Name: FlyBar: מתן אלכוהול לזבובים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-18T18:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: חקור התנהגויות מושפעות מאלכוהול בזבובי Drosophila באמצעות מערכת FlyBar פשוטה וזולה. השיטה מאפשרת השוואה בין קבוצות שונות ומדידה של רגישות לאלכוהול בהתבסס על מחזורים צירקדיים וגורמים גנטיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מימון למחקר זה מסופק על ידי תכנית במדעי המוח בפרס ממדינת מכללת פלורידה לרפואה של האוניברסיטה ותמיכה מהמחלקה למדע ביולוגי בברית המועצות לשעבר. מימון נוסף מסופק על ידי גרנט-in-Aid מקרן המחקר של אלכוהול משקאות היצרן.

<ol><li>Linde, K., Lyons, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+acute+alcohol+sensitivity+but+not+acute+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiol.+Int%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila.</a> Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).</li>
<li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+for+alcohol+reward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li>
<li>Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+deprivation+increases+ethanol+intake+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila.</a> Science. 335, 1351-1355 (2012).</li>
<li>Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fruit+fly%3A+A+model+organism+to+study+the+genetics+of+alcohol+abuse+and+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The fruit fly: A model organism to study the genetics of alcohol abuse and addiction.</a> Cell. 93, 909-912 (1998).</li>
<li>Guarnieri, D. J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster%2C+a+genetic+model+system+for+alcohol+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster, a genetic model system for alcohol research.</a> International Review of Neurobiology. 54, 203-232 (2003).</li>
<li>Scholz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intoxicated+fly+brains%3A+Neurons+mediating+ethanol-induced+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Intoxicated fly brains: Neurons mediating ethanol-induced behaviors.</a> J. Neurogenet. 23, 111-119 (2009).</li>
<li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. Y., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">High-resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li>
<li>Schumann, G., Spanagel, R., Mann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+genes+for+alcohol+dependence%3A+Animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">Candidate genes for alcohol dependence: Animal studies.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 27, 880-888 (2003).</li>
<li>Singh, C. M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+control+of+acute+ethanol-induced+behaviors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic control of acute ethanol-induced behaviors in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 24, 1127-1136 (2000).</li>
<li>Perreau-Lenz, S., Zghoul, T., de Fonseca, F. R., Spanagel, R., Bilbao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+regulation+of+central+ethanol+sensitivity+by+the+mPer2+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Circadian regulation of central ethanol sensitivity by the mPer2 gene.</a> Addiction Biology. 14, 253-259 (2009).</li>
<li>Brager, A. J., Prosser, R. A., Glass, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+and+acamprosate+modulation+of+elevated+ethanol+drinking+in+mPer2+clock+gene+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiol.+Int%22%5BJournal%5D)">Circadian and acamprosate modulation of elevated ethanol drinking in mPer2 clock gene mutant mice.</a> Chronobiol. Int. 28, 664-672 (2011).</li>
<li>Sinclair, J. D., Geller, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+consumption+by+rats+under+different+lighting+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ethanol consumption by rats under different lighting conditions.</a> Science. 175, 1143-1144 (1972).</li>
<li>Danel, T., Jeanson, R., Touitou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+pattern+in+consumption+of+the+first+drink+of+the+day+in+alcohol-dependent+persons%5BTitle%5D)+AND+%22Chronobiol.+Int%22%5BJournal%5D)">Temporal pattern in consumption of the first drink of the day in alcohol-dependent persons.</a> Chronobiol. Int. 20, 1093-1102 (2003).</li>
<li>Kapfhamer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taok2+controls+behavioral+response+to+ethanol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+brain%2C+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Taok2 controls behavioral response to ethanol in mice.</a> Genes, brain, and behavior. 12 (1), 87-97 (2012).</li>
<li>Lasek, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evolutionary+conserved+role+for+anaplastic+lymphoma+kinase+in+behavioral+responses+to+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An evolutionary conserved role for anaplastic lymphoma kinase in behavioral responses to ethanol.</a> PLoS One. 6, 226-236 (2011).</li>
<li>Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lmo+genes+regulate+behavioral+responses+to+ethanol+in+Drosophila+melanogaster+and+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse.</a> Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).</li>
<li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning & Memory. 16, 19-27 (2009).</li>
<li>Hamblen-Coyle, M. J., Wheeler, D. A., Rutila, J. E., Rosbash, M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+of+period-altered+circadian-rhythm+mutants+of+Drosophila+in+ligh-dark+cycles+%28Diptera+Drosophilidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavior of period-altered circadian-rhythm mutants of Drosophila in ligh-dark cycles (Diptera Drosophilidae).</a> J. Insect Behav. 5, 417-446 (1992).</li>
<li>Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+behavior+associated+with+altered+homeostasis+and+photosensitivity+of+Drosophila+clock+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Reciprocal behavior associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants.</a> J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).</li>
<li>Power, J. M., Ringo, J. M., Dowse, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+period+mutations+and+light+on+the+activity+rhythms+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Rhythms%22%5BJournal%5D)">The effects of period mutations and light on the activity rhythms of Drosophila melanogaster.</a> Journal of Biological Rhythms. 10, 267-280 (1995).</li>
<li>Yoshii, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+cycles+drive+Drosophila+circadian+oscillation+in+constant+light+that+otherwise+induces+behavioural+arrhythmicity%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Temperature cycles drive Drosophila circadian oscillation in constant light that otherwise induces behavioural arrhythmicity.</a> Eur. J. Neurosci. 22, 1176-1184 (2005).</li>
<li>Berger, K. H., Heberlein, U., Moore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+chronic%3A+two+distinct+forms+of+ethanol+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid and chronic: two distinct forms of ethanol tolerance in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 28, 1469-1480 (2004).</li>
<li>Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+ethanol+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Functional ethanol tolerance in Drosophila.</a> Neuron. 28, 261-271 (2000).</li>
<li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-regulated+genes+that+contribute+to+ethanol+sensitivity+and+rapid+tolerance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol-regulated genes that contribute to ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.</a> Alcohol Clin Exp Res. 34, 302-316 (2010).</li>
<li>Borycz, J., Borycz, J., Kubow, A., Lloyd, V., Meinertzhagen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ABC+transporter+mutants+white%2C+brown+and+scarlet+have+altered+contents+and+distribution+of+biogenic+amines+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of biogenic amines in the brain.</a> J. Exp. Biol. 211, 3454-3466 (2008).</li>
<li>Sitaraman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+is+necessary+for+place+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Serotonin is necessary for place memory in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).</li>
<li>Bainton, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+modulates+acute+responses+to+cocaine%2C+nicotine+and+ethanol+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila.</a> Current Biology. 10, 187-194 (2000).</li>
<li>Kong, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pair+of+dopamine+neurons+target+the+D1-like+dopamine+receptor+DopR+in+the+central+complex+to+promote+ethanol-stimulated+locomotion+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila.</a> Plos One. 5, (2010).</li>
<li>Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. Deaths: Final data for 2007. , U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention: National Center for Health Statistics. (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+National+Center+on+Addiction+and+Substance+Abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Shoveling+up+II%3A+The+impact+of+substance+abuse+on+federal%2C+state+and+local+budgets%22%5BJournal%5D)">The National Center on Addiction and Substance Abuse.</a> Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. , Columbia University. (2009).</li>
<li>NIAAA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimated+economic+costs+of+alcohol+abuse+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States.</a> , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="www.medtext.com/hdcn.htm">www.medtext.com/hdcn.htm</a> (1992).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction-like+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Communicative+%26+Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Communicative & Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).</li>
<li>Rodan, A. R., Rothenfluh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+behavioral+alcohol+responses+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila.</a> International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).</li>
<li>Boothroyd, C. E., Young, M. W. Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoothroyd%2C+CE+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22">Annals of the New York Academy of Sciences</a>. Pfaff, D. W., Kieffer, B. 1129, Blackwell Publishing. 350-357 (2008).</li>
<li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Current Biology. 18, 84-93 (2008).</li>
<li>Sheeba, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+melanogaster+circadian+pacemaker+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Genet%22%5BJournal%5D)">The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit.</a> J. Genet. 87, 485-493 (2008).</li>
<li>Cohan, F. M., Graf, J. -D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latitudinal+cline+in+Drosophila+melanogaster+for+knockdown+resistance+to+ethanol+fumes+and+for+rates+of+response+to+selection+for+further+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance.</a> Evolution. , 278-293 (1985).</li>
<li>Moore, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+intoxication+in+Drosophila%3A+Genetic+and+pharmacological+evidence+for+regulation+by+the+cAMP+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway.</a> Cell. 93, 997-1007 (1998).</li>
<li>Berger, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+sensitivity+and+tolerance+in+long-term+memory+mutants+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).</li>
<li>Pohl, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+Genes+Differentially+Affect+Tolerance+to+Ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22in+Drosophila.+Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol.</a> in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).</li>
<li>Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assay+for+evoked+locomotor+behavior+in+Drosophila+reveals+a+role+for+integrins+in+ethanol+sensitivity+and+rapid+ethanol+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).</li>
<li>Rothenfluh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+behavioral+responses+to+ethanol+are+regulated+by+alternate+RhoGAP18B+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms.</a> Cell. 127, (1016).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

העלויות של שימוש לרעה באלכוהול ואלכוהוליזם לחברה היא אדירות, הן במונחים של עלויות אנושיות 29 וכלכליות 30,31. דרוזופילה כמודל מציעה מערכת מהירה ותכליתית כדי לבחון במהירות את התגובות התנהגותיות של מספר גדול של אנשים ובתור שכזו כבר נעשה שימוש נרחב עבור שניהם אלכוהול 5,7,32-34 ומחקר היממה 35-37. כאן, אנו תיארתי פרוטוקול פשוט לניהול המבוקר של אדי אלכוהול לזבובים בוג...

תסיסנית להפגין תגובות התנהגותיות biphasic לאלכוהול 1 שהם מקבילים לתגובות אנושיות לתרופה זו 2,3. לאחר החשיפה ראשונית לריכוזים נמוכים של אלכוהול, זבובי פעילות של תנועה מוגברת תערוכה, הוחלף על ידי חוסר הקואורדינציה מוטורית, אובדן השליטה ביציבה ורפלקסים ליישר (אובדן ליישר רפלקס: LoRR), והרגעה (חוסר הפעילות מוטורית בתגובה מלאה לגירוי מכאני) כחשיפה לאלכוהול מתקדמת 4-9. השעון הביולוגי אנדוגני הוא מאפנן חזק של רגישות אלכוהול ורעילות כפי שנצפה בעכברים 10,11, חולדות 12, ובני האדם 13. ההתקדמות שחלה באחרונה במחקר דרוזופילה הראו שעון היממה מודולציה רגישות אלכוהול חריף אך לא אלכוהול סובלנות 1. גישות רבות עוצמה הגנטית הזמינות בדרוזופילה באמצעות מחקרי מוטציה ומניפולציות מהונדסים של המרחביתוביטוי גנים של זמן מספק מערכת המאפשרת התקדמות מהירה בזיהוי המנגנונים התאיים ומולקולריים שבבסיס להתנהגויות מורכבות. השימוש בדרוזופילה ככלי חקירה התירה התקדמות מהותית בהבנת נוירוביולוגיה אלכוהול שיכול להיות מתורגמת במהירות ליונקים 14-16. על מנת להקל על ההבנה של המנגנונים המולקולריים שבאמצעותו השעון הביולוגי מודולציה רגישות אלכוהול ולמדוד באופן אחיד על פני תגובות התנהגותיות נקודות זמן היממה, פרוטוקול ממשל אלכוהול מתאים לשימוש בתנאי אור אדום עמומים נדרש. לדרוזופילה, אלכוהול יכול להינתן באמצעות תוספי מזון לחשיפה כרונית או באופן אמין דרך בניהול אלכוהול בצורה של אדים לחשיפות אקוטיות. כאן אנו מתארים פרוטוקול ממשל אלכוהול מתאים להערכה של אפנון היממה של רפלקס הפסד של ליישר (LoRR) 1, כמו גםתרופות הרגעה. זבובים נגררו עם שעות 12: 12 מחזורי LD שעות בטמפרטורה קבועה ולאחר מכן הועברו למשטר אור נשלט על 2-5 ימים, תלוי בשאלה הניסיונית. זבובים נחשפים לאדי אתנול במכשיר המכונה FlyBar. במכשיר זה, כמויות מבוקרות של אוויר מבעבעים דרך מים ואלכוהול; לאחר מכן האדים מעורבבים וביימו לדיור בקבוקון הזבובים. כל 5 דקות זבובי כבש עבור המספר שאינו מצליח להציג ליישר רפלקסים או הפכו מסומם. אחוזי LoRR עבור כל נקודת זמן מחושבים והשוואה בין נקודות זמן היממה או בין הזנים של זבובים. הפשטות והאמינות של אספקת אלכוהול באמצעות משלוח אלכוהול FlyBar בשילוב עם אפשרויות ניתוח התנהגות מספקת יתרון משמעותי לניסויים ביולוגיים שנערכו בתנאים חשוכים.

<table><tbody><tr><td>אלכוהול 190 הוכחה</td><td>שונות</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מאוורר</td><td>חנות חיות מקומית</td><td></td><td>אנו משתמשים בלחישה 60</td></tr><tr><td>צינורות סיליקון 1/8 אינץ'</td><td>VWR</td><td>408060-0030</td><td></td></tr><tr><td>120&deg; מחבר Y</td><td>VWR</td><td>82017-256</td><td></td></tr><tr><td>ניתוקים מהירים</td><td>VWR</td><td>46600-048</td><td></td></tr><tr><td>מהדקי צינור פלסטיק</td><td>מוצרי Bell-art</td><td>132250000</td> זה <td>או הבא</td></tr><tr><td>ווסת אוויר מיניאטורי</td><td>McMaster-Carr</td><td>8727K11</td><td></td></tr><tr><td>תושבת הרכבה של ווסת אוויר מיניאטורי</td> זה או קודם <td>McMaster-Carr</td><td>9891K66</td><td></td></tr><tr><td>גילמונט גודל 12 מד זרימה</td><td>VWR</td><td>29895-242</td><td></td></tr><tr><td>קליפס כלים</td><td>McMaster-Carr</td><td>1722A43</td><td>להחזיק מדי זרימה</td></tr><tr><td>בקבוקון</td><td>VWR</td><td>89092-722</td><td></td></tr><tr><td>פקק גומי עם שני חורים</td><td>VWR</td><td>59585-186</td><td>מתאים לבקבוקונים</td></tr><tr><td>5 מ"מ צינורות זכוכית פיירקס</td><td>טריקינטיקה</td><td>PGT5x65</td><td>מתאים ביותר לפקק הקודם</td></tr><tr><td>סרט טפלון</td>חנות <td></td><td>לחומרי בניין</td><td>כדי להשיג התאמה צמודה בפקקים במידת הצורך</td></tr><tr><td>פקק גומי עם שני חורים</td><td>VWR</td><td>59582-122</td><td>מתאים לבקבוקים שלנו</td></tr><tr><td>צנרת זכוכית חד פעמית</td><td>VWR</td><td>53283-768</td><td>חתוך לאורך וכיפוף על ידי חימום</td></tr><tr><td>רשת ניילון עדינה מאוד</td><td>VWR</td><td></td> נורות שונות <td></td></tr><tr><td>של 15 וואט</td><td>חנות</td><td></td> לחומרי בניין <td>אור</td></tr> <tr><td>אדום תקורהמסנני אור בטוח אדום צילומי</td><td>אור אדום עילי</td>פנסי מיני עם מסננים אדומים אור מג <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

flybar: מתן אלכוהול לזבובים

The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

זבובי פירות (דרוזופילה melanogaster) הם מודל שהוקם עבור שני מחקרי אלכוהול וביולוגיה היממה. לאחרונה, הראה כי השעון הביולוגי מווסת את רגישות לאלכוהול, אך לא היווצרות של סובלנות. כאן אנו מתארים הפרוטוקול שלנו בפירוט. אלכוהול ניתן לזבובים באמצעות FlyBar. בהגדרה זו, אדי אלכוהול רוויים הוא מעורבב עם אוויר humidified בפרופורציות קבועות, וניתן לזבובים בארבע שפופרות בו זמנית. זבובים שגודלו בתנאים אחידים כדי למזער וריאציה בין משכפל. זבובים ישנים שלושה ימים של גנוטיפים או טיפולים שונים המשמשים לניסויים, רצוי על ידי זבובים משתי נקודות זמן שונות (למשל, CT 5 ו-CT 17) מה שהופך את השוואה ישירה אפשרית תואם. במהלך הניסוי, זבובים נחשפים לשעה 1 לשיעור שנקבע מראש של אדי אלכוהול ומספר הזבובים שמפגין אובדן ליישר רפלקס (LoRR) או sedation נספרים כל 5 דקות. ניתן לנתח את הנתונים באמצעות שלוש גישות סטטיסטיות שונות. הראשון הוא לקבוע את המועד שבי 50% מהזבובים איבדו את רפלקס ליישרם ולהשתמש בניתוח השונה (ANOVA) כדי לקבוע אם הבדלים משמעותיים קיימים בין נקודות זמן. השני הוא לקבוע את אחוז הזבובים שמראים LoRR לאחר מספר מסוים של דקות, ואחרי ניתוח ANOVA. השיטה האחרונה היא לנתח את סדרת כולה פעמים באמצעות סטטיסטיקה רב משתני. גם הפרוטוקול יכול לשמש לניסויים או השוואות שאינן היממה בין גנוטיפים.

אפנון היממה של אלכוהול רגישות באמצעות LoRR 50% כסמן. דוגמא מייצגת מראה אפנון היממה ברגישות אלכוהול במהלך היום מוצגת באיור 2. LoRR נמדד בשש נקודות זמן במהלך היום 2 nd של DD בקנטון-S ו50% LoRR נקבעו עבור כל נקודת זמן. ניתוח הראה השפעה משמעותית של שעה ביום (ANOVA: F = 5,45 7.39, p &lt;0.001, N = 6-10 לנקודה זמן). מבחן LSD פישר הראה הבדלים משמעותיים בין CT1 לעומת CT5, C...

דרוזופילה התפתחה כמערכת מודל משמעותית עבור לנתח את הבסיס התאי ומולקולרית של תגובות התנהגותיות לאלכוהול. כאן אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף נתונים רגישות אלכוהול בהקשר היממה שיכולה להיות מיושם בקלות לניסויים אחרים, והוא מתאים היטב למחקר לתואר ראשון.

FlyBar: מתן אלכוהול לזבובים

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא למדוד התנהגויות המונחות על ידי אלכוהול ב-Drosophila, באמצעות מערך זול וקל להרכבה המתאים למחקר של סטודנטים לתואר ראשון או לחוקריםC החדשים למחקרי מקצבים צירקדיים. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הרכבת מוט הזבובים, המאפשר השוואות סימולטניות של מספר קבוצות זבובים.השלב הבא של הפרוצדורה הוא גידול Drosophila תחת מחזורי אור וחושך מוגדרים ואיסוף זבובים בעלי גיל תואם לצורך הניסוי. לאחר מכן, הזבובים נחשפים לריכוזים מוגדרים של אדי אלכוהול והנתונים נאספים. בסופו של דבר, מדידת אובדן רפלקס הכתיבה או הסדציה יכולה להראות הבדלים ברגישות לאלכוהול בין קבוצות, בין אם על בסיס השעה ביום או על בסיס גנטיקה.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון ששלבי התצפית קשים ללמידה בשל האתגרים הכרוכים בצפייה בהתנהגות ובתאורה האדומה העמומה, וכן בשל הקושי לקבוע אילו זבובים איבדו את רפלקס הכתיבה ואילו לא. ראשית, הרכיבו את מוט הזבובים. התחילו בהרכבת זרימת האוויר.חברו קטע קצר של צינור סיליקון גמיש לברז אוויר של המבנה או למשאבת אוויר של אקווריום כדי לספק זרימת אוויר. פצלו את זרימת האוויר באמצעות מחבר Y. חברו את הענף הראשון לווסת.רכיב זה ישלוט על כמות האוויר הכוללת העוברת במערכת. חברו את הענף השני למחבר מהיר. דבר זה יאפשר להפסיק את זרימת האוויר (Airstream) בעת הצורך מבלי להשפיע על זרימת האוויר המכוילת.הוסיפו מחבר Y וחברו כל צינור מסתעף לווסת זרימת אוויר. לאחר מכן, חברו כל ווסת למד-זרימה של אוויר. כעת, חתכו פיפטות זכוכית של 1 mL למקטעים והמיסו זווית ישרה לתוך כל מקטע.אלו ישמשו כצינורות זווית קשיחים בהתקנה. הכניסו את פיפטת הזכוכית הישרה עבור כניסת האוויר דרך חור אחד והאריכו אותה אל תוך הנוזל עד לגובה של סנטימטר אחד מעל התחתית. הכניסו מקטע זכוכית זוויתי דרך החור השני עד שייכנס לבקבוק.השתמשו בפתחים אלה כדי לאחד את זרימת האוויר מכל בקבוק במחבר Y. בעזרת צינור גמיש, חברו את מדי זרימת האוויר לחלק הישר של פפיטה. אלו ישמשו כפתחי כניסת האוויר לשני בקבוקי התמיסה.מים או אלכוהול, יש לשמור את שני בקבוקי התמיסה באמבט מים המכוון למעל שתי מעלות מצלזיוס מטמפרטורת הסביבה. יש לסגור את הבקבוקים בעזרת פקקי גומי בעלי שני חורים עם צינורות סיליקון. חברו את הקצה השני של ה-Y לבקבוק בעל פקק גומי עם שני חורים.זרם האוויר מבקבוק ערבוב זה יספק אלכוהול ומים מאוידים לבקבוקי התצפית. פצלו את זרם האוויר היוצא מבקבוק הערבוב שתיים או שלוש פעמים כדי לקבל ארבעה או שמונה זרמי אוויר קטנים יותר. זרם אחד עבור כל בקבוק תצפית.המשיכו להשתמש בצינורות סיליקון. מבחנות התצפית הן מבחנות זבובים ריקות שנאטמו בעזרת פקק גומי בעל שני חורים, כניסה ויציאה עבור אדי האלכוהול. צינורות זכוכית מותאמים לחורי הפקק.כסו את קצות צינור הזכוכית ברשת. קיבעו את הרשת במקומה באמצעות קטע קצר של צינור פלסטיק גמיש. הכניסו את הצינור הזה דרך החור הראשון עד שיתפוס כחצי מאורך הבקבוקון.במידת הצורך, השתמשו בסרט טפלון כדי להשיג התאמה הדוקה. הכניסו את צינור הזכוכית השני עם הרשת עד שיהיה בקו אחד עם הקצה הפנימי של פקק הגומי. ערבבו את הפракציות המתאימות של שני זרמי האוויר (Airstreams) שהועברו בבועות דרך אלכוהול או מים.נטרו את לחץ האוויר באופן רציף ובצעו התאמות לפי הצורך כדי לשמור על התערובת הרצויה של אלכוהול ואדי מים בבקבוק הערבוב. בסוג זה של ניסוי, ודאו תמיד שהחדר מאוורר כראוי. כדי למזער שונות בין חזרות, יש להקדיש תשומת לב מרבית לתנאי הגידול של הזבובים.יש לגדל את הזבובים בתנאי צפיפות נמוכה ובסנכרון קפדני, כך שניתן יהיה לבחון זבובים מאותו גיל ומאותה קבוצה זה מול זה. יש לגשת לזבובים בשעות הדמדומים, לאסוף בעלי חיים שזה עתה בקעו ולאחסנם למשך 24 שעות בבקבוקוני אחסון עם כמות קטנה של מזון בריכוז אגאר גבוה באותו הזמן.ביום למחרת, חלק את הזבובים שנאספו לקבוצות של כ-30 זבובים באמצעות שואב זבובים (aspirator) והעבר את הקבוצות למבחנות טריות כדי לבחון אפנון צירקדי של ההתנהגות. הכן מספר קבוצות מספיק כדי לבחון כל תנאי בשישה נקודות זמן במרווחים שווים ביום הבדיקה, במטרה לבחון את התנהגות האפנון הצירקדי. כמו כן, החזק את הזבובים בחושך מוחלט בטמפרטורה של 25 °C למשך יומיים לפני הבדיקה.בלאגור לתוכנית הניסוי, לפחות שעה לפני הבדיקה ההתנהגותית, העבירו את הזבובים לחדר הניסוי ההתנהגותי המואר באור אדום עמום בלבד. בצעו את הניסויים תחת אור אדום עמום כדי שגירוי פוטו-אופטי לא ישבש את התוצאות. לפני הניסוי, העבירו אוויר דרך המערכת למשך 10 דקות לפחות וכיילו את זרימות האוויר.מתחת לבקבוקי התצפית, הניחו דף נייר לבן כדי להגביר את נראות הזבובים באמצעות הניגודיות הנוספת. לאחר שזרימת האוויר התייצבה, נתקו את מחבר השחרור המהיר והכניסו קוהורט של 30 זבובים לכל בקבוק תצפית.במהלך כל הרצה של מוט הזבובים, יש לבחון כל תנאי ניסוי. פעולה זו תגביר את חסונו של הניסוי ותמזער את ההשפעה של שינויים יומיים. לאחר טעינת כל מבחנות התצפית, חברו מחדש את זרימת האוויר והפעילו את הטיימרים.השתמשו בטיימר אחד כדי לעקוב אחר זמן החשיפה הכולל לאלכוהול ובשני כדי לספור לאחור פרקי זמן של חמש דקות לאורך הניסוי. עקבו אחר זרימות האוויר ובצעו את ההתאמות הדרושות כדי לשמור עליהן קבועות. בדרך כלל, זרימות האוויר מתייצבות מדי חמש דקות באמצעות מנורת אור אדום.ספרו את מספר הזבובים שאיבדו את רפלקס הכתיבה. הרחיקו את המנורה לפחות 12 אינץ' מבקבוקי המבחנה. הקישו נקישה חזקה על הבקבוק וספרו כמה זבובים אינם מצליחים לכתוב בתוך כארבע שניות.זבובים אלו עשויים עדיין להניע את רגליהם וכנפיהם, אך הם לא יוכלו להתהפך חזרה למצב זקוף. אם הזבוב אינו מניע אף גפה, הוא נמצא תחת הרדמה מלאה. ניתן לדרג זאת כקריטריון נפרד מהיעדר רפלקס הכתיבה.הסשן יימשך כשעה; בסיומו, ספרו את המספר הכולל של הזבובים בכל קובץ באמצעות הפרוטוקול המתואר. נמדדה מודולציה צירקדית ברגישות לאלכוהול. היעדר רפלקס הכתיבה נמדד בשישה נקודות זמן במהלך היום השני של החשיכה ב-Canton S; לשעה ביום הייתה השפעה מובהקת על הזמן.מחצית מהזבובים לא הצליחו להתרחש באופן עצמאי. אחוז הזבובים מסוג cantons שהורדמו לאחר 40 דקות עם 30% alcohol. האיד נמדד ב-CT five ביום וב-CT 17 בלילה.נמצא כי מספר זבובים מועט באופן משמעותי היה תחת הרדמה במהלך היום הסובייקטיבי בהשוואה ללילה. שימוש בסדרות זמן הדגים הבדלים ברפלקס הכתיבה ובהרדמה כאשר זבובים מסוג Canton s הושוו לזבובים הנושאים את המוטציה white 1 1 1 8. ברקע של Canton S, זבובים מסוג white 1 1 1 8 הראו רפלקס כתיבה טוב יותר בתגובה לאדי אתנול מאשר Canton S. הבדלים בין מוטנטים מסוג white 1 1 1 8 לבין זבובים מסוג בר (wild type) נמצאו גם בקצב ההרדמה.ההבדל נובע ככל הנראה מרמות משתנות של אויבים ביוגניים עם המוטציה white 1 1 1 8. לכן, יש לבקר את התגובות ההתנהגותיות הנובעות מהמוטציה white 1 1 1 8 הנוכחת בקווים טרנסגניים רבים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן מתן האלכוהול לזבובים באמצעות ה-fly barn.חיוני לאסוף את הזבובים באופן שיטתי ולוודא שהתצפיות באור אדום עמום יהיו סטנדרטיות ככל האפשר.

the-flybar-administering-alcohol-to-flies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

Assay פשוט למדוד את ההשפעות מרגיעים של אתנול...

דרך פשוטה למדוד את רגישות אתנול זבובים

סרטון זה מתאר כיצד לבצע הזרקה של זבובים בוגרים חיים וכולל פרוטוקול לדוגמה שבו חלקיקים מסומנים וטריפאן כחול מוזרקים בבטן הזבוב כדי להעריך פגוציטוזה.

הזרקה של זבובי דרוזופילה בוגרים: שיטה של משלוח תרכובת או תווית

סרטון זה מדגים את הזרקת הננו-הזרקה של תרחיף חיידקי לחלל גוף הזבוב, וכתוצאה מכך התרבות חיידקים וזיהום. התגובה החיסונית של הזבוב מנקה חלק מהחיידקים, בעוד שאחרים בורחים מפינוי חיסוני ושורדים בתוך הפונדקאי וגורמים לזיהום.

הדבקת זבובים בתרחיף חיידקי באמצעות ננו-מזרק

סרטון זה מדגים טכניקה להדביק דרוזופילה על ידי החדרת חיידק פתוגני ישירות לחלל גופם. שיטה זו עוקפת מחסומי אפיתל ומנגנוני הגנה פסיביים אחרים, ומאפשרת השראת זיהום מערכתי. עם ההדבקה, התגובה החיסונית המתקבלת מוערכת על ידי ניטור תמותת זבובים וביצוע בדיקות במורד הזרם.

טכניקת דקירה ספטית להחדרת זיהום חיידקי מערכתי בזבובים

בדיקות פשוטות למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בדרוזופילה מקלות על השימוש באורגניזם מודל זה לחקירת התנהגויות חשובות אלה הקשורות לאתנול. כאן מתוארת בדיקה פשוטה יחסית וניתנת להרחבה למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בזבובים.

Assay זול, Scalable התנהגות למדידת אתנול הרגעת רגישות וסובלנות מהירה ב<em&gt; דרוזופילה</em

המתואר כאן הוא השימוש בכמה כלים תוצרת בית כדי להעביר, לצנן, ולהרוג מבוגרים Drosophila ילה, כמו גם לנקות את התרבות זכוכית מבחנות ולאסוף ביצים. כלים אלה קלים לעשות והם יעילים למדי בטיפול Drosophila ילה.

כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר

שיטות נוכחיות למדידת רגישות האלכוהול בדרוזופילה נועדו לבחון קבוצות של זבובים. אנו מציגים בקלות, בעלות נמוכה, התפוקה גבוהה הערכה להערכת רגישות הרגעה אלכוהול במספר גדול של זבובים בודדים. השיטה אינה דורשת כלים מיוחדים וניתן לבצעו בכל מעבדה המשתמשת בחומרים משותפים.

שיטת תפוקה גבוהה עבור מדידת אלכוהול הרגעה זמן של הפרט דרוזופילה מלאנוגסטר

השיטת Flypub מודדת את ההתנהגויות שבהן מציג הפרי את מלאנוזופילה מלוגסטר תחת השפעת האתנול. ניתן לשלוט בקלות על ידי הניסויים בכל הרמות וליישם גירויים שונים, הקלה על שימוש בסמים ולימודי התמכרות.

Flypub ללמוד אתנול המושרה ביטול עכבה התנהגותית הרגישות

זבוב הפירות (Drosophila melanogaster) נמצא בשימוש נרחב למחקר ביולוגי וטוקסיקולוגי. כדי להרחיב את התועלת של זבובים, פיתחנו מכשיר, מערך הרדמה סדרתית, שחושף בו זמנית דגימות זבובים מרובות להרדמה כללית נדיפה (VGAs), מה שמאפשר לחקור את ההשפעות הנלוות (רעילות ומגוננות) של VGAs.

מערך ההרדמה הסדרתי לחקירה בתפוקה גבוהה של חומרים נדיפים באמצעות Drosophila melanogaster

מאמר זה מתאר את תחזוקת המעבדה (כולל הזדווגות והאכלה) של זבוב הדיפטרן התחתון Bradysia (Sciara) coprophila.

תחזוקת מעבדה של זבוב הדיפטרן התחתון Bradysia (Sciara) coprophila: אורגניזם מודל מתפתח חדש/ישן

חקור התנהגויות מושפעות מאלכוהול בזבובי Drosophila באמצעות מערכת FlyBar פשוטה וזולה. השיטה מאפשרת השוואה בין קבוצות שונות ומדידה של רגישות לאלכוהול בהתבסס על מחזורים צירקדיים וגורמים גנטיים.

FlyBar: מתן אלכוהול לזבובים

גלה סרטונים נוספים