הבדלי שומה ביכולת תחרותית בזרע דרוזופילה

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבדוק הבדלים ביכולת התחרותית של הזרע בין זכרי דרוזופילה, מלנוגסטר עם גנוטיפים מובחנים. זה מושג על ידי מעקב אחר סמנים גנטיים גלויים המזהים את אבהות הצאצאים מנקבה שהזדווגה לשני זכרים שונים, גנוטיפים בבדיקה, נקבות מורשות תחילה להזדווג עם זכר ייחוס ולאחר מכן מורשות להזדווג עם זכר ניסיוני. חלק הצאצאים שנולד על ידי זכר הניסוי מוסק על ידי בחינת צבע העיניים של הצאצאים.

התוצאות משוות בעקיפין את היכולת התחרותית של הזרע הגברי הניסיוני על ידי ביצועיהם היחסיים לזרע הזכר הייחוס. שיטות אלו יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח בגנטיקה ובאבולוציה בתחומי הביולוגיה, כגון הערכת ההשפעה של גורם גנטי על היכולת התחרותית של SPR המדגימה הליך זה יהיו S וסטודנטים לתואר ראשון מהמעבדה שלנו. הפרוטוקול הבא ממחיש את הניתוח של גורם גנטי הנקרא sic, אשר ככל הנראה מקודד חלבון המעורב בתנועתיות הזרע.

התחל בהגדרת 15 עד 20 בקבוקונים לכל בקבוקון. מפזרים קלות את המדיה עם כמה כדורי שמרים פעילים מיובשים. כדי להקל על מיקום ove.

השתמש תמיד במדיה תזונתית טרייה כגון מדיום שמרי קמח תירס. לאחר מכן לכל בקבוקון, הוסיפו שמונה עד 10 נקבות, אך לא יותר, והוסיפו חמישה זכרים. ניתן להשיג זיהוי מין על ידי בדיקה ויזואלית של כמה הבדלים מורפולוגיים.

אחסן את הבקבוקונים בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס והעביר את הבוגרים לבקבוקונים חדשים לפחות כל שלושה עד חמישה ימים. העבירו את המבוגרים כל יומיים לקבלת התוצאה הטובה ביותר. שמור את הביצה המכילה בקבוקונים כדי לקצור את הצאצאים.

מספר הבקבוקונים הנדרשים יהיה תלוי במספר סוגי הזכרים הניסיוניים במחקר ובמספר המשוער של הפרטים הדרושים לכוח סטטיסטי. ארבעה או חמישה ימים לאחר העברת ההורים מהבקבוקון, הגדל את המשטח הזמין להתגלמות בבקבוקון על ידי הכנסת נייר מקופל לתוך המדיום. בדוק את הבקבוקונים לאיתור גולם כהה כאשר הם נראים לעין.

זבובים אלה יופיעו תוך 24 שעות, 11 עד 12 ימים לאחר הצלבת הצלב לראשונה. התחילו לקצור נקבות בתולות וזכרים תמימים מהבקבוקונים הללו. דבר ראשון בבוקר, השליכו זבובים שהופיעו במהלך הלילה.

לאחר מכן פעם או פעמיים במהלך היום במרווחים של ארבע עד שש שעות, אספו זבובים מהבקבוקונים, הרדימו את הזבובים על ידי הכנסת פחמן דו חמצני לבקבוקון. לאחר מכן הקישו על הזבובים למטה וסקסו אותם תחת מיקרוסקופ הסטריאו. הניחו את הזבובים הרצויים בבקבוקונים שונים לפי מין ופנוטיפ ותייגו את הבקבוקונים בהתאם.

אל תעמיס את הבקבוקונים ביותר מ-10 פוטנציאליים. נקבות בתולות קובעות מחזור כהה של 12 עד 12 אור על הזבובים כדי לווסת את זמן החסימה שלהם לטובתך. זמני השיא של החסימה מתרחשים שעה עד שעתיים לאחר עלות השחר הסובייקטיבית, ושעתיים לפני כיבוי האורות.

ישנן שתי גרסאות לניסוי זה. הם מכונים מבחן ההתקפה ומבחן ההגנה. סעיף זה מתאר כיצד לבצע את בדיקת העבירה בבוקר היום הראשון, להגדיר את ההזדווגות הראשונה באמצעות שואב

שואב מורכב מחתיכת צינור המחוברת לקצה פיפטה עם מעקה השומר על זבובים נשאבים בקצה. קידוח הקצה מורחב. כי הזבובים הקימו בקבוקונים שהכילו עשר נקבות בתולות בנות ארבעה או חמישה ימים.

עם 10 זכרים נאיביים, הקימו שניים עד שלושה בקבוקונים כאלה מדי יום במשך חמישה ימים רצופים. עבור כל בקבוקון, אפשרו לזבובים להזדווג במשך שעתיים, ואז השליכו את זכרי הייחוס והעבירו כל נקבה לבקבוקון חדש באמצעות תווית שואב כל בקבוקון V אחד והשאירו את הנקבה בבקבוקון למשך יומיים. ביום השלישי, הגדר את ההזדווגות השנייה לזכרים תמימים מהגנוטיפ השני עבור כל נקבה.

שעתיים לפני רדת החשיכה הסובייקטיבית, השתמש בשואב כדי להעביר את הנקבה לבקבוקון חדש עם זכרי ניסוי בני שלושה, חמישה או שישה ימים מאותו גנוטיפ. סמן את הבקבוקונים עם הגנוטיפ הגברי ותייג את הבקבוקון החדש V שתיים. למחרת בבוקר הוא היום הרביעי.

שעתיים לפני שהזבובים סובייקטיביים, השחר משליך את הזכרים באמצעות השואב. ביום השישי, העבירו כל נקבה לבקבוקון חדש אחר שכותרתו V שלוש. ביום העשירי, השליכו את הנקבות ביום ה-17.

בדוק את בקבוקוני ה-V מהצאצאים. קבע אם הנקבה הייתה בתולה או לא כאשר הזדווגה לדואר הייחוס והאם היא הזדווגה עם דואר הייחוס. באותו יום, בדוק את הצאצאים משני בקבוקוני ה-V על ידי הפלת הזבובים עם פחמן.

מיין אותם לפי צבע עיניים ומין. לאחר מכן רשום את מספר הצאצאים של הזכר הראשון והשני. בניסוי זה, ניתן להקצות באופן חד משמעי רק צאצאים נקבות כפי שצוין על ידי ההתייחסות או זכרי הניסוי.

בניסויים אחרים, ניתן להשתמש בסמנים גנטיים שונים כדי לקבוע גם את האבהות של הצאצאים הזכרים. השליכו את הצאצאים שנבדקו, אך שמרו את שני בקבוקוני ה-V לשנייה. בדיקה ביום 20, רשום את אבהות הצאצאים משני בקבוקוני V בפעם השנייה ובצע את הבדיקה הראשונה של הצאצאים שיצאו משלושת בקבוקוני ה-V.

ואז שלושה ימים לאחר מכן, ביום ה-23, בדוק את הצאצאים שהופיעו ב-V 3. שוב, יש לארגן את ספירת הצאצאים המתועדת כראוי לבדיקה ויזואלית קלה וניתוח יעיל עם חבילה סטטיסטית לכל נקבה והספירות מ-V 2 ו-V 3. כדי לחשב את המספר הכולל של צאצאים שנקבעו על ידי זכר הייחוס וזכר הניסוי, חשב את ציון P 2 עבור כל נקבה כשיעור הצאצאים שנקבעו על ידי זכר הניסוי על פני הצאצאים הן מזכר הניסוי והן מזכר הייחוס.

יש להוציא חלק מהנקבות מהניתוח. ראשית, אלה ללא צאצאים או צאצאים מוגבלים מאוד, נקבות שניות שמתו במהלך ההליך ונקבות שלישיות שהוזרעו בהצלחה רק על ידי אחד משני הזכרים. חפש הבדלים סטטיסטיים בשני ערכי P.

בין סוגי הזכרים הניסיוניים משתמשים במבחנים פרמטריים או לא פרמטריים המבוססים על ההטיה של התפלגות שני הערכים P והתלות בין השונות לפרופורציה הממוצעת. הנתונים בדרך כלל אינם מופצים בדרך כלל. ניתן להחיל את טרנספורמציית סימני הקשת, הידועה גם בשם הטרנספורמציה הזוויתית, על P מקורי שני ערכים לפני מבחן T של תלמיד או מבחן NOVA, או פשוט להשתמש במבחנים לא פרמטריים כגון WIL Coxin שני ניסויי עבירה עם דרוזופילה מלנוגסטר.

זכרי הניסוי נערכו אחד עם ואחר ללא אשכול ESIC פונקציונלי. בסך הכל, 58% עד 83% מהנשים היו אינפורמטיביות. זכרים ללא אשכול ESIC תפקודי הראו ציוני P 2 נמוכים משמעותית בהשוואה לגברים עם אשכול esic שלם.

זה מצביע על כך שאשכול SIC מגביר את היכולת התחרותית של הזרע. לאחר צפייה בסרטון זה, אתם אמורים להבין היטב כיצד לבצע ניסויי הזדווגות כפולה, כך שתוכלו לזהות את ההבדלים ביכולת התחרותית של הזרע בין זכרים מוטנטיים לזכרי ביקורת.