רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

המטרה הכללית של הליך זה היא ליצור היפרדות רשתית ניסיונית עם גובה היפרדות עקבי ובר-שחזור ללא דימום סוב-רטינלי (תת-רשתי). הדבר מושג תחילה על ידי חיתוך הקונג'נקטיבה הטמפורלית בלימבו האחורי כדי להפריד את הקונג'נקטיבה מהסקלרה. בשלב השני, נעשה שימוש בקצה של מחט במידה 30 gauge כדי לבצע חתך סקלרלי עם סגירה עצמית ונקב בקרנית.

לאחר מכן, מזריקים sodium urinate לחלל התת-רשתית כדי להפריד את הרשתית הנוירוסנסורית (neurosensory retina) מאפיתל הפיגמנט של הרשתית שמתחתיה. בשלב הסופי, מניחים דבק cyanoacrylate על הפצע בסקלרה והקונג'נקטיבה מוחזרת למקומה המקורי, כדי להפחית את הסיכון לדליפת sodium hall urinate. לבסוף, בוחנים את קרקעית העין באמצעות זכוכית כיסוי כדי לאשר את יצירת התנתקות רשתית מסוג bolus ללא דימום תת-רשתי.

שיטות קיימות להפחתת היפרדות רשתית במכרסמים עלולות להוביל לשונות בגובה ובמידה של הישרדות ההיפרדות, דבר הגורם למדידה של שיעורי מוות תאיים שאינם עקביים. באמצעות טכניקה זו, ניתן ליצור היפרדות רשתית בועית (bullous) ועמידה באופן הניתן לשחזור, עם סיכון מופחת לדימומים סוב-רשתיים, מה שמאפשר מודל מהימן של היפרדות רשתית במכרסמים. ביצוע היפרדות רשתית ניסויית במכרסמים הוא פשוט יחסית, בעל מסלול זמן סביר, ודומה למדי למחלה בבני אדם.

לכן, זהו מודל מצוין לחקר מנגנוני מוות של תאי פטורצפטור (קולטני אור) ולטיפולים למניעת אובדן ראייה. בהפרעות של דגנרציה רשתית, שבהן ידוע כי מוות של תאי פטורצפטור משתנה ברשתית מנותקת, ישנו יתרון ביצירת ניתוק הדירות ללא דימום סוב-רטינלי (מתחת לרשתית). זאת מכיוון שמשך זמן ממושך יותר של ניתוק הרשתית או התרחשות של דימום סוב-רטינלי עלולים להשפיע על מוות של תאי פטורצפטור.

לאחר הרדמת עכבר בן שמונה שבועות, גזרו את שפמיריו של בעל החיים, ולאחר מכן הרחיבו את האישון באמצעות תמיסה המכילה 5% phenyl rine ו-0.5% tropic תחת מיקרוסקופ כירורגי. גזרו את הריסים של בעל החיים והנחילו הרדמה מקומית, תמיסה עינית של 0.5% propane hydrochloride. הניחו את העכבר במצב צדי כאשר האף פונה לעבר המנתח, ולאחר מכן בצעו חתך בלחמית הטמפורלית בלימבו האחורי, תוך הפרדת הלחמית מהסקלרה באמצעות פינצטה.

אחזו בלוחית העין (conjunctiva) באזור הלימבוס כדי לשלוט בעין. לאחר מכן, החזיקו מחט בכיליבר 30 כאשר חוד השפיץ פונה כלפי מעלה. השתמשו בקצה המחט כדי ליצור מנהרה דרך הלובן (sclera), תוך חדירה מהלובן אל הכורואיד (choroid) מבלי לחדור לרשתית.

בשלב הבא, החזיקו את המחט בכיליבר 30 במקביל לקשתית, ונקבו את הקרנית כדי להפחית את הלחץ התוך-עיני. כעת, כשהחלק האלכסוני של המחט פונה כלפי מטה, הכניסו מחט בכיליבר 33 המחוברת למזרק Hamilton של 10 µL אל החלל התת-רשתי, והזריקו 3.5 µL של sodium urinate.

פעולה זו תגרום להיפרדה של כ-50% מהרשתית הנוירוסנסורית (neurosensory retina) מאפיתל הפיגמנט הרטינלי שמתחתיה. באמצעות פינצטה, דחפו את הקרנית מסביב לנקב הקרנית כדי לאפשר להומור העיני (aqueous humor) לזרום החוצה מהנקב, ולאחר מכן השתמשו במקל סלולוז כירורגי כדי לוודא שאין דליפה מפצע הלובן (sclera), במטרה להפחית את הסיכון לדליפת נתרן אורינאט (sodium urinate). מרחו דבק ציאנואקרילט על פצע הלובן ולאחר מכן החזירו את הלובן (conjunctiva) למקומו המקורי.

השתמשו בזכוכית כיסוי כדי לבחון את קרקית העין ולאשר את יצירת התנתקות רשתית מסוג bolus ללא דימום סוב-רטינלי. לבסוף, מרחו משחה אנטיביוטית על העין כדי להפחית את הסיכון לזיהום. השאירו את העכבר על פד חימום כדי למנוע ירידה בטמפרטורת הגוף.

בעקבות לחץ דם נמוך. החזירו את החיה לכלוב לאחר התעוררותה מההרדמה. כדי להעריך את התמדת ההיפרדות הרשתית שנוצרה באמצעות פרוטוקול זה, בוצעו חתכי קריו (cryo sections) ביום השלישי, השביעי וה-14 לאחר השראת ההיפרדות.

עבור כל נקודת זמן נעשה שימוש בשישה עיניים, ובוצעה צביעה ב-hematin and eosin כדי להדמיא את החתכים, אשר כל אחד מהם הראה בולוס של היפרדות רשתית המתקרבת לעדשה.

באף אחת מהעיניים לא נצפו סימנים של זיהום או פגיעה בעדשה. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע ניתוח זה בכחמש דקות. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לבצע כל שלב בעדינות כדי למנוע דליפת נתרן, דימום סוב-רטינלי (תת-רשתיתי) משמעותי או פגיעה בעדשה, אשר כולם עלולים להשפיע על מוות של תאי קולטנים ברשתית המופרדת. לאחר צפייה בסרטון זה, תגבירו את הבנתכם לגבי האופן שבו ניתן ליצור הפרדה רשתית ניסויית במכרסמים עם גובה הפרדה עקבי ובר-שחזור ללא דימום סוב-רטינלי.