קולונוסקופיה גמישה בעכברים כדי להעריך את חומרת קוליטיס ומעי הגס גידולים באמצעות מערכת Validated אנדוסקופי ניקוד
16 באוקטובר 2013
במהלך השנים האחרונות, אנדוסקופים דור חדשים צמחו כעזרי מחקר אבחונים חשובים להערכת קוליטיס העכברי וגידולי מעי גס. אנו מציגים במסמך פרוטוקול מפורט לשיטת ניקוד חדשה שמשתמשת במזהים עשרוניים לתעד את החומרה אנדוסקופית של קוליטיס וגידולי מעי גס הערכה אנדוסקופית של דלקת וגידולי מעי גס בעכברים, כמו גם.
היי.אני טומוהירו קאני, מבקר pH מאוניברסיטת נינטנדו בטוקיו, ואני פאביו אלי, מנהל המרכז לחקר בריאות העיכול, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ווסטרן ריזרב. בסרטון זה נתאר את המתודולוגיה שלנו לביצוע קולונוסקופיה בעכברים. הדגש את החשיבות של היכרות עם האנטומיה האנדוסקופית הרגילה.
תאר כיצד לפתור בעיות ביעילות במהלך אנדוסקופיה כדי למזער טראומה וחפץ תמונה. ולבסוף, תאר את מערכת הניקוד שלנו להערכת דלקת מעיים במודל העיניים של קוליטיס וסרטן הקשור לקוליטיס. תודה על תשומת הלב.
ראשית, הגדר את מערכת האנדוסקופיה ב- חבר את הסקופ למרכז מערכת הווידאו ולמקור האור. עקר את ההיקף והצמד מזרק לאינפלציה באוויר. לאחר מכן הפעל את המערכת והתאם את איזון הלבן עם החיה.
הרדמה ומרוסנת כראוי התחל את הבדיקה האנדוסקופית. ניתן לקבל דגימות ביופסיה לפי הצורך. לאחר התקופה, יש לחמם את העכבר עם אור להתאוששות בסוף.
מוסברת מערכת הניקוד להערכת דלקת במעי הגס וסרטן המעי הגס הקשור למעי הגס. הגדרת מערכת האנדוסקופיה. מערכת האנדוסקופיה כוללת את מרכז מערכת הווידאו, מקור אור קסנון ומקליט וידאו.
אנו משתמשים באורטרוסקופ אנושי לקולונוסקופיה בעכברים. ההיקף שלנו URFV הוא היקף וידאו גמיש המשתמש בחיישן CCD. הקוטר החיצוני של צינור ההחדרה הוא 3.3 מילימטרים והקצה הדיסטלי בקוטר 2.8 מילימטרים.
כדי להתחיל, חבר את הסקופ למרכז מערכת הווידאו ולמקור האור. לאחר מכן, עקר את ההיקף ואת משטח העדשה עם 70% אתנול. ואז חבר מזרק של שלושה מילימטר לתעלת העבודה.
זה משמש לוויסות כמות האוויר התוך-לומינלי עם אינפלציה או שאיפה. הפעל את המתג הראשי והגדר את איזון הלבן. כמו כן, אל תשכח להגדיר במצב NBI שתיים, להרדים את העכבר.
ראשית, אדגים הרדמה באינהלציה באמצעות איזוף פלואור, אנו משתמשים בארבעה עד 5% מאיזוף פלואור לאינדוקציה. לאחר שהעכבר מפסיק את התנועה, הפחת את הריכוז למינון תחזוקה של 1 עד 2%רסן את העכבר על השולחן על ידי הדבקת הזנב והגפיים התחתונות. הדבקת זנב חשובה במיוחד כדי לשמור על העכבר נייח במהלך התיחום.
כמו כן, הזרקה תוך צפקית של tri bromo. ניתן להשתמש באתנול להרדמה. שלוש. אנדוסקופיה נגעים פריאנאליים אינם חלק מההערכה האנדוסקופית, אך הם ממצא חשוב ויש להבחין בהם לפני ההחדרה ולא להתבלבל עם דימום טראומטי.
לפני ההחדרה יש לצפות את הסקופ בחומר סיכה כירורגי, הקפד לא לצפות את חיישן ה-CCD. הכנס את הסקופ דרך פי הטבעת. החדרה ראשונית זו צריכה להיות עדינה ככל האפשר, שכן החדרה עיוורת עלולה לפגוע ברירית המעי הגס.
הדליקו את האור והתחילו להקליט. דחוף את מזרק האוויר לאט ובזהירות כדי לקבל שדה ראייה. אינפלציה רבה מדי עלולה להרוג את הפה.
יש לשפוט נוכחות של דימום ספונטני כאשר האנדוסקופ מוחדר לזווית פי הטבעת או המעי הגס. הטיפול מכוונן את התצוגה אנכית ובקרת המומנט מיועדת לכוונון אופקי. התיאום בין שני הבקרות הללו חשוב מאוד.
שימו לב לשקיפות. במעי הגס רגיל, הקיר שקוף עם כלי דם רגילים וללא כל עובי. שקיפות מוגדרת כנראות טרנסמורלית של הכלים או האיברים החוץ-מורליים.
התנועה החוזרת ונשנית של החדרה ומשיכה מסייעת להערכה במעי הגס התקין. כלים קטנים וגדולים נראים במהלך הבדיקה. ניתן לצלם תמונות או דגימות ביופסיה לפי הצורך.
בדוק נוכחות של דימום במגע. בעת משיכת האנדוסקופ, אין צורך לגרד את הרירית בכוונה. מצב הדמיית הפס הצר מדגיש את המבנים העדינים של כלי דם בקרומים ריריים.
פי הטבעת מוקף בשרירים ואילו המעי הגס אינו מקובע על ידי הרקמות שמסביב. בגלל ההבדל האנטומי הזה, קרביים חוץ-מורליים אינם נראים בפי הטבעת. כדורי צואה נמצאים לפעמים קרוב לפי הטבעת.
ניתן להסיר אותם באמצעות אינפלציה של אוויר, אולם לפעמים הם יכולים להימשך ולחסום את הנוף האנדוסקופי. במקרים אלה, נשתמש בעד מיל אחד של חוקן PBS כדי לשטוף את הצואה. צואה מופרשת בדרך כלל לאחר מספר דקות.
תצוגה מטושטשת הנגרמת על ידי נוכחות של מריחות על העדשה היא גם בעיה נפוצה, במיוחד במקרה של קוליטיס או דימום. במצב זה ניסינו לנקות את העדשה עם אינפלציה של אוויר. הליך זה עשוי להצליח בניקוי העדשה ללא נסיגה של הסקופ.
תנועה פריסטלטית היא אחת הפעילויות הפיזיולוגיות הרגילות של המעיים. מכיוון שאינפלציה באוויר אינה מצליחה להרחיב את הלומן במהלך פריסטלטיקה, עליך להמתין עד שהגל הפריסטלטי יעבור. מספר ארבע, דגימות ביופסיה מתקבלות באמצעות מלקחיים גמישים של ביופסיה.
הכוסות נפתחות ונסגרות על ידי הידית. הכנס את המלקחיים לתעלת העבודה. היזהר לא לנקב את המעי.
פתחי את הגביעוניות לגודל מתאים והניחי את הקצה על אזור העניין. סגרו בעדינות את הכוסות ומשכו בחוזקה. הסר את הדגימה על ידי שטיפה בתמיסה מתאימה.
מספר חמש, התאוששות. לאחר הבדיקה יש לחמם את העכבר עד שהוא מתאושש. אנו משתמשים באור חשמלי לחימום שש ניקוד לדלקת במעי הגס.
מערכת הניקוד שלנו מורכבת מארבעה פרמטרים, נגע פריאנאלי אחד, שניים, שקיפות של דופן המעי הגס, שלושה דימומים במעי וארבעה נגעים מוקדיים. ניתן לנקד כל פרמטר מאפס לשלוש. הציון הכולל המקסימלי הוא 12.
בנוסף, כללנו סולם של יחידות עשרוניות שניתן להשתמש בהן כדי להדגיש ממצאים אנדוסקופיים ספציפיים. התיאור המפורט של כל פרמטר זמין בכתב היד המצורף. הנה סיכום מספר אחד, נגע פריאנאלי.
יש להקפיד על ממצא זה לפני החדרת הסקופ לרקטום. זה מונע בלבול עם דימום טראומטי. ציון אפס הוא נורמלי.
הציון השני הוא על הפרשות עקובות מדם. ציון שלוש הוא עבור רקמת גרנולציה או צניחת פי הטבעת. 2. שקיפות. זה מייצג את היכולת לדמיין את כלי הדם בדופן המעי הגס והקרביים שמסביב.
ציון אפס מציין שכלי הדם נראים בבירור. ציון אחד. כלים קטנים אינם נראים חלקית, אך כלים גדולים נראים לעין.
ציון שתיים. כלים קטנים אינם נראים בדרך כלל ואפילו כלים גדולים אינם ברורים. ציון שלוש זהה לציון שתיים ומראה מעובה של המעי הגס. שלוש.
יש להבדיל בין דימום ספונטני לדימום ממגע. שפטו אותו בהתאם. ציון 1 מצביע על דימום ממגע הנגרם על ידי הליך הטווח הסטנדרטי העדין ציון 3.
הודעה על דימום ספונטני עם הכניסה למעי הגס. מספר ארבע, נגע מוקדי. ממצאים אלה משקפים תנאים מקומיים הנלווים לעתים קרובות לדלקת.
ציון אחד. פלאק הוא גובה שטוח המכוסה ברירית רגילה לכאורה. ציון שתיים.
שחיקת אזור הקצה האדום משיגה שלוש. שחיקת כיב מכוסה בחומר דמוי פיברין. NBI מועיל להכיר בכך.
מתארים עשרוניים. הוספנו שלושה פרמטרים נוספים ונתנו להם ציונים עשרוניים.0.1. לציון היצרות 0.2 לציון קרע או ניקוב במעי 0.5 להצגת מקרה נגע גידולי ראשון.
עכבר עם זיהום קלוסטרידיום דיפיצילה. יש לו שקיפות רגילה אך שחיקה מוקדמת. נראה שחיקה קטנה, אך רירית הרקע תקינה.
בהתבוננות מקרוב מתגלה בצקת קלה סביב נגע זה. גם. בחלקים אחרים, אין ממצאים המצביעים על נוכחות דלקת. מקרה שני.
עכבר עם קוליטיס הנגרמת על ידי DSS בדיאטה עתירת שומן. אי שקיפות, דימום ספונטני והיצרות נראים במקרה זה. בהתחלה רואים דימום.
זה ספונטני. הנה הגבלה. הוא אינו מורחב על ידי אינפלציה של אוויר והאנדוסקופ אינו יכול לעבור דרכו.
רירית הרקע אדמומית ומעובה. כמו כן, מכות מגע מתרחשות פה ושם. זה מצביע על שבריריות מקרה המעי הגס. שלוש.
נראים עכבר עם קוליטיס DSS כרונית, חוסר שקיפות, עובי דופן ובליטות דמויות גידול. בדרך כלל נראה עובי דופן צווארון לבן והקיר אינו שקוף. זהו כיב סביב כופף הטחול בליטות מדהימות.
מקרה רביעי. עכבר עם סרטן הקשור לקוליטיס המושרה עם אזוקסימתאן ו-DSS. יש לו גידולים מרובים וכיבים.
נגע בולט גדול מסוג שטוח נמצא בקיר הימני ובאזור קצת יותר פרוקסימלי נראה נגע שטוח נוסף נמוך יותר. מבנה פני השטח שונה ככל הנראה מהרירית הרגילה. NBI שימושי לאיתור ואבחון בנגע כזה.
יש כיב גדול גיאוגרפי המכוסה בחומר סיבי בפי הטבעת. תודה שצפית.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מאמר זה מציג פרוטוקול מפורט לביצוע קולונוסקופיה בעכברים, תוך התמקדות בהערכה של דלקת במעיים וגידולי מעי גס ופיקטום. המחברים מציגים מערכת דירוג חדשנית לתיעוד חומרת הקוליטיס והגידולים באמצעות מזהים עשרוניים.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מדעי המוח
- גסטרואנטרולוגיה
- טכניקות אנדוסקופיות
רקע
- אנדוסקופים מדור חדש חיוניים למחקר של קוליטיס וגידולים רקטום-קולוניים בעכברים.
- הבנת האנטומיה האנדוסקופית הנורמלית היא קריטית לצורך הערכה יעילה.
- צמצום טראומה וארטיפקטים של תמונה במהלך האנדוסקופיה הוא חיוני.
- מוצגת מערכת דירוג להערכת דלקת מעיים.
מטרת המחקר
- מתן מתודולוגיה לביצוע קולונוסקופיה בעכברים.
- הדגשת החשיבות של היכרות עם האנטומיה האנדוסקופית.
- הצגת מערכת ניקוד להערכת דלקת במעי.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הערכה אנדוסקופית של דלקות וגידולים במודלים של עכברים.
- הטמעה של מערכת ניקוד חדשה לתיעוד חומרת המצב.
- טכניקות לפתרון בעיות במטרה למזער טראומה אנדוסקופית.
- פרוטוקול מפורט לביצוע קולונוסקופיה בעכברים.
תוצאות עיקריות
- יישום מוצלח של טכניקות אנדוסקופיות במודלים של עכברים.
- ביסוס של מערכת דירוג מהימנה עבור קוליטיס וגידולים.
- הבנה משופרת של האנטומיה האנדוסקופית הנורמלית.
- שיטות יעילות לפתרון בעיות לשיפור איכות התמונה.
מסקנות
- הפרוטוקול המוצג משפר את הערכת קוליטיס וגידולים בעכברים.
- מערכת הניקוד מספקת גישה סטנדרטית לתיעוד חומרת המצב.
- הכרות עם טכניקות אנדוסקוپیות היא חיונית לצורך ביצוע הערכות מדויקות.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
דירוג אנדוסקופי מתוקף במודלים של עכברים מאפשר הערכה כמותית הניתנת לשחזור של חומרת הקוליטיס והגידולים במעי הגס ובפיקטום, ובכך מספק תמיכה ישירה בתיקוף של מטרות טיפוליות ובצמצום סיכונים מכניסטיים במחקר של מחלות במערכת העיכול. שילוב של הערכת דלקת וגידולים במסגרת זרימת עבודה אחת משפר את הביטחון החזוי ואת הרצף התרגומי משלב הגילוי המוקדם ועד למחקרים פרה-קליניים. מערכות דירוג סטנדרטיות מקלות על השוואה בין מחקרים ועל קבלת החלטות ברמת פורטפוליו במו"פ של התעשייה הביופרמצבטית.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביו-פארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר בחינה קפדנית של מנגנוני מחלה במודלים של קוליטיס כרונית וסרטן השוער והחך (colorectal cancer).
- תומך בתיקוף פונקציונלי של מטרות על ידי כימות הדלקת ועומס הגידול in vivo.
- מסייע בהפחתת סיכונים מנגנוניים באמצעות דירוג עיוור ו可שחזר של מאפיינים פתולוגיים.
- משפר את הביטחון החזוי עבור מחקרים תרגומיים עתידיים.
סריקה ופיתוח בדיקות
- מספק קריאה כמותית וסטנדרטית להערכת התערבויות מועמדות במודלים של עכברים.
- מאפשר הערכה הדירה של נקודות סיום דלקתיות ונאופלסטיות בבדיקה אחת.
- תומך ביכולת הרחבה (scalability) של הבדיקה ובסנכרון בין מחקרים באמצעות קריטריוני ניקוד מתוקףים.
- מכין מערכות רלוונטיות למחלה לצורך סריקת תרכובות והערכת יעילות אמינה.
מחקר תרגומי ו-Preclinical
- מתאם נקודות סיום פרה-קליניות עם מאפיינים קליניים של קוליטיס וסרטן המעי הגס לרלוונטיות תרגומית.
- מאפשר רציפות משלב הגילוי דרך תיקוף פרה-קליני באמצעות שילוב של הערכת דלקת וגידול.
- תומך בהחלטות קידום מותאמות סיכון המבוססות על דירוג פתולוגי כמותי וניתן לשחזור.
- מסייע בתיאום ביומארקרים ובאופטימיזציה של מודל המחלה למחקרים תרגומיים.
שילוב תהליכי עבודה וצנרת עיבוד (Pipeline)
מערכת דירוג אנדוסקופית מהומנת זו ממוקמת בתוך הרצף שבין שלב הגילוי לשלב הפרה-קליני, ומאפשרת בדיקת השערות, הערכת תרכובות מובילות (leads) ואופטימיזציה של מודלים תרגומיים במחקר של מחלות במערכת העיכול.
- ביולוגיה של גילוי: תומכת בחקירה מונחית-היפותזה של מנגנונים דלקתיים וניאופלסטיים in vivo.
- סריקה: מספקת פלטיות כמותיות וסטנדרטיות להערכת יעילות ובטיחות של תרכובות.
- אנליזה: מספקת נתוני דירוג עיוורים וניתנים לשחזור להשוואה סטטיסטית חסונה בין זרועות הניסוי.
- מחקר תרגומי: מגשרת בין ממצאים פרה-קליניים לנקודות סיום קליניות על ידי שילוב מדדי דלקת וגידולים.
- שימוש חוזר ארגוני: מכוננת פלטפורמה מתוקתקת וניתנת לשימוש חוזר למחקרי מודלים מתמשכים של מחלות במערכת העיכול (GI) ולהשוואה בין תוכניות שונות.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי ומפחית עמימות מכניסטית במודלים של מחלות מערכת העיכול.
- ערך תפעולי: סטנדרטיזציה של הערכת פתולוגיה, המשפרת את השחזוריות והיכולת להרחבה (scalability) בין מחקרים.
- ערך אסטרטגי: מאפשר קבלת החלטות מושכלת לגבי המשך או הפסקת פיתוח (go/no-go) וניהול תיק פיתוח יעיל מבחינת הון.
- השפעה על תיק הפיתוח: תומך בתעדוף מותאם סיכון ובקידום תוכניות למחלות מערכת העיכול.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות באנדוסקופיה של עכברים ובדירוג פתולוגי.
- נדרש גישה למערכות אנדוסקופיה גמישות ולפרוטוקולי דירוג מתוקתקים.
- נדרשת סטנדרטיזציה בין-צוותית להשגת נתונים הניתנים לשחזור.
- ייתכן שיהיה צורך בהתאמה עבור זני עכברים שונים או מודלים שונים של מחלות במערכת העיכול.
- מגבלות פוטנציאליות כוללות שונות בין מפעילים ועקומת למידה טכנית.
