשר הדמיה של כל גוף, אבל דג הזברה הן בעלי חוליות ולספק מודל שימושי לרקמות חוליות, כולל מערכת כלי דם מרופד תא האנדותל. מחקרים אלה יכולים לשלב קווים מהונדסים משמעותיים ומשאבים הגנומי מהקהילה מחקר דג הזברה. שחזור 3D ו טיוח של תמונות confocal מדג הזברה עוברית, כפי שתואר כאן, מאפשר גישת ביולוגיה של מערכות להסתעפות של כלי דם וצפיפות כלי דם שאינה אפשרי עם מודלים של בעלי חיים גדולים כמו חולדות ועכברים. יתר על כן, כamniotes דג הזברה מתפתחת בסביבה לשינוי (חיץ E3), שבו אפשר להוסיף בקלות גhemicals המעכבים אנזימים ספציפיים או תהליכים אחרים המשפיעים על התפתחות של כלי דם. הריכוז ועיתוי המשלוח כימי ניתן לשנות, מה שמאפשר לחוקר תנאי טיפול לכוונן. 1. שינויים ופתרון בעיות שינויים במערכת זו יכולה לשלב קווים מהונדסים של דג הזברה שמבטאים חלבוני ניאון EGFP או אחרים במגוון רחב של דפוסי רקמות ספציפיים, איבר או אזור 10. יתר על כן, ניתוח של שינויי neovascular ברשתית דג הזברה באחרונה פורסם 5. בעיות עם פיגמנטציה בעוברים ודג זברה מבוגרים יותר יכולות להיות מתוגמלות על ידי מעבר עם קווים מהונדסים, שאינו מייצרים פיגמנטים בקנה מידה או פיגמנט של רשתית. בעיות עם הקרינה מופחתת בדרך כלל כתוצאה מתנאי קיבעון לא הולמים. Paraformaldehyde (4%) ליום 1 הוא אופטימלי, אבל fixatives חזק יותר, כגון glutaraldehyde, tetroxide אוסמיום או אלכוהול, עלוללהרוס הקרינה EGFP. לאחר קיבוע, צריך להיות כל הזמן עובר בPBS ב 4 ° C ותמיד מוגן מפני אור שמש ישיר. 2. מגבלות של טכניקה זו האיכות והרזולוציה של הדמיות 3D מיוצרות עם פרוטוקול זה תלויות באיכות של תמונות שנוצרו. חדירת אור דרך עוברים אלה מוגבלים למישור אמצע sagittal-באמצעות מיקרוסקופ confocal סטנדרטי. היבט זה של הדמיה מגביל את העומק של הדמיה בעוברים ומבוגרים, אבל מערכות מיקרוסקופיה רב פוטון מתקדמות יותר מאפשרות הדמיה בעומקים גדולים יותר. 3. משמעות ביחס לשיטות קיימות פרוטוקול זה מספק גישה לניתוח של רשתות כלי דם ברמה מערכות שיכולים לשלב כל בעלי חיים. ייצוגים קודמים של נתונים כאלה לעתים קרובות הסתמכו על סדרה של תמונות ערוכים יחד, אבל טיוח 3D מספק רזולוציה טובה יותר של רלה המרחביתtionships מעורב. 4. יישומים עתידיים פיתוחים חדשים בתחום הדמיה ועיבוד רקמות יספק יישומים חדשים רבים לשיטות אלה, שעשויים לכלול מה שהופך את עוברים או מבוגרים 11-14 שקוף מבוגרים יותר. שקיפות משופרת תגדיל חדירה לרקמות מאוד על ידי לייזרי פוטונים רב confocal ו. יתר על כן, כמו המהירות של מצלמות וצינורות מכפיל להגדיל זה עשוי להיות אפשרי בקרוב לייצר הדמיות 3D של דגים בזמן אמת, ומספק ממד ה -4 של ניתוח. 5. צעדים קריטיים שלב קריטי בפרוטוקול זה הוא הכנה להדמיה, הכולל קיבוע נכון. הדמיה צריך להיעשות בהקדם האפשרי לאחר קיבוע עם יעדים באיכות גבוהה שיש להם הפתחים המספריים הטובים ביותר הזמינים. החלטה תלויה במערכת ההדמיה משמשת, מערכות איכות כל כך גבוהה הן בדרך כלל טוב יותר. יצירת הדמיות 3D היא זיכרון אינטנסיבילכך מחשבים עם כמות גדולה של זיכרון ומעבדי גרפיקה טובים יותר, high-end מומלץ. מערכת הביולוגיה החזותית שתוארה כאן כבר מותאמת לדג זברה מהונדס המבטא EGFP בתאי האנדותל של כלי דם, אם כי יכולים להיות מותאמות בשיטות אלה לעוברים מהונדסים המבטאים את ה-GFP, או חלבוני ניאון אחרים, באוכלוסיות של תאי עצב, שרירים, בלוטות או כל מספר של תאים אחרים. היתרון העיקרי בעבודה עם מערכת זו הוא היכולת ללמוד מה שקורה בכל העובר בכל עת במהלך תקופת התפתחותי זה, בבעלי חיים קבועים ו / או בשידור חי.

דג הזברה לספק מערכת רבת עוצמה כדי לחקור ביולוגיה התפתחותית, והשקיפות היחסית של העוברים שלהם ניתנת למחקרים מבוססי הדמיה 1. החברה דג הזברה שמשה כמודל לפיתוח חוליות במשך עשרות שנים. Teleosts, כוללים דג הזברה, יש מערכת כלי דם חוליות פשוטה שאין לו הומולוג סביר בחסרי חוליות. דם נשאב מהלשכה הקדמית של לב שני תאיים דרך זימים, שם הוא מחומצן. דם מהזימים מתכנס באב העורקים הגב ועובר דרך עורקי הסניף לתוך כלי קטן יותר ויותר, בסופו נימי לכת ברקמות איברים. בתוך חמצן נימים הוא שוחרר ופחמן דו חמצני נספג. בצד הוורידים של נימי דם זורם לורידים גדולים יותר ויותר ולבסוף נשאב לתוך התא האחורי של הלב, שבו המחזור חוזר. דג הזברה מבוגר יכולה להניח 200 או יותר ביצים בכל פעם, וoncדואר מופרה, שהם מפתחים במהירות 2. בתוך יום אחד ציר הגוף מפותח, כולל שרירים שחוזה ולהעביר את העובר סביב בתוך קרום כוריוני. מ2-7 ימים לאחר הפריה (DPF) רוב מערכות הגוף לפתח, כולל עיניים ומערכת עצבים מרכזיות שיכולים לתאם שוחה לעבר מזון או הרחק מאור בהיר. עד 7 עוברי DPF הם קטנים מספיק כדי לאפשר הדמיה עם מיקרוסקופ. קווים מהונדסים המבטאים את חלבוני ניאון ניתן הדמיה עם מיקרוסקופיה confocal או הקרינה. ההדמיה confocal ניתן לזווג עם תוכנות קוד פתוח 3 כדי ליצור הדמיות 3D של מבני כלי דם מלאים בעוברי דג הזברה המספקים נקודת מבט ביולוגיה מערכות של התפתחות כלי דם. מחקרים העוסקים בשינויים במורכבות כלי דם וכלי דם במוח ייהנו מפרוטוקול זה כפי שהוא מאפשר ניתוח ברמת מערכות של רשתות כלי דם 4,5. אוסף של שיטות ומשאבים הם לספקד, כדי לאפשר אימוץ קל ושל טכניקות אלה ללימודים שדורשים הדמיה של מבני כלי דם בדג זברה עוברית. יעילות העלות של דג הזברה כמודל חיה היא שילוב עם טכנולוגיות הדמיה המתעוררות לספק פלטפורמות חדשות שבה להעריך את השפעות angiogenic של מסלולים מולקולריים בהתפתחות חוליות והומאוסטזיס.

<table><tbody><tr><td>N &ndash; פנילתיאוריאה&nbsp;</td><td>אלפא אזר, קטלוג #41972</td><td></td><td>0.2 M במאגר E3, נשמר ב-4 &#176; מאגר C</td></tr><tr><td>E3</td><td>סיגמא</td><td></td><td>5 מ"מ NaCl, 0.17 מ"מ KCl, 0.33 מ"מ CaCl<תת>2</תת>, 0.33 מ"מ MgSO<תת>4</תת></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי&nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td>D-EclipseC1 על צלחות תחתון מזכוכית Nikon TE-2000U</td></tr><tr><td></td><td>Mat-Tek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GSI IX/DAPT</td><td></td><td></td><td>N-[N-(3,5-Difluorophenacetyl-L-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester EMD Biosciences</td></tr><tr><td>24 צלחות באר&nbsp;</td><td>Becton-Dickinson, cat# 351147</td><td></td><td>BD Falcon</td></tr><tr><td>Transfer pipettes&nbsp;</td><td>VWR, חתול #414004-001</td><td></td><td>פיפטות העברה חד פעמיות VWR</td></tr><tr><td>מתיל-תאית&nbsp;</td><td>אלפא אזר, חתול #43146</td><td></td><td>3% במאגר E3</td></tr><tr><td>NRD 4/6 מזון דגים&nbsp;</td><td>שרימפס מלח מיובש ישיר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שרימפס מלח</td><td>שרימפס מלח ישיר</td><td></td>חוט טונגסטן חי ישיר<td></td></tr>&<tr><td>nbsp;</td><td>חלקים קטנים # TW-016-60</td><td></td><td>0.016 אינץ' OD</td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>VWR # 101107-950</td><td></td><td>טריקאין מתאן סולפונאט 250 מ"ג/ליטר במאגר E3</td></tr></tbody></table>

הדמיה ו3d שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

דג הזברה הוא כלי רב עוצמה כדי ללמוד ביולוגיה התפתחותית ופתולוגיה בגוף חי. הגודל הקטן ושקיפות היחסית של עוברי דג הזברה להפוך אותם שימושי במיוחד לבדיקה ויזואלית של תהליכים כגון לב והתפתחות כלי דם. בכמה מחקרים שנעשה לאחרונה דג הזברה מהונדס המבטא EGFP בתאי האנדותל של כלי דם שימשו לתמונה ולנתח את רשתות כלי דם מורכבות במוח וברשתית, באמצעות מיקרוסקופיה confocal. תיאורים מסופקים להכין, לטפל ותמונה עוברי דג הזברה שמבטאים את החלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP), ולאחר מכן ליצור הדמיות 3D מקיפות של מערכת כלי הדם במוח. פרוטוקולים כוללים את הטיפול בעוברים, הדמיה confocal, ופרוטוקולי קיבעון שלשמר הקרינה EGFP. יתר על כן, עצות שימושיות על קבלת תמונות באיכות גבוהה של מבני כלי דם במוח, כגון הסרת עין ללא רקמה עצבית סמוכה מזיקה מסופקות. בעיות פוטנציאליותעם ההדמיה confocal הם דנו, יחד עם הצעדים הדרושים כדי ליצור 3D שחזורים מארובות תמונת confocal באמצעות תוכנת קוד פתוח זמינה באופן חופשי.

שחזור 3D של מבני כלי דם מספק נקודת מבט מקיפה ומעניינת מבחינה ויזואלית של פיתוח דג הזברה. איורים שיטות מופע 1 ו -2 כפי שהם בדרך כלל עשו. איור 3 מציג כמה זוויות של מבני כלי דם ב6 DPF עובר דג הזברה שהביע EGFP בתאי האנדותל. עם צבע ירוק או לבן מוצק זה יכול להיות קשה להעריך את עוצמת אות; פסאודו צביעה לספק עוצמת תמונה מלהסתכל למעלה שולחנות ומאפשרת תפיסת עומק טובה יותר כאשר מבנים חופפים. דוגמא לתמונת 3D פסאודו בצבע של כלי הדם ב6 DPF דג הזברה מסופקת באיור 4. דימות פלואורסצנטי של עוברים חיים יכולה לשמש כדי לחקור מאפיינים פיסיולוגיים הכוללים את העין ותנועת גוף, ופעילות לב. איורים 3 ו -4 להראות תוצאות שהושגו עם נציג שיטות אלה, תוך שימוש בקו דג הזברה המהונדס<html> תאר. הדמיה ברזולוציה תלויה במאפייני מיקרוסקופ, אבל הבהירות של אות EGFP מספיק עבור איכות תמונה טובה עם רוב המערכות מסחריות. שיקום וטיוח של ייצוגי 3D הוא עקביים ואפשרויות בתוך תוכנת קוד פתוח זו מספקות תוצאות טובות באופן עקבי. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50417/50417fig1highres.jpg" width="600" /> איור 1. הסרת עין. א) העובר DPF 3 קבועים עם צורך טונגסטן ממוקם בסמוך לעין. רקמה היא לחתוך מסביב לעין מזו עמדה. B) העין היא נופל החוצה ושרירי העין הבסיסיים ועצב ראייה נחתכים. שקע העין הריק מסומן בעיגול מקווקו. C) אותו העובר התהפך ועלה עם מתיל תאית, בעין ללא פגע פונה כלפי מעלה.<html> hres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50417/50417fig2highres.jpg" width="600" /> איור 2. צעד אחר צעד שחזור 3D של ערימת תמונת confocal. א) פתח קובץ (4104.1.ids) הטעון בתוך פיג&#39;י באמצעות תוספים&gt; לוקוסים&gt; Bioformat לבחור. ב &#39;) לאחר מציאת פרוסה עם האזור של עניין, התאמת סף נבחרה כפי שמוצגת. C) סף מותאם ל214 משתמש העליון מחוון ולהחיל נבחר. צופה 3D D) נקרא כפי שמוצג. E) שחזור 3D מוצג של דג הזברה עם עין שלמה, להתמצאות. F) התמונה כבר מוגדלת ומסובבת. G) סרט סיבוב של o360 הוא עשה כפי שמוצג.<html> res.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50417/50417fig3highres.jpg" width="600" /> איור 3. פרספקטיבות משחזור 3D. א) נקודת מבט המדיאלי של 6 העובר DPF צילם עם 10x אובייקטיבי, פה הוא בצד הימין, ולא זימים בתוך פה. ב &#39;) לרוחב של אותו העובר, סנפיר פתק הוא לולאה באמצע.) אותו העובר C צילם עם 20x אובייקטיבי, נקודת מבט המדיאלי, רזולוציה זימים פתק. ד) נקודת מבט רוחבית של 20x הדמיה אובייקטיבית. הסנפיר הוא בקצה הימני של הפנל.) תצוגה Antero-E המדיאלי של 20x הדמיה אובייקטיבית, זימי פתק בתוך הפה של בטן. F) מאותו העובר צילם עם 20x אובייקטיבי, ראשו לצד הימין. שים לב כלי דם בצק החלמון בפינה הימנית התחתונה.jove.com/files/ftp_upload/50417/50417fig3highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50417/50417fig4highres.jpg" width="600" /> איור 4. הבדלי עוצמה ב6 עובר DPF. תמונה של שיקום 6 DPF באמצעות להסתכל למעלה שולחנות pseudocolor לעוצמת אות. פה, מוח, זימים וצק חלמון מסומנים להתמצאות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50417/50417fig4highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50417/Zfish_still.jpg" width="500" /> איור 5. הסרט של מערכת כלי דם משוחזרת בדג זברת DPF 4. הדגים היו צילם ב2.5 מיקרומטר. התמונות היומהדמית חצי אחד של העובר. השוואת מבני כלי דם עם מבנים בדג זברה שטופל GSI סיפקו באיור 6. שים לב לצפיפות נמוכה יותר של כלי דם בראש ובזימים גדולים יותר. (ראה קובץ משלים &quot;Zfish_spin.avi&quot; תחת הורדות) <img alt="איור 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50417/Zfish_still1.jpg" width="500" /> איור 6. 3D סרט של מערכת כלי דם בעובר שטופל ב-GSI בDPF 4. הדגים היו צילם ב2.5 מיקרומטר באמצעות מרוחב לקו אמצע. השוואת מבני כלי דם עם השליטה DPF 4 דגים שמוצגים באיור 5. הגב המקומר והגודל קטן יותר אופייניים בעוברים שטופלו בחומר כימי זה. (ראה קובץ משלים &quot;GSI-treated_4dpf_fish.avi&quot; תחת הורדות)

הדמיה של כלי דם במוח בפיתוח דג הזברה זחל הוא תאר. טכניקות כדי להקל על ההדמיה 3D ולשנות התפתחות כלי דם במוח באמצעות טיפולים כימיים גם מסופקות.

הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להעריך מבנים צרברו-וסקולריים בעוברים של דגי זברה. דבר זה מושג תחילה על ידי איסוף ביצי דגי זברה מופריות והגדרת תנאי טיפול. לאחר תקופת גדילה של שלושה ימים, דגי הזברה מוקרבים ו מקובעים, ועין מוסרת בזהירות לפני הרכבת הדגימה על זכוכית כיסוי.לאחר מכן, כלי הדם המוחיים מדומיינים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית. לבסוף, נוצרים הדמיות בתלת-ממד של כלי הדם באמצעות תוכנה בקוד פתוח. בסופו של דבר, ניתוח השחזורים משמש לקביעת השפעות תנאי הטיפול על הסתעפות וצפיפות כלי הדם.במוח של דגי זברה בהתפתחות. טכניקה זו מעריכה את מערכת כלי הדם השלמה של דגי זברה עובריים. היא אפשרה לנו לחקור את הביולוגיה של amyloid beta ברמת מערכות איברים.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן קשה ללמוד את הדיסקציה ואת ניתוח התמונות בשל המורכבות הטכנית שלהם. ראשית, יש לגדל זן של דגי זברה טרנסגניים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר ברקמות הרצויות בטמפרטורה של 28.5 °C, במחזור של 14 שעות אור ו-10 שעות חושך. בדוגמה זו, דגים טרנסגניים המבטאים EGFP בתאי אנדותל וסקולריים גודלו בלילה שלפני איסוף הביצים; יש להכין זכרים ונקבות במיכלי הזדווגות בעלי תחתית רשת. למחרת בבוקר, יש להסיר את המחיצה ולאפשר לדגים להזדווג, תוך בדיקה של נוכחות ביצים מדי 15 דקות.לאחר שימוש במסננת רשת לאיסוף הביצים וב-E three לשטיפתן, השתמש ב-E three להעברת הביצים לצלוחי תרבית של 100 מילימטר והדגר אותן ב-28 degrees Celsius כדי לשנות את הפיצול התסלולרי המוחיי (cerebrovascular branching). החל מ-24 שעות לאחר ההפריה, הוסף חומר כימי כגון מעכב gamma secretase המומס ב-DMSO. במידת הצורך, הוסף 0.03%PTU כדי לעכב את היווצרות הפיגמנט.לאחר העברת העוברים בתמיסה לבארות של פלטת 12 בארות, הדגרי בטמפרטורה של 28.5 °C עד שהעוברים יגיעו לשלב ההתפתחות הרצוי. לאחר קטילת העוברים ב-trica וקיבועם באלדהיד למשך לילה בטמפרטורה של 4 °C, אחסני את העוברים ב-PBS בחושך ובטמפרטורה של 4 °C.כדי להוציא את העין מהעובר, השתמשו במחט טונגסטן מחודדת וחתכו מסביב לרקמה המחברת עין אחת. לאחר מכן חתכו את השרירים ולבסוף את העצב האופטי כדי להוציא את העין. ברגע שהעין הוצאה, הפכו את העובר על זכוכית כיסוי כך שבית העין הריק פונה כלפי מטה ונוגע בזכוכית הכיסוי.הוסיפו טיפה של 3%Methylcellulose כדי לקבע את העובר במקומו ולכסות את העובר כולו למניעת התייבשות. בזמן הדמיה באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי הפוך עם עדשת 20 x plan APO, הדמיאו את העובר באופן מיידי; מערכות הדמיה רבות יצליחו להבחין במבנים כלי דם רק עד מחצית הדגימה. במקרה זה, השעו את העובר ב-PBS והעבירו אותו לצד הנגדי להמשך הדמיה לצורך ביצוע רקונוסלציה תלת-ממדית של תמונות כלי דם מוחיים באמצעות Image J, המותאמת לרינדורים תלת-ממדיים.ייבאו מחסניות קונפוקליות על ידי מעבר ל-plugins, loci, bio formats importer, ולאחר מכן בחרו את קובץ הקונפוקל; עבור מחסניות Nikon בחרו ב-view stack with hyper stack והגדירו את מצב הצבע ל-gray scale. לאחר מכן סמנו את auto scale ו-split channels. בחירות אלו יפתחו ארבעה פאנלים נפרדים עבור הערוצים.סגרו את כל התמונות למעט התמונה ב-16 bit ששם הקובץ שלה מסתיים ב-c=1. התאימו את הסף (threshold) באמצעות רצועת הגלילה בתחתית כדי לסרוק ולמצוא פלח שבו נמצא האזור או המבנה המעניין. לאחר מכן, עברו ל-Image Adjust Threshold.בפאנל שמופיע, החליקו את הסרגל העליון שמאלה כדי שהמבנה ייראה בבירור על רקע הרקע, והשאירו את הסרגל התחתון במקומו כדי ליצור תמונה חדשה של שמונה ביט. בחרו ב-b and w, ולאחר מכן ב-dark background.אין לבחור בחישוב סף (calculate threshold) עבור כל תמונה, אלא אם נדרשות התאמות שונות עבור כל פלח. לאחר מכן, עברו ל-plugins 3D viewer threshold, הגדירו את ה-zero resampling factor ל-one או two, ובטלו את הבחירה בתיבות הצבע האדום והכחול כדי לקבל פלט תלת-ממדי בירוק. אחרת, התוצאה תהיה רינדור לבן.לאחר מכן בחרו ב-apply. השתמשו בבקרים של העכבר והמקלדת כדי לסובב, להסיב ולהגדיל את התמונה התלת-ממדית כדי לשמור תמונות סטטיות בכל נקודה. השתמשו באפשרות capture בתפריט.גודל תיבת התמונה על המסך קובע את ממדי הפיקסלים של התמונה שתוצר, לכן אם נדרשת תמונה ברזולוציה גבוהה, הגדל את התיבה על ידי גרירת הפינה הימנית התחתוית. צור סרט 3D מסתובב על ידי בחירה ב-view record 360 degree rotation. לבסוף, שמור את הקובץ באחד מכמה פורמטים זמינים והשתמש בנגן המדיה החינמי ובקוד פתוח VLC לצפייה ב-3D.שחזור של מבנים כלי דם מספק נקודת מבט מקיפה ומעניינת ויזואלית של התפתחות דג הזברה. מוצגים כאן מספר זוויות של מבני כלי דם בעובר דג זברה שישה ימים לאחר ההפריה, אשר ביטא EGFP בתאי אנדותל בצבעים ירוק מונוכרומטי או לבן. לעיתים קשה להעריך את עוצמת האות, אך צביעה מדומה (pseudo coloring) מספקת עוצמת תמונה מטבלת ערכים, דבר המאפשר תפיסת עומק טובה יותר של מבנים חופפים.לדוגמה, איור זה מציג תמונה תלת-ממדית בצבעי פסאודו של מערכת כלי הדם בדג zebrafish שישה ימים לאחר ההפריה, לאחר התפתחותה. טכניקה זו אפשרה לנו לבחון את ההשפעות הווסקולריות של amyloid beta במוח של חולייתן. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להדמיות את רשתות כלי הדם בדגי zebrafish עובריים, המהווים מערכת חסכונית ונגישה לחקר האנגיוגנזה.

imaging-3d-reconstruction-cerebrovascular-structures-embryonic

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה שבאמצעותה לנתח את המוח חוליות עוברי דג הזברה מתפתח לחיות ברזולוציה של תא בודד על ידי מיקרוסקופיה confocal. זה כולל את השיטה שבאמצעותה אנו מזריקים את העובר מתא בודד דג הזברה ולאחר מכן הר התמונה במוח המתפתח.

חיים הדמיה של המוח על ידי עוברי דג הזברה מיקרוסקופיה confocal

לאחר היווצרות בצינור העצבי, neuroepithelium מכווץ קפלי תוך הצינור מתמלא הנוזל השדרתי עובריים (eCSF) כדי ליצור את החדרים במוח העוברי. פיתחנו טכניקה זו זריקה החדר כדי להמחיש טוב יותר את החלל מילא נוזל לעומת הצורה neuroepithelial בעובר חי.

החדר דג הזברה המוח Injection

confocal הדמיה זמן לשגות היא טכניקה רבת עוצמה שימושית לאפיון התפתחות עוברית. כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה ולאפיין המורפוגנזה craniofacial בסוג פראי, כמו גם PDGFRA, smad5, וSMO עוברים שעברו מוטציה.

ניתוח Craniofacial המורפוגנזה בדג הזברה שימוש 4D מיקרוסקופיה confocal

הדמיית ההתנהגות הדינמית של אברונים ומבנים תת-תאיים אחרים in vivo יכולה לשפוך אור על תפקודם במצבים פיזיולוגיים ומחלות. כאן, אנו מציגים שיטות לתיוג גנטי של שני אברונים, צנטרוזומים ומיטוכונדריה, והדמיית הדינמיקה שלהם בעוברי דג זברה חיים באמצעות מיקרוסקופיה רחבת שדה וקונפוקלית.

הדמית מבני subcellular בעובר דג הזברה החייה

כאן, אנו מציגים שיטת הרכבה רב-תכליתית המאפשרת הדמיה ארוכת טווח של התפתחות הגוף האחורי של עוברי דג זברה חיים מבלי להפריע להתפתחות תקינה.

שיטת הרכבה צדדית עבור Long Term הדמיה של פיתוח דג זברה

ב vivo הדמיה היא כלי רב עוצמה שניתן להשתמש בו כדי לחקור את המנגנונים הסלולריים בבסיס פיתוח מערכת העצבים. כאן אנו מתארים טכניקה לשימוש מיקרוסקופיה מיקוד הזמן כדי להמחיש מספר גדול של המוח ססגוניות באמצעות התווית בזמן אמת בתוך מערכת העצבים דג זברה המתפתח.

מדמיין את המוח המתפתח בחיים דגים באמצעות הברקשת וזמן-הדמיה קונמיקוד

פרוטוקול זה מתאר גישה לתיוג תותוג טומוטו והדמיה רב ממדית של התפתחות עיניים מוקדמות של דגי זברה. אנו מתארים תיוג, הטמעה והדמיה בארבעה ממדים (4D) באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית לסריקת לייזר, ושיקולים למיטוב רכישת ערכות נתונים לניתוח מנגנונים של מורפוגנזה של אופטית.

הדמיה תלת מימדית של מורפוגנזה של גביע זברה אופטי

כאן אנו מציגים שיטה לדימוי המוח העוברי של דג הזברה בשלבים של זחלים ונוער. הליך מיקרו-פולשני זה, המותאם מגישות אלקטרופיזיולוגיות, מספק גישה לפרטים תאיים ותת-תאיים של נוירון בוגר וניתן לשלבו עם אופטוגנטיקה ומחקרים נוירופרמקולוגיים לאפיון תפקוד המוח והתערבות תרופתית.

In vivo הדמיה של רקמת מוח פעילה לחלוטין בזחלי דגי זברה ערים וצעירים על ידי הסרת גולגולת ועור

מוצג כאן פרוטוקול להדמיית מוח שלם in vivo של דגי זברה זחלים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי תלת ממדי. הליך הניסוי כולל הכנת דגימה, רכישת תמונה והדמיה.

ב Vivo הדמיה מוחית שלמה של זחלי דגי זברה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי תלת מימדי

פרוטוקול זה מתאר שיטת מיקרוסקופ אור בעלות נמוכה להערכת מורפולוגיה ותפקוד לב בעוברי דג זברה, המאפשרת הערכה ניתנת לשחזור של רעילות לב התפתחותית ללא צורך במערכות הדמיה מתקדמות.

הדמיית לב תפקודית בעוברי דג זברה באמצעות מיקרוסקופיה סטנדרטית וניתוח וידאו: יישומים במחקר סביבתי וביו-רפואי

למד שיטות הדמיה ושחזור תלת-ממדי של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה. טכניקת מיקרוסקופיית קונפוקל מאפשרת חקר התפתחות מערכת העורקים והשפעת טיפולים כימיים על ענפות כלי הדם.

הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

גלה סרטונים נוספים