Name: מודל Murine של תת עכבישי דימום (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: חקור מודל מכרסם סטנדרטי ליצירת דימום תת עכבישי בעכברים באמצעות ניקור כלי דם אנדווסקולרי. שיטה זו מאפשרת ניטור לחץ תוך גולגולתי והדמיית התפלגות הדם במוח לחקר מנגנוני מחלה נוירולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר הנוכחי ממומן על ידי קרן מחקר Solorz-זק.

כל הניתוחים היו נתונים לביקורת אתית ואושרו על ידי הממשלה בעליונה בוואריה (מספר אסמכתא: 55.2-1-54-2532.3-13-13 ו-2532-136-11). בעלי חיים הם עכברי C57BL / 6 גברים עם משקל גוף של כ 25 גרם. 1. הכנת בעלי החיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה על ידי הצבת העכבר לתוך תא. לשטוף את החדר עם isoflurane 5% עד שהחיה מאבדת את הכרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק הרדמה מעורבבת מראש intraperitoneally: פנטניל (0.05 מ&quot;ג / קילוגרם), midazolam (5 מ&quot;ג / קילוגרם) וmedetomidine (0.5 מ&quot;ג / קילוגרם). בדקו את הרפלקסים לפני ואופן קבוע במהלך ההליך. Reinject שליש מהסכום הראשוני לשעה כדי לשמור על הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנרר orotracheally עם צינור עשוי מצנתר ורידי G 20 11. עבור אינטובציה לתקן את החיה על פלטפורמה משופעת (30 מעלות), לחזור בו הלשון עם מלקחיים כפופים, לדמיין את מיתרי קול תחת מיקרוסקופ פעולה ולהכניס את הצינור לתוך קנה הנשימהבמהלך השראה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בעמדה פגיע ולבדוק את המיקום הנכון של הצינור עם פיסת צמר גפן או microcapnograph. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינור אינטובציה להנשמה. לאוורר את העכבר עם אוויר חדר בתוספת חמצן 25% בתדירות של 180-220 נשימות / דקה ונפח פעימה של 200-250 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינור אינטובציה לmicrocapnograph. לשמור על קצה הנשיפה PCO 2 ב30 מ&quot;מ כספית על ידי התאמת תדר האוורור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בדיקה טמפרטורה רקטלית ומניח את החיה על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת גוף 37 ° C ליבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את חיישן pulsoximeter טבעתי בכף הרגל האחורית הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את העור מעל הגולגולת עם זוג מספריים. החתך צריך להיות כ 0.5 סנטימטר ארוך ובין העין לאוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את שריר הרקה השמאלי עם אזמל מהעצם הטמפורלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבק flowmeter דופלר לייזר הבדיקה (LDF) עלהעצם הטמפורלית השמאלי. החזק את הבדיקה בתנוחה קבועה עד שהדבק מתקשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח חור בקוטר של כ 1.5 מ&quot;מ עם מקדח שיניים לתוך העצם הטמפורלית השמאלי. לקרר את העצם עם מי מלח כדי למנוע נזק חום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הבדיקה ICP לתוך חלל הגולגולת. לדחוף קדימה כdorsally ככל האפשר כדי למנוע נזק לרקמות מוח ודימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הבדיקה היא במיקום הנכון, לתקן, ולאטום אותו במלט. בואו יבש המלט למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את העכבר בזהירות למצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניטור לחץ דם רציף, לצנתר את עורק הירך השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הקטטר הירך למכשיר הניטור לחץ דם. </li></ol> 2. אדון אינדוקציה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את העור עם זוג מספריים מעצם החזה לסנטר (2 סנטימטר). לנתח את רקמת חיבור בבוטות ולדחוף את בלוטות הרוק בצד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את עורק התרדמה המשותף שמאל (CCA) ולגייס אותו. לשמר אתעצב מחנק, אשר פועל באותו נדן רקמת חיבור כמרכז לאמנות העכשווית. הזז גולגולת ולחשוף ולגייס את ICA וECA תוך שימוש באותה הטכניקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור את ECA ככל cranially ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתאם שתי ligations יותר לחוט הלהט סביב ECA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את המרכז לאמנות עכשווית והמנהל האזרחי באופן זמני עם microclips. מקם את microclips עם המוליך microclip. ודא קליפים מיושמים בצורה נכונה על ידי משייכתו בעדינות אותם בחזרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך חור להכנסת החוט לECA עם מספריים כלי שיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס נימה Prolene 5-0 עם 12 אורך מ&quot;מ לתוך ECA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את אתר ההכנסה עם קשירה מראש אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את microclips עם המוליך microclip מהמרכז לאמנות העכשווית והמנהל האזרחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם את חוט הלהט עם מלקחיים לתוך ICA עד ICP עולה. עלייה פתאומית של ICP מציינת אינדוקציה דימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשוך את החוט באופן מיידי ולקשור ECA ידי סגירת שני יחסי הציבורligations earranged ברציפות. זה מונע דימום מאתר ההכנסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את הפצע בעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על הפרמטרים הפיזיולוגיים של בעלי החיים לעוד 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר ICP ובדיקות LDF ותפרת את הפצע בעור. </li></ol> 3. סוף הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנקב את החיה transcardially עם 20 מיליליטר של תמיסת מלח (בטמפרטורת חדר) ואחריו 20 מיליליטר של PFA 4% ב-PBS (4 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים את המוח מהגולגולת. חותכים את הגולגולת בקו האמצע ובין החללים מסלולית. לאחר מכן לקלף את העצם מהמוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את חלוקת הדם בחלל תת עכבישי. </li></ol> 4. שיקולים במקרה של ניתוח הישרדות (לא מוצג בוידאו) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק Carprofen (4 מ&quot;ג / קילוגרם תת עורי) על כאבים שלאחר ניתוח ישירות לאחר אינדוקציה הרדמה. במהלך תקופת המעקב שלאחר ניתוח Carprofen (4 מ&quot;ג / קילוגרם תת עורי) מוזרק כל שעה 24. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקום מדידת לחץ דם פולשנית לעשות שימוש במערכת לניטור לחץ דם לא פולשנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפסקת להזריק הרדמה להרגיז סוכנים תת עורי: נלוקסון (1.2 מ&quot;ג / קילוגרם), flumazenil (0.5 מ&quot;ג / קילוגרם) וatipamezole (2.5 מ&quot;ג / קילוגרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Extubate בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהשיב את הרפלקסים של לשים את בעלי החיים לחדר שחומם מראש. לשמור על בעלי החיים בכ 32 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים נבדקים באופן קבוע לנשימה ספונטנית ומצבו הכללי שלהם בשעות הראשונות שלאחר ניתוח. אם גזע המוח מושפע בעלי חי בעיות נשימה וצריכים להיות מורדמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים נבדקים מדי יום על מצבו הכללי שלהם ומשקל גוף, כמו גם לגירעונות נוירולוגיות וחושיים 15. </li></ol>

<ol><li>Cahill, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+hemorrhage%3A+is+it+time+for+a+new+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid hemorrhage: is it time for a new direction.</a> Stroke. 40, 86-87 (2009).</li>
<li>van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+haemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid haemorrhage.</a> Lancet. 369, 306-318 (2007).</li>
<li>Lin, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+subarachnoid+hemorrhage-induced+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A murine model of subarachnoid hemorrhage-induced cerebral vasospasm.</a> J. Neurosci. Methods. 123, 89-97 (2003).</li>
<li>Altay, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+subarachnoid+hemorrhage+to+induce+vasospasm+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel method for subarachnoid hemorrhage to induce vasospasm in mice.</a> J. Neurosci. Methods. 183, 136-140 (2009).</li>
<li>Feiler, S., Friedrich, B., Scholler, K., Thal, S. C., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+induction+of+subarachnoid+hemorrhage+in+mice+by+intracranial+pressure+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Standardized induction of subarachnoid hemorrhage in mice by intracranial pressure monitoring.</a> J. Neurosci. Methods. 190, 164-170 (2010).</li>
<li>Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+blood+flow+and+cerebral+perfusion+pressure+in+a+new+noncraniotomy+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat.</a> Stroke. 26, 1086-1091 (1995).</li>
<li>Veelken, J. A., Laing, R. J., Jakubowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sheffield+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Stroke. 26, 1279-1283 (1995).</li>
<li>Kamii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+vasospasm+after+subarachnoid+hemorrhage+in+transgenic+mice+overexpressing+CuZn-superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Amelioration of vasospasm after subarachnoid hemorrhage in transgenic mice overexpressing CuZn-superoxide dismutase.</a> Stroke. 30, 867-871 (1999).</li>
<li>Parra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+subarachnoid+hemorrhage+associated+cerebral+vasospasm%3A+methodological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol.+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of subarachnoid hemorrhage associated cerebral vasospasm: methodological analysis.</a> Neurol. Res. 24, 510-516 (2002).</li>
<li>Broderick, J. P., Brott, T. G., Duldner, J. E., Tomsick, T., Leach, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+and+recurrent+bleeding+are+the+major+causes+of+death+following+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Initial and recurrent bleeding are the major causes of death following subarachnoid hemorrhage.</a> Stroke. 25, 1342-1347 (1994).</li>
<li>Thal, S. C., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+intraoperative+monitoring+of+blood+pressure+and+arterial+pCO2+during+surgical+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Non-invasive intraoperative monitoring of blood pressure and arterial pCO2 during surgical anesthesia in mice.</a> J. Neurosci. Methods. 159, 261-267 (2007).</li>
<li>Hockel, K., Trabold, R., Scholler, K., Torok, E., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+pathophysiology+and+mortality+following+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Transl.+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on pathophysiology and mortality following subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Exp. Transl. Stroke Med. 4, 5(2012).</li>
<li>Wang, Z., Schuler, B., Vogel, O., Arras, M., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+optimal+anesthetic+protocol+for+measurements+of+cerebral+autoregulation+in+spontaneously+breathing+mice%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">What is the optimal anesthetic protocol for measurements of cerebral autoregulation in spontaneously breathing mice?</a> Exp. Brain Res. 207, 249-258 (2010).</li>
<li>Schwartz, A. Y., Masago, A., Sehba, F. A., Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat%3A+a+refinement+of+the+endovascular+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Experimental models of subarachnoid hemorrhage in the rat: a refinement of the endovascular filament model.</a> J. Neurosci. Methods. 96, 161-167 (2000).</li>
<li>Feiler, S., Plesnila, N., Thal, S. C., Zausinger, S., Scholler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+matrix+metalloproteinase-9+to+cerebral+edema+and+functional+outcome+following+experimental+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc.+Dis%22%5BJournal%5D)">Contribution of matrix metalloproteinase-9 to cerebral edema and functional outcome following experimental subarachnoid hemorrhage.</a> Cerebrovasc. Dis. 32, 289-295 (2011).</li>
</ol>

יש מחברים אין לחשוף.

אפשרויות טיפול לאחר SAH נדירות ובעיקר inefficacious. לכן הפתופיזיולוגיה של נזק מוחי לאחר מדמם צריכה להיות מובנת נוסף על מנת לזהות מטרות טיפוליות חדשות ולפתח גישות טיפוליות חדשניות. טופל ומודלים של בעלי חיים גם לשחזור בבעלי חיים מהונדסים גנטי, עכברים כלומר, הם קריטיים לחקירות מסוג זה. מודל קואליציית הנשים לשלום הפך למודל בשימוש נרחב עבור אדון כפי שהוא דומה להפתופיזיולוגיה בבני האדם באופן הדוק, עם זאת, השימוש בו בעכברים הקשו על ידי שחזור נמוך ושונות בין אישית גבוהות. וריאצי...

אדון הוא תת סוג השבץ עם התוצאה מועילה לפחות לחולים: 40% מהחולים מתים בתוך חודש לאחר 1 דימום וניצולים לעתים רחוקות יש תוצאה חיובית מבחינה קלינית. רוב הגדול של SAHs הספונטני (80%) נגרמים על ידי קרע של מפרצת תוך גולגולתי שרובם נמצאים לאורך הקדמי וגם אחורי תקשורת עורקים, עורק basilar, ועורק המוח אמצעי (MCA) 2. מפרצת כאלה קשות למודל בבעלי חיים, ולכן מודלים של בעלי חיים של אדון מבוצעים גם על ידי הזרקה של דם לתוך החלל / חדרים מוחי תת עכבישי או על ידי ניקוב endovascular של כלי שיט תת עכבישי. הזרקת דם עצמית לMagna Cisterna היא קלה לביצוע ולשעתק את נפח הדם יכול להיות נשלט על 3 באופן ישיר. למרבה הצער, כמה היבטים של הפתופיזיולוגיה אדון, למשלפגיעה בכלי, לא יכול להיות מודל על ידי הליך זה. עוד גישה טכנית לזירוז של אדון היא הפתיחה של וריד intracisternal 4. עם זאת, קואליציית הנשים לשלום intraluminal בסניף MCA נראה ההליך שמודלי הפתופיזיולוגיה בבני האדם 5 באופן הדוק ביותר. השיטה פותחה ותוארה ראשון בחולדות על ידי Bederson ועמיתיו ובו בזמן על ידי Veelken ועמיתי 6,7. מאוחר יותר מודל ניקוב intraluminal הותאם לעכברי 8,9. נימה מוכנסת לתוך עורק הצוואר החיצוני (ECA) והתקדמה לבסיס הגולגולת דרך עורק התרדמה הפנימי (הרשפ&quot;ת). בנקודת הסתעפות MCA נימה מנקבת את הספינה וגורמת לדימום לתוך החלל תת עכבישי בבסיס הגולגולת. הדם לאחר מכן מפיץ לתוך החלל תת עכבישי שנותר לאורך סדקים וכלי דם. הדימום הוא נעצר על ידי היווצרות קריש דם באתר של ניקוב, אבל rebleedings, WHich הם לעתים קרובות מזיקים בחולים 10, יכול להתרחש. בהתאם לכך, מודל נימה endovascular הפך מודל אדון בשימוש נרחב במהלך השנים האחרונות. הוזכר בתדירות הגבוהה ביותר החסרון של מודל ניקוב נימה הוא שנפח דימום לא ניתן לשלוט באופן ישיר ולכן עשוי להיות משתנים. השתנות זו באופן משמעותי, ניתן להפחית על ידי שליטה הדוקה של פיזיולוגיה של בעלי החיים וICP הודעה המדמם. יש עכברים יתרון הגדול כי מספר גדול של זנים מהונדסים גנטי זמינים. עם זאת, בשל גודלם הזעיר ניתוחים נוטים להיות מורכב יותר מאשר במינים גדולים, חולדות למשל או ארנבות. לכן downscaling של טכניקות שפותחו לחולדות לעכברים לעתים קרובות אינו מביא לתוצאות הרצויות, למשל כמו עכברים טכניקות מוגבלות מאוד במשקל גוף ונפח דם לא פולשנית לטיפול בלחץ דם וניתוח גז דם, כמו גם לרווית ההמוגלובין וניטור קצב לבצריך להיות מיושם בכל הזדמנות אפשרית. בהתאם לכך, מטרת הפרסום הנוכחי היא לתאר את מודל ניקוב נימה לSAH בעכברים וכדי להדגים כיצד מודל זה יכול להתבצע באופן סטנדרטי ולשעתקו מאוד.

<table><tbody><tr><td colspan="4" ><חזק>ציוד</חזק></td></tr><tr><td>פעולה מיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>KL2500</td><td></td></tr><tr><td>isoflurane וופורייזר</td><td>הרווארד אינסטרומנטס</td> הנשמה <td>וופורייזר</td><td></td>זרימה רציפה</tr><tr><td></td><td>הוגו סאקס</td><td>Minivent 845</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-קפנוגרף</td><td>הוגו זקס</td><td>סוג 340</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה</td>בקר <td>טמפרטורה</td><td></td> <td>FHC</td> DC</tr><tr><td>מקדחה דנטלית</td><td>Paggen</td><td>Labset- N</td><td></td></tr><tr><td>צג ICP קודמן</td><td></td><td>ICP מוניטור</td><td></td></tr><tr><td>לחץ דם מכשירי</td><td>AD מגבר</td><td>גשר FE221</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מזרק</td><td>World Precision Instruments SP101IZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pulsoximeter</td><td>קנט עכבר מדעי</td><td>STAT</td><td></td></tr> צג נתונים אנלוגי <tr><td>LDF</td><td>Perimed</td><td>Periflux 5000</td><td></td></tr><tr><td>AD</td><td>Instruments</td><td>Power Lab 16/35</td><td></td></tr><tr><td colspan="4" ><חזק>חומר</חזק></td></tr><tr><td>מלט לקיבוע בדיקת ICP</td> דבק מלט <td></td><td>Speiko</td><td>Carboxylate</td></tr><tr><td>לקיבוע בדיקה LDF</td> דבק ציאנואקרילט <td>תעשיות בוב סמית 'תעשיות</td><td>(מקסי קיור וסט אינסטה)</td><td></td></tr><tr><td>קטטר ורידי</td><td>ג'ונסון ג'ונסון</td><td>ג'לקו מכונף צנתר IV; REF 4076</td> צינורות <td>אינטובציה מותאמים</td></tr><tr><td>לצנתר עצם הירך</td><td>צינורות</td><td>פוליאתן רפואיים עם נשא עדין; קוטר פנימי 0.28 מ"מ קוטר חיצוני 0.61 מ"מ; REF 800/100/100</td><td>חתוך לחוט נימה באורך 30 ס"מ</td></tr><tr><td>לניקוב כלי הדם</td><td>Ethicon</td><td>Prolene 5-0</td><td>חתוך באורך 12 מ"מ</td></tr><tr><td>ציוד כירורגי</td><td>Fine Scientific Instruments</td><td>מלקחיים רפואיים #5, מספריים לכלי 8 ס"מ, מיקרוקליפ לסת</td><td></td> 4 מ"מ</tr></tbody></table>

מודל murine של תת עכבישי דימום

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

בפרסום הסרטון הזה במודל עכבר סטנדרטי של דימום תת עכבישי (SAH) מוצג. דימום הוא מושרה על ידי מעגל endovascular של ניקוב וויליס (קואליציית נשים לשלום) ומוכח על ידי ניטור לחץ תוך גולגולתי (ICP). ובכך חלוקת דם הומוגנית בחללים תת עכבישי המקיפים את מחזור הדם בעורקים וסדקים המוח הקטן מושגת. פיזיולוגיה של בעלי חיים היא מתוחזק על ידי אינטובציה, אוורור מכאני, וניטור רציף של פרמטרים פיסיולוגיים ולב וכלי דם שונים על השורה: טמפרטורת גוף, לחץ דם מערכתי, קצב לב, ורוויה של המוגלובין. וכך לחץ זלוף המוחי יכול להיות במעקב בחוזקה וכתוצאה מכך נפח פחות משתנה של דם extravasated. זה מאפשר סטנדרטיזציה טובה יותר של ניקוב נימה endovascular בעכברים והופך את כל המודל לשחזור מאוד. לכן הוא זמין למחקרים פרמקולוגיים וpathophysiological בסוג בר וגנטיly שינה עכברים.

תמותה ברגע שטכניקת הניתוח היא שולטת ההליך לא לעורר שום תמותה במהלך ניתוח. כמו כן דימום יכול להיות מושגת כמעט בכל בעלי החיים. תמותה לאחר ניתוח היא 30-40% עם רוב בעלי החיים מתים ביום 1 לאחר הניתוח (איור 5). ICP ערכים לאחר SAH ICP לפני הדימום הוא סביב 4 מ"מ כספית. דימום...

מודל עכבר סטנדרטי של דימום תת עכבישי על ידי מעגל intraluminal של הניקוב וויליס מתואר. ניקוב כלי ודימום תת עכבישי מנוטרים על ידי ניטור לחץ תוך גולגולתי. בנוסף פרמטרים חיוניים שונים נרשמים ומבוקר כדי לשמור על תנאים פיסיולוגיים.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לגרום לדימום תת-עכבישי סטנדרטי בעכברים. זה מושג על ידי חיבור החיה המורדמת למכשירי ניטור כדי לפקח על מצבים פיזיולוגיים במהלך הניתוח. השלב השני הוא יישום חיישנים למדידת זלוף מוחי ולחץ תוך גולגולתי כפרמטרים מרכזיים לזירוז דימום.לאחר מכן, הדימום התת-עכבישי נגרם על ידי ניקוב נימה אנדווסקולרי. השלב האחרון הוא לחלחל את החיה ולבודד את המוח כדי לדמיין את פיזור הדם האקסטרווזי. היתרון העיקרי בביצוע טכניקה זו בעכברים במקום רקס הוא שאנו יכולים לעשות שימוש בבעלי חיים טרנסגניים.בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון שאינטובציה, ניטור פיזיולוגיה רב-מודאלית, כמו גם הכנת כלי דם הם די מאתגרים לביצוע בעכברים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שקשה ללמוד את השלבים הכירורגיים. מי שתדגים את ההליך תהיה קתרין שולה, דוקטורנטית מהמעבדה שלי.יש לה ניסיון של יותר משנתיים בביצוע מודל SAH זה. כדי להתחיל, חיה מורדמת על פלטפורמה מלוכסנת העובדת תחת מיקרוסקופ, מושכת את הלשון בעזרת מלקחיים כפופים כדי לאתר את מיתרי הקול. לאחר הדמיה אינטובציה במהלך ההשראה עם צינור העשוי מצנתר ורידי בגודל 20.לאחר מכן, הנח את העכבר במצב נוטה ובדוק את המיקום הנכון של הצינור עם חתיכת כותנה או מיקרו קפנוגרף אם הוא ממוקם נכון. חבר את צינור האינטובציה למכונת הנשמה. אווררו את העכבר באוויר בחדר, בתוספת 25% חמצן.חבר את צינור האינטובציה למיקרו קפנוגרף. שמור על לחץ הנשיפה החלקי הסופי של פחמן דו חמצני ב-30 מילימטר כספית על ידי התאמת תדירות האוורור. לאחר החדרת בדיקת טמפרטורת פי הטבעת, הנח את החיה על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ב-37 מעלות צלזיוס, הנח חיישן אוקסימטר דופק טבעתי על הכפה האחורית הימנית.לאחר מכן, בצע חתך מעין לאוזן. למשוך את העור ולנתח את השריר הטמפורלי השמאלי מהעצם הטמפורלית. לאחר החשיפה, הדבק בדיקת מד זרימת דופלר לייזר על העצם הטמפורלית השמאלית.החזק את הגשושית במצב קבוע עד שהדבק מתקשה. קדחו חור בקוטר של כ-1.5 מילימטרים לתוך העצם הטמפורלית השמאלית בזמן הקידוח. מצננים את העצם במי מלח.כדי למנוע נזקי חום, הכנס את בדיקת הלחץ התוך גולגולתי לחלל הגולגולת ודחף אותה קדימה בצורה גבית ככל האפשר כדי למנוע נזק לרקמות ודימום. לאחר שהבדיקה מונחת כהלכה, תקן ואטום במלט ותן לו להתייבש במשך חמש דקות. כאשר המלט יבש, סובב את העכבר בזהירות למצב שכיבה.באמצעות טכניקות סטנדרטיות, צנתר את עורק הירך השמאלי לניטור לחץ דם רציף. לאחר שנמצא במקום, חבר את קטטר הירך למכשיר ניטור לחץ הדם. ראשית, פתח את העור עם זוג המספריים מעצם החזה ועד הסנטר.נתח דרך רקמת החיבור ודחף את בלוטות הרוק הצידה כדי לחשוף את עורק הצוואר המשותף השמאלי. בודד את ה- CCA מהרקמה שמסביב, הקפד לא לפגוע בעצב הנרתיק הממוקם באותו מעטפת רקמת חיבור. לאחר מכן, חשוף ובודד בזהירות את עורק הצוואר הפנימי ואת עורק הצוואר החיצוני.לאחר הבידוד, קשרו את ה-ECA רחוק ככל האפשר, סידרו מראש שתי קשירה נוספות סביב ה-ECA לשימוש מאוחר יותר באמצעות חסימת אפליקטור, ה-CCA וה-ICA באופן זמני עם מיקרו קליפסים. משכו בעדינות את התפסים לאחור כדי לוודא שהם מוחלים כהלכה. לצורך השראת דימום, אנו משתמשים בחוט פרולין חמש אפס באורך 12 מילימטר.חותכים חור קטן לתוך ה-ECA בעזרת מספריים לכלי ומכניסים את הנימה. לאחר שהחוט נמצא במקומו, סגור את מקום ההחדרה באמצעות אחת הקשרים שנקבעו מראש. לאחר מכן, הסר את מהדקי המיקרו עם האפליקטור של המיקרו קליפ כדי לגרום לדימום.קדם את החוט לתוך ה-ICA עד שה-ICP עולה. עלייה פתאומית של ה-ICP מצביעה על השראת דימום, משיכת החוט מיד וקשירת ה-ECA על ידי סגירת שתי הקשרים שנקבעו מראש ברציפות. זה מונע דימום ממקום ההחדרה.לתפור את פצע העור ולעקוב אחר הפרמטרים הפיזיולוגיים של החיה למשך 20 דקות נוספות. בתום תקופה זו, הסר את בדיקות ה-ICP וה-LDF לאחר זלוף טרנס-קרדיאלי. הסר את המוח והעריך את חלוקת הדם בחלל התת-עכבישי לפני הדימום, ה-ICP הוא בסביבות ארבעה מילימטרים.דימום כספית גורם לעלייה חדה של ה-ICP עד 120 מילימטרים. ערכי הכספית ICP מתייצבים תוך חמש דקות בכ-30 מילימטר כספית. בנוסף, לחץ הדם עולה מיד לאחר הדימום.ערכי מד זרימת דופלר לייזר מייצג אינדוקציה לאחר אינדוקציה מראים ירידה דרמטית בזלוף המוח לרמה שונה באופן אינדיבידואלי מתרחשת תוך חמש דקות לאחר העלבון. בדוגמה זו נצפתה חלוקת דם לאורך עורקי אספקת המוח וסדקים במוח. שלוש שעות לאחר הדימום, קווים אדומים מצביעים על פיזור דם לאורך עורקי האספקה למוח.הצד המקביל לדימום היה מכוסה ביותר דם מאשר ההמיספרה הנגדית שנראה. להלן עקומת ההישרדות בעקבות SAH ב-49 עכברים זכרים, C 57 BL שישה עכברים. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לעקוב אחר התנאים הפיזיולוגיים כדי להבטיח כמות דימום הניתנת לשחזור לאחר התפתחותו.טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הדימום התת-רשתית לחקור את מנגנוני הנתיב של איסכמיה מוחית מוקדם לאחר העלבון.

a-murine-model-of-subarachnoid-hemorrhage

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

דימום תת עכבישי Aneurysmal (sah) הוא דימום שמתרחש בחלל תת העכבישים כאשר נקרע מפרצה. בעוד התחלואה והתמותה מהאירוע הזה כבר על ירידה עקב גישות טיפול משופרים, הסיכון של vasospasm לאחר דימום subarachnoid ממשיך להיות כפי שהיה לפני מספר שנים. החשיבות של הקמת מודל חיה מקיפה ולשעתק לזהות אירועי ייזום של vasospasm מוחות כבר למוקד של מחקר מאז השימוש הראשון של חולדות במודל vasospasm ניסיוני בשנת 1979 על ידי...

מודל חולדת תמותה נמוך להערכת Vasospasm מוחות המושהה לאחר דימום subarachnoid ניסויי

הסרטון מדגים את השראת הדימום התת עכבישי באמצעות ניקוב אנדו-וסקולרי במודל עכבר. חתך נעשה באזור הצוואר של העכבר המרדים כדי לגשת לעורק התרדמה המשותף ואת bifurcation שלה. חוט להט מוכנס דרך העורקים כדי לנקב ענף עורק תוך גולגולתי, גרימת דימום תת-עכבישי.

השראת דימום תת-עכבישי במודל עכבר באמצעות ניקוב אנדוסקולרי

סרטון זה מדגים את הנוהל להקמת מודל חולדה לדימום תת-עכבישי. חולדה מורדמת מושתלת בבדיקות למדידת לחץ תוך גולגולתי וזרימת דם מוחית. אתר המטרה מזוהה, והמחט מוחדרת במצב טרום-כיאזמטי. לאחר מכן מוזרק דם אוטולוגי לחלל התת-עכבישי, מגביר את הלחץ התוך גולגולתי ומפחית את זרימת הדם המוחית, ומבסס את המודל.

הקמת מודל חולדה דימום תת-עכבישי המושרה על ידי הזרקת דם אוטולוגית

המודל הניסיוני של דימום תת-עכבישי (SAH) בדם מבוקר לחץ תוך גולגולתי בארנב משלב את ההליכים הסטנדרטיים - קנולציה של העורקים התת-בריחיים וניקוב צינורא מגנה דרך העור, המאפשר חיקוי קרוב של מצבים פתופיזיולוגיים אנושיים לאחר SAH. אנו מציגים הוראות שלב אחר שלב ודנים בנקודות כירורגיות מרכזיות ליצירת SAH ניסיוני מוצלח.

דגם ארנב דם מחלף לחקר חריף והמאוחר Sequelae של דימום תת עכבישים: היבטים טכניים

מטרת מאמר זה היא להציג שיטה המאפשרת שחזור תלת-ממדי של העץ כשאבדן בעכברים לאחר מיקרו שחושב טומוגרפיה והנחישות של אמצעי אחסון של מקטעי כל כלי יכול לשמש כדי לכמת vasospasm מוחין ב מודלים מאתר של דימום תת-עכבישי.

שיטה הנפחי עבור כימות Vasospasm המוחית במודל מאתר של דימום תת-עכבישי

תיארנו בפרוטוקול זה מודל עכבר מתוקננת של דימום תת-עכבישי (SAH) על ידי הזרקה כפולה של דם מלא אוטולוגי לתוך הבור מגנה. רמת הסטנדרטיזציה הגבוהה של הליך ההזרקה הכפולה מייצגת מודל בינוני עד אקוטי של SAH עם בטיחות יחסית לגבי תמותה.

הזרקת דם ישירה כפולה לתוך מגנה צ'יסטרנה כודל של דימום Subarachnoid

דימום תת-קרקעי ממשיך לשאת נטל גבוה של תמותה ותחלואה באדם. כדי לאפשר מחקר נוסף על המצב והפתופיזיולוגיה שלו, מוצג מודל פרה-כיאזמטי, הזרקה יחידה.

טרום כיאזמטי, הזרקה יחידה של דם אוטולוגי כדי לגרום לדימום ניסיוני subarachnoid במודל חולדה

כאן אנו מציגים מודל עכבר SAH סטנדרטי, המושרה על ידי ניקוב נימה אנדווסקולרית, בשילוב עם הדמיית תהודה מגנטית (MRI) 24 שעות לאחר הניתוח כדי להבטיח את אתר הדימום הנכון ולא לכלול פתולוגיות תוך גולגולתיות רלוונטיות אחרות.

מודל ניקוב אנדווסקולרי לדימום תת-עכבישי בשילוב עם דימום תהודה מגנטית (MRI)

מודל עכברי של ריפוי פצע עורי שניתן להשתמש כדי להעריך את התרכובות טיפוליות בהגדרות פיסיולוגיות וpathophysiological.

מודל עכברי של ריפוי פצע

שינויים היסטולוגית ויוכימי לאחר הרחקת endograft פרצה עדיין אינם ברורים. אנו מתארים מודל חדש של השתלת endograft על פרצה עכברית. באמצעות ניתוח פקיק עם ובלי ממשק persistant מחזור דם זרם, והערכת חומרים ביולוגית endovascular חדש, מודל זה יסייע להבין טוב יותר pathobiology הדרה מפרצת endovascular.

דגם Murine חדש של מפרצת אבי העורקים תיקון Endovascular

חקור מודל מכרסם סטנדרטי ליצירת דימום תת עכבישי בעכברים באמצעות ניקור כלי דם אנדווסקולרי. שיטה זו מאפשרת ניטור לחץ תוך גולגולתי והדמיית התפלגות הדם במוח לחקר מנגנוני מחלה נוירולוגיים.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

גלה סרטונים נוספים