Name: בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-26T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: למד את פרוטוקול בידוד תאי גזע ממקור שומני מLipoaspirates אנושיים באמצעות עיכול אנזימטי עם קולגנאז. שיטה זו מאפשרת קבלת תאים חיים לחקר רפואה רגנרטיבית ותהנדסת רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות ולהודות לאנשי מחקר נוספים אלה שתרמו לפיתוח של הפרוטוקול המתואר ובידודה של ASCs, ביניהם: ד&quot;ר ה &#39;פיטר לורנץ, MD, ד&quot;ר הירושי Muzuno, MD, ד&quot;ר ג&#39;רי הואנג, MD , ד&quot;ר האדם כץ, MD, ד&quot;ר ויליאם פוטרל, MD, ד&quot;ר רונג ג&#39;אנג, DDS, PhD, ד&quot;ר לריסה רודריגז, MD, ד&quot;ר Zeni אלפונסו, PhD, וד&quot;ר ג&#39;ון פרייזר, PhD. התוצאות שהוצגו מומנו בחלקו על ידי מענקי מחקר מהמכון הלאומי לבריאות, כולל NIAMS ומכוני NIDCR.

<ol><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-lineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).</li>
<li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+isolated+fat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolism of isolated fat cells.</a> J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).</li>
<li>Poznanski, W. J., Waheed, I., Human Van, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fat+cell+precursors.+Morphologic+and+metabolic+differentiation+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">fat cell precursors. Morphologic and metabolic differentiation in culture.</a> Lab Invest. 29 (5), 570-576 (1973).</li>
<li>Zuk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+Stem+Cells+in+Tissue+Regeneration%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived Stem Cells in Tissue Regeneration: A Review.</a> ISRN Stem Cells. , in press (2012).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li>
<li>Mitchell, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotype+of+human+adipose-derived+cells%3A+temporal+changes+in+stromal-associated+and+stem+cell-associated+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers.</a> Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16 (1), 91-104 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+freshly+isolated+and+cultured+cells+derived+from+the+fatty+and+fluid+portions+of+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates.</a> J Cell Physiol. 208 (1), 64-76 (2006).</li>
<li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li>
<li>Chung, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD90+%28Thy-1%29+Positive+Selection+Enhances+Osteogenic+Capacity+of+Human+Adipose-Derived+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">CD90 (Thy-1) Positive Selection Enhances Osteogenic Capacity of Human Adipose-Derived Stromal Cells.</a> Tissue Eng Part A. , (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+potential+of+adipose+stem+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Adipogenic potential of adipose stem cell subpopulations.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (3), 663-672 (2011).</li>
<li>Rada, T., Reis, R. L., Gomes, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+stem+cells+subpopulations+isolated+from+human+adipose+tissue+exhibit+different+chondrogenic+and+osteogenic+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Distinct stem cells subpopulations isolated from human adipose tissue exhibit different chondrogenic and osteogenic differentiation potential.</a> Stem Cell Rev. 7 (1), 64-76 (2011).</li>
<li>Heydarkhan-Hagvall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Adipose+Stem+Cells%3A+A+Potential+Cell+Source+for+Cardiovascular+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Human Adipose Stem Cells: A Potential Cell Source for Cardiovascular Tissue Engineering.</a> Cells Tissues Organs. 187 (4), 263-274 (2008).</li>
<li>Jack, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processed+lipoaspirate+cells+for+tissue+engineering+of+the+lower+urinary+tract%3A+implications+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+bladder+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Processed lipoaspirate cells for tissue engineering of the lower urinary tract: implications for the treatment of stress urinary incontinence and bladder reconstruction.</a> J Urol. 174 (5), 2041-2045 (2005).</li>
<li>Banas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hepatic+fate+specification+of+adipose-derived+stem+cells+and+their+therapeutic+potential+for+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Rapid hepatic fate specification of adipose-derived stem cells and their therapeutic potential for liver failure.</a> J Gastroenterol Hepatol. 24 (1), 70-77 (2009).</li>
<li>Schreml, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harvesting+human+adipose+tissue-derived+adult+stem+cells%3A+resection+versus+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Harvesting human adipose tissue-derived adult stem cells: resection versus liposuction.</a> Cytotherapy. 11 (7), 947-957 (2009).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Ahmad, J., Eaves, F. F., Rohrich, R. J. 3rd, Kenkel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+American+Society+for+Aesthetic+Plastic+Surgery+%28ASAPS%29+survey%3A+current+trends+in+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Surg+J%22%5BJournal%5D)">The American Society for Aesthetic Plastic Surgery (ASAPS) survey: current trends in liposuction.</a> Aesthet Surg J. 31 (2), 214-224 (2011).</li>
<li>Tierney, E. P., Kouba, D. J., Hanke, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+tumescent+and+laser-assisted+liposuction%3A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drugs+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Safety of tumescent and laser-assisted liposuction: review of the literature.</a> J Drugs Dermatol. 10 (12), 1363-1369 (2012).</li>
<li>Mojallal, A., Auxenfans, C., Lequeux, C., Braye, F., Damour, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+negative+pressure+when+harvesting+adipose+tissue+on+cell+yield+of+the+stromal-vascular+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater+Eng%22%5BJournal%5D)">Influence of negative pressure when harvesting adipose tissue on cell yield of the stromal-vascular fraction.</a> Biomed Mater Eng. 18 (4-5), 193-197 (2008).</li>
<li>Matsumoto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+preservation+at+various+temperatures+on+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates.</a> Plast Reconstr Surg. 120 (6), 1510-1517 (2007).</li>
<li>Francis, M. P., Sachs, P. C., Elmore, L. W., Holt, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+from+lipoaspirate+blood+and+saline+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Isolating adipose-derived mesenchymal stem cells from lipoaspirate blood and saline fraction.</a> Organogenesis. 6 (1), 11-14 (2010).</li>
<li>Boquest, A. C., Shahdadfar, A., Brinchmann, J. E., Collas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+stromal+stem+cells+from+human+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of stromal stem cells from human adipose tissue.</a> Methods Mol Biol. 325, 35-46 (2006).</li>
<li>Bunnell, B. A., Flaat, M., Gagliardi, C., Patel, B., Ripoll, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+isolation%2C+expansion+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation.</a> Methods. 45 (2), 115-120 (2008).</li>
<li>Dubois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+adipose-derived+stem+cells+from+biopsies+and+liposuction+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of human adipose-derived stem cells from biopsies and liposuction specimens.</a> Methods Mol Biol. 449, 69-79 (2008).</li>
<li>Mosna, F., Sensebe, L., Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells%3A+a+user%27s+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells: a user's guide.</a> Stem Cells Dev. 19 (10), 1449-1470 (2010).</li>
<li>Zachar, V., Rasmussen, J. G., Fink, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+growth+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and growth of adipose tissue-derived stem cells.</a> Methods Mol Biol. 698, 37-49 (2011).</li>
<li>Williams, S. K., McKenney, S., Jarrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+lot+selection+and+purification+for+adipose+tissue+digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion.</a> Cell Transplant. 4 (3), 281-289 (1995).</li>
<li>Wang, H., Van Blitterswijk, C. A., Bertrand-De Haas, M., Schuurman, A. H., Lamme, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+enzymatic+isolation+of+fibroblasts+for+the+creation+of+autologous+skin+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Improved enzymatic isolation of fibroblasts for the creation of autologous skin substitutes.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 40 (8-9), 268-277 (2004).</li>
<li>Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+highly+defined+proteases+for+the+isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells.</a> Regen Med. 3 (5), 705-715 (2008).</li>
<li>Kurita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+centrifugation+on+cells+and+tissues+in+liposuction+aspirates%3A+optimized+centrifugation+for+lipotransfer+and+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of centrifugation on cells and tissues in liposuction aspirates: optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation.</a> Plast Reconstr Surg. 121 (3), 1033-1041 (2008).</li>
<li>Poloni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dedifferentiated+adipocytes+show+similar+properties+to+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dedifferentiated adipocytes show similar properties to bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 30 (5), 965-974 (2012).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+and+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine and tissue banking.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Tallone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+adipose+tissue+contains+several+types+of+multipotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human adipose tissue contains several types of multipotent cells.</a> J Cardiovasc Transl Res. 4 (2), 200-210 (2011).</li>
<li>De Francesco, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD34%2FCD90+ASCs+are+capable+of+growing+as+sphere+clusters%2C+producing+high+levels+of+VEGF+and+forming+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human CD34/CD90 ASCs are capable of growing as sphere clusters, producing high levels of VEGF and forming capillaries.</a> PLoS One. 4 (8), e6537(2009).</li>
<li>Haasters, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+immunocytochemical+characteristics+indicate+the+yield+of+early+progenitors+and+represent+a+quality+control+for+human+mesenchymal+stem+cell+culturing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Morphological and immunocytochemical characteristics indicate the yield of early progenitors and represent a quality control for human mesenchymal stem cell culturing.</a> J Anat. 214 (5), 759-767 (2009).</li>
</ol>

הסופרים של כתב היד הזה הם שיתוף ממציאים בפטנטים שבבעלות העוצרים של אוניברסיטת קליפורניה ומורשה לTherapeutics Cytori.

רקמת שומן לבידודה של ASCs יכולה לבוא בצורות רבות: מחתיכות מוצקות של רקמה המתקבלות באמצעות כריתה או lipoplasty לחתיכות קטנות יותר שהושגו באמצעות שני חילוץ מזרק או lipoplasty בסיוע יניקה (כלומר שאיבת שומן). האם ניתן להשיג יותר תאי SVF (ובכך ASCs) מדגימות שומן resected או להישאף לא ברור מחקרים סותרים הוצגו 16, 17. יתכן כי גם צורה של רקמת שומן היא יותר ממתאים לבידוד של תאים וASCs SVF כל עוד המפעיל הוא בקיא בטכניקת הבידוד שלהם. עם זאת, שאיבת שומן עושה להחזיק יתרון ע...

ב2001, אוכלוסייה משוערת של תאי גזע multipotent מרקמת שומן שתוארה בכתב עת הנדסת רקמות 1. תאים אלה ניתנו תאים שם מעובד Lipoaspirate או PLA בשל גזירתם מרקמות lipoaspirate מעובד שהושגו באמצעות ניתוח קוסמטי. שיטת הבידוד המתוארת במאמר זה הייתה מבוסס על אסטרטגיות האנזימטית קיימות לבידוד של החלק של כלי דם סטרומה (SVF) מרקמת שומן 2. SVF הוגדר כאוכלוסיית עיבוד מינימאלי של תאי דם אדום, fibroblasts, בתאי אנדותל, תאי שריר חלק, pericytes מראש adipocytes שעדיין לדבוק במצע רקמת תרבות 2, 3. Culturing של SVF זה לאורך הזמן מוצע לחסל הרבה של אוכלוסיות תאים מזהמים אלה ולגרום לאוכלוסייה חסיד, fibroblastic. fibroblasts אלה זוהה בספרות ל40 השנים האחרונות כמי שמראשadipocytes. עם זאת, קבוצת המחקר שלנו הוכיחה כי תאים אלה ברשות multipotency mesodermal ועל שמם אוכלוסיית SVF חסיד כתאי PLA. מחקרים מאוחרים יותר על ידי קבוצות מחקר רבות אחרות שהוספתם לפוטנציאל זה, המצביעים על שני endodermal ופוטנציאלי ectodermal (לסקירה ראתה 4). מאז אותה תקופה, תנאים נוספים רבים לתאים אלה הופיעו בספרות. על מנת לספק איזה סוג של קונסנסוס, המונח בתאי גזע שמקורם בשומן או ASCs אומצה בnd כנס IFATS השנתי 2. ככזה, ASC המונח ישמש במאמר זה. הפרוטוקול המתואר במאמר זה הוא הליך פשוט יחסית שדורש ציוד מעבדה סטנדרטי ומשתמש בחומרים כימיים פשוטים כגון שנאגרו מלוח phospho ריאגנטים מדיה תרבות תקן הרקמות וcollagenase. זה יכול לייצר מספר גדול של ASCs בהתאם לכמות של החל שומן לרקמות נפח וג הבאזמן ulture. עם זאת, העיבוד של כמות כה גדולה של רקמת שומן יכול להציג כמה בעיות פיזיות שניתן למתן במידת שימוש בפרוטוקול זה. יתר על כן, פרוטוקול זה דורש מתקני סטרילי רקמת תרבות וברדסי בטיחות ביולוגיים שאושרו, ובכך מחייב את השימוש במתקן בתרבית רקמה שאושר. דרישה זו יכולה גם להקטין את התועלת של אוכלוסיית ASC ביישומים קליניים, אלא אם כן הם מבודדים בייצור נאות מתקנים מאושרים (GMP) מיועדים לבידוד וההרחבה של חומרים לשימוש קליני. כחלופה, מערכות אוטומטיות שיכול לבודד ASCs במערכת סגורה בחדר הניתוח היינו למנוע בעיה מפתח זה ולאפשר לשימוש המיידי של ASCs ללא כל צורך בהרחבה לאחר מכן במבחנה. נכון להיום, יש שש מערכות אוטומטיות כי הם זמינים מסחריים עבור הבידוד של תאים מהרקמה אנושית. מערכות אלו יכולות לעשות את זה אפשרי לבודדמספר משמעותי של ASCs מכמויות גדולות של רקמת שומן בעקבות הקציר שלה באופן מיידי. ASCs אלה אז יכול להיות מחדש למטופל עבור מגוון רחב של מטרות משובי ללא המטופל שתצטרכנה לעזוב את חדר הניתוח. בנוסף לפרוטוקול זה מתאר את הבידוד הידני של ASCs, פרוטוקול לבידוד אוטומטי של ASCs באמצעות מערכת Celution ניתן גם במאמר נלווה.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco&#8217; s שינוי של נשר&#8217; s Medium)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>10-013-CV</td><td>עם 4.5 גרם/מ"ל גלוקוז, L-גלוטמין, סודיום פירובט</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין,</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td>10,000 יחב"ל/מ"ל פניצילין/10,000 &#956; גרם/מ"ל סטרפטומיצין</td></tr><tr><td>אמפוטריצין B</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-003-CF</td><td>250 & #956; גר'/מ"ל אמפוטריצין B</td></tr><tr><td>10X PBS (מי מלח עם חוצץ פוספו)Mediatech</td> <td>Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td>ללא סידן, ללא מגנזיום</td></tr><tr><td>טריפסין/EDTA</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>20-031-CV</td><td>0.25% טריפסין/2.21 מ"מ EDTA</td></tr><tr><td>קולגנאז מסוג IA (מ-Clostridium histolyticum)</td>תכשיר גולמי <td>Sigma</td><td>C2674</td><td>; 125 יחידות עיכול קולגן/מ"ג מוצק</td></tr><tr><td>FBS (סרום בקר עוברי) מומת</td><td>בחום Gemini Bioproducts</td><td>100106</td><td>ממקור USDA, מומת בחום </td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפטות סרולוגיות</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>25 מ"ל פיפטות סרולוגיות</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-106</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגות פוליפרופילן</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-106</td><td></td></tr><tr><td>כלי תרבית רקמות 100 מ"מ</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>150 מ"מ כלי תרבית רקמות</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>500 מ"ל יחידות סינון Stericup</td><td>Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>קרום PES, 0.22 & #956; m נקבוביות</td></tr><tr><td>מסנני תאים</td><td>FisherBrand</td><td>22-363-549</td><td>100 & #956; m ניילון רשת</td></tr><tr><td>דקסמתזון - מסיס במים</td><td>סיגמא</td><td>D-2915</td><td></td></tr><tr><td>L-חומצה אסקורבית 2 פוספט</td><td>סיגמא</td><td>A-8960</td><td></td></tr><tr><td>&#946;-גליצרופוספט מלח דיסודיום </td><td>סיגמא</td><td>G-9422</td><td>הידוע גם בשם אינסולין גליצרופוספט</td></tr><tr><td></td><td>סיגמא</td><td>I-6634</td><td>עשוי מלבלב בקר</td></tr><tr><td>אינדומתצין</td><td>סיגמא</td><td>I-7378</td><td></td></tr><tr><td>apo-transferrin</td><td>Sigma</td><td>T-4382</td><td></td></tr><tr><td>TGF&#946; 1</td><td>מו"פ D Systems</td><td>240-B-002</td><td>שמן אנושי רקומביננטי</td></tr><tr><td>אדום O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Alcian Blue</td><td>Sigma</td><td>A-5268</td><td></td></tr><tr><td>כסף חנקתי</td><td>Sigma</td><td>S-0319</td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>30525-89-4</td><td>מסופק כמלאי</td></tr> <tr>של 16%<td colspan="4">[כותרת]</td></tr><tr><td colspan="4" ><חזק>דרוש ציוד</חזק> </td></tr><tr><td>Class II A/B מכסה מנוע בטיחות ביולוגית</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>להבטיח שלמכסה המנוע יש קווי ואקום לשאיפה</td></tr><tr><td>צנטריפוגה ספסלית</td><td>Hermle Labnet</td><td>Z383</td><td>רוטור מתנדנד לצינורות 50 מ"ל נדרשים, מסוגל לאמבט מים 1200xg</td></tr><tr><td> </td><td>Fisher Scientific Isotemp</td><td>S52602Q</td><td>קיבולת 5-10 ליטר, מסוגל 37C</td></tr><tr><td>עזרי פיפטה אוטומטיים</td><td>Drummond Pipette Aid XL</td><td>4-000-105</td><td></td></tr><tr><td>CO2 אינקובטור</td><td>Thermo Scientific</td><td>Forma 310</td><td>חום ישיר או מעטפת מים</td></tr></tbody></table>

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מlipoaspirates האדם

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

ב2001, חוקרים באוניברסיטת קליפורניה, לוס אנג&#39;לס, תאר את בידודה של אוכלוסייה חדשה של תאי גזע בוגרים מרקמת שומן liposuctioned שהם בתחילה כינו את תאי Lipoaspirate מעובד או תאי PLA. מאז, תאי גזע אלה כבר לשנות את שמם כתאי גזע שמקורם בשומן או ASCs והלכו על מנת להפוך לאחת מאוכלוסיות תאי גזע בוגרים הפופולריות ביותר בתחומי מחקר בתאי גזע ורפואה רגנרטיבית. אלפי מאמרי החברה מתארים את השימוש של ASCs במגוון רחב של מודלים של בעלי חיים משובי, כוללים התחדשות עצם, תיקון עצב היקפי והנדסת לב וכלי דם. מאמרים אחרונים החלו לתאר את מספר עצום של שימושים לASCs במרפאת. הפרוטוקול שמוצג במאמר זה מתאר את ההליך הבסיסי לידני ואנזימי בידוד ASCs מכמויות גדולות של lipoaspirates מתקבל מהליכים קוסמטיים. פרוטוקול זה בקלות וניתן לשנותם למעלה או למטה כדי accommodאכלתי את עוצמת הקול של lipoaspirate ויכול להיות מותאם לבודד ASCs מרקמת שומן שהושג באמצעות abdominoplasties ונהלים דומים אחרים.

המתווה הפרוטוקול לעיל מתארת ​​שיטה ידנית, אנזימטיים לבידודה של SVF ממדגם lipoaspirate נפח גדול. בתוך SVF זה הן אוכלוסיות תאים רבות, כוללים ASC. מחקרים רבים מציעים כי culturing SVF זה בתנאי תרבות תקן רקמות יבחר עבור אוכלוסיית פיברובלסטים חסיד עשויה להיות מורכבים בעיקר מסוג ASC. עולה בקנה אחד עם זה, שהראינו, באמצעות cytometry זרימה וimmunofluorescence, שכדורי SVF התרבותיים הפכו למעשה ללא סוגים העיקריים מזהמים תאים, כלומר RBCs, תאי שריר חלק ותאים של שושלת אנדותל 1. אוכלוסי...

ב2001, חוקרים באוניברסיטת UCLA תאר את בידודה של אוכלוסייה של תאי גזע בוגרים, המכונה תאי גזע שמקורם בשומן או ASCs, מרקמת שומן. מאמר זה מתאר את הבידוד של ASCs מlipoaspirates באמצעות פרוטוקול עיכול ידני, האנזימטית באמצעות collagenase.

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד תאי גזע מהרקמה השומנית שהושגה בצורה של שאיבת שומן (lipo aspirate). דבר זה מושג תחילה על ידי הסרת התמיסה הכירורגית ושטיפת השאיבה מתאי דם אדומים מזוהמים. השלב השני הוא שחרור תאי הגזע באמצעות עיכול אנזימטי של השאיבה השוטפה באמצעות קולגנאז.בשלב הבא, התאים ששוחררו בצורת פרקציה וסקולרית סטרומלית (SVF) נאספים באמצעות סרטיפוגציה. השלב הסופי הוא הסרת הנוזל העליון (supernatant) וזריעת תאי ה-SVF לצורך סלקציה וטיפוח של תאי ה-ASCs הנצמדים. לבסוף, תתבצע אינדוקציה in vitro של תאי ה-ASCs המטופחים לכיוון רקמת עצם, שומן וסחוס.ניתן להשתמש בשושלות תאים כדי לאשר את נוכחותם של תאים אלו בתרבית, בנוסף לאישור הפוטנציאל הרב-קוואליטטיבי (multi potentiality) שלהם. בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקשו בשל הלוגיסטיקה הכרוכה בעבודה עם נפחים גדולים של lipo aspirin לפני קצירת התאים. הכינו תמיסת collagenase Type one a סטרילית ומדיום בקרה סטרילי.אספו את השאיבה השומנית (lippo aspirate) למכל שאיבה. העבירו בזהירות את השאיבה השומנית לבי커 זכוכית סטרילי בנפח של ליטר אחד. כאשר השכבות של השאיבה השומנית נפרדו באמצעות כבידה, שאבו את שכבת השמן העליונה, אם קיימת.כמו כן, הסר את השכבה התחתונה. העरक את נפח שכבת הרקמה השומנית שהתקבלה. הוסף נפח שווה של 1X PBS סטרילי וערבב באמצעות הפיפטה ששימשה לשאיבה.לאחר שהשכבות השתיים התיישבו, שאבו את הנוזל העליון באמצעות פיפטה סרולוגית של 10 milliliter. המשיכו לשטוף את פראקציית הרקמה השומנית ב-PBS עד לשכבה השומנית יופיע גוון צהוב-זהוב. שאבו את הנוזל העליון פעם אחרונה, והשאירו את פראקציית הרקמה השומנית.בתוך הרמקול הזכוכית. יש להמתין חמש דקות להשקעת שכבות השאיבה של השומן (lippo aspirate) לאחר השטיפה האחרונה ולפני השאיבה הסופית. ביחידת סינון, הכין תמיסת collagenase one סטרילית.הוסיפו נפח השווה לנפח של פראקציית הרקמה השומנית ובצעו סינון סטרילי. לאחר מכן, שפכו בזהירות את פראקציית הרקמה השומנית השטופה לתוך תמיסת הקולגנאז וסגרו את הבקבוק היטב. דגרו את תערובת הקולגנאז והרקמה השומנית באמבט מים בטמפרטורה של 37 °C למשך 30 דקות, תוך ערבוב עדין כל חמש עד 10 דקות. העריכו את שכבת הרקמה השומנית כדי לבדוק אם היא נראית חלקה יותר ככל שהעיכול מתקדם, ובמידת הצורך, הגדילו את זמן התגובה כדי להמיס שאריות של חלקי שומן מוצקים.סטריליזציה של יחידת הסינון המכילה את תערובת הרקמה השומנית שעברה עיכול בקולגנאז באמצעות 70% ethanol והחזרתה לקללת הבטיחות הביולוגית. כעת, העבירו באמצעות פיפט מנות של 25 milliliter של התוצר המכיל את הפракציה הסטרומלית-ווסקולרית למבחנות צנטריפוגה סטריליות של 50 milliliter. הוסיפו 25 milliliters של מדיום בקרה לכל מבחנה והדגירו בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות כדי לנטרל את הקולגנאז.לאחר מכן, סנטריפוגו למשך 10 דקות ב-1,200 ×g כדי לאסוף את הפרקציה הווסקולרית הסטרומלית כמשקע (pellet) בתוך קבינת הבטיחות הביולוגית. שאבו את הנוזל העליון (supernatant) מכל מבחנה. ודאו ששכבת השמן העליונה וכל האדיפוציטים הצפים נשאבים יחד עם נוזל זה.בשלב הבא, איחדו את משקעי ה-SVF לשפופרת צנטריפוגה אחת באמצעות 30 milliliters של מצע מותנה, וחלקו באופן שווה לשתי שפופרות צנטריפוגה חדשות של 50 milliliters. לאחר הצנטריפוגה, שאבו את העל-נוזלים משני המשקעים. במידה ומבוקשת ליזיס של RBC, ניתן לתלות כל אחד משני המשקעים הללו ב-10 milliliters של בופר לליזיס של RBC, ולהדגיר בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר הצנטריפוגה, שאבו את העל-נוזלים כדי לקבל משקעים של ה-stromal vascular fraction.העבירו את שני המשקעים הללו לשפופרת צנטריפוגה חדשה אחת. באמצעות 5 עד 10 מיליליטר של מדיום בקרה, ניתן לסנן חלקיקי רקמה גדולים באמצעות מסנן רשת של 100 מיקרון המונח על גבי שפופרת צנטריפוגה חדשה של 50 מיליליטר. כעת, חלקו את הפракציה המסוננת המכילה את תאי הגזע של הרקמה השומנית לצלחות תרבית רקמה.לאחר מכן, הוסיפו לכל צלחת נפח מתאים של מדיום תרבית ביקורת. תרבתו את התאים למשך שלושה עד ארבעה ימים ללא החלפת מדיום; שאבו את מדיום התרבית ושטפו את התאים פעם אחת ב-PBS סטרילי כדי להסיר תאי דם אדומים מזוהמים, לאחר מכן מלאו מחדש את המדיום והמשיכו בתרבית כאשר משתמשים בשיטה אנזימטית ידנית זו לבידוד של פראקציית סטרומה וסקולרית (SVF) מדגימת ליפואספירציה בנפח גדול.אוכלוסיית ה-A SC המגודלת המתקבלת היא הומוגנית יחסית במראה, והשימוש בתאים דמויי פיברובלאסטים הוא האמצעי הנפוץ ביותר לתיקוף. השראה in vitro של אוכלוסיית ה-A SC באמצעות תנאי תרבית מוגדרים מובילה להבחנתם לשושלות מזודרמיות, אקטודרמיות ואנדודרמיות. פוטנציאל של שלושת שכבות הנבט in vitro הוביל לשימוש ב-ASCs במגוון רחב של מערכות מודל רגנרטיביות.גבייה של התמיינות לתאים אדיפוגניים, אוסטאוגניים וכונדרוגניים מספיקה בדרך כלל כדי לזהות את ה-ASC ולאשש את רב-הפוטנציאליות (multipotency) שלו. בנוסף, ניתן להמיינו ASCs גם לתאי שושלת מיוגנית שלדית ושושלת מיוגנית חלקה, לתאים משושלת אקטודרמלית או לשושלת תאי כבד אנדודרמליים. לאחר צפייה בסרטון זה, תבואו לידי הבנה טובה של אופן בידוד של פракציה וסקולרית סטרומלית מ-Lipos.לצרכי Turing, זהו רכיב SC.

manual-isolation-adipose-derived-stem-cells-from-human

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של שומן הנגזר מתאי סטרומה lipoaspirate ויצירת 4 calvarial פגם קריטי בגודל מ"מ להעריך התחדשות שלד.

תיקון של דגם פגם Calvarial הקריטי בגודל תאי שומן באמצעות נגזרת סטרומה נקטפו מן Lipoaspirate

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד וטיפוח תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) המסומנים באופן פלואורסצנטי מרקמת השומן של קשת פריאורטית. לאחר הבידוד, NCADSCs מזוהים, ממוינים באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות, ולאחר מכן תרבית על צלחת, קידום התפשטות תאים.

בידוד תאי גזע שמקורם בשומן מרקמת שומן פריאורטית מורין

ניתן להגדיר את הטרוגניות השעתוק בתוך תאי סטרומה שמקורם בשומן אנושי ברמת התא הבודד באמצעות סמני פני התא וגנים אוסטאוגניים.  אנו מתארים פרוטוקול המשתמש בזרימה ציטומטרית לבידוד תת-אוכלוסיות תאים עם פוטנציאל אוסטאוגני מוגבר, אשר עשוי לשמש לשיפור שחזור השלד הגולגולתי.

בידוד וההעשרה של אדם שומן המופק מתאי סטרומה לOsteogenesis משופר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשיג סטרומה השבר בכלי הדם של רקמת שומן באמצעות סדרה של תהליכים מכניים, הכוללים תחליב centrifugations מרובים.

Micronization מכני של Lipoaspirates לטיפול רגנרטיבית

גילוי מדויק של שיטות ופרוטוקולים הוא חיוני לקליטה בקנה מידה גדול של טיפולים בתאי גזע. כאן אנו מציגים פרוטוקול לבידוד תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן, המשמשים להזרקה תוך-תאית אחת כטיפול בבעיות זיקפה (ED) בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית (RP).

בידוד של תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן לטיפול בבעיות זיקפה בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית

פרוטוקול זה מספק שיטה נטולת אנזימים לבידוד תאי גזע mesenchymal מ מתיחת בטן ודגימות ליפוף באמצעות שיטת החקור. העדר אנזימים קשים או צעדים צנטריפוגה מספק תאי גזע רלוונטיים קלינית שניתן להשתמש בהם למחקרים בתוך מבחנה או להעביר חזרה למרפאה.

שיטה נטולת אנזימים לבידוד והתרחבות של אדיפוז האנושית-תאי גזע נגזרים

. בעזרת מכשיר מערכת סגור שיטה חדשה זו מאפשרת בידור של אשכולות תת-מילימטר של רקמת האדיפוז המתאימים להשתלה vivo, בתרבות החוץ-גופית ובבידוד תאים נוסף ואפיון.

מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מתודולוגיה משופרת לבידוד ADSC וכתוצאה מכך תפוקה תאית אדירה עם רווח בזמן בהשוואה לספרות. מחקר זה מספק גם שיטה פשוטה להשגת מספר גדול יחסית של תאים בני קיימא לאחר שימור בהקפאה לטווח ארוך.

טכניקה לקבלת תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן ואפיון שבר כלי דם סטרומלי בשימור בהקפאה ארוכת טווח

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה לבידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים (MSC) שמקורם ברקמת שומן מחולדות Sprague Dawley.

בידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת שומן של חולדות Sprague Dawley

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של &gt;90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.

בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר

למד את פרוטוקול בידוד תאי גזע ממקור שומני מLipoaspirates אנושיים באמצעות עיכול אנזימטי עם קולגנאז. שיטה זו מאפשרת קבלת תאים חיים לחקר רפואה רגנרטיבית ותהנדסת רקמות.

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

גלה סרטונים נוספים