Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

Vladimir A. Volkov; Anatoly V. Zaytsev; Ekaterina L. Grishchuk

doi:10.3791/51150

הכנת Microtubules מקוטע לחקר תנועות מונעים על ידי מסתיים microtubule הפירוק

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

הכנת Microtubules מקוטע לחקר תנועות מונעים על ידי מסתיים microtubule הפירוק

Full Text

14,995 Views

12:20 min

March 15, 2014

DOI: 10.3791/51150-v

Vladimir A. Volkov^1,2, Anatoly V. Zaytsev³, Ekaterina L. Grishchuk³

¹Center for Theoretical Problems of Physicochemical Pharmacology,Russian Academy of Sciences, ²Federal Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia, ³Physiology Department, Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Microtubules מטבעם פולימרים לא יציבים, ומיתוגם בין הצמיחה וקיצור הוא אקראי וקשה לשליטה. כאן אנו מתארים פרוטוקולים באמצעות microtubules המפולח עם כובעי ייצוב photoablatable. Depolymerization של microtubules המפולח יכול להיות מופעל עם רזולוציה של זמן ומרחב גבוה, ובכך מסייע לניתוח של תנועות עם קצות microtubule פירוק.

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לחקור את התנועות של מולקולות חלבון וחרוזים מצופים חלבון עם קצות של מיקרו-צינורות דה-פולימריזציה. זה מושג על ידי הרכבת תא זרימה רב פעמי עם החלקת כיסוי בגודל נקי. לאחר מכן מכינים זרעי מיקרו-צינורות המחוברים להחלקת הכיסוי ומשמשים לגרעין מיקרו-צינורות, אשר לאחר מכן מיוצבים באופן זמני עם מכסים הניתנים להרס צילום.

לאחר מכן חלבונים המסומנים ב-GFP או חרוזים מצופים חלבון מוכנסים לתא הזרימה ונקשרים למיקרו-צינורות מפולחים. לאחר מכן מופעלת דה-פולימריזציה של מיקרו אמבטיה על ידי הסרת הכובעים על ידי אבלציה של תמונות. התמונות מנותחות עם CH כדי לקבוע אם החלבונים המסומנים מציגים התנהגות מעקב אחר קצה, שהיא תנועה עם הקצוות של מיקרו-צינורות דה-פולימריזציה.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos