Name: במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו M-המצב פולשנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: למדו כיצד למדוד קצב לב של עוברי עכברים ברחם ביום עוברי 18.5 באמצעות אולטרסאונד מצב M פולשני. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של תפקוד הלב העוברי ללא פגיעה במצב הפיזיולוגי, ותומכת במחקר מחלות לב מולדות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים מנון Laprise לאימונים באקו ואן Chamberland על שהקדשת מהתמונות שמוצגת באיורים 1 ו -2. עבודה זו נתמכה על ידי מכון קנדי ​​לחקר בריאות MOP מענק 44363 וקנדה יו&quot;ר 950-216,684.

כל הנהלים שמוצגים בפרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים IRCM. 1. אולטראסאונד מערכת ותחנת הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את מערכת ההדמיה אולטרסאונד ולהתחבר scanhead כמו גם את יחידת הבקר פיזיולוגיה על פי הוראות היצרן (איור 1). בחר לב תכנית המדידה וscanhead שמתאים למתמר 30 MHz. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא מזנקים של scanhead עם מים deionized. למנוע בועות אוויר כמו שהם מפריעים להדמיה ברזולוציה. הנח את scanhead עם צד הידית עד למחזיק בה בסמוך לפלטפורמת ההדמיה (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את פלטפורמת ההדמיה ופינת עבודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למלא לגמרי את הבקבוק של ג&#39;ל אולטרסאונד, כדי למנוע היווצרות של בועות ולמקם אותו במהופך בסט מיכל prewarming 37 ° C (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הרמות של Oxygen ומערכת צינורות להרדמה isoflurane ו. ניסוי אחד עם ~ 8 עוברים ישתמש כ 15-20 חמצן L. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבקבוקים של מרככי עיניים, קרם מקריח וג&#39;ל אלקטרודה ליד פלטפורמת ההדמיה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שפונקציות מנורת חום אינפרא אדום. במהלך אימון, הגדר את רמת החום, את עמדתה של המנורה ואת המרחק של המנורה לעכברים כדי לשמור על טמפרטורת גוף קבועה וקצב לב. הערה: ההכנה נכונה של המערכת והחומר היא קריטית. הליכים ממושכים עשויים להשפיע על המאפיינים הפיזיולוגיים והמודינמית של עוברים כהרדמה ארוכה מדכאת את תפקוד לב על ידי הפחתת קצב לב, לחץ דם ורמת חמצון בדם. העיבוד בזמן ל~ 8 עוברים (גודל המלטה ממוצע בC57BL / 6) צריך להיות כ 1 שעות. זני עכבר אחרים עשויים לספק מספר גבוה יותר של עוברים, ואולי עם גודל נקבה גדול יותר. אימון הוא חיוני כדי לייעל את processiזמן ng. </li></ol> 2. עכבר הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את הנקבה בהריון בתא עם אספקה ​​רציפה של 2% isoflurane בחמצן (200 מיליליטר / דקה) עד שהוא הופך nonresponsive. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על פלטפורמת ההדמיה במצב שכיבה, להתאים את הצינור לשאיפה מתמדת של isoflurane 1.5% בחמצן (200 מיליליטר / דקה), ולתקן את צינור שאיפה עם (איור 2 א) קלטת. הרדמה מספיק צריכה להיות אישרה במהלך ההליך על ידי התנוחה הנינוחה של העכבר והעדר כל תגובה לצובט זנב ובוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ג&#39;ל אלקטרודה המקום היחיד בחלק העליון השמאלי ורפידות האלקטרודה ימנית תחתונה (מימין קדמי רגל ורגל השמאלית אחורית, המכונה גם עמדה השנייה עופרת) לelectrocardiography. עופרת העמדה השנייה מספקת מוגדר טוב יותר P-גל זקוף חיובי וQRS מורכב כדי לקבוע את קצב לב. אבטח את ארבע כפות רגליים לכל משטח באמצעות (איור 2 א) קלטת. כדי למנוע יובש בעיניים, להחיל 1 טיפה שלמזור עיניים לכל עין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הבטן מחזה לשלפוחית ​​שתן עם גוזז שיער. לאחר מכן להחיל קרם מקריח למשך 2 דקות ונגב אותה בעזרת גזה ו / או מקלון צמר גפן כדי להסיר כל שיער שנשאר בזהירות. היזהר שלא לחתוך את הפטמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את המדחום prelubricated עם ג&#39;ל אלקטרודה לתוך פי הטבעת של הנקבה כדי לפקח על טמפרטורת הגוף (יש לשמור על 37 ± 0.5 ° C על ידי התאמת מנורת חום אינפרא אדום ממוקמת מעל הפלטפורמה). קצב לב צריך להיות 450 ± 50 פעימות / דקה (BPM). טמפרטורה וקצב לב הן מוצגים ביחידת בקר פיזיולוגיה (איור 1). הערה: הרדמה ארוכה, נשירת שיער וג&#39;ל קולי (אם כי prewarmed) יכולה להוביל להיפותרמיה, אשר יכול להשפיע על קצב הלב של הנקבה. אם טמפרטורת הגוף יורדת מתחת 36.5 ° C, להפסיק את ההליך ולשנות את עמדתה של מנורת החימום כדי להתאים את הטמפרטורה ואת קצב הלב. חכה כמה דקות befבצר ימשיך שוב. </li></ol> 3. זיהוי עובר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות מטה על הבטן בעירום כדי לאתר את העוברים. לאט ובקלילות פרוש להם יש רוב של עוברים בשכבה אחת מתחת לפני שטח הבטן. בכל קרן רחם, שקים הם ליניארי מחוברים זה לזה. נסה לכבד את הסדר הזה כשמתפשט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מארק כל עובר על בטן העירום של הנשים עם סמן קבע עם קדמי / אחורי וכיווני הגחון גב / שלהם. לדעת את הכיוון יאפשר איתור הלב עם החללית. מספר העוברים בצד הימין וקרנות עזבו החל מצוואר הרחם (1, 2, 3 ... ו1 &#39;, 2&#39;, 3 &#39;... בהתאמה; איור 2). הערה: (i) הימנע מלהפיץ את העוברים בכוח מוגזם. לשרטט את מיקומם על פיסת נייר כדי לעקוב אחריהם (איור 2 ג). (Ii) יש לי C57BL / 6 נקבות ~ 8 עוברים בכל המלטה. עם זאת, 0-2 עובר בכל המלטה הוא located מתחת לאחרים, מה שהופך את ההדמיה שלהם בלתי אפשרית. תכלול עוברים אלה מהניתוח ולהעריך יותר המלטות במידת הצורך. </li></ol> 4. מדידת קצב לב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כמות קטנה של ג&#39;ל אולטרסאונד prewarmed על בטן עירומה ולהפיץ אותה באופן שווה. למנוע היווצרות בועה. להוסיף כמות גדולה יותר של ג&#39;ל (~ 5 מיליליטר) באזור המסוים לתמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הבדיקה במגע עם השכבה העבה ג&#39;ל (10 מ&quot;מ) ולהזיז את החללית בהדרגה לכיוון העור תוך מבט ללב הפועם. ברגע שהלב הפועם מוצג על המסך, להתאים את הזווית של החללית יש שני חדרים בגודל הגדול ביותר שלהם במטוס ההדמיה (איור 2 ד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין רכישת תמונה. עם הזרוע מונחת על התחנה, למקם את המתמר על הג&#39;ל אולטרסאונד כדי לקבל תמונה בשידור חי במסך הצפייה (איור 2 ד). שמירה על הרכס של המתמר בחלק העליון ולחיצה על נטייה scanheadסמן n (בפינה השמאלית העליונה של התמונה) מאפשר התיאום של תנועת היד והאזור דמיינו על המסך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מצוואר הרחם, לעבור לעובר הקרוב המסומן (1 או 1 &#39;בקרן רחם ימינה או שמאלה, בהתאמה) כדי להמחיש את הלב הפועם על המסך. בגלל עומק מוקד קבוע, בעדינות להזיז את החללית למעלה / למטה ולצדדים מבלי לאבד מגע עם ג&#39;ל להשיג מטוס תמונה הרצויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הלב הפועם במרכז המסך באזור המסומן בקו המקווקו הצהוב המייצג את אזור המוקד לרכישת נתונים טוב יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש את הקלטת החיה. השג את תמונת הסקאוט ולחדש את ההקלטה (איור 3 א). ברגע שמינימום של 10 שניות של הקלטה יציבה מתקבל, לעצור את ההקלטה ולשמור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך לעובר הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שכל העוברים מנותחים, &quot;עיון&quot; לחץ במקלדת כדי להציג את רשימת ההקלטות. שחק כל טרייסי M-מצב נרשמהng ולבצע מדידות מרובות (לפחות 5 לעקיבה) של המרווח בין פסגות סמוכות (זמן / זרימת מחזור) כדי להשיג את קצב לב הממוצע (איור 3 ב). הערה: פרוטוקולים יש הטוענים שימוש במעמד נייח לscanhead להימנע מטלטול. עם זאת, הוא מרסן את הזווית של ניתוח, מה שהופך את ההתבוננות בעוברים לרוחב קשה. היא גם מאיטה את הניתוח, כעמדה צריכה להיות מותאמת לכל עובר. מחזיק scanhead תוך יישוב הזרוע בתחנת יעילות ממזער רועד. אימון עם 5-10 נשים בהריון מומלץ כדי לייעל את התוצאה. </li></ol> 5. Genotyping <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים כירורגית נקיים ומלקחיים, לחתוך אורכי העור ושכבת שריר של הבטן. אתר את שקים בכל קרן רחם ולהתאים את המספרים. גזור לפתוח את שק החלמון לחשוף את העובר בצו שימוש מעל. אם לא בהסדר ליניארי, הסקיצה של עמדות עובר על פיסהנייר יהיה חיוני ברגע שהסימנים על העור כבר לא נראים לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך רק ~ 4 מ&quot;מ מזנב לגנוטיפ כמו הדנ&quot;א הגנומי מופק ביעילות רבה מזנבות עובריים. הערה: (i) ההליך כירורגי יכול להיות שיש לבצע במיקום נפרד מחדר ההדמיה. עם זאת, חשוב שלא להזיז את העכבר ויש לי את ההליך כירורגי על פלטפורמת ההדמיה כדי לעקוב אחר העוברים הממוספרים. התייעץ עם מנהל מתקן בעלי החיים כדי לייעל את ההליך הכירורגי. (Ii) הנקבה בהריון במהירות מתה כתוצאה מאיבוד דם כעוברים יוסרו לגנוטיפ לאחר הדמיה. לאחר קיצוץ זנב, העוברים ממוקמים 3 דקות על קרח להרדמה על ידי היפותרמיה ולאחר מכן ערפו את הראש עם מספריים, כפי שהומלצו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים שלנו. </li></ol>

<ol><li>Hoffman, J. I., Kaplan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The incidence of congenital heart disease.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 39, 1890-1900 (2002).</li>
<li>Miller, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+brain+development+in+newborns+with+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Abnormal brain development in newborns with congenital heart disease.</a> N. Engl. J. Med. 357, 1928-1938 (2007).</li>
<li>Bruneau, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developmental+genetics+of+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The developmental genetics of congenital heart disease.</a> Nature. 451, 943-948 (2008).</li>
<li>Wessels, A., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+anatomy+of+the+heart%3A+a+tale+of+mice+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Developmental anatomy of the heart: a tale of mice and.</a> 15, 165-176 (2003).</li>
<li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ENU+induced+mutations+causing+congenital+cardiovascular+anomalies%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">ENU induced mutations causing congenital cardiovascular anomalies.</a> Development. 131, 6211-6223 (2004).</li>
<li>Seidah, N. G., Prat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+and+therapeutic+targeting+of+the+proprotein+convertases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The biology and therapeutic targeting of the proprotein convertases.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 11, 367-383 (2012).</li>
<li>Roebroek, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+ventral+closure+and+axial+rotation+in+embryos+lacking+the+proprotein+convertase+Furin%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Failure of ventral closure and axial rotation in embryos lacking the proprotein convertase Furin.</a> Development. 125, 4863-4876 (1998).</li>
<li>Roebroek, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+redundancy+of+the+proprotein+convertase+furin+in+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Limited redundancy of the proprotein convertase furin in mouse liver.</a> J. Biol. Chem. 279, 53442-53450 (2004).</li>
<li>Kisanuki, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tie2-Cre+transgenic+mice%3A+a+new+model+for+endothelial+cell-lineage+analysis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tie2-Cre transgenic mice: a new model for endothelial cell-lineage analysis in vivo.</a> Dev. Biol. 230, 230-242 (2001).</li>
<li>Kim, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+endothelial+furin+leads+to+cardiac+malformation+and+early+postnatal+death%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Loss of endothelial furin leads to cardiac malformation and early postnatal death.</a> Mol. Cell Biol. 32, 3382-3391 (2012).</li>
</ol>

אין ניגוד האינטרסים הכריז.

אקו M-המצב הוא שיטה יעילה ופשוטה למדידה בקצב לב ברחם של עוברי עכברים. מתמרים זמין מסחרי לספק רזולוציה מספיקה כדי להמחיש את לב פועם קטן. לפיכך, הם מאפשרים מדידת קצב לב מאוד מדויקת, בהשוואה לשיטות אחרות כגון מדידת דופק, ויכולים להוות תחליף מיקרוסקופיה וידאו ברזולוציה גבוהה. עם זאת, כלים הנוכחיים אינם מאפשרים ניתוח סימולטני של כל העוברים, רומזים הליך מייגע לדמיין כל אחד מהעוברים. בנוסף, השדה הצר היחסי של תצוגה והיעדר עומק שדה (2D-תמונה) דורשים התאמה ידנית תושג רק על...

מחלת לב כלילית הוא הגורם המידבק השכיח ביותר למוות בלידה 1. ניתוחים רבים לעתים קרובות יש צורך לתקן את הליקויים המבניים בנושאי איכות החיים, שעשוי להישאר בסכנה 1. ילדים עם מחלת לב כלילית בתדירות גבוהה לפתח הפרעות נוירולוגיות גם אם הם לא עברו ניתוח, מה שמעיד חשוב בהשלכות רחם על 2,3 פיתוח. גורמים גנטיים והן סביבתיים, כגון חשיפה לוירוסים או חומרים כימיים (אלכוהול) במהלך הריון, מחלת לב כלילית גורם. לומדים תורמים הגנטיים הוא עדיין בשלב המוקדם שלה, אבל גדל במהירות. לזהות התורמים האלה ולהבין את תפקידם בהתפתחות לב, Phenotyping עכברים שעברו מוטציה עם כלי פשוט ורב עוצמה יהיה מאוד מועיל. עכבר הוא אכן מודל חיה של בחירה ללמוד מחלת לב כלילית, ורוב המקרים של בני אדם יכול להיות מועתק בעכברים 4,5. כתוצאה מכך, phenotyping לב עוברי בעכבר הפך incחשוב reasingly לחקור אטיולוגיה של מחלת לב כלילית אדם ודורש כלים מתאימים. למרות שמחקרים היסטולוגית על דגימות קבועות הם לא יסולא בפז, הדמיה של בעלי חיים בזמן אמת היא חיונית כדי להבין את הפיסיולוגיה של הלב. מיקרוסקופיה וידאו מציעה הדמיה לחיות. עם זאת, זה דורש laparotomy לחשוף עוברים, וכך לפגוע במדינה הפיזיולוגית והמודינמית שלהם. לאחרונה, אקו הפך את טכניקת ההדמיה סטנדרטית להערכות לב במרפאת, כמו גם בעכברים. אקו העוברי בעכבר מתבצע באמצעות מערכות סטנדרטיות קליניות אולטרסאונד, כמו גם מערכות אולטרסאונד אולטרה תדירות גבוהה. האחרון מספק 30 MHz או מתמרים תדר גבוה יותר שיוצרים דימויים דו ממדים ולאפשר ההערכה של שלבים עובריים המוקדמים. יש לי מתמרים אלו עומק חדירה נמוך יחסית (~ מ&quot;מ 13), שהוא, לעומת זאת, מספיק כדי להשיג מטוסי הדמיה נאותים ולקבוע הרשות לב בסיסיתrameters, כגון קצב לב, בקוטר הפנימי של חדר שמאל וימין בירוויח והתכווצות ומחצה ועובי קיר, בלי לבצע פיום בטן. במחקר שלנו, יש לנו בשימוש מערכת אולטרסאונד-Ultra High Frequency כדי להעריך את קצב לב של עוברי עכברים בE18.5 היום עוברי. בחרנו מתמר 30 MHz המספק תצוגת תחום 20 מ&quot;מ x 20 מ&quot;מ, שהוא אידיאלי בהתחשב בגודל של העוברים, עם אורך מוקד של 12.7 מ&quot;מ. עם זאת, מתמר תדר גבוה יותר ניתן לבחור כדי לנתח שלבי התפתחות מוקדמים יותר. M-המצב שנבחר מאפשר ההדמיה של רקמות בבזכות תנועה לרזולוציה גבוהה זמנית של 1,000 מסגרות / sec. ההליך המלא הוא פשוט וצריך להתבצע במהירות אפשרית, כדי למנוע כל הפרעה של המדינות הפיזיולוגיות והמודינמית של העובר. הניתוח של כ -8 עוברים דורש כ 1 שעות.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>CP0406v2</td><td>1-כלורו-2,2,2-טריפלואורואתיל דיפלואורומתיל אתר</td></tr><tr><td>אולטרסאונד ג'ל</td><td>מעבדות פרקר בע"מ</td>ג'ל אלקטרודות שקוף <td></td><td>Aquasonic</td></tr><tr><td></td><td>מעבדות פרקר בע"מ</td><td>ספקטרה 360</td><td></td></tr><tr><td>ג'ל עיניים</td><td>נוברטיס</td><td>קרם דמעות ג'ל</td><td></td></tr><tr><td>להסרת שיער</td><td>צ'רץ' דווייט ושות', בע"מ</td><td>Nair</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ</td><td></td><td></td><td></td>שיער</tr><tr><td>גזה / החלפת כותנה</td><td>Q-tips</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טוש</td><td></td><td></td><td></td>קבוע</tr><tr><td>ברזולוציה גבוהה In vivo מערכת הדמיית אולטרסאונד</td><td>Visual Sonics</td><td>Vevo770</td><td></td></tr><tr><td>30 MHz מתמר</td><td>Visual Sonics</td><td>פלטפורמת</td> הדמיה RMV707B <td></td></tr><tr><td>ו יחידת בקר פיזיולוגיה</td> מערכת הרדמה <td>Visual Sonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Cyprane North America Inc.</td><td></td><td></td>312462</tr><tr><td>מנורת</td><td></td><td></td><td></td> חימום אינפרא אדום</tr></tbody></table>

במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו m-המצב פולשנית

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

מחלת לב מולדת (CHD) היא הגורם המידבק השכיח ביותר למוות בלידה. השכיחות של מחלת לב כלילית נעה 4-50 / 1, 000 לידות (מחלות ואומדני פגיעה אזוריים, ארגון בריאות עולמי, 2004). ניתוחים שלעתים קרובות להתפשר על איכות החיים נדרשים לתיקון מומי לב, מזכירים לנו את החשיבות של מציאת הגורמים למחלת לב כלילית. מודלים עכבר שעברו מוטציה וטכנולוגיה הדמיה לחיות הפכו לכלי חיוני ללמוד אטיולוגיה של מחלה זו. למרות שיטות מתקדמות מאפשרות הדמיה חיה של לב חריג בעוברים, המדינות הפיזיולוגיות והמודינמית של זה האחרון לעתים קרובות נפגעים כתוצאה מניתוחים ו / או ארוכים. אולטרסאונד הדמיה לא פולשנית, לעומת זאת, ניתן להשתמש ללא ניתוח חושף את העוברים, ובכך שמירה על הפיסיולוגיה שלהם. בזאת, אנו משתמשים באולטרסאונד M-מצב פשוט כדי להעריך את קצב לב של עוברים בE18.5 ברחם. זיהוי של קצב לב לא תקין הוא אכן אינדיקה טובהטור של חוסר תפקוד של לב ובכך מהווה שלב ראשון בזיהוי של ליקויים התפתחותיים שעלולות להוביל לאי ספיקת לב.

השיטה הנ&quot;ל הייתה בשימוש כדי להעריך את ההשפעה של הנוכחות או עדר של furin פרוטאז סרין בתאי האנדותל בקצב לב של עוברי עכברים בE18.5 ברחם. Furin שייך למשפחה של convertases proprotein (מחשבים) שמבשרי החלבון ידבקו אחרי שאריות בסיסיות. Furin והמצעים שלה הם חלבוני הפרשה ומחשוף יכול להתרחש במנגנון Golgi, endosomes או על פני התא. מצעי מפתח של furin כוללים TGFb, וגורמים כמו TGFb, כגון חלבוני morphogenetic העצם (BMPs) שמשחקים תפקיד חשוב בהתפתחות לב. חברים אחרים במשפחת המחשב יכולי...

אולטרסאונד בתדירות גבוה במיוחד הוא כלי הדמיה חיה רב עוצמה כדי לבחון מומים לב בבעלי חיים קטנים. noninvasiveness שלו מאפשר שמירה על המצב הפיזיולוגי של עוברים. בזאת, אנו מציגים את השימוש באולטרסאונד M-mode כדי למדוד את קצב הלב של עוברים בE18.5 ברחם.

במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו M-המצב פולשנית

Congenital heart disease (CHD) is the most frequent noninfectious cause of death at birth. The incidence of CHD ranges from 4 to 50/1,000 births (Disease ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד את קצב הלב של עוברים של עכבר ברחם ביום E 18.5 באמצעות אולטרסאונד פשוט במצב M. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הצבה מאובטחת של הנקבה ההרה על הפלטפורמה תחת הרדמה רציפה. בשלב השני, מיקום העוברים מזוהה לאורך האפידרמיס של בטנה של הנקבה.השלב השלישי הוא מדידת קצב הלב של כל עובר באמצעות מתמר של 30 megahertz. לאחר מכן, נאספים הזנבות של העוברים לצורך גנוטיפינג. בסופו של דבר, התוצאות יכולות להראות כיצד נקבע קצב הלב של כל עובר ברחם על ידי מדידת הזמן שלוקח מחזור לבבי אחד ב-milliseconds.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון מיקרוסקופיית וידאו, הוא שמדובר בשיטה פשוטה שתוכננה עבור מומחים ולא-מומחים כאחד, והיא מספקת מדידות מדויקות מאוד של קצב הלב. הכנה נכונה של המערכת והחומרים היא קריטית, שכן הליך ממושך מדי עלול להשפיע על המאפיינים הפיזיולוגיים וההמודינמיים של העוברים. הפעל את מערכת הדמיות האולטרסאונד.חברו את ראש הסריקה התואם למתמר ב-30 megahertz וחברו את יחידת בקרת הפיזיולוגיה ליחידת הבקרה. בחרו בתוכנית למדידה לבבית. לאחר מכן, מלאו את קצה האף של ראש הסריקה במים מיוננים.הימנעו מבועות אוויר שכן הן פוגעות ברזולוציית הדימות. הניחו את ראש הסריקה כאשר הידית פונה כלפי מעלה על מעמדו, בסמוך לפלטפורמת הדימות באזור העבודה המחוטא, ומלאו לחלוטין את בקבוק ג'ל האולטרסא

in-utero-measurement-heart-rate-mouse-noninvasive-m-mode

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אקו Transthoracic מציעה שיטה לא פולשנית להערכת תפקוד הלב בעכברים. שילוב של אולטראסאונד דופלר שיטות הדמיה ניתן להשתמש כדי להשיג מדידות ממדי של הלב ואת זרימת הדם intracardiac, אשר יחדיו מספקים הערכה של הסיסטולי והדיאסטולי לב וביצועים.

אקו Transthoracic ב עכברים

וידאו זה מדגים שימוש רכבת רכוב בתדירות גבוהה בדיקה אולטרסאונד לבצע אקו על העכבר בהרדמה. שיטות מתארים הן מדידות דו מימדי ו-M-mode קונבנציונלי של תפקוד הלב בנוסף, הכלים החדשים חזקים יותר כגון צבע דופלר, ניתוח המתח, כמו גם בניגוד הדמיה בכלל ממוקדות.

אקו Murine והדמיה אולטראסאונד

מדידת לחץ חדר שמאל (LV) בעכברים עובריים בילוד מתואר. הלחץ נמדד על ידי החדרת מחט מחוברת מתמר מלא נוזלים לתוך LV בהנחיית אולטרסאונד. יש להקפיד לשמור על תפקוד הלב תקין במהלך פרוטוקול הניסוי.

מדידת לחץ חדרית השמאל עכברים עובריים ילודים המאוחרת

מוות עובר ולידה הוא תכונה נפוצה כאשר לומדים שינויים גנטיים המשפיעים על התפתחות לב. הדמית אולטרסאונד בתדר גבוה השתפרה רזולוצית 2-D ויכולה לספק מידע מצוין על התפתחות מוקדמת ולב היא שיטה אידיאלית כדי לזהות את ההשפעה על מבנה ותפקוד לב לפני המוות.

אקו העוברי Murine

סרטון זה מתאר פרוטוקול לביצוע אקוקרדיוגרפיה על עכבר מעבדה.

אקוקרדיוגרפיה של עכבר: טכניקה לא פולשנית להערכת מורפולוגיה של הלב

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להזריק סוכני אולטרסאונד ניגוד microbubble לחיים, עוברים עכברי שלב מאוחר-הריון מבודד. שיטה זו מאפשרת הלימוד של פרמטרים זלוף ושל סמנים מולקולריים של כלי דם בתוך העובר באמצעות הדמיה אולטרסאונד בתדר גבוה חומר ניגוד.

הדמיה ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות תדר גבוהים אולטראסאונד

אולטראסאונד בתדירות גבוהה הדמיה של העכבר עוברית השתפרה דימות ברזולוציה, יכול לספק אפיון פולשני מדויק של התפתחות הלב, פגמים מבניים. פרוטוקול המתוארים במסמך זה מיועדת לביצוע בזמן אמת עוברי עכברים אקוקרדיוגרפיה ויוו.

הדמיה באמצעות מערכת סאונד בתדירות גבוהה (30 / 45MHZ) וכלי דם עוברי העכבר

כאן אנו מתארים ומשווים שתי עמדות לקבלת השקפה של ארבעה קאמריים בעכברים. תנוחות אלה מאפשרות את כימות התפקוד הימני של הפונקציה, לספק תוצאות דומות, ניתן להשתמש לסירוגין.

המדידה האקוקרדיוגרפית של פרמטרים של הימני החדרית בעכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול אלקטרוקרדיוגרפיה (ECG) פולשנית, הממוטב לעכברים לאחר הלידה המוקדמת, שאינו דורש שימוש בהרדמה.

אלקטרוקרדיוגרפיה לא פולשנית בעכבר פרילינטל

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הערכה אקוקרדיוגרפית של מורפולוגיה של חדר שמאל, תפקוד וזרימת דם כלילית בעכברים בני 7 ימים.

אפיון אקוקרדיוגרפי של מבנה החדר השמאלי, תפקודו וזרימה כלילית בעכברים ילודים

למדו כיצד למדוד קצב לב של עוברי עכברים ברחם ביום עוברי 18.5 באמצעות אולטרסאונד מצב M פולשני. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של תפקוד הלב העוברי ללא פגיעה במצב הפיזיולוגי, ותומכת במחקר מחלות לב מולדות.

במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו M-המצב פולשנית

גלה סרטונים נוספים