שיטה ידנית פירוק עצמות אפקטיבית להכין רקמות האף מאוס שלמות עם ארגון האנטומי משומר

שלום, אני דייוויד דנטון מהמעבדה של ד"ר וונג לין ב-UMBC. בסרטון זה, אנו מציגים טכניקה יעילה להכנת רקמת אף של עכבר תוך שימור הארגון האנטומי. טכניקה זו מאפשרת להשיג דגימה בודדת המכילה כמעט את כל רקמת האף, כולל רקמה נשימתית וריחית, וכן רקמה אפיתליאלית ותת-אפיתליאלית.

אנו מציגים את השלבים להסרה של עצמות פנים שונות הסובבות את רקמת האף, תוך שימור של הרקמות העדינות ביותר, כגון קצוות ה-main olfactory epithelium. לשיטה שלנו יש יתרונות משמעותיים על פני שיטות של דה-קלציפיקציה (decalcification), כיוון שהיא מונעת טיפול כימי אגרסיבי והסרת העצם יכולה להסתיים בתוך 20 עד 30 דקות. יתרונות נוספים של טכניקה זו הם שאינה מוגבלת לגיל העכבר וניתן לבצעה באמצעות רקמה מקובעת או טרייה.

יתרונות אלה הופכים את הטכניקה שלנו לאידיאלית עבור מחקרים מורפולוגיים, אימונוהיסטוכימיים ופיזיולוגיים. כאן אנו מציגים תרשים סכימטי של ההיבט הדורסלי של עצמות הגולגולת והאף. בסרטון זה, נתמקד בהנתיחה של עצמות האף.

זוהי תרשים סכימטי של ההיבט הוונטרלי (בטני) של עצמות הגולגולת והאף. זוהי מבט דורסלי (גבי) עם גולגולת ואף שאינם מנותחים בחלק העליון, ואף מנותח בחלק התחתון. מוצגים כעת הקצוות של אפיתל ריח מרכזי.

כאן אנו מראים את עצמות האף החל מההיבט הדורסלי. זהו החלק הדורסלי של הלוח הזיגומטי, ולאחריו הקשת הזיגומטית. זוהי עצם האף, ובשלב הבא מוצגת הלוחית המסננת (cribriform plate) הממוקמת במיקום זה.

במיקום קדמי הרבה נמצא גנגליון גרונברג (gruenberg ganglion). מנקודת מבט צדית, אנו מראים את חלקו של עצם הרשם המכסה את הטורבנה של אפיתל הריח, את גנגליון גרונברג, את הלסת העליונה ואת השיניים החותכות הקדמיות. במעבר לנקודת מבט ונטרלית, הצגנו את הטוחניות, את השיניים החותכות הקדמיות, את עצם החיך ואת עצם ה-vulner.

התחילו בהסרת עצם הוולנר (vulner bone) על ידי בחינת ההיבט הוונטרלי של האף. כדי להסיר את עצם הוולנר, השתמשו בפינצטה כדי לשבור את העצם לאורכה, ולאחר מכן הסירו את חלקי העצם על ידי הפיכתם הרחק מהרקמה שמתחתיהם, כדי למנוע נזק לאיבר האף של ה-RO. לצורך משימה זו, השתמשו בפינצטה כדי לשבור את החלק הוונטרלי של שיני החיתוך הקדמיות.

השתמשו בתנועת לחיצה ושברו את השיניים החותכות הקדמיות לכיוון מיקומו של עצם העלמר (ulmer bone). לאחר שבירת השיניים החותכות הקדמיות, הסירו באמצעות פינצטה את שרידי העצם שנותרו המחוברים לרקמה. כדי לשחרר את הלסת העליונה, התחילו מההיבט הוונטרלי ושברו את הלסת העליונה ממש וונטרלית לקשת הזייגומטית זו.

הפכו את האף לצד הגבי והשבירו את הלסת העליונה (maxilla) ממש לפני קשת העצם הלחיית (zygomatic arch). כדי לשחרר את הלסת העליונה ולהסיר את הצד הימני של עצם האף, פנו את שאר ה-frontal bone coddle בצדו הימני של עצם האף. למשימה זו תשתמשו ב-Ron jurors.

יש לנקוט משנה זהירות בעת שימוש במלקחי Ron כדי למנוע פגיעה ברקיב המסננת (cribriform plate) הדק, שכן פגיעה ברקיב המסננת עלולה לגרום לפילוג של האף לשניים. הרם והסיר את העצם השבורה. לאחר מכן, הרם את החלק הדורסלי של הפלטה הזygomatic הרחק מהרקמה שמתחתיה.

הפרידו את עצם האף לאורך קו האמצע שלה. בעזרת פינצטה או מוחק, אחזו בעצם זו באמצעות הפינצטה והזיזו אותה בעדינות מצד לצד תוך כדי הרמה כלפי מעלה. יש לבצע הליך זה בזהירות רבה, שכן קל לפגוע ברקמה שמתחתיה בעת הסרת העצם. לאחר הסרת העצם, ניתן לראות את הרקמה שמתחתיה באופן נפרד, כפי שמוצג בתמונה זו.

כדי להסיר את העצם, פשוט חתכו אותה באמצעות פינצטה או מספריים. כעת עברו להסרת הלסת העליונה הקדמית (anterior maxilla). אם היא עדיין לא הוסרה עד שלב זה, הלסת העליונה הקדמית כבר רפויה, לכן הסירו אותה על ידי שבירת כל החיבורים שנותרו לרקמה.

ממבט גבי (דורסלי) מלמעלה, הסיר את עצם המצח הנמצאת בצמוד לצד השמאלי של עצם האף. השתמש בפליירים כדי לשבור את עצם המצח. ניתן להשתמש בפליירים או בפינצטה כדי להסיר את החלק הזה של עצם המצח.

ניתן להרפות את הלסת העליונה (maxilla) בשלב זה, אם כי הדבר אינו הכרחי. כדי להסיר את הצד השמאלי של עצם האף, השתמשו בפינצטה והפרידו בעדינות את עצם האף מהרבות מהעצמות הסובבות אותה. לאחר מכן, אחזו בעצם זו באמצעות פינצטה והזיזו אותה באופן כללי מצד לצד תוך써 הרמה, כדי להפריד את עצם האף מהרקמה שמתחתיה.

ככל שהרקמה התומכת נפרדת מהעצם, ניתן לעיתים להשתמש בזווית ראייה צדית כדי לראות את הרקמה המחוברת לעצם. השתמשו בפינצטה כדי להפריד בעדינות את הרקמה המחוברת לעצם, ולאחר מכן הסירו את העצם באמצעות מספריים או פינצטה. לאחר הסרת עצם האף, הסירו את הלסת העליונה הקדמית (anterior maxilla) בצדו השמאלי של האף, תוך שימוש באותה טכניקה ששימשה להסרת הלסת העליונה הקדמית בצדו הימני של האף.

השלב הבא הוא הסרת הלוחיות העיגומטיות (zygomatic plate) בצד שמאל של האף. ייתכן שעדיין קיים חיבור בין הלוחית העיגומטית לרקמה שמתחתיה; במקרה זה, ניתן להשתמש בפינצטה כדי לסגור בעדינות ולשחרר את החלק הגבי (dorsal) של הלוחית העיגומטית. התבוננו בהיבט הבטני (ventral) של האף.

כדי לזהות את השיריים ואת עצם החיך, ניתן להסיר או את השיריים או את עצם החיך. ראשית, זוהי תצפית על ההיבט הלטרלי של האף, ותצפית זו מראה את הסרת השיריים מהצד הימני של האף. באמצעות ה-urs, כאשר הצד הימני של הלסת העליונה הוסר, מוסרת עצם החיך.

בשלב הבא, שברו את שארית הלסת העליונה (maxilla) ואת הטחניות, והסירו רסיסי עצם גדולים מעצם החיך (palatine bone) או מהלסת העליונה. שברו והסירו כל חלקים נותרים של עצם המסננת (ethmoid bone) הבולטים לעבר האפיתל. הניחו את הפינצטה העדינה מתחת לעצם והרימו אותה כלפי מעלה כדי להפריד אותה מהרקמה שמתחתיה.

לחלופין, השתמש ב-Rogers כפי שמוצג כאן כדי לשבור את העצם ולאחר מכן השתמש בפינצטה עדינה כדי להפריד את העצם מהרקמה שמתחתיה. כך נראית הקונכיה של אפיתל הריח האנושי. לאחר הסרת עצם ה-moid, תסור עצם זו.

בשלב הבא, יש להסיר את העצם הנמצאת במיקום כודלי (coddle) ומדיאלי לעצם האף באמצעות מספריים. יש לנקוט זהירות במהלך שלב זה כדי למנוע פגיעה ברצפת הנפה (cribriform plate). לאחר שבירת העצם, השתמשו בפינצטה כדי להסירה.

בשלב הבא נראה מבט על האף. לאחר הסרת עצם זו, יש לבדוק אזור אחרון סביב ה-V nasal organ. זאת מכיוון שקיימת עצם המפרידה בין הצינורות הזוגיים של ה-V nasal organ, שאותה אני מסיר כעת בניתוח זה.

זוהי נקודת המבט הגבית של אף שעבר דיסקציה באמצעות הטכניקה שלנו. כעת, נסובב את האף כדי להציג את היבטיו השונים. זוהי המבט הגבי, ולאחריו מבט צדי של צד שמאל של האף ומבט בטני.

כעת נציג בפירוט את המאפיינים של אף שנו dissectה במלואה באמצעות הטכניקה שלנו, החל מההיבט הדורסלי של האף. החלק הראשון שאנו מציגים הוא הקונכיות של האפיтелиום הנשמי הראשי. קיימות בועות אוויר ברקמה שמתחת לעצמות האף, ובועות אוויר אלו מוסרות על ידי שאיבה של הדגימה מנקודת מבט לטראלית.

אנו מראים את הקונכייה השלמה של אפיתל ריח אנושי. שימו לב כי קיימות בועות אוויר בתוך הקונכיות. רקמה בלוטית נמצאת קדמית לקונכייה ואפיתל נשימי נראה מנקודת מבט צדדית זו.

מנקודת מבט ונטראלית, ניתן להבחין באיבר האף הפגיע. תמונה זו מציגה הרחבה של טכניקת הנתיחה שלנו, הכוללת הסרה של הפקעות הריח במוח והאף מדגם אחד. כדי להכין את הרקמה לחיתוך, קחו תחילה תבנית פלסטיק ומלאו אותה ב-optimum cutting temperature media.

הניחו את הרקמה הרלוונטית לתוך התבנית הממולאת, והניחו את התבנית בתוך מעגל של גריס סיליקון על צלחת פלסטיק; בקבוק יונח על מעגל הגריס כדי ליצור אטימה עבור הוואקום. במעבדה שלנו נעשה שימוש בוואקום שנוצר על ידי זרימת מים. לאחר יצירת הוואקום באמצעות הזרימה, בועות המים נמשכות החוצה מהרקמה.

יש להפסיק את הוואקום על ידי סגירת המים ושחרור הצינורית. לאחר מכן, הוצא את התבנית מפלסטיק. בשלב זה אני מעביר את הרקמה לאוריינטציה הרצויה לפני הקפאת הרקמה.

המעבדה שלנו משתמשת בקרח יבש כדי להקפיא רקמות. אלו הן תוצאות מייצגות של חיתוך אף באמצעות טכניקת הנתיחה שלנו וצביעה ב-neutral red. זהו חיתוך אופקי המראה את הקונכיות של אפיתל ה-man effector, רקמה בלוטית ואפיתל נשימתי.

החיתוך השני הוא חיתוך קורונלי המראה את דפוסי הקיפול המפותלים של הקונכיות של אפיתל ריח מרכזי. בסרטון זה, אנו מציגים טכניקה להסרה ידנית של העצמות מהאף כדי להשיג דגימה האידיאלית למחקרים מורפולוגיים, אימונוהיסטוכימיים או פיזיולוגיים.