Name: בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-25T21:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: למדו שיטת MRI פלואורין-19 למעקב סלולרי in vivo בדגמי עכברים. הפרוטוקול מאפשר תיוג תאים ex vivo, כימות התוכן הפלואוריני וניתוח התמונות לזיהוי מיקום ומספר התאים לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות נדין Henn וארנד Heerschap לסיוע רב ערך שלהם. עבודה זו נתמכה על ידי המכון ההולנדי לרפואת רגנרטיבית (NIRM, FES0908), ENCITE האיחוד האירופי FP7 התכנית (HEALTH-F5-2,008-201,842) וTargetBraIn (HEALTH-F2-2012-279,017), מענק מקרן פולקסווגן ( I/83 443), ארגון הולנד למחקר מדעי (Veni 700.10.409 וVidi 917.76.363), ERC (מתקדם גרנט 269,019), ומרכז Radboud אוניברסיטת ניימיכן הרפואי (AGIKO-2008-2-4).

<ol><li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+cellular+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Imaging of cellular therapies.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 62, 1080-1093 (2010).</li>
<li>de Vries, I. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+tracking+of+dendritic+cells+in+melanoma+patients+for+monitoring+of+cellular+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy.</a> Nat. Biotechnol. 23, 1407-1413 (2005).</li>
<li>Srinivas, M., Heerschap, A., Ahrens, E. T., Figdor, C. G., de Vries, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+for+quantitative+in+vivo+cell+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">MRI for quantitative in vivo cell tracking.</a> Trends Biotechnol. 28, 363-370 (2010).</li>
<li>Ruiz-Cabello, J., Barnett, B. P., Bottomley, P. A., Bulte, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorine+%2819F%29+MRS+and+MRI+in+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Fluorine (19F) MRS and MRI in biomedicine.</a> NMR Biomed. 24, 114-129 (2011).</li>
<li>Stoll, G., Basse-Lusebrink, T., Weise, G., Jakob, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+inflammation+using+19F-magnetic+resonance+imaging+and+perfluorocarbons%5BTitle%5D)+AND+%22Wires+Nanomed.+Nanobiol%22%5BJournal%5D)">Visualization of inflammation using 19F-magnetic resonance imaging and perfluorocarbons.</a> Wires Nanomed. Nanobiol. 4, 438-447 (2012).</li>
<li>Srinivas, M., Boehm-Sturm, P., Figdor, C. G., de Vries, I. J., Hoehn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+cells+for+in+vivo+tracking+using+%2819%29F%5BTitle%5D)+AND+%22MRI.+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Labeling cells for in vivo tracking using (19)F.</a> MRI. Biomaterials. 33, 8830-8840 (2012).</li>
<li>Ahrens, E. T., Flores, R., Xu, H., Morel, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+platform+for+tracking+immunotherapeutic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging platform for tracking immunotherapeutic cells.</a> Nat. Biotechnol. 23, 983-987 (2005).</li>
<li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Customizable%2C+multi-functional+fluorocarbon+nanoparticles+for+quantitative+in+vivo+imaging+using+19F+MRI+and+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Customizable, multi-functional fluorocarbon nanoparticles for quantitative in vivo imaging using 19F MRI and optical imaging.</a> Biomaterials. 31, 7070-7077 (2010).</li>
<li>Boehm-Sturm, P., Mengler, L., Wecker, S., Hoehn, M., Kallur, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+human+neural+stem+cells+with+19F+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of human neural stem cells with 19F magnetic resonance imaging.</a> PLoS One. 6, e29040(2011).</li>
<li>Srinivas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cytometry+of+antigen-specific+t+cells+using+%2819%29F%5BTitle%5D)+AND+%22MRI.+Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo cytometry of antigen-specific t cells using (19)F.</a> MRI. Magn. Reson. Med. , (2009).</li>
<li>Srinivas, M., Morel, P. A., Ernst, L. A., Laidlaw, D. H., Ahrens, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorine-19+MRI+for+visualization+and+quantification+of+cell+migration+in+a+diabetes+model%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Fluorine-19 MRI for visualization and quantification of cell migration in a diabetes model.</a> Magn. Reson. Med. 58, 725-734 (2007).</li>
<li>Mangala Srinivas, E. T. A. Cellular labeling and quantification for nuclear magnetic resonance techniques. US patent. , 11787521 (2007).</li>
<li>Boehm-Sturm, P., Pracht, E. D., Aswendt, M., Henn, N., Hoehn, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoehm-Sturm%2C+P+%22Proceedings+of+the+International+Society+for+Magnetic+Resonance+in+Medicine%22">Proceedings of the International Society for Magnetic Resonance in Medicine</a>. , Melbourne, Australia. (2012).</li>
<li>Insko, E. K., Bolinger, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+Radiofrequency+Field%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Magn.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Mapping of the Radiofrequency Field.</a> J. Magn. Res. A. 103, 82-85 (1993).</li>
<li>Haacke, E. M., Brown, R. W., Thompson, M. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHaacke%2C+EM+%22Magnetic+resonance+imaging%3A+physical+principles+and+sequence+design%22">Magnetic resonance imaging: physical principles and sequence design</a>. , Wiley. (1999).</li>
<li>Scheffler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pictorial+description+of+steady-states+in+rapid+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Concepts+Magn.+Res%22%5BJournal%5D)">A pictorial description of steady-states in rapid magnetic resonance imaging.</a> Concepts Magn. Res. 11, 291-304 (1999).</li>
<li>Firbank, M. J., Coulthard, A., Harrison, R. M., Williams, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+methods+for+measuring+the+signal+to+noise+ratio+on+MR+images%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">A comparison of two methods for measuring the signal to noise ratio on MR images.</a> Phys. Med. Biol. 44, 261-264 (1999).</li>
<li>de Chickera, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+dendritic+cells+with+SPIO+has+implications+for+their+subsequent+in+vivo+migration+as+assessed+with+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Labelling dendritic cells with SPIO has implications for their subsequent in vivo migration as assessed with cellular MRI.</a> Contrast Media Mol. Imaging. 6, 314-327 (2011).</li>
</ol>

יש המחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

הפרוטוקול המתואר כאן מתאר את הנוהל הכללי לin vivo 19 מעקב תא F-MRI. למרות שיטת שיתוף דגירה שתוארה, ישנם מספר פרוטוקולים שונים לתיוג תאים עם סוכן F 19. עם זאת, שיתוף הדגירה משמשת לרוב ויכולה להיות מותאם לדוגמא עוד יותר על ידי תוספת של סוכני transfection 6. פרוטוקול תיוג תא בפועל יהיה תלוי בסוג התא. רק צעדי תיוג מפתח מתוארים בפרוטוקול כאן. באופן כללי, את התווית מוכנה והוסיפה לתאים לזמן שנבחר נע בין כמה שעות לכמה ימים. לבסוף, התאים י...

במעקב תא vivo הוא חיוני לאופטימיזציה והניטור של תרופות תאיות 1. בשל האופי פולשני שלה, הדמיה מציעה הזדמנויות מצוינות כדי לפקח על תאים בגוף חי. הדמיית תהודה מגנטית (MRI) אינה תלויה בקרינה מייננת ומאפשרת הדמיה ברזולוציה מעולה ולעומת זאת רקמות רכות פנימיות. מעקב סלולרי המבוסס על MRI כבר בשימוש קליני לעקוב תאי דנדריטים בחולים מלנומה 2. MRI הקליני הקונבנציונלי מתבצע בגרעין H 1, הנמצא במים ניידים ברקמות. כמו כן ניתן לבצע בדיקת MRI על גרעינים פעילים אחרים, כגון 13 C, נ 19 ו23 Na. עם זאת, רק 19 F-MRI כבר מיושם בהצלחה בvivo מעקב תא כפי שהוא מציע את הרגישות הגבוהה ביותר, לאחר ה &#39;1 העדר בדיקת MRI לגילוי אנדוגני נ 19 ברקמות מאפשר סלקטיביות אות גבוהה עבורזיהוי של סוכנים בניגוד 19 F אקסוגניים ומאפשר כימות של ריכוז פלואור ישירות מנתוני התמונה. לדיון מפורט ביום 19 F-MRI, ראה 3-5. נושא מרכזי עם 19 F-MRI הוא הצורך לפתח ולייעל את תוויות תא 19 F מתאימים, אם כי כמה תוויות פותחו, עם מגמה של סוכני multimodal 6. הפרוטוקול שאנו מתארים כאן מבוסס על מחקרים על ידי הקבוצות שלנו 7-9, כולל המאמרים הראשונים שתיארו בvivo כמותיים 19 סלולריים מבוסס MRI F מעקב 10,11. הנוהל הכללי של מעקב סלולרי באמצעות 19 F-MRI מסוכם באיור 1. אנו מתארים פרוטוקול כללי לתיוג והדמיה של תאים דנדריטים (DC) באמצעות סוכן לעומת perfluorocarbon מחוייט 8. פרוטוקול ההדמיה הוא בדרך כלל ישים לסוגי תאים שונים, מדבקות ומודלים של בעלי חיים.מודל סוג התא ושל בעלי החיים שתואר כאן יש לקחת רק כדוגמא, ובכך אנחנו לא מספקים פרטים על בידוד התא ותיוג, אלא להתמקד בפרוטוקול ההדמיה. שינויים יהיו הכרחיים עבור כל תווית, סוג התא, מודל חיה, והתקנת הדמיה, וניתן למצוא את אלה בספרות או שצריכים להיות מותאם על ידי החוקרים. כמה שינויים נפוצים כלולים בדיון.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><חזק>ריאגנטים</חזקים></td></tr><tr><td>PBS</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>MFCD00131855</td><td></td></tr><tr><td>TFA</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>76-05-1</td><td></td></tr><tr><td>קטמין (קטבט)</td><td>פייזר</td><td>778-551</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין (רומפון)</td><td>באייר</td><td>QN05 cm92</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים</td> <td>Ophtosan </td><td>Produlab Pharma</td><td>2702</td></tr><tr><td colspan="4" ><חזק>שם החומר</חזק> </td></tr><tr><td>סורק MRI</td><td>Bruker Biospec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר NMR</td><td>Bruker Biospec</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

בf-mri 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F-MRI מאפשר מעקב תא כמותית ללא השימוש בקרינה מייננת. זוהי טכניקה לא פולשנית שיכול להיות מיושמת על בני אדם. כאן אנו מתארים פרוטוקול כללי לתיוג תא, הדמיה, ועיבוד תמונה. הטכניקה היא ישימה לסוגים שונים של תאים ומודלים של בעלי חיים, למרות שכאן אנחנו מתמקדים במודל של עכברים אופייני למעקב אחר תאי חיסון עכבריים. הנושאים החשובים ביותר לתיוג תא מתוארים, שהינם רלוונטיים לכל הדגמים. כמו כן, פרמטרים הדמיה מפתח מפורטים, אם כי הפרטים משתנים בהתאם למערכת ה-MRI וההתקנה בודדת. לבסוף, אנו כוללים פרוטוקול עיבוד תמונה לכימות. וריאציות לזה, ובחלקים אחרים של הפרוטוקול, נבחנים בסעיף הדיון. בהתבסס על הנוהל מפורט שתואר כאן, המשתמש יצטרך להתאים את הפרוטוקול לכל אחד מסוגי תאים מסוימים, תווית תא, מודל חיה, והתקנת הדמיה. שימו לב כי protocol גם יכול להיות מותאם לשימוש בבני אדם, כל עוד הגבלות קליניות הם נפגשו.

כאן אנו מראים את התוצאות האופייניות לפרוטוקול של ההעברה 19 תאים שכותרתו-F ביות לבלוטות לימפה ניקוז. איור 2 מראה ספקטרום 19 F תמ"ג של 10 6 תאים שכותרתו באמצעות התייחסות TFA. התקנת ההדמיה בוצעה כפי שתוארה בפרוטוקול (איור 3). עבור vivo ההדמיה, השתמשנו התייחסות המורכבת מצילינדר אטום של אותה התווית המשמש לתאים ממוקמים בין רגליו של העכבר. תמונה מעובדת נציג מוצגת באיור 4. על ידי יישום הפרוטוקול מ...

אנו מתארים פרוטוקול כללי לin vivo מעקב תא באמצעות MRI במודל של עכברים עם תאי שכותרתו לשעבר vivo. פרוטוקול טיפוסי לתיוג תא, עיבוד רכישת תמונה וכימות כלול.

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לדמות ולכמת את מספר 19 התאים המסומנים F in vivo באמצעות 19 FMRI. ניתן לעשות זאת במסגרת קלינית או פרה-קלינית. זה מושג על ידי תיוג תאים עם חומר 19 F מתאים.זה נעשה לרוב ex vivo. השלב השני הוא לכמת את תכולת ה-19 F לתא, שניתן לעשות זאת באמצעות 19 F ו-MR עם התייחסות ידועה. ההנחה היא שתכולת 19 F לתא תישאר קבועה במהלך הניסוי, אחרת יש לחשב גורמי תיקון.לאחר מכן, הנבדק מצולם in vivo באמצעות H אחד ו-19 FMRI כדי למקם את התאים המסומנים המועברים. התייחסות ידועה ופרמטרי הדמיה מתאימים חיוניים לכימות מנתוני התמונה. השלב האחרון הוא לעבד את נתוני התמונה כדי לחשב את מספר התאים.ניתן להשתמש בהיסטולוגיה או בטכניקות אחרות כדי לאמת את הנתונים במידת האפשר. בסופו של דבר, ניתן להשתמש ב-19 FMRI למעקב אחר תאים in vivo כדי לחקור את התאים המועברים במונחים של לוקליזציה ומספרים לאורך פרק הזמן הרלוונטי, בהינתן הנחות מסוימות כמתואר בטקסט. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו HMRI אחד המשתמש בתוויות תאים סופר פרמגנטיות, הוא שאין אות רקע מבלבל ושניתן לקבוע את מספר התאים ישירות מנתוני התמונה.שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הטיפולים התאיים, כגון היכן נמצאים התאים וכמה נמצאים בנקודות זמן שונות. כדי להתחיל בפרוטוקול זה, הוסף תחילה תווית של 19 F לתאים דנדריטיים לא בשלים בריכוז של ארבעה מיליגרם למיליון תאים בשני מיליליטר של מדיום. ואז מערבבים בעדינות לערבב.לאחר מכן, דגרו על התאים הדנדריטים עם התווית למשך שלושה ימים לפני ההבשלה והקציר. לאחר מכן אסוף את התאים והסר עודפי תווית על ידי שטיפה לפחות שלוש פעמים. בספירת PBS, התאים המתקבלים מושעים מחדש בנפח קטן של PBS להזרקה או לבדיקות נוספות.שים לב שהפרוטוקול כמתואר כאן רלוונטי לתאים דנדריטיים ספציפיים אלה ולתווית. לפיכך, פרוטוקול לסוג תא אחר יצטרך להימצא בספרות או לבצע אופטימיזציה על ידי החוקר. הנח מספר ידוע של תאים מסומנים בצינור NMR.לאחר מכן הוסף 10 מיקרוליטר של 5%tri Fluor או חומצה חומצית, או TFA. אם תדר התהודה של TFA אינו מתאים עקב חפיפה עם התווית, השתמש בתרכובת מסיסה חלופית. הנח דגימה בספקטרומטר NMR וקבל את ספקטרום הפלואור 19.לאחר מכן חשב שטחים יחסיים מתחת לפסגות הייחוס והמדגם או השיא העיקרי של המדגם, ולאחר מכן חשב את המספר הממוצע של פלואור לתא בדגימה. שימו לב שיש לחזור על כל התהליך הזה בממוצע כדי להגיע למובהקות סטטיסטית. ניתן לעשות זאת גם באמצעות ספקטרוסקופיה ישירות בסורק ה-MRI.שימו לב גם שהליך זה חושף רק את העומס הממוצע של פלואור 19 עבור מספר רב של תאים, ולא שונות בין תאים. בדיקת אחידות ספיגת התאים מחייבת נוכחות של רכיב פלואורסצנטי עם חומר 19 F. כאן רק תרחיש 3 מציג תיוג הומוגני של התאים, למרות שתמיד מניחים זאת בחישובים, ניתן לאמת זאת באמצעות טכניקות משלימות כגון מיקרוסקופיה שהוגדרה להדמיה על ידי הנחת עכבר מורדם לחלוטין בעריסה ושיתוק שלו כדי למנוע תנועה במהלך הסריקה.כמו כן, חבר בקרת טמפרטורה ונשימה לניטור פיזיולוגי במהלך הסריקה. במידת הצורך, מקם התייחסות חיצונית ליד החיה, גם הייחוס וגם אזור העניין צריכים להיות במרכז הסליל. התחל ברכישה עם סריקת MRI פרוטונים קונבנציונלית כהתייחסות אנטומית להדמיית 19 F.לאחר מכן כוון את המערכת לתדר 19 F של סמן התא ובצע סריקת 19 FMRI. באופן אידיאלי, לסריקת 19 FMRI יהיה אותו שדה ראייה ובחירת פרוסות כמו MRI קונבנציונאלי, אם כי סביר להניח ברזולוציה נמוכה יותר. לאחר מכן, קבע את רווח דופק הייחוס של 19 F באמצעות הנוסחה הנראית כאן ורכוש ספקטרום FNMR של 19 כדי לקבוע את תדר 19 F.הערך את הגורם התלוי בסליל תדר רדיו C בניסוי נפרד במבחנה. שימוש בסליל תדר רדיו עם פרופיל B אחד הומוגני כגון סליל משטח יכול לפגוע בכימות של נתוני 19 F. מכיוון שהאות תלוי לא רק בריכוז 19 F, אלא גם במרחק מהסליל.לכן, רכוש מפה B אחת בערוץ H אחד כדי לתקן רטרוספקטיבית נתוני 19 F. זה דורש שפרופילי סליל H אחד ו-19 F יהיו זהים למעט גורם הפרופורציונליות C וכי מספיק אות רקע H אחד מסופק באזורים של 19 F.כאן אנו רואים מפות זווית היפוך של צינורות עם TFA במים שנרכשו בערוץ H ו-19 F. כדי לתקן את נתוני 19 F רכוש תחילה מפת זווית היפוך של H אחד בשיטת שתי זוויות ההיפוך.השתמש בסריקת הד שיפוע עם TR ארוך מאוד שהוא מעל שלוש פעמים ל-HT אחד עם זווית היפוך משוערת של קצת מתחת ל-90 מעלות קרוב לסליל. לאחר מכן רכוש סריקת הד שיפוע שנייה עם זווית היפוך כפולה מזווית ההיפוך של הסריקה הראשונה. חשב את אלפא זווית ההיפוך H אחת ב-vle X, Y, Z באמצעות האות והחוש של סריקות ה-ECHO השיפוע הראשונה והשנייה.זווית ההיפוך של 19 F תהיה זהה למעט הפקטור C אחד עקב פרופילים פרופורציונליים של B אחד, הנחתה של עוצמת אות 19 F מרצף הד ספין עם זווית היפוך עירור זווית היפוך אלפא זווית היפוך שני אלפא במהלך קליטת האות נראית על המסך כאן. ההנחתה עקב עירור לא מושלם נראית כאן. ואז ניתן לחשב את ההנחתה הכוללת.שימו לב שהוא מנורמל לאחד במקרה של 90 מעלות מושלמות, זווית היפוך מיקוד מחדש של עירור של 180 מעלות, ה-B אחד מתוקן 19 F עוצמות אות תמונה SI 19 F מתוקן מחושבות באמצעות נוסחה זו ליצירת תמונות שכבת-על אחת של H ו-19 F. ייצא את נתוני התמונה ופתח את הקבצים בתוכנית עיבוד תמונה כגון תמונה J, החל התאמות תמונה לפי הצורך, והקפד לשמור על ההתאמות זהות עבור כל התמונות. לאחר מכן עבד את תמונות 19 F בצבע כוזב ולאחר מכן שכב על תמונות ה-H המתאימות.על מנת למקם את האות, בחר את תמונת הגודל של 19 F עם התאים הרלוונטיים וההתייחסות הגלויה למשוך ROIs על פני התאים הרלוונטיים, ההתייחסות ואזור מחוץ לנושא עבור ערך הרעש כפי שמוצג במדגם. שימו לב שכאן, הסריקה האנטומית H אחת מוצגת לשם הבהרה. לאחר מכן ניתן להשתמש בפרופורציונליות פשוטה ובערך של 19 F לתא כדי להעריך את מספר התאים בהחזר ההשקעה.תמונות אלה הן מתוצאות טיפוסיות של פרוטוקול הכולל העברה של 19 תאים מסומנים F המגיעים לבלוטת לימפה מנקזת. כאן אנו רואים ספקטרום של 19 FNMR של מיליון תאים מסומנים באמצעות הפניה ל-TFA, וכאן אנו רואים תמונה מעובדת מייצגת להדמיה in vivo. התייחסות המורכבת ממכל אטום של אותה תווית המשמשת לתאים הונחה בין רגלי העכבר.על ידי יישום הפרוטוקול המתואר, חישבנו מספר תאים של כ-1.2 מיליון בהתבסס על התמונה הגולמית בגודל 19 F. התמונה של 19 F מונחת בצבע כוזב על גבי תמונת הפרוטונים האנטומית בקנה מידה אפור. בעת הגדרת ניסוי חדש, חשוב לאמת את הפלואור.תוצאות MRI עם היסטולוגיה, הדמיה אופטית או שיטות אחרות. לדוגמה, חשוב לציין שתווית פלואור יכולה להישאר ברקמה כאשר התאים מתים ולהוביל לאות חיובי כוזב.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

להערכת טיפולים בתאי גזע חדש חשוב הלא פולשני המסלול התאים מוזרקים in vivo. סרט הווידאו הזה יראה לכם כיצד לתייג אדם בתאי גזע mesenchymal ו עובריים עם סוכני תחמוצת ברזל מבוסס בניגוד in vivo עבור הבאים MR הדמיה in vivo.

תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging

עבודה זו מתארת ​​את הנהלים הבסיסיים של פולשנית חיה MRI קטן...

פולשנית In vivo קטנים בעלי חיים MRI ו MRS: הפרוצדורות בסיסי

מעקב של תאים באמצעות MRI זכה לתשומת לב ראויה לציון בשנים האחרונות. פרוטוקול זה מתאר את התיוג של תאים דנדריטים עם פלואור...

נדידת תאים דנדריטים ניטור באמצעות<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H דימות תהודה מגנטית

הטבע של האינטראקציות בין תאי גזע hematopoietic ואב (HSPCs) ונישות מח עצם הוא הבין היטב. שינויי חומרה מותאם אישית ופרוטוקול רכישה רב שלבים לאפשר את השימוש בשני הפוטונים ומיקרוסקופיה confocal לתמונת vivo לשעבר HSPCs שכותרתו התביית בתוך אזורי מוח עצם, אינטראקציות מעקב ותנועה.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

מונוציטים הם מווסתים מרכזיים של חסינות מולדת וממלאים תפקיד קריטי בחידוש המערכת הפגוציטית החד-גרעינית ההיקפית ובמקרה של דלקת. כתב יד זה מתאר את הליך ההדמיה בזמן אמת של מח העצם של קלווריה של העכבר כדי לחקור את מנגנון הגיוס של המונוציטים.

מעקב עכבר מח עצם המונוציטים<em&gt; In vivo</em

פרוטוקול חזקים כדי לפקח אוכלוסיות עצבית על ידי זמן לשגות וידאו-מיקרוסקופיה ואחריו-מבוססות תוכנה שלאחר עיבוד מתואר. שיטה זו מייצגת כלי רב עוצמה לזיהוי אירועים הביולוגי בקרב אוכלוסיה הנבחר במהלך הניסויים הדמיה בשידור חי.

חיים הדמיה ואחריו תא בודד מעקב צג Cell Biology, ההתקדמות שושלת היוחסין של אוכלוסיות עצבית מרובים

אנו מתארים פרוטוקול לצורך מעקב פרה ויוו של גרורות סרטן. הוא מבוסס על עיתונאי רדיונוקלידים-זריחה שילוב של סודיום יודיד symporter, זוהה על ידי פולשני [18נ] tetrafluoroborate-PET, חלבון פלואורסצנטי לאישור מפושטת ex-vivo . השיטה זו ישימה עבור פרה ויוו תא מעקב מעבר הגידול ביולוגיה.

רדיונוקלידים-זריחה מדווח הדמיה כדי לעקוב אחר התקדמות הגידול במודלים הגידול מכרסמים

הזרקה תוך-גולגולתי Orthotopic של תאים סרטניים שימש בחקר הסרטן ללמוד ביולוגיה גידול במוח, התקדמות, התפתחות, תגובה טיפולית. כאן אנו מציגים פלורסצנטיות מולקולרית טומוגרפיה של גידול xenografts, אשר מספק הדמיה intravital בזמן אמת, כימות של גידול המוני במודלים פרה גליובלסטומה.

קרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית עבור הדמיה In Vivo של גליובלסטומה Xenografts

שינויים מורפולוגיים מתרחשים בתאי החיסון החיסונית התגובה בעקבות ההפעלה ולקדם שינויים בגיוס הסלולר. ניצול 2-פוטון הדמיה בשילוב עם חלבון מהונדס בצורה גנטית לפיברוסט-1 (FSP1)-יצור; tdTomato פלומפולט-stop-floxed (tb/tb) קו העכבר הירוק fluorescently מתויג ליפופוליל-fitc, אנחנו יכולים להדגים ספיגה ספציפית מאוד של ליפופוליד בפיברוהכדורים ושינויים מורפולוגיים ב vivo.

ב Vivo שני צבעים 2-פוטון הדמיה של תאי כתב שתייגת גנטית בעור

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור משלוח של תאי גזע mesenchymal לא פולשנית (MSC) ומעקב במודל העכבר של פציעה מוחית טראומטית. ברזל פאראמגנטי תחמוצת הברזל מועסקים כהדמיה תהודה מגנטית (MRI) בדיקה עבור התיוג MSC ו פולשני ב vivo מעקב אחר משלוח intranasal באמצעות MRI בזמן אמת.

מעקב על תחמוצת ברזל פאראמגנטית-מתויג תאי גזע Mesenchymal באמצעות ה-MRI לאחר Intranasal משלוח ב מודל טראומטי פציעה במוח

טיפול תאי מציע התערבות מבטיחה לפיברוזיס ריאתי על ידי שימוש בתאי אב לתיקון רקמות פגועות ושיפור תפקוד הריאות. מכיוון שהדמיה ממלאת תפקיד מרכזי במעקב אחר אינטגרציה של תאים, כאן, אנו מתארים הדמיה מונחית חלקיקים מגנטיים מעקב in vivo של טיפול תאי בפיברוזיס ריאתי במודל עכבר.

מעקב In Vivo מונחה תמונה של תאי אב אפיתל ריאה דיסטליים מושתלים לפיברוזיס ריאתי באמצעות הדמיית חלקיקים מגנטית

למדו שיטת MRI פלואורין-19 למעקב סלולרי in vivo בדגמי עכברים. הפרוטוקול מאפשר תיוג תאים ex vivo, כימות התוכן הפלואוריני וניתוח התמונות לזיהוי מיקום ומספר התאים לאורך זמן.

בF-MRI ¹⁹ vivo למעקב סלולרי

גלה סרטונים נוספים