שיטה לחקר ההשפעה של כשל שחל מושרה כימי ביכולת גופנית ולב הסתגלות בעכברים

שתי פרדיגמות תרגיל נבדקו על חדש שפותח במודל עכבר בגיל המעבר כימי שגרם לבחון את ההשפעה של גיל המעבר על יכולת גופנית והסתגלות לב לפעילות גופנית.

המטרה הכוללת של הליך זה היא להאיץ את התהליך הטבעי של אטרזיה זקיקית בשחלות, ובכך לגרום לכשל שחלתי, דלדול אסטרוגן ונקבה שאינה רוכבת על אופניים, מצב המחקה מקרוב את גיל המעבר. זה מושג על ידי מתן ראשון במשך 15 עד 20 ימים רצופים, הכימיקל התעסוקתי לוויניל ציקלין דו חמצני או VCD, שהוכח כמכוון באופן ספציפי והורס זקיקי שחלות ראשוניים וקדמוניים קטנים על ידי האצת תהליך האטרזיה הטבעי שלהם. השלב השני הוא קביעת מחזור האסרה ומחזוריות השחלות על ידי ציטולוגיה נרתיקית החל משישה שבועות לאחר תחילת זריקות VCD.

יש להבחין בציטולוגיה נרתיקית של 15 עד 20 ימים של DSTE מתמשך או אי-רכיבה על אופניים כדי לאשר אובדן מחזוריות ואי ספיקת שחלות. השלב האחרון הוא יישום התערבות שעלולה להיות מושפעת מגיל המעבר או מהמעבר לגיל המעבר, כגון פעילות גופנית מרצון בגלגל הכלוב והסתגלות לבבית. בסופו של דבר, פעילות גלגל כלוב מרצון והסתגלות לבבית משמשות כדי להראות אם גיל המעבר מפחית את פעילות גלגל הכלוב.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון אקטומיה, הוא שכריתת אסטרוגן היא הליך כירורגי המביא לדלדול פתאומי של אסטרוגן, בניגוד לאובדן האסטרוגן המתקדם הטבעי כפי שקורה במהלך המעבר לפני גיל המעבר לאחריו. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול במחלות מטבוליות ומחלות לב וכלי דם בנשים לאחר גיל המעבר מכיוון שנשים לאחר גיל המעבר רגישות במיוחד לתסמונת המטבולית ולמחלות נלוות אליה, כולל מחלות לב וכלי דם בהשוואה לנשים לפני גיל המעבר. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שקשה ללמוד את שלבי הציטולוגיה הנרתיקית מכיוון שיש להקפיד על ביצוע טכניקת המריחה הנכונה וזיהוי מחזור ה-EST.

ארבע, ויניל ציקלין דו חמצני או VCD מאוחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס. להכנת VCD לפרוטוקול ההזרקה, הוסף נקודה 587 מיליליטר VCD לבקבוקון מינון נקי והביא את הנפח הסופי ל-10 מיליליטר עם שמן שומשום מכסה ואוטם עם פרם ומערבב על ידי היפוך עדין. יש לאחסן בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס עד שבעה ימים.

כדי להתחיל בפרוטוקול הזרקת VCD, יש לשקול שני עכברים בגיל חודשיים במשך 20 ימים רצופים, לתת זריקות תוך-צפקיות יומיות של VCD בטמפרטורת החדר במינון של 160 מיליגרם לקילוגרם, באמצעות מחט בגודל 27 במהלך תקופת ההזרקה. נסו להחליף את אתרי ההזרקה כדי להפחית את הסיכוי לזיהום מקומי באופן דומה. הזריקו לעכברי בקרה את תמיסת הרכב שמן שומשום בנפח של 2.5 מיליליטר לק"ג לאחר סיום תקופת ההזרקה.

עקוב אחר מחזור ה-esra מדי יום על ידי השגת מריחות נרתיקיות. אחד הגורמים הקריטיים להצלחת מחקר זה הוא השגת מריחות נרתיקיות באיכות גבוהה לקביעת ציטולוגיה. רסנו עכברים בשיטת קשקוש הגב.

הכנס טפטפת עם 0.2 מיליליטר מי מלח סטריליים לפתח הנרתיק לעומק של 0.5 סנטימטרים. ערבבו את מי המלח שהוזרקו שלוש פעמים עם הטפטפת, ולאחר מכן הניחו טיפה אחת בשקופית ריקה. הערך מיד כל דגימה במיקרוסקופ באמצעות מיקרוסקופ אור סטנדרטי בעוצמה של פי 100 כדי לאמת אי ספיקת שחלות.

לאחר מכן, עכברי גיל המעבר המושרים על ידי VCD משמשים לניסויי האימון. מנגנון גלגל הכלוב מורכב מגלגל בקוטר 11.5 ס"מ עם משטח ריצה ברוחב חמישה ס"מ המצויד במונה מגנטי דיגיטלי המופעל על ידי סיבוב גלגלים. לפני כל ריצה של גלגל, בדוק כייל את גלגל הכלוב בהתאם להנחיות היצרן.

מדוד את הקוטר הפנימי של גלגל הריצה. חשב את ההיקף והזן ערך זה במונה הדיגיטלי כגודל גלגל כדי להרכיב את הגלגל לכלוב, החלק את הגלגל. עמדו דרך החיווט העליון של כלוב החיות.

אבטח את מעמד הגלגלים לחיווט הכלוב בעזרת תפסי קלסר. הקליפים צריכים להיות בחלק העליון של החיווט הרחק מהחיה. הזינו את חלק המחשב וכל כבל נוסף דרך החיווט של הכלוב.

הנח במחשב כבל עודף הרחק מהישג ידם של בעלי החיים. ניתן להשיג זאת על ידי הנחת צלחת פלסטיק בגודל בינוני על גבי החיווט של הכלוב כדי להחזיק למחשב כבל עודף. לאחר מכן, חבר את חלק המחשב של המונה המגנטי הדיגיטלי למעמד הגלגלים.

בעזרת סרט דביק, חבר את המגנט החופשי של המונה המגנטי הדיגיטלי לסרגל המרכזי באותו צד של כבל המגנט למחשב. שוב, הדבקה מספיק כדי להגן על המגנט מפני נזקי לעיסה. יש למקם את המגנט כך שכל סיבוב של הגלגל יירשם על ידי המחשב ללא כל הפרעה או התנגדות לסיבוב גלגל מלא.

חבר את גלגל הריצה לגלגל. עמדו על ידי הכנסת עמודי מעמד הגלגלים לחורי ההרכבה בסורגים המרכזיים של הגלגל. ודא שהגלגל מסוגל להסתובב בחופשיות.

יש לעקוב אחר ההתקנה מדי יום לאיתור נזקי לעיסה ולתקן לפי הצורך לצורך הניסוי עכברים נקבות C 57 ו-B 6 ו-B 6 C3 F1 מהמלטה נתונה מוקצים באופן אקראי למשטר האימונים או לבקרה בישיבה. איך חיות ניסוי בנפרד? בכלוב בגודל 47 על 26 על 14.5 סנטימטר עם גישה חופשית לגלגל כלוב למשך 28 ימים, חיות הביקורת שוכנות יחד בכלוב ללא גלגל.

תן לכל בעלי החיים מים וחמין מכרסמים קשה סטנדרטי. הוסף lido רשום ידנית ערכים יומיים עבור מרחק הריצה והזמן הכולל שהושקע בריצה הניתנים על ידי המונה המגנטי רשום ערכי מרחק וזמן באותה מסגרת זמן של שעה בכל יום לערכים מדויקים ועקביים לאורך 28 הימים של תקופת האימון. לאחר ההקלטה של כל יום, נקה את המונה המגנטי כדי להבטיח קריאות מדויקות למחרת.

בתום תקופת האימון הספציפית, משקל הגוף של בעלי חיים שהומתים נרשם לפני קצירת הרקמות. כדי להפעיל את הלב, בצע חתך מדיאלי בצד הגחון, פתח את הסרעפת ודמיין את הלב במהירות. כורתים את הלב בבסיס ומניחים בתמיסת מלח חוצצת פוספט קר כדי לשטוף מספיק את שאריות הדם החדריות חותכים את הלב מרקמות עודפות, שוקלים את כל הלב ומקפיאים בחנקן נוזלי אם רוצים.

אסוף רקמות בלו נוספות, שטוף עם תמיסת מלח עם פוספט קר כקרח שונה והקפיא בהצמד ואיזופ פנטן מקורר בחנקן נוזלי. במחקר זה, אי ספיקת שחלות נגרמה על ידי טיפול ב-VCD ואושרה על ידי בדיקה מיקרוסקופית של מריחות נרתיקיות. השלב במחזור ה-esra נקבע על ידי שיעור תאי האפיתל, תאי אפיתל מכומתים ולויקוציטים בתאי אפיתל גרעיניים של PROEs שולטים.

כאן החצים מצביעים על כך שתאים גרעיניים במהלך תאי אסטרו הם בעיקר תאי אפיתל קשקשיים מכומתים ללא גרעין. מאסטרו מאופיין בתערובת של סוגי תאים עם דומיננטיות של לויקוציטים. דיסטרוס נשלט על ידי לויקוציטים.

מחזור האסטרו בעכברים נמשך בדרך כלל ארבעה ימים לפני הזרקת VCD. בעלי חיים נחשבו א-מחזוריים לאחר 15 ימים של אסון מתמשך. תרשים זה מציג את האורך הממוצע בימים של המחזור הנוסף הגבוה ביותר של קבוצות שהוזרקו לרכב ו-VCD.

מחזור אחד נמדד מהיום הראשון ב-ES ועד ליום הראשון של המחזור הבא. ב-ES ציטולוגיה נרתיקית החלה כשישה שבועות לאחר תחילת הזריקות. נצפה כי מחזורי ה-ESTRO של בעלי חיים שהוזרקו VCD הפכו לא סדירים בהשוואה לבעלי חיים שהוזרקו ברכב, ולאחר 12 מחזורי אסטרו, ציטולוגיה של כל בעלי החיים שהוזרקו VCD כבר לא הצביעה על רכיבה על אופניים בסיום פרוטוקול הזרקת VCD, צביעת H ו-E של חתכי רקמת השחלה חשפה ניוון משמעותי ברקמת השחלה שטופלה ב-VCD בהשוואה לביקורת.

כאשר נצפה בהגדלה של פי 20 בהגדלה של 200, נצפתה דלדול מוחלט של זקיקים ראשוניים וראשוניים ברקמה שטופלה ב-VCD. בניגוד לרקמה שטופלה ברכב, ההשפעה של אי ספיקת שחלות הנגרמת על ידי VCD על ביצועי הפעילות הגופנית נבדקה ב-VCD בן שבעה חודשים ועכברים שטופלו ברכב משני זנים נרשמו ערכי אימון יומי של גלגלי כלוב עבור זמן ומרחק עבור כל חיה שהתאמנה לאורך תקופת אימון של ארבעה שבועות. איור זה מציג את הממוצעים השבועיים של ערכי הריצה היומיים עבור מרחק, זמן ומהירות.

עבור C 57, שישה עכברים שחורים שטופלו ברכב או ב-VCD, לא נצפו הבדלים משמעותיים בביצועי הפעילות הגופנית שנמדדו על ידי מרחק הריצה הממוצע היומי וזמן השהות על ההגה בין הקבוצות שטופלו ב-VCD לקבוצה שטופלה ברכב בזן הפה C 57, Black six או B six C3 F1. זה מצביע על ההשפעה של אי ספיקת שחלות הנגרמת על ידי VCD תרגיל גלגל כלוב מרצון מתעלה על לפחות שני מתיחות בפה לאחר משך פרוטוקול תרגיל הכלוב מרצון. תועדו מורפומטריות גוף והלבבות נכרתו במהירות ונשקלו בהתאם לתצפיות קודמות.

נצפתה היפרטרופיה לבבית בתגובה לתרגיל גלגל כלוב שנמדדה על ידי משקל לב מוחלט ומשקל לב מנורמל לאורך השוקה. למרות שמסת הלב האבסולוטית ומשקל הלב לאורך השוקה היו גבוהים משמעותית בעכברים שטופלו ברכב וב-VCD בהשוואה לעמיתיהם בישיבה, לא היו הבדלים מדידים בהיפרטרופיה של הלב בין ביקורת לאי ספיקת שחלות שנגרמה על ידי VCD. עכברים לאחר תרגיל גלגל הכלוב הוולונטרי, לבסוף, VCD ועכברים שטופלו ברכב היו נתונים לריצת הליכון כפויה כדי לקבוע יכולות פעילות גופנית בעצימות גבוהה ונמוכה כאחד.

בפרוטוקול העוצמה הגבוהה, מהירות החגורה הממוצעת הוגדלה בשלבים כל 10 דקות עד שהעכברים הראו סימני תשישות. בממוצע, המהירות המקסימלית של עכברים שטופלו ברכב הייתה 26.7 פלוס מינוס 0.95 מטר לדקה, והמהירות המקסימלית של עכברים שטופלו ב-VCD הייתה 28 פלוס מינוס 1.4 מטר לדקה לפני התשישות. ריצה בעצימות נמוכה יותר של 20 מטר לדקה שימשה לבדיקת יכולת הסיבולת.

בממוצע, הזמן המקסימלי של עכברים שטופלו ברכב היה 28.3 פלוס מינוס 1.3 דקות, והזמן המקסימלי של עכברים שטופלו ב-VCD היה 29.7 פלוס מינוס 1.4 דקות לפני התשישות. לא נמצאו הבדלים משמעותיים בעצימות גבוהה או נמוכה ביכולת הפעילות הגופנית בין הקבוצות שטופלו ברכב ל-VCD, מה שמצביע על כך שלכשל שחלתי שנגרם על ידי VCD לא הייתה השפעה על יכולת הפעילות הגופנית של העכברים. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחומי מדעי התא, המולקולרים והפיזיולוגיה לחקור את תפקידם של גיל המעבר ומכרסמים.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע את זריקות ה-VCD הנכונות, לבצע את הציטולוגיה הנרתיקית וליישם התערבות פיזיולוגית.